南医大药物分析药物的鉴别实验
药物分析-药物的鉴别试验
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如： 丙二酰脲类鉴别试验只能证实是 巴比妥类药物，但具体是何种巴 比妥类药物不可确定。
5
初熔 终熔
6
3）熔点测定的注意事项：
a. 传温液 mp在80℃以下的，用水； mp在80℃以上的，用硅油或液体石蜡。
b. 毛细管 中性硬质玻璃管，长：9cm 内径：0.9~1.1mm
壁厚：0.10~0.15mm。
c. 升温速度 1~1.5 ℃/min。
d. 温度计 0.5℃刻度，且经校正。
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（2）凝点
小供试品量，以m表示，单位为µg。 最低检出浓度---在一定条件下能观察出试验结果时
供试品的最低浓度，以1V表示。
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最低检出量与最低检出浓度之间的关系：
m v 106 V
式中： — 试液的体积（mL）：鉴别时所取试
液的体积
V — 最低检出浓度的体积：指含有1 g 供
试品的溶液体积（mL）
钠盐鉴别试验等。
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（三）专属鉴别试验
专属鉴别试验（specific identification test）是 证实某一种药物的依据。根据每一种药物化学 结构差异所引起的物理化学特性不同，选用某 些专属定性反应来鉴别药物的真伪。 如： 维生素B1，中国药典（2000年版）—硫 色素反应作为其专属鉴别试验。
m — 最低检出量( µg )。
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空白试验
目的: 检查试剂和蒸馏水中是否含有待测组分。 方法：用蒸馏水代替试样进行测定。 对照试验 目的: 检查方法的可靠性。 方法: 用标样代替试样进行测定。
药物的鉴别实验
最低检出量和最低检出浓度 之间的关系可以用下式表示：
m
v V
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6
式中υ为鉴别试验时，所取 供试品溶液的最小体积（ml）。
影响条件： 1.在选用灵敏度很高的反应时，必须采用 高纯度的试剂，非常洁净的器皿，才能保 证鉴别试验结果的可靠性。 2.为了消除试剂和器皿可能带来的影响， 应同时进行空白试验（blank test)以供对 照。 空白试验，是在与供试品鉴别试验完 全相同的条件下，除不加供试品外，其它 试剂均同样加入而进行的试验。 3.与分析方法、观察方式、反应条件、人 的观察能力等因素有关。
酸盐）与溴化钾之间不发生离子交 换反应，则采用溴化钾作为制片基
质。否则，盐酸盐样品制片时必须
使用氯化钾基质。
3）测定时应注意二氧化碳和水汽等
的大气干扰，必要时，应采取适当
措施（如采用干燥氮气吹扫，真空）
加以改善。
4）仪器间分辨率的差异及不同的操 作条件（如狭缝程序，扫描速度等） 可能影响药品光谱图的判断。 需用在比较样品的光谱图前，首 先比较聚苯乙烯薄膜的光谱图。 5）本法对于多组分药物或存在多晶 现象而又无可重复转晶方法的药物不 适用。
（四）药物鉴别方法新动向
1.仪器分析应用数量增加，尤其 是红外光谱法、气相色谱法和高效 液相色谱法。 2.制剂广泛采用IR法鉴别。与 原料药相比，制剂需先分离再压片 绘制图谱。
四、鉴别实验条件
鉴别试验必须在规定条件下完成，
否则将会影响结果的判断。影响鉴别
反应的因素主要有被测物浓度，试剂
的用量，溶液的温度、 pH ，反应时
3.荧光反应鉴别法常用的荧光发射形 式有以下类型： （1）药物本身 （2）药物溶液加硫酸使呈酸性后 （3）药物和溴反应后 （4）药物和间苯二酚反应后 在可见光下发射荧光；
南医大药物分析 总论部分
药物分析（Pharmaceutical Analysis）总结绪论药物分析（Pharmaceutical Analysis）药物分析是一门研究和发展药物质量规律和质量控制的学科。
运用分析测试手段（化学、物理化学或生物化学），发展药物的分析方法；研究、检验化学结构已经明确的合成药物或天然药物及其制剂的质量控制（quality control,QC)方法，也研究有代表性的中药制剂和生化药物及其制剂的质量控制方法。
药物分析常用的分析方法：经典的化学分析：容量分析法（酸碱滴定法，氧化还原滴定法，络合滴定法，沉淀滴定法，非水溶液滴定法），重量分析法。
