恒河猴CD1d基因的克隆及其组织表达差异性分析
我国恒河猴粪便腺病毒聚合酶基因片段的序列分析
Ｓ ｑｕ ｎ ｉ ｎｄ ａ ｌ ｓ ｓ ｏ ｈｅ ａ ｅ ｏ ｉ ｕ ｏ ｙ ｅ ａ ｅ ｇ ｎ ｅ ｅ ｃ ｎｇ ａ ｎａ ｙ ｅ ｆｔ ｄ ｎ ｖ ｒ ｓ ｐ ｌ ｍ ｒ ｓ ｅ ｅ ｉ ｅ ａ ａ ｐｌｓ ｏ ａ ｉ ｅ ｙ ｂｒ ｄ ｒ ｅ ｕ ａ ａ ｅ ｎ Ｃｈ ｎａ ｎ ｆ ｃ ｌｓ ｍ ｅ ｆ ｃ ｐｔｖ ｌ ｅ ｈ ｓ ｓ ｍ ｃ ｑｕ ｓｉ ｉ
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恒河猴糖尿病动物模型血清及组织中细胞因子的变化
恒河猴糖尿病动物模型血清及组织中细胞因子的变化朱华;徐艳峰;刘颖;黄澜;秦川【期刊名称】《中国实验动物学报》【年(卷),期】2013(021)003【摘要】Objective To investigate the changes of cytokines (IL-6,IL-10,TNF-α) in rhesus monkey models of diabetes mellitus.Methods Ten adult rhesus monkeys were divided into experimental and control groups,5 in each group.The experimental monkeys were intravenously injected with streptozotocin (STZ) (30 mg/kg body weight,three times).The dynamic changes of IL-6,IL-10 and TNF-α serum levels were measured for 19 months.The animals were sacrificed when impending death.The expressions of IL-6,IL-10 and TNF-α in the pancreatic islets,liver and kidney were examined by immunohistochemical staining.Image analysis and statistical analysis were carried out of all the data obtained above.Results Compared with the serum levels before STZ injection,the level of IL-10 was significantly increased (P ＜0.01),while the levels of IL-6 and TNF-α decreased (P ＜ 0.01).The expressions of IL-6 and TNF-α were significantly decreased in pancreatic islets than those in the control group (P ＜0.05).The IL-10 expression was significantly increased in pancreatic islets than that in the control group (P ＜ 0.01).The number of TNF-α-positive cells in the liver was significantly decreased compared with that of the control group (P ＜ 0.05).Conclusions The levels and changes of cytokinesin the rhesus monkey models of diabetes mellitus generated by multiple injection of low-dose streptozotocin are similar to those in human diabetes,and this animal model may be used as a useful tool in researches assessing safety and efficacy of protective agents.%目的探讨恒河猴糖尿模型病细胞因子的水平和变化规律.方法健康恒河猴5只,小剂量(30mg/kg)多次静脉注射链脲佐菌素(STZ),血糖稳定后3、9、12和19个月检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10 (IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量.安乐濒死状态的动物,取胰腺、肝脏、肾脏制成石蜡切片,用免疫组化染色法显示组织中IL-6、IL-10、TNF-α的表达,并对结果进行图像分析和统计学处理.结果造模后9个月动物血清中IL-10浓度显著降低(P＜0.01).IL-6、TNF-α水平在采样的各个时间点均显著高于造模前(P＜0.01).胰腺组织中IL-6中等强度着色,对照组弱阳性表达(P＜0.05).对照组IL-10强阳性表达,模型组弱阳性(P＜0.01).模型组TNF-α中等强度表达,对照组弱阳性(P＜0.05).模型组肝脏组织TNF-α中等阳性表达,对照组弱阳性(P＜0.05).结论小剂量多次注射STZ后恒河猴细胞因子的含量及变化与临床类似,可作为相关研究的动物模型.【总页数】5页(P53-56,后插8)【作者】朱华;徐艳峰;刘颖;黄澜;秦川【作者单位】卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京100021;卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京100021;卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京100021;卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京100021;卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京100021【正文语种】中文【中图分类】Q95-33【相关文献】1.2型糖尿病并发肺结核患者血清中炎症细胞因子水平变化的研究 [J], 李雨泽;刘玉琴;陈向丽;侯绍英;Hayder;姜辉;李殿忠2.SIVmac239感染中国恒河猴动物模型组织病理学变化 [J], 徐文漭;李霞;赵稳兴;李涛;宋蜀伶;杨举伦3.观察糖尿病合并高血压患者血清促炎细胞因子(IL-6、TNF-α)和抗炎细胞因子(IL-10)水平变化 [J], 汪川;赵雯4.恒河猴糖尿病动物模型血清超氧化物歧化酶和丙二醛的检测及意义 [J], 朱华;刘颖;秦川5.糖尿病视网膜病变患者血清中细胞因子及视网膜中央动脉血流动力学的变化 [J], 金梅;李晓凤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