现代仪器分析技术：光谱分析法（紫外-可见分光光度法UV，红外分光光度法IR，原子吸收分光光度法AAS，原子发射分光光度法AES，荧光分析法），色谱分析法（高效液相色谱法HPLC，高效液相色谱-质谱HPLC-MS，气相色谱GC，气相色谱-质谱GC-MS，薄层色谱法TLC），电化学分析法（电导法，电位法，电解法，伏安法，极谱法）。
药物分析新技术：质谱法，高效毛细管电泳法HPCE，联用技术（气-质联用GC—MS，液-质联用HPLC-MS，傅立叶变换-红外分光光度法FT- IR，毛细管电泳-质谱联用CE-MS，等离子-质谱联用ICP-MS）质量管理规范：GMP 药品生产质量管理规范Good practices in the manufacture and quality control of drugsGLP 药品非临床研究质量管理规范Good laboratory practiceGSP 药品经营质量管理规范Good supply practiceGCP 药品临床试验质量管理规范Good clinical practiceGAP 中药材生产质量管理规范Good agriculture practice第一章质量研究与药典《中国药典》（2015年）分四部：一部中药，二部化药，三部生物制品，四部通则。
药物分析 第二章 药物的鉴别试验
药物分析教研室
1
主要内容
第一节 药物鉴别试验的定义及目的
第二节 药物试验的项目 第三节 鉴别方法 第四节 鉴别试验的条件及方法验证
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第一节 药物鉴别试验的定义及目的
▪ 定义：根据药物的分子结构、理化性质，采用 物理、化学或生物学方法来判断药物的真伪。
▪ 目的：不是对未知物进行定性分析，而是证实 贮藏在有标签容器中的药物是否为其所收载的 药物。
HO—CH—COOH
水浴中
HO—C—COONH4
2Ag+
+2NH3+2H2O
HO—C—COONH4
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（三）芳香第一胺类
稀盐酸
供 试
+ 0.1mol/L亚硝酸钠
品
碱性-萘酚试液
N2+Cl-.
橙黄色到猩红色 沉淀
+NaNO2+2HCl
+NaCl+2H2O
N2+Cl-.
+
+NaOH
+NaCl+2H2O
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（三）荧光反应鉴别法 ①药物本身在可见光下发射荧光
如：硫酸奎宁溶液显蓝色荧光 ②药物及适当试剂反应后发射荧光
如：氯普噻吨+HNO3后，紫外下显绿
碱性 VB1 K3Fe(CN)6 硫色素（蓝色荧光）
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（四）气体生成反应鉴别法 ①大多数伯胺（铵）类药物、酰尿类以及某些酰
胺类药物，可经强碱处理后加热产生氨气。 红色石蕊试纸变蓝 硝酸亚汞试液湿润的试纸显黑色
对照品法：将供试品与对照品在同样的条件下绘制 红外图谱，彼此对比是否一致的方法。可消除不 同仪器和操作条件造成的误差。USP多采用对照 品法。
药物分析药物的鉴别试验
➢ 规定λ和Aλ1/Aλ2 ➢ 经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱 特性。
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例1：布洛芬
【鉴别】 (1) 取本品，加0.4％氢氧化钠溶液 制成每1ml中含0.25mg的溶液，照分光光度 法（附录Ⅳ A）测定，在265nm与273nm的 波长处有最大吸收，在245nm与271nm 的波 长处有最小吸收，在259nm的波长处有一肩 峰。
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2.有机酸盐
水杨酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、 枸橼酸盐
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（1）水杨酸盐
① FeCl3反应
COOH
6
OH+FeCl3
弱酸性
COO-
O- Fe 2
Fe
+ 12HCl
3
中性
②加稀HCl，即析出白色沉淀；分离，沉淀溶
于醋酸铵溶液。
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例：水杨酸镁
【鉴别】 (1) …… (2)取本品约0.3g，置洁净 的试管中，加水10ml溶解，加硝酸银试液过 量，即生成白色沉淀，滴加氨试液恰使沉淀溶 解后，将试管置水浴中加热，银即游离并附在 管的内壁成银镜。
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3.芳香第一胺
NH2
重氮化-偶合反应
R
取供试品约5mg，加稀盐酸1ml，必要时缓缓
+NaCl + H2O
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氨苯砜
【鉴别】 (1) 本品显芳香第一胺类的鉴别 反应（附录Ⅲ）。 (2) ……。
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药物分析药物的鉴别实验
折光率测定法：标准曲线法
n5
nx
n4
n3 n2 n1
0
c1c2 c3 c4 cx c5
例1：KCl 溶液，在于 20 ℃时测得其折光率为 1.3564 ，溶剂（水）在 20 ℃的折光率为 1.3330。已知KCl 的折光率因素（ F）为 0.00117 求KCl 溶液的浓度。
优点：多数的药物分子含有特征吸收光谱的基团，可 作为鉴别的依据，可进行简单的定性分析，鉴定共 轭发色团，推断未知物骨架，可进行定量分析及测 定配合物配位比和稳定常数
缺点：不同的有机化合物具有不同的吸收光谱，但吸 收光谱较简单，必须采用多规定参数法提高专属性
示例一、二、三
2、红外光谱鉴别法 红外光谱法是一种专属性很强、应 用较广（固体、液体、气体样品）的鉴别方法。主要用 于组分单一、结构明确的原料药、特别适用于用其他方 法不易区分的同类药物，如磺胺类、甾体激素类和半合 成抗生素类药品。
（四）色谱鉴别法 1、薄层色谱鉴别法
岛津CS-9000 双波长薄层扫描仪
瑞士CAMAG SCANNER 3 薄层扫描仪
1、薄层色谱 将吸收剂或支持剂均匀铺在玻璃板上（或聚酯薄
膜塑料或铝箔上），把要分离分析的样品点在薄层色 谱板上，用溶剂展开，在日光或紫外光下观察所获得 的斑点，从而达到分离、分析、鉴定目的。
解： 1.3564 - 1.3330 C = ————————— =20 （g /ml ，
%） 0.00117
答：KCl 溶液的浓度为 20% 。
方法1：采用同温度溶剂 的折光率来求浓度
例2：在26 ℃测得KI溶液的折光率为 1.3460 。已知： KI的F为0.00131 。求其浓度。
药物鉴定
药物的鉴别试验
南京医科大学第一附属医院 临床药物研究室
张宏文
1
药品检验工作的基本内容 1. 取样
工 作 程 序
2. 鉴别
3. 检查
4. 含量测定
5. 检验报告
2
鉴 别
是根据药物的分子结构、理 化性质，采用化学、物理化 学或生物学方法来判断药物 的真伪. 鉴别方法要求: 专属性强、 再现性好、灵敏度高、简便快 速
表示方法：摩尔吸收系数 百分吸收系数 用
% E1 1 cm
途： 检查纯度 测定制剂含量
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一般鉴别试验
鉴 别 实 验 项 目
依据某一类药物的化学结构或理化 性质的特征，通过化学反应来鉴别药 物的真伪
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一般鉴别试验
无机药物: 根据阴、阳离子（钠盐、钙盐、 硫酸盐、氯化物）的特殊反应,并以药典附 录项下的一般鉴别试验为依据；
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一般鉴别实验
2．有机酸盐
（1）水杨酸 1）鉴别方法一：取供试品的稀溶液，加三 氯化铁试液1滴，即显紫堇色。 2）反应原理：本品在中性或弱酸性条件下， 与三氯化铁试液生成配位化合物，在中 性时呈红色，弱酸性时呈紫色。
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二、一般鉴别试验
2.水杨酸盐鉴别方法二 ① FeCl3反应
COOH 6 OH + FeCl 3 COOO2 Fe Fe 3 + 12HCl
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一般鉴别实验
（3）硝酸盐 鉴别一： 取供试品溶液，加等量硫酸，混合冷却沿 壁管加 FeSO4 试液 , 使成两液层，界面显 棕色
鉴别二： 取供试品溶液，加硫酸和铜丝，加热即 生成红棕色蒸汽。
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（三）专属鉴别试验
鉴 别 实 验 项 目
南医大药物分析第02章-药物的鉴别实验
（四）色谱鉴别法
1.薄层色谱鉴别法 采用对照品（或标准品）比较 法，要求二者的Rf值一致 ； 2.高效液相色谱鉴别法 要求供试品和对照品色谱 峰的保留时间比值一致；含量测定方法为内标法 ； 3.气相色谱鉴别法 4.纸色谱鉴别法 逐渐被薄层色谱法所取代 5.高效毛细管电泳
ChP 2010: 雌二醇的熔点：本品的熔点为175180℃.