实验性糖尿病恒河猴的组织病理学观察
感谢实验室人员的辛勤付出和协助，他们为本实验提供了宝贵的 支持和帮助。
对资助机构的感谢
感谢相关资助机构对本实验的资助和支持，这些机构的支持使得 本实验得以顺利进行。
THANKS
谢谢您的观看
背景
糖尿病是一种常见的慢性疾病，对人 类健康具有严重危害。
恒河猴是一种常用的实验动物，具有与人 类相似的生理特征，可用于研究人类疾病 。
组织病理学观察是研究疾病发生、 发展过程中组织结构与功能变化的 重要手段。
02
实验方法与过程
实验动物与饲养条件
实验动物
健康成年恒河猴，雌雄不限，体重在3-5kg之间。
细胞坏死
实验性糖尿病恒河猴的胰岛细胞坏死数量也明显增加。
免疫细胞浸润与炎症反应
T淋巴细胞浸润
实验性糖尿病恒河猴的胰岛和肾组织中T 淋巴细胞浸润明显，提示免疫调节异常。
VS
单核/巨噬细胞浸润
实验性糖尿病恒河猴的视网膜和肾组织中 单核/巨噬细胞浸润明显，表明炎症反应 强烈。
04
讨论与结论
糖尿病对恒河猴组织的影响
通过对恒河猴组织的病理学观察，可以了解糖尿病对机 体的影响程度，为诊断提供依据。
01
机制研究
通过对恒河猴组织的病理学变化进行 分析，有助于深入探讨糖尿病的发病 机制。
02
03
药物筛选
通过对恒河猴组织的病理学变化进行 观察，可以评估药物对糖尿病的治疗 效果，为新药研发提供参考。
本实验的优缺点与改进方向
取材部位
取胰腺、肾脏、肝脏等组织。
取材时间
在注射后4周进行取材。
组织处理
将取材的组织用10%中性甲醛固定，进行石蜡包 埋、切片等处理。
人CD1d分子胞外区的原核表达及其多克隆抗体的制备
人CD1d分子胞外区的原核表达及其多克隆抗体的制备作者：陈章权*, 黄震, 梁晓东, 陆田田, 何天文【摘要】目的: 原核细胞表达人CD1d分子胞外区及制备其多克隆抗体。
方法: 用RT-PCR法扩增人CD1d分子胞外区基因, 将其克隆入原核表达载体pET28中, 转化大肠杆菌BL21（DE3）, 用IPTG 诱导重组蛋白的表达, 用亲和层析法纯化重组蛋白, 以之为免疫原免疫小鼠制备多克隆抗体, 并以ELISA、 Western blot及免疫组织化学法检测抗体。
结果: 在原核细胞中高效表达和纯化了人CD1d分子胞外区蛋白, 用其免疫小鼠, 获得了效价高、特异性较好的多克隆抗体, 免疫组织化学检测显示该抗体可识别人小肠组织中的天然CD1d分子。
结论: 成功制备了人CD1d分子胞外区重组蛋白及鼠抗人CD1d分子胞外区抗体, 为进一步建立人CD1d分子的免疫学检测方法及其生物学功能的深入研究奠定了基础。
【关键词】 CD1d 基因表达抗体制备CD1分子是独立于MHC分子之外的第三类抗原提呈分子, 分为CD1-I和CD1-II两组, 前者包括CD1a、 CD1b、 CD1c和CD1e等4个分子, 后者只有CD1d分子［1］。
CD1d分子由胞内区、跨膜区和胞外区组成, 胞外区又由α1、α2和α3等3个结构域组成, 它主要提呈糖脂抗原, 在免疫调节及与感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等疾病的发生发展过程中起重要作用［1, 2］。
在CD1d基因克隆过程中, 我们发现在某些疾病患者体内存在α3结构域或跨膜区缺失的变异体, 跨膜区缺失的变异体的存在提示患者体内可能存在可溶性CD1d分子。
为此, 我们拟建立双抗体夹心ELISA法进行可溶性CD1d分子的检测, 但目前尚未见有其商品化ELISA检测试剂盒。
特异性抗体的获取是建立ELISA检测方法的关键所在, 在成功制备兔抗人CD1d分子α3结构域抗体［3］的基础上, 我们又对人CD1d分子胞外区编码基因进行了重组表达, 并制备了其鼠源性抗体。
最新北师大版高中数学高中数学选修2-3第三章《统计案例》检测(答案解析)(2)
一、选择题1．为了调查某校高二学生的身高是否与性别有关，随机调查该校64名高二学生，得到2×2列联表如表：附：K 2()()()()2()n ad bc a b c d a c b d -=++++由此得出的正确结论是（ ）A ．在犯错误的概率不超过0.01的前提下，认为“身高与性别无关”B ．在犯错误的概率不超过0.01的前提下，认为“身高与性别有关”C ．有99.9%的把握认为“身高与性别无关”D ．有99.9%的把握认为“身高与性别有关”2．某人研究中学生的性别与成绩、视力、智商、阅读量这4个变量的关系，随机抽查了52名中学生，得到统计数据如表1至表4，则与性别有关联的可能性最大的变量是（ ） 表1表2表3表4 智商 性别 偏高正常总计阅读量 性别丰富不丰富总计男 8 12 20 男 14 6 20 女 8 24 32 女 2 30 32 总计163652总计163652A ．成绩B ．视力C ．智商D ．阅读量3．下列命题是假命题．．．的是（ ） A ．某企业有职工150人，其中高级职称15人，中级职称45人，一般职员90人，若用分层抽样的方法抽出一个容量为30的样本，则一般职员应抽出18人； B ．用独立性检验（列联表法）来考察两个分类变量是否有关系时，算出的随机变量的值越大，说明“与有关系”成立的可能性越大；C ．已知向量，，则是的必要条件； D ．若，则点的轨迹为抛物线.4．