（3）比旋度
在一定波长与温度下，偏振光透过长1 dm 且每1 ml中含有旋光性物质1 g的溶液时， 测得的旋光度称为比旋度。反映手性药物 特性及其纯度的主要指标。
ChP 2010： 维生素C的比旋度测定：取本品， 精密称定，加水溶解并定量稀释使成每1 ml 中含约0.10 g的溶液，测定，比旋度为 +20.5~+21.5.
（专属性很强、 应用较广）
适用范围：组分单一、结构明确的原料药；特别是
其他方法不易区分的同类药物。
2.1.试样制备方法：压片法、糊法、膜法和溶液法； 2.2.原料药鉴别 注意多晶现象； 2.3.制剂的鉴别 采取提取分离、适当干燥、压片绘制 图谱。 （1）有机溶剂直接提取，去除辅料干扰测定IR （2）有机酸，有机碱的对应盐，加入酸或碱沉淀， 分离干燥测定IR （3）主成分有机酸，加碱溶解，过滤，加酸沉淀分 离干燥测定IR （4）无辅料或辅料干扰少，可 （二）溶液的酸碱度 （三）溶液的温度 （四）共存物质干扰 （五）反应介质 （六）试验时间
三、鉴别试验的灵敏度
（一）反应灵敏度和空白试验 1.反应灵敏度（Sensitivity） *最低检出量（Minimum detectable quantity） （又称检出限量）：以m表示，就是应用某一反 应，在一定的条件下，能够观测出的供试品的最 小量，其单位通常用微克（μg）表示。
药物分析实验药物鉴别
药物分析鉴别方法总结一、葡萄糖注射液1、用斐林试剂〔0.1 g/ml的氢氧化钠和0.05 g/ml的硫酸铜试剂〕反响生成砖红色沉淀加热的条件下原理：具有醛基，醛基遇斐林试剂有砖红色沉淀生成。
2、班氏试剂：在试管中参加葡萄糖注射液0.1mL，参加班氏糖定性试剂1mL，混合均匀后，将试管放入盛有开水的烧杯中，加热煮沸1min~2min，假设试管中溶液在加热后产生了砖红色沉淀，说注射液中含有葡萄糖。
3、可用溴水来鉴别葡萄糖，葡萄糖能被溴水氧化成葡萄糖酸，使溴水褪色。
原理：葡萄糖的醛基具有复原性，溴水能将其氧化，使溴水褪色。
结果：三小时后，溴水褪色。
4、分光光度法：利用分光光度计测量简单的吸光度，与标准溶液吸光度比拟。
5、银镜反响：葡萄糖分子中的醛基，有复原性，能与银氨溶液反响：被氧化成葡萄糖酸。
6、比旋度测定法：原理：葡萄糖分子结构中有5个不对称碳原子，具有旋光性，为右旋体。
比旋度是旋光性物。
7、红外光谱：测量样品溶液的红外光谱，与标准溶液的红外光谱图比拟。
8.薄层色谱法9.高效液相色谱法二、阿司匹林肠溶片1、三氯化铁法：本品水溶液加热放冷后，与三氯化铁溶液反响，呈紫堇色。
原理：受热分解产生水杨酸和乙酸，水杨酸的酚羟基与三氯化铁，呈紫堇色。
2、水解反响：阿司匹林与碳酸钠溶液加热水解，得水杨酸钠及醋酸钠，加过量稀硫酸酸化后，则生成白色水杨酸沉淀，并产生醋酸的臭气。
3、红外光谱法4、薄层色谱5、高效液相色谱法：在含量测定项下记录的色谱中，供试品溶液主峰的保存时间应与对比品溶液主峰的保存时间一致。
6.紫外光谱法7.核磁共振法三、维生素E软胶囊1.氧化复原法：原理：维生素E侧链上的叔碳原子易自动氧化，生成相应的羟基化合物，本品的乙醇溶液与硝酸供热，则生成生育酚，溶液显橙红色。
2、维生素E具有较强的复原性，与三氯化铁作用，被氧化成生育酚，后者与2,2'-联吡啶作用生成血红色的络合物。
3、薄层色谱法，结果供试品溶液色谱中在与对比品溶液色谱相应位置上显深蓝色的斑点，空白对比无干扰。
南医大2012药物分析鉴别总结
药物分析鉴别反应总结1.与FeCl3反应（阿司匹林，双水杨酯，二氟尼柳，水杨酸，对乙酰氨基酚，吡罗昔康，美洛昔康）（水解-紫堇色）（碱水解-紫色）（溶于乙醇-深紫色）（紫堇色）（蓝紫色）（玫瑰红色）（淡紫红色）（盐酸异丙肾上腺素，重酒石酸去氧肾上腺素，盐酸去氧肾上腺素，盐酸多巴胺）（深绿）（翠绿）（紫色）（墨绿）（盐酸氯丙嗪）（维生素D）（红色）（橙黄）2.缩合反应（酮洛芬：酸性条件与二硝基苯肼生成橙色偶氮化合物）（巴比妥类：与香草醛在浓硫酸存在条件下发生缩合反应生成棕红色产物）3.重氮化-耦合反应：（二氢吡啶类苯环硝基在酸性条件下被Zn还原为芳伯胺基也可发生此反应）（氯氮卓，奥沙西泮与盐酸共沸水解，生成橙红色沉淀，后者放置后颜色变暗）（对乙酰氨基酚）（苯佐卡因，盐酸普鲁卡因，盐酸氯普卡因，盐酸普鲁卡因胺）（红色）（橙黄到猩红色）（橙黄到猩红色）（与上述芳伯胺基类的区别：盐酸丁卡因在酸性条件下与亚硝酸钠反应，生成N-亚硝基化合物乳白色沉淀）4.氧化反应：（甲芬那酸：溶于硫酸，与重铬酸钾显深蓝色到棕绿色）（吲哚美辛：硫酸中与重铬酸钾共热显紫色）（莨菪烷类：水解生成莨菪酸与硫酸-重铬酸钾在加热条件下，逸出苦杏仁臭味）（二氢吡啶类：可将氢氧化亚铁氧化为红棕色氢氧化铁沉淀。
）（氧化显色：盐酸氯丙嗪加水溶解后加硝酸显红色后渐变黄色；）（氧化显色：盐酸氯丙嗪加水溶解后加三氯化铁显红色）5.水解：（阿司匹林：水解加稀硫酸生成白色沉淀）（巴比妥类药物：酰亚胺结构碱液水解，释放出氨气可使红色石蕊试纸变蓝）6.S元素：（美洛昔康：高温分解产生H2S，遇醋酸汞生成硫化铅黑色沉淀）（硫喷妥钠：氢氧化钠溶液中与铅离子反应生成白色沉淀）（维生素B1：与氢氧化钠共热，分解产生Na2S，可与硝酸铅反应生成黑色沉淀。
）7.甲醛-硫酸反应：（肾上腺素，盐酸异丙肾上腺素，重酒石酸去氧肾上腺素，盐酸去氧肾上腺素）（苯巴比妥）（红色）（棕色至暗紫色）（淡红）（玫瑰红-橙红-深棕色）（玫瑰红）8.还原性反应：（肾上腺素：酸性条件，过氧化氢氧化生成肾上腺素红显血红色，放置后变为棕色多聚体）（盐酸异丙肾上腺素：偏酸条件，碘氧化生成异丙肾上腺素红，加硫代硫酸钠溶液变淡红色）9.氨基醇的双缩脲反应：（盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱，盐酸去氧肾上腺素）（盐酸麻黄碱：硫酸铜2滴，氢氧化钠1ml，显蓝紫色；加乙醚，乙醚层紫红色，水层蓝色）（盐酸去氧肾上腺素：硫酸铜1滴，氢氧化钠1ml，显蓝紫色；加乙醚，乙醚层无色）10.与脂肪伯胺Rimini反应：（重酒石酸间羟胺：加亚硝基铁氰化钾，丙酮，碳酸氢钠显红紫色）（与之区别：C17-甲酮基反应，黄体酮可与亚硝基铁氰化钠反应生成蓝紫色产物）11.与金属的反应：（盐酸利多卡因：碳酸钠中与CuSO4生成蓝色配合物，加三氯甲烷，三氯甲烷层显黄色）（盐酸利多卡因：酸性溶液中与CoCl2反应生成亮绿色细小钴盐沉淀。
药物分析鉴别试验
药物分析鉴别试验水杨酸盐(1)取供试品的稀溶液，加三氯化铁试液1滴，即显紫色。
(2)取供试品溶液，加稀盐酸，即析出白色水杨酸沉淀;分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。
丙二酰脲类(1)取供试品约0.1g，加碳酸钠试液1ml 与水10ml，振摇2分钟，滤过，滤液中逐滴加入硝酸银试液，即生成白色沉淀，振摇，沉淀即溶解;继续加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。
(2)取供试品约50mg，加吡啶溶液(1→10)5ml，溶解后，加铜吡啶试液1ml，即显紫色或生成紫色沉淀。
有机氟化物取供试品约7mg，照氧瓶燃烧法(本版药典二部附录ⅦC)进行有机破坏，用水20ml 与0.01mol/L氢氧化钠溶液6.5ml为吸收液，俟燃烧完毕后，充分振摇;取吸收液2ml，加茜素氟蓝试液0.5ml，再加12%醋酸钠的稀醋酸溶液0.2ml，用水稀释至4ml，加硝酸亚铈试液0.5ml，即显蓝紫色;同时做空白对照试验。
亚锡盐取供试品的水溶液1滴，点于磷钼酸铵试纸上，试纸应显蓝色。
亚硫酸盐或亚硫酸氢盐(1)取供试品，加盐酸，即发生二氧化硫的气体，有刺激性特臭，并能使硝酸亚汞试液湿润的滤纸显黑色。
(2)取供试品溶液，滴加碘试液，碘的颜色即消退。