通过随机询问100名性别不同的居民是否能做到“光盘”行动，得到如下的列联表：做不到“光盘” 能做到“光盘” 男 45 10 女3015则有（ ）以上的把握认为“该市民能否做到‘光盘’与性别有关”，附表及公式()20P K k ≥0.100 0.050 0.010 0.001 0k 2.7063.8416.63510.828()()()()()22n ad bc K a b c d a c b d -=++++A ．90%B ．95%C ．99%D ．99.9%5．为了检验设备M 与设备N 的生产效率，研究人员作出统计，得到如下表所示的结果，则（ ）设备M 设备N生产出的合格产品4843生产出的不合格产品27附：()2P K k>0.150.100.050.0250.0100.0050.001 k 2.072 2.706 3.841 5.024 6.6357.87910.828参考公式：22()()()()()n ad bcKa b c d a c b d-=++++，其中n a b c d=+++.A．有90%的把握认为生产的产品质量与设备的选择具有相关性B．没有90%的把握认为生产的产品质量与设备的选择具有相关性C．可以在犯错误的概率不超过0.01的前提下认为生产的产品质量与设备的选择具有相关性D．不能在犯错误的概率不超过0.1的前提下认为生产的产品质量与设备的选择具有相关性6．为了普及环保知识，增强环保意识，随机抽取某大学30名学生参加环保知识测试，得分如图所示，若得分的中位数为m e，众数为m0，平均数为x-，则()A．m e＝m0＝x-B．m0＜x-＜m eC．m e＜m0＜x-D．m0＜m e＜x-7．如图所示，茎叶图记录了甲、乙两组各4名学生完成某道数学题的得分情况，该题满分为12分．已知甲、乙两组学生的平均成绩相同，乙组某个数据的个位数字模糊，记为x．则下列命题正确的是( )A．甲组学生的成绩比乙组稳定B．乙组学生的成绩比甲组稳定C．两组学生的成绩有相同的稳定性D．无法判断甲、乙两组学生的成绩的稳定性8．为考察数学成绩与物理成绩的关系,在高二随机抽取了300名学生,得到下面的列联表:现判断数学成绩与物理成绩有关系,则犯错误的概率不超过 ( ) A ．0.005B ．0.01C ．0.02D ．0.059．春节期间，“厉行节约，反对浪费”之风悄然吹开，某市通过随机询问100名性别不同的居民是否能做到“光盘”，得到如下的列联表：由此表得到的正确结论是( )A ．在犯错误的概率不超过0．01的前提下，认为“该市居民能否做到‘光盘’与性别有关”B ．在犯错误的概率不超过0．01的前提下，认为“该市居民能否做到‘光盘’与性别无关”C ．在犯错误的概率不超过0．1的前提下，认为“该市居民能否做到‘光盘’与性别有关”D ．在犯错误的概率不超过0．1的前提下，认为“该市居民能否做到‘光盘’与性别无关” 10．在一项中学生近视情况的调查中，某校男生150名中有80名近视，女生140名中有70名近视，在检验这些中学生眼睛近视是否与性别有关时用什么方法最有说服力（ ） A ．平均数与方差 B ．回归分析 C ．独立性检验 D ．概率11．若在区间[－5,5]内任取一个实数a ，则使直线x ＋y ＋a ＝0与圆(x －1)2＋(y ＋2)2＝2有公共点的概率为( )A ．5B ．25C ．35D ．1012．对两个变量x 和y 进行回归分析,得到一组样本数据: ()()1122,,,x y x y ,…(),n n x y ,则下列说法中不正确的是( )A ．由样本数据得到的回归方程ˆˆˆy bx a =+必过样本中心(),x yB ．残差平方和越小的模型,拟合的效果越好C ．若变量y 和x 之间的相关系数为0.9362r =-,则变量y 和x 之间具有线性相关关系D ．用相关指数2R 来刻画回归效果, 2R 越小,说明模型的拟合效果越好二、填空题13．如图所示是世界20个地区受教育程度的人口百分比与人均收入的散点图，样本点基本集中在一个条型区域，因此两个变量呈线性相关关系．利用散点图中的数据建立的回归方程为ˆ 3.19388.193yx =+，若受教育的人口百分比相差10%，则其人均收入相差_________．14．下列说法：①将一组数据中的每个数据都加上或减去同一个常数后，方差恒不变；②设有一个回归方程＝3－5x ，变量x 增加一个单位时，y 平均增加5个单位；③线性回归方程＝x ＋必过(，)；④曲线上的点与该点的坐标之间具有相关关系；⑤在一个2×2列联表中，由计算得K 2＝13.079，则其两个变量之间有关系的可能性是90%.其中错误的个数是________．15．以下结论正确．．的序号有_________ （1）根据22⨯列联表中的数据计算得出2K ≥6.635, 而P （2K ≥6.635）≈0.01，则有99% 的把握认为两个分类变量有关系.（2）在残差图中，残差点比较均匀落在水平的带状区域中即可说明选用的模型比较合适，与带状区域的宽度无关.（3）在线性回归分析中，相关系数为r ，r 越接近于1，相关程度越大；r 越小，相关程度越小.（4）在回归直线0.585y x =-中，变量200x =时，变量y 的值一定是15.16．如果根据性别与是否爱好运动的列联表得到K 2≈3．852＞3．841，则判断性别与是否爱好运动有关，那么这种判断犯错的可能性不超过________．17．为了解某班学生喜爱打篮球是否与性别有关,对该班50名 学生进行了问卷调查, 得到了如下22⨯ 列联表喜爱打篮球 不喜爱打篮球 合计男生20 525 女生 10 1525合计30 2050则至少有_____的把握认为喜爱打篮球与性别有关(请用百分数表示). 18．已知方程是根据女大学生的身高预报她的体重的回归方程，其中的单位是，的单位是，那么针对某个体的残差是______.19．已知的取值如表所示：若与呈线性相关，且回归方程为，则等于 ．23454620．已知下列命题：①从匀速传递的产品生产流水线上，质检员每30分钟从生产流水线中抽取一件产品进行某项指标检测，这样的抽样方法是系统抽样；②两个变量的线性相关程度越强，则相关系数的值越接近于1；③两个分类变量X 与Y 的观测值2k ，若2k 越小，则说明“X 与Y 有关系”的把握程度越大；④随机变量X ～(0,1)N ，则(1)2(1)1P X P X <=<-. 其中为真命题的是__________．三、解答题21．我国新型冠状病毒肺炎疫情期间，以网络购物和网上服务所代表的新兴消费展现出了强大的生命力，新兴消费将成为我国消费增长的新动能.