托烷生物碱类取供试品约10mg，加发烟硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黄色的残渣，放冷，加乙醇2～3滴湿润，加固体氢氧化钾一小颗，即显深紫色。
汞盐亚汞盐：(1)取供试品，加氨试液或氢氧化钠试液，即变黑色。
(2)取供试品，加碘化钾试液，振摇，即生成黄绿色沉淀，瞬即变为灰绿色，并逐渐转变为灰黑色。
汞盐：(1)取供试品溶液，加氢氧化钠试液，即生成黄色沉淀。
(2)取供试品的中性溶液，加碘化钾试液，即生成猩红色沉淀，能在过量的碘化钾试液中溶解;再以氢氧化钠试液碱化，加铵盐即生成红棕色的沉淀。
(3)取不含过量硝酸的供试品溶液，涂于光亮的铜箔表面，擦试后即生成一层光亮似银的沉积物。
芳香第一胺类取供试品约50mg，加稀盐酸1ml，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mol/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。
药物分析-鉴别实验(本科生实验)
实验一药物的鉴别实验——大山楂丸的鉴别一、目的要求1. 掌握药物的化学鉴别和薄层色谱鉴别试验。
2. 掌握药物分析的前处理方法。
3. 熟悉其它药品检测方法及要求。
二、主要仪器与药品超声仪、水浴锅、烤板器；移液管、蒸发皿、分液漏斗、漏斗、锥形瓶、展缸、薄层色谱板；乙醇、甲醇、正丁醇、氯仿、丙酮、水、盐酸、镁粉。
三、实验方法大山楂丸组方为山楂、六神曲（麸炒）、炒麦芽，为棕红色或褐色的大蜜丸。
1. 化学鉴别取本品9 g，剪碎，加乙醇40 mL，超声10分钟，滤过，取续滤液10 mL蒸干，残渣加水2 mL，加热使溶解（分三次加入，溶液合并），用正丁醇3 mL振摇，萃取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1mL溶解。
溶液（a）加少量镁粉与盐酸2~3滴，加热4~5分钟后，即显橙红色。
2. 薄层鉴别取上述溶液（a），作为供试品溶液。
另取熊果酸对照品，加甲醇制成对照品溶液。
吸取上述两种溶液适量，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。
四、注意事项1. 移液管的使用移取溶液前，先用吸水纸将尖端外的水吸除掉，然后用待吸溶液转洗3次。
吸取溶液时，将移液管直接插入液面下1~2 cm深处。
用右手拿移液管，左手拿洗耳球，排出球内空气，紧接管口上，使溶液缓慢上升，管内溶液上升至标线以上时，移去洗耳球，右手食指迅速按紧管口，把移液管提出液面，左手拿容器，倾斜45°，将管的尖端垂直紧贴容器的内部，食指稍松，使液面缓慢下降，待管中溶液的凹液面与刻度线相切时，用食指紧按管口，使溶液不再外漏。
此时溶液恰好为管上所示容量。
用左手拿另一洁净的容器，右手将移液管放入容器，方法同上，待溶液自然流完，停15 s后取出移液管。
凡移液管上未写“吹”字的，其残留液不用吹出，若管上标有“吹”字，其残留液必须吹出。
药物的鉴别实验
VS
详细描述
化学结构分析是药物鉴别实验中的另一种 重要方法，通过分析药物的化学结构，可 以确定药物的种类和分子式等信息。这种 方法需要使用各种谱学技术，如红外光谱 、核磁共振谱等，通过对药物分子结构的 解析，可以精确地鉴别药物的种类和组成 。
03
物理鉴别实验
熔点测定
总结词
熔点测定是利用药物在不同温度下熔化的特性来鉴别药物的 一种方法。
详细描述
高效液相色谱法具有分离效能高、分析速度 快、灵敏度高、重现性好等优点，适用于对 药物的定性和定量分析。在实验过程中，将 药物样品注入色谱柱，通过高压泵施加压力， 使药物分子在柱内分离，再通过检测器检测 各组分的含量和性质，实现对药物的鉴别。
气相色谱法
总结词