某市为了了解本地居民在2020年2月至3月两个月网络购物消费情况，在网上随机对1000人做了问卷调查，得如表频数分布表：（1）作出这些数据的频率分布直方图，并估计本市居民此期间网络购物的消费平均值； （2）在调查问卷中有一项是填写本人年龄，为研究网购金额和网购人年龄的关系，以网购金额是否超过4000元为标准进行分层抽样，从上述1000人中抽取200人，得到如表列联表，请将表补充完整并根据列联表判断，在此期间是否有95%的把握认为网购金额与网购人年龄有关.参考公式和数据：()()()()()22n ad bc K a b c d a c b d -=++++.（其中n a b c d =+++为样本容量）22．某私营业主为确定下一年度投入某种产品的宣传费，需了解月宣传费x （单位：百元）对月销售量y （单位：t ）和月利润z （单位：百元）的影响，对8个月的宣传费i x 和销售量i y （i ＝1，2，...，8）数据作了初步处理，得到如图的散点图及一些统计量的值.x y w()821i i x x =-∑()821ii w w =-∑()()81iii x x y y =--∑ ()()81iii w w yy =--∑（1）根据散点图判断出y ＝c +y 关于月宣传费x 的回归方程类型，求y 关于x 的回归方程；（表中i w =（2）已知这种产品的每月利润z 与x 、y 的关系为2z y x =-，根据（1）的结果，当月宣传费用x ＝16时，求月利润的预报值.参考公式：1122211()()()()n ni iiii i nni i i i x y nx y x x y y b x n x x x ====-⋅--==--∑∑∑∑, ˆˆa y bx=- 23．为了了解某校高中生的身体质量情况，某调查机构进行了一次高一学生体重和身高的抽样调查，从中抽取了8名学生（编号为18）的身高(cm)x 和体重(kg)y 数据.如下表，某调查机构分析发现学生的身高和体重之间有较强的线性相关关系，在编号为6的体检数据丢失之前，调查员甲已进行相关的数据分析并计算出该组数据的线性回归方程为ˆˆ0.5ya x =+，且根据回归方程预估一名身高为180cm 的学生体重为71kg ，计算得到的其他数据如下：81170,89920i ii x x y===∑.（1）求a 的值及表格中8名学生体重的平均值y ；（2）在数据处理时，调查员乙发现编号为8的学生体重数据有误，应为63kg ，身高数据无误.请你根据调查员乙更正的数据重新计算线性回归方程，并据此预估一名身高为180cm 的学生的体重.附：回归直线方程ˆˆˆy a bx=+的斜率和截距的最小二乘法估计分别为：1221ˆni ii nii x ynx y bxnx==-=-∑∑，ˆˆay bx =-. 24．“海水稻”就是耐盐碱水稻，是一种介于野生稻和栽培稻之间的普遍生长在海边滩涂地区，具有耐盐碱的水稻，它比其它普通的水稻均有更强的生存竞争能力，具有抗涝，抗病虫害，抗倒伏等特点，还具有预防和治疗多种疾病的功效，防癌效果尤为显著.海水稻的灌溉是将海水稀释后进行灌溉.某试验基地为了研究海水浓度x (‰)对亩产量y (吨)的影响，通过在试验田的种植实验，测得了某种海水稻的亩产量与海水浓度的数据如表.绘制散点图发现，可用线性回归模型拟合亩产量y 与海水浓度x 之间的相关关系，用最小二乘法计算得y 与x 之间的线性回归方程为.88ˆ0ˆy bx=+.（2）①完成上述残差表：②统计学中，常用相关指数2R 来刻画回归效果，2R 越大，模型拟合效果越好，并用它来说明预报变量与解释变量的相关性.你能否利用以上表格中的数据，利用统计学的相关知识，说明浇灌海水浓度对亩产量的贡献率？（计算中数据精确到0.01）(附：残差公式ˆˆi i i ey y =-，相关指数()()22121ˆ1ni i i nii y yR y y ==-=--∑∑)25．在传染病学中，通常把从致病刺激物侵入机体或者对机体发生作用起，到机体出现反应或开始现该疾病对应的相关症状时止的这一阶段称为潜伏期.一研究团队统计了某地区1000名患有某种传染病的患者的相关信息，得到如表：该传染病的潜伏期受诸多因素的影响，为研究潜伏期与患者年龄的关系，以潜伏期是否超过6天为标准进行分层抽样，从上述1000名患者中抽取200人，得到如下列联表.（Ⅰ）请将列联表补充完整；（Ⅱ）根据列联表判断是否有95%的把握认为潜伏期与患者年龄有关？附：()()()()()22n ad bcKa b c d a c b d-=++++，其中n a b c d=+++.26．2020年5月22日晚，国际权威医学杂志《柳叶刀》在线发表了全球首个新冠疫苗临床试验结果，该试验结果来自我国的陈薇院士和朱凤才教授团队､由于非人灵长类动物解剖生理､组织器官功能和免疫应答反应等性状与人类非常接近，所以常选择恒河猴进行科研和临床实验.某生物制品研究所将某一型号疫苗用在恒河猴身上进行科研和临床实验，得到部分数据如下表.现从注射疫苗的恒河猴中任取1只，取到感染病毒的恒河猴的概率为2 5 .95%把握认为注射此种疫苗有效？（2）在感染病毒的恒河猴中，按未注射疫苗和注射疫苗的比例抽取5只进行病理分析，然后从这5只恒河猴中随机抽取3只对注射疫苗情况进行核实，求恰好抽到2只未注射疫苗的恒河猴的概率.附：()()()()()22n ad bcKa b c d a c b d-=++++，n a b c d=+++.【参考答案】***试卷处理标记，请不要删除一、选择题 1．D 解析：D 【分析】根据22⨯列联表，计算2k ，与临界值表比较即可得出结论. 【详解】K 的观测值：K 2264(862426)34303232⨯⨯-⨯=≈⨯⨯⨯20.330；由于20.330＞10.828，∴有99.9%的把握认为“身高与性别有关”，即在犯错误的概率不超过0.001的前提下，认为“身高与性别有关” 故选：D ． 【点睛】本题主要考查了独立性检验的应用问题，K 2的计算，22⨯列联表，考查了运算能力，属于中档题．2．D解析：D 【分析】计算得到22322214χχχχ>>>，得到答案. 【详解】计算得到：222152(6221410)5281636322016363220χ⨯⨯-⨯⨯==⨯⨯⨯⨯⨯⨯； 222252(4201612)521121636322016363220χ⨯⨯-⨯⨯==⨯⨯⨯⨯⨯⨯ ； 222352(824128)52961636322016363220χ⨯⨯-⨯⨯==⨯⨯⨯⨯⨯⨯ ； 222452(143062)524081636322016363220χ⨯⨯-⨯⨯==⨯⨯⨯⨯⨯⨯；故22322214χχχχ>>>. 