气相色谱法是一种分离气体或挥发性液体的 色谱方法，通过将药物样品在气相色谱柱中 分离，然后通过检测器检测，实现对药物的 鉴别。
琼脂糖凝胶电泳法是一种常用的药物鉴别方法，具有 分辨率高、操作简便等优点。
详细描述
琼脂糖凝胶电泳法利用琼脂糖凝胶作为支持介质，通过 电场作用使药物分子进行分离，根据药物的迁移速度和 分子量进行鉴别。该方法适用于蛋白质、多肽、核酸等 大分子药物的分离和鉴别，具有分辨率高、操作简便、 重复性好等优点。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法
详细描述
薄层色谱法具有操作简便、分离效果好、重现性好等优点，广泛应用于药物的鉴 别、分离和纯化。在实验过程中，将药物样品溶液点在薄层板上，经过展开后， 根据斑点的位置和颜色与标准品进行比较，确定药物的真伪和纯度。
高效液相色谱法
总结词
高效液相色谱法是一种高分离效能的色谱方 法，通过高压泵将药物样品注入色谱柱，然 后通过不同的洗脱液将其分离，再通过检测 器检测，实现对药物的鉴别。
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（一）性状：反映了药物特有的物理性质，一般包括 外观、嗅、味、溶解度以及物理常数(mp. bp. 等)。
（二）一般鉴别试验（General identification test）： 证实其是某一类药物，而不能证实是哪一种药物。仅 供确认单一的化学药物，如为数种化学药物的混合物 或有干扰物质存在时，除另有规定外，应不适用。 无机药物 阴离子和阳离子的特殊反应 有机药物 典型的官能团反应
常见的呈色反应有：
➢与重金属离子的沉淀反应---如巴比妥类药物与 铜盐、钴盐、银盐生成沉淀的反应； ➢与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应-多为生物 碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐； ➢其它沉淀反应。
常有气体生成的药物
➢大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类 药物，可经强碱处理后，加热，产生氨（胺）气 ➢化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生 硫化氢气体 ➢含碘有机药物经直火加热，可生成紫色碘蒸气 ➢含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产 生乙酸乙酯的香味。
（5（6）待测成分的晶型不变化，辅料存在干扰，可参 照原料药的表征光谱，在指纹区选择数个不受辅料干 扰的待测成分作为特征的鉴别谱带。
*最低检出浓度（Minimum detectable concentration）：以1:G或1:V表示，是应用 于某一反应，在一定条件下，能够观测出供试 品的最低浓度。
2. 空白试验（Blank test）:就是在与供试 品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供 试品外，其它试剂同样加入进行的试验。
（二）提高灵敏度的方法 1.加入与水不相溶的有机溶剂 2.改进观测方法
四、鉴别方法
（一）物理鉴别法 物理常数如沸点、熔点、相对密度、比旋度等均可 作为鉴别药物的依据，常用于纯度较高的原料药的 鉴别。如可可碱、氨茶碱、磷酸可待因等，测定熔 点是一种简便、专属的鉴别方法。对于某些熔点过 高、对热不稳定、熔点不敏锐的药物，可通过加入 试剂，使药物与试剂反应生成衍生物再测定熔点的 方法易于测定—制备衍生物测定熔点法。
一、概述
依据药典进行的药物分析主要有三大项： 鉴别、检查和含量测定 药典所收载的药物项下的鉴别试验方法， 仅适用于贮藏在有标签容器中的药物，用 以证实是否为其所标示的药物。
这些试验方法不能赖以鉴别未知物
ChP 2010凡例对药物鉴别的定义：鉴 别项下规定的试验方法，仅反映该药 品某些物理、化学或生物学等性质的 特征，不完全代表该药品化学结构的 确证。
（1）溶解度
反映药品的纯度、晶型或粒度，通过溶解 度试验判断溶解度
ChP 2010: 尼莫地平的溶解度：在丙酮、三氯 甲烷或乙酸乙酯中易溶，在乙醇中溶解， 在乙醚中微溶，在水中几乎不溶。
（2）熔点
指一种物质按规定方法测定，由固体熔化 成液体的温度、熔融同时分解的温度或在 熔化时自初熔至全熔的一段温度。
（二）化学鉴别法
1.干法 焰色试验 加热分解
➢取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在 无色火焰中燃烧，使火焰显出特殊的颜色。 ➢在适当的温度条件下，加热使供试品分解， 生成有特殊气味的气体。
2.湿法
呈色或褪色反应 沉淀生成反应 荧光反应 气体生成反应
常见的呈色反应
➢三氯化铁呈色反应---酚羟基或水解后产生酚羟基 ➢异羟肟酸铁反应---多为芳酸及其酯类、酰胺类 ➢茚三酮呈色反应---脂肪氨基 ➢重氮化-偶合显色反应---芳伯氨基或能产生芳伯氨 基 ➢氧化还原显色反应及其它颜色反应
二、鉴别反应的条件
（一）溶液的浓度 （二）溶液的酸碱度 （三）溶液的温度 （四）共存物质干扰 （五）反应介质 （六）试验时间
三、鉴别试验的灵敏度
（一）反应灵敏度和空白试验 1.反应灵敏度（Sensitivity） *最低检出量（Minimum detectable quantity） （又称检出限量）：以m表示，就是应用某一反 应，在一定的条件下，能够观测出的供试品的最 小量，其单位通常用微克（μg）表示。
（三）光谱鉴别法
1．紫外光谱鉴别法 (p76)
➢同时测定、核对λmax和λmin； ➢规定一定浓度的供试液在λmax处的吸收度； ➢规定吸收波长和吸收系数法； ➢规定吸收波长和吸收度比值法； ➢经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。
2.红外光谱 鉴别法
标准图谱对照法： 中国药典（2010年版) 对照品法：USP (32)。 JP(15)采用对照品鉴别法、对 照光谱鉴别和吸收波数鉴别法。 BP(2009)采用对照品法和对照 光谱法
（专属性很强、 应用较广）
适用范围：组分单一、结构明确的原料药；特别是
其他方法不易区分的同类药物。
2.1.试样制备方法：压片法、糊法、膜法和溶液法； 2.2.原料药鉴别 注意多晶现象； 2.3.制剂的鉴别 采取提取分离、适当干燥、压片绘制 图谱。 （1）有机溶剂直接提取，去除辅料干扰测定IR （2）有机酸，有机碱的对应盐，加入酸或碱沉淀， 分离干燥测定IR （3）主成分有机酸，加碱溶解，过滤，加酸沉淀分 离干燥测定IR （4）无辅料或辅料干扰少，可直接测定。
ChP 2010: 雌二醇的熔点：本品的熔点为175180℃.
（3）比旋度
在一定波长与温度下，偏振光透过长1 dm 且每1 ml中含有旋光性物质1 g的溶液时， 测得的旋光度称为比旋度。反映手性药物 特性及其纯度的主要指标。
ChP 2010： 维生素C的比旋度测定：取本品， 精密称定，加水溶解并定量稀释使成每1 ml 中含约0.10 g的溶液，测定，比旋度为 +20.5~+21.5.
例如，经一般鉴别反应的钠盐试验，证实某一药物 为钠盐，但不能辨认是氯化钠、苯甲酸钠或者是其 它某一种钠盐药物。要想最后证实被鉴别的物质到 底是哪一种药物，必须在一般鉴别试验的基础上， 再进行专属鉴别试验，方可确认。
（三）专属鉴别试验（Specific identification test）： 根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化 学特性的不同,选用某些特有的灵敏定性反应，来鉴别 药物的真伪。