故选：D . 【点睛】本题考查了独立性检验，意在考查学生的计算能力和应用能力.3．D解析：D 【分析】根据分层抽样的概念易得，解出方程即可判断为真；用独立性检验（列联表法）的判定方法即可得出B 为真；根据充分条件和必要条件的定义以及向量的数量积的应用，进行判断即可得到C 为真；可将原式化为，表示动点到定点和到动直线距离相等的点的轨迹，但是定点在定直线上，故可判断D. 【详解】设一般职员应抽出人，根据分层抽样的概念易得，解得，即一般职员应抽出18人，故A 为真； 用独立性检验（列联表法）来考察两个分类变量是否有关系时，算出的随机变量的值越大，说明“与有关系”成立的可能性越大，可知B 为真；若，则，即不成立，若，则，即成立，故是的必要条件，即C 为真；方程即：，化简得，即表示动点到定点的距离和到直线的距离相等的点的集合，且在直线上，故其不满足抛物线的定义，即D 为假，故选D.【点睛】本题主要考查了分层抽样的概念，独立性检验在实际中的应用，充分条件、必要条件的判定，抛物线的定义等，属于中档题.4．A解析：A 【解析】分析：根据列联表中数据代入公式计算k 的值，和临界值表比对后即可得到答案. 详解：将列联表中数据代入公式可得()210045153010 3.030 2.70675255545k ⨯⨯-⨯=≈>⨯⨯⨯，所以有0090的把握认为“该市居民能否做到‘光盘’”与性别有关.点睛：独立性检验的一般步骤：（1）根据样本数据制成22⨯列联表；（2）根据公式()()()()()22n ad bc K a b a d a c b d -=++++计算2K 的值；(3) 查表比较2K 与临界值的大小关系，作统计判断.（注意：在实际问题中，独立性检验的结论也仅仅是一种数学关系，得到的结论也可能犯错误.）5．A解析：A【解析】将表中的数据代入公式，计算得22100(487243) 3.0535050919K ⨯⨯-⨯=≈⨯⨯⨯，∵3.053 2.706>，∴有90%的把握认为生产的产品质量与设备的选择具有相关性，故选A ．6．D解析：D 【解析】由条形图知，30名学生的得分情况依次为2个人得3分，3个人得4分，10个人得5分，6个人得6分，3个人得7分，2个人得8分，2个人得9分，2个人得10分，中位数为第15,16个数(分别为5,6)的平均数，即m e ＝5.5,5出现的次数最多，故众数为m 0＝5，平均数为x ＝130(2×3＋3×4＋10×5＋6×6＋3×7＋2×8＋2×9＋2×10)≈5.97，故m 0＜m e ＜x . 故答案为D.点睛：这个题目考查的是条型分布直方表的应用，以及基本量：均值，平均数的考查；一般在这类图中平均数就是将数据加到一起除以数据的个数即可，在频率分布直方表中是取每个长方条的中点乘以相应的频率并相加即可.7．A解析：A 【解析】()x 甲＝14×(9＋9＋11＋11)＝10，x 乙＝14×(8＋9＋10＋x ＋12)＝10，解得x ＝1.又2s 甲＝14×[(9－10)2＋(9－10)2＋(11－10)2＋(11－10)2]＝1，2s 乙＝14×[(8－10)2＋(9－10)2＋(11－10)2＋(12－10)2]＝52，∴2s 甲<2s 乙，∴甲组学生的成绩比乙组稳定． 故答案为A.8．D解析：D 【解析】因为K 2的观测值k=2300(371433585)12217872228⨯-⨯⨯⨯⨯≈4.514>3.841, 所以在犯错误的概率不超过0.05的前提下认为数学成绩与物理成绩有关系. 选D.9．C解析：C 【解析】由2×2列联表得到a ＝45，b ＝10，c ＝30，d ＝15．则a ＋b ＝55，c ＋d ＝45，a ＋c ＝75，b ＋d ＝25，ad ＝675，bc ＝300，n ＝100．所以K 2的观测值k ＝2100675-30055457525⨯⨯⨯（）≈3．030．因为2．706<3．030<3．841．选C. 点睛：根据卡方公式求K 2，再与参考数据比较，最后作出判断.10．C解析：C【解析】判断两个分类变量是否有关的最有效方法是进行独立性检验，故选C. 考点：独立性检验的意义.11．B解析：B 【解析】∵直线0x y a ++=与圆()()22122x y -+=+有公共点，∴≤13a -≤≤，∴在区间[55]-，内任取一个实数a ，使直线0x y a ++=与圆()()22122x y -+=+有公共点的概率为312555+=+，故选B. 点睛：本题主要考查了几何概型的概率，以及直线与圆相交的性质，解题的关键弄清概率类型，同时考查了计算能力，属于基础题；利用圆心到直线的距离小于等于半径可得到直线与圆有公共点，可求出满足条件的a ，最后根据几何概型的概率公式可求出所求.12．D解析：D 【解析】逐一分析所给的各个选项：A. 由样本数据得到的回归方程ˆˆˆy bx a =+必过样本中心(),x yB. 残差平方和越小的模型,拟合的效果越好C. 若变量y 和x 之间的相关系数为0.9362r =-,则变量y 和x 之间具有线性相关关系D. 用相关指数2R 来刻画回归效果,2R 越大,说明模型的拟合效果越好，该说法错误. 本题选择D 选项.二、填空题13．93美元【分析】设所受教育百分比分别为且利用回归方程计算即可【详解】设所受教育百分比分别为且根据回归方程为收入相差大约为：即受教育的人口百分比相差则其人均收入相差约美元故答案为：3193美元【点睛】解析：93美元 【分析】设所受教育百分比分别为%,%a b ，且10a b -=，利用回归方程计算即可． 【详解】设所受教育百分比分别为%,%a b ，且10a b -=根据回归方程为 3.19388.193y x ∧=+， 收入相差大约为：()3.19388.193 3.19388.193 3.1931031.93a b ⨯+-⨯+=⨯=，即受教育的人口百分比相差10%，则其人均收入相差约31.93美元． 故答案为：31.93美元． 【点睛】本题考查了线性回归方程的应用问题，属于中档题．14．3【解析】【分析】逐一分析各个说法即可得到结论【详解】由方差的性质知：方差反映一组数据的波动大小将一组数据中的每个数据都加上或者减去同一个常数后方差恒不变①正确；一个回归方程＝3－5x 变量x 增加一个解析：3 【解析】 【分析】逐一分析各个说法即可得到结论 【详解】由方差的性质知：方差反映一组数据的波动大小，将一组数据中的每个数据都加上或者减去同一个常数后，方差恒不变，①正确；一个回归方程ˆy＝3－5x ，变量x 增加一个单位时，y 平均减少5个单位，②错误 线性回归方程必过样本中心点，③正确；曲线上的点与该点的坐标之间具有一一对应关系④错误．在一个2×2列联表中，由计算得K 2＝13.079，则其两个变量之间有关系的可能性是99.90%，故⑤错误综上所述，其中错误的个数是3个 故答案为3 【点睛】本题主要考查了线性回归方程，考查了独立性检验，考查了方差的变化特点，考查了相关关系，是一道考查的知识点比较多的题目，综合性较强，注意分析，本题不需要计算，只要理解概念即可得到结论15．(1)(3)【解析】分析：根据独立性检验残差图相关系数回归分析的定义及性质逐一分析四个答案的真假即可详解：对于（1）根据2×2列联表中的数据计算得出≥6635而P （≥6635）≈001则有99的把握解析：(1)(3). 【解析】分析：根据独立性检验、残差图、相关系数、回归分析的定义及性质，逐一分析四个答案的真假即可．详解：对于（1），根据2×2列联表中的数据计算得出2K ≥6.635, 而P （2K ≥6.635）≈0.01，则有99%的把握认为两个分类变量有关系，故（1）正确．对于（2），根据残差图的意义可得，当带状区域的宽度较小时，说明选用的模型比价合适，而当带状区域的宽度较大时，说明选用的模型不合适，故（2）不正确．对于（3），在线性回归分析中，相关系数为r ，|r |越接近于1，则相关程度越大；|r |越接近于0，则相关程度越小．故（3）正确．对于（4），在回归直线y =0.5x −85中，当x =200时，y =15，但实际观测值可能不是15，故（4）不正确．综上可得（1）（3）正确．点睛：本题考查回归分析和独立性检验的基本知识，属于基础类题目，解题的关键是熟记相关的的概念和性质．16．【解析】∵P(K2≥3841)≈005∴判断性别与是否爱好运动有关出错的可能性不超过5点睛：根据卡方公式计算再与参考数据比较就可确定可能性 解析：5%【解析】∵P (K 2≥3．841)≈0．05．∴判断性别与是否爱好运动有关，出错的可能性不超过5%． 点睛：根据卡方公式计算2K ，再与参考数据比较，就可确定可能性.17．【解析】则至少有的把握认为喜爱打篮球与性别有关 解析：99.5%【解析】2250(30050)8.33325253020k -==⨯⨯⨯()200.0050.001p k k >≥>则至少有99.5%的把握认为喜爱打篮球与性别有关18．【解析】试题分析：由回归直线方程可知当时所以针对个体的残差是考点：线性回归方程 解析：0.29-【解析】试题分析：由回归直线方程可知当160x =时，53.29y =，所以针对个体的残差是5353.290.29-=-.考点：线性回归方程.19．5【解析】试题分析：考点：回归方程【方法点睛】求回归直线中的参数ba 需要先求得b 再求a 因为所以要根据列表中的数据求得公式中相关的量将这些数据代入公式中即可求得参数b 对于参数a 需要将b 代入回归直线求得解析：5【解析】试题分析：3125344646i i i x y ==⨯+⨯+⨯=∑， 32222123429i i x ==++=∑，3x =， 5y =， ∴ 31322130.53ˆi i i i i x y xyb x x==-==-∑∑． 考点：回归方程．【方法点睛】求回归直线中的参数b ，a ，需要先求得b ，再求a ，因为，所以要根据列表中的数据求得公式中相关的量，将这些数据代入公式中，即可求得参数b ．对于参数a ，需要将b ，代入回归直线求得．20．①④【解析】对于①从匀速传递的产品生产流水线上质检员每30分钟从生产流水线中抽取一件产品进行某项指标检测这样的抽样方法是系统抽样故①正确；对于②两个变量的线性相关程度越强则相关系数的绝对值越接近于1解析：①④ 【解析】对于①，从匀速传递的产品生产流水线上，质检员每30分钟从生产流水线中抽取一件产品进行某项指标检测，这样的抽样方法是系统抽样，故①正确；对于②，两个变量的线性相关程度越强，则相关系数的绝对值越接近于1，故②错误； 对于③,两个分类变量X 与Y 的观测值2k ,若2k 越小，则说明“X 与Y 有关系”的把握程度越小，故③错误；对于④,∵随机变量X ∼N (0,1),设P (|X |<1)=p ,则1(1)(1)2pP X P X ->=<-=， ∴11(1)1(1)122p pP X P X -+<=->=-=， ∴2(1)1P X p <-=,即(1)2(1)1P X P X <=<-，故④正确。
恒河猴五种组织染色质化学组分的对比研究
恒河猴五种组织染色质化学组分的对比研究
钟叔平;温博贵
【期刊名称】《动物学研究》
【年(卷),期】1994(000)003
【摘要】恒河猴五种组织染色质化学组分的对比研究钟叔平，温博贵（汕头大学医学院生化教研室汕头５１５０３１）关键词恒河猴，细胞分化，染色质，非组蛋白，基因调控ＣＯＭＰＡＲＡＢＬＥＳＴＵＤＹＯＮＣＨＲＯＭＡＴＩＮＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＯＦＦＩＶＥＴＩＳＳＵＥＳＦＲ...
【总页数】1页(P70)
【作者】钟叔平;温博贵
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】Q959.848
【相关文献】
1.低渗肿胀实验、苯胺蓝染色及染色质扩散实验检测精子核蛋白及膜完整性对比研究 [J], 李安娜;张美华;房振亚;邱毅
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3.不同年龄恒河猴消化系统的组织学与组织化学研究比较 [J], 于博;孔小明;程树军;黄韧
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5.八种脱钙液对骨组织制片后HE染色质量影响的实践探究 [J], 方皓;云杰苗;王雄;袁滋铎;林俞辰;陶子春;薛逢贵;胡爱华
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恒河猴骨髓间充质干细胞的培养与鉴定
恒河猴骨髓间充质干细胞的培养与鉴定董婧婧;胡竹林;李妍;孙晓梅【摘要】背景:关于恒河猴骨髓间充质干细胞的研究结果很有限,来自幼年恒河猴骨髓间充质干细胞的分化潜力仍然未知.目的:探讨体外分离培养的恒河猴骨髓间充质干细胞生物学特性,对其生长曲线和表型进行初步鉴定.方法:采用密度梯度离心法和全骨髓贴壁培养法提取培养幼年恒河猴骨髓间充质干细胞,利用MTS法绘制第2,7代骨髓间充质干细胞生长曲线,利用流式细胞仪分析法检测第3代骨髓间充质干细胞凋亡及第4代骨髓间充质干细胞表面标志物CD29、CD34、CD45、CD90、CD147表达,检测第3代骨髓间充质干细胞的成骨及成脂分化能力.结果与结论:①第2,7代骨髓间充质干细胞在培养第一二天为潜伏期,第3-7天为对数生长期,第8天后细胞增殖逐渐减慢,进入平台期,第7代细胞增殖能力弱于第2代;②骨髓间充质干细胞表面标志物CD90、CD29、CD147呈阳性表达,CD34、CD45呈阴性表达;③流式细胞仪细胞凋亡检测结果显示,73.83％为活细胞,21.76％为死亡细胞,4.27％为凋亡细胞;④骨髓间充质干细胞可诱导分化为成骨细胞与成脂细胞;⑤结果表明,分离培养的恒河猴骨髓间充质干细胞生长活跃,有较强的增殖及多向分化能力.%BACKGROUND:Studies on rhesus monkey bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) are limited,and the differentiation potential of juvenile rhesus monkey BMSCs remains unknown.OBJECTIVE:To investigate the biological characteristics of rhesus monkey BMSCs isolated and cultured in vitro,and to identify the growth curve and phenotype ofBMSCs.METHODS:BMSCs from juvenile rhesus monkeys were isolated and cultured by density gradient centrifugation and the whole bone marrow adherence methods.BMSCs at passages 2 and 7 were taken to draw cellgrowth curves by MTS method.Flow cytometry was used to detect apoptosis of passage 3 BMSCs and to detect expression of cell surface markers,CD29,CD34,CD45,CD90,CD147,in passage 4 BMSCs.Osteogenic and adipogenic abilities of passage 3 BMSCs were also detected.RESULTS AND CONCLUSION:The BMSCs at passages 2 and 7 were incubated at first 2 days,logarithmically grew at 3-7 days,and then proliferated slowly at 8 days.The BMSCs at passage 2 showed stronger proliferation than those at passage 7.At passage 3,BMSCs were negative for CD34 and CD45,but positive for CD90,CD29 and CD147.Results from the fiow cytometry showed that there were 73.83％ living cells,21.76％ dead cells,and 4.27％apoptotic cells.BMSCs could differentiate into osteoblasts and adipocytes under osteogenic and adipogenic induction,respectively.Toconclude,BMSCs from the rhesus monkey have strong proliferation and multilineage differentiation abilities in vitro.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2017(021)029【总页数】6页(P4623-4628)【关键词】干细胞;间充质干细胞;恒河猴;原代培养;形态学;分化;鉴定【作者】董婧婧;胡竹林;李妍;孙晓梅【作者单位】昆明医科大学第四附属医院,云南省第二人民医院眼科,云南省昆明市650021;昆明医科大学第四附属医院,云南省第二人民医院眼科,云南省昆明市650021;昆明医科大学第四附属医院,云南省第二人民医院眼科,云南省昆明市650021;中国医学科学院昆明医学生物研究所灵长类研究中心,云南省昆明市650018【正文语种】中文【中图分类】R394.20 引言 lntroduction间充质干细胞是分布在间质骨髓的多能祖细胞，在特定培养条件下有极强的增殖分化潜能，并打破了传统的胚层分化限制，可向3个胚层的细胞分化：内胚层的肝细胞，中胚层细胞的成骨细胞、脂肪细胞和肌细胞，外胚层的神经细胞等[1-4]。
用微卫星DNA标记技术建立猕猴遗传检测方法及对群体遗传多样性的分析
用微卫星DNA标记技术建立猕猴遗传检测方法及对群体遗传多样性的分析随着生物学、医学和药学的发展,对标准化实验猕猴的需求量不断增加,建立并提供遗传背景清楚的标准化实验猕猴,将对生命科学研究结果的准确性和可靠性提供有力保障。
实验动物科学是生物医学乃至整个生命科学研究的基础和支撑条件,其发展和应用程度是衡量一个国家或地区科学技术水平高低的一个重要标志。
但是,从整体水平看,我国实验动物工作的发展还不平衡,标准化进程和水平也不一致,尤其是实验猕猴等大型实验动物,不管是资源丰厚程度,还是自身的研究力度都相当薄弱。
实验动物遗传质量监测是评价动物质量好坏的一个重要手段,其目的是为了验证各种动物品系应具有的遗传特性,检查是否存在杂合性、基因突变和遗传污染等,以确定被检对象是否符合该群体的生物学特性。
微卫星DNA标记技术由于其具有高度地灵敏性、特异性和多态性,方法简便、快速和廉价等特性,被广泛地应用到实验动物的遗传质量监测和遗传结构多样性分析中,是目前公认的物种遗传多样性评估的最佳分子遗传标记技术,也是实验动物遗传质量监测的重要手段。
本实验研究通过优化各猕猴微卫星DNA位点的复性温度和Mg2+浓度等PCR扩增反应体系条件,从100个位点中筛选出D1S1594、D1S533、D3S3045、D21S1246、D7S513、D6S493、D6S2419、D4S1645、D5S820、D5S1470、D5S1466、D14S255、D15S644、D10S611、D20S171、D12S372、D2S1333、D12S67、D2S146、D11S2002、D11S1352、D9S934、D17S1290、D17S791、D13S797、D18S536、D18S869、D19S571、D19S559和D16S403等30个具有多态性高、等位基因数多和染色体上分布均匀的微卫星DNA位点。
利用这30个多态性微卫星DNA位点对北京地区恒河猴种群的28只个体的遗传结构进行了监测分析,其等位基因数均在7条以上,最高的达到了11条。
恒河猴源犬瘟热病毒N、F基因的克隆与序列分析
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恒 河 猴 源 犬 瘟 热 病 毒 Ｎ、 Ｆ基 因 的 克 隆 与 序 列 分 析
邱 薇 ，王文博 ，胡挺 松 ，余 静 ，郭 平 ，郑 颖 ，张富强 ，范泉水
恒河猴艾滋病模型中枢神经系统及淋巴结病变的电镜观察
恒河猴艾滋病模型中枢神经系统及淋巴结病变的电镜观察徐艳峰;孙丽华;潘菊华;卢耀增【摘要】Objective To observe ultrastructural changes of central nerve system and lymph nodes at different stages of SIV infection in rhesus monkeys, explore the pathogenesis of simian AIDS. Methods 15 rhesus monkeys, 1 was used as normal control, the other 14 monkeys were infected with SIVmac239 intravenously. Inguinal lymph nodes and hypothalamic tissues were inspected by transmission electron microscopy at 1 week, 2 weeks, 1 month, 2 months, 12 months and 18 months after infection. Results 1 week after infection, lymphocytes in lymph node showed pathological changes, manifested as mitochondria swelling with cristae dissolution and autophagies. At time points of 2 weeks and 1 month after infection, lymphocytes showed mitochondria swelling with cristae dissolution. 2 months after infection, the nuclei of the lymphocytes were obviously deformed. At 12 months after infection, a high proportion of lymphocytes had obvious lesions, manifested as cell swelling, most organelles lost their normal appearance; some cells showed features of solubilized necrosis. At 18 months after infection, the lymphocytes were sparse in some areas of the lymph node, the nuclei of the lymphocytes were swelling or had irregular shapes. Central nervous system lesions appeared at 1 week after infection, manifested as nerve fiber swelling. At 2 weeks after infection, the neuron showed mitochondria swelling, rough endoplasmic reticulum degranulation, Nissl bodies disappearing; therewere vacuoles in the nerve fibers. At 12 months and 18 months after infection, the lesions of neurons and nerve fibers were increased. Conclusions In the early stage of SIV infection, the lesions can be found in lymph node and central nervous system. After maintaining a relatively stable stage, the disease deteriorated, the lesions were increased. The lesions in the central nervous system and lymph node showed some similarity in the development.%目的观察恒河猴艾滋病模型不同感染阶段中枢神经系统及淋巴结的超微结构改变,探讨艾滋病的发病机制和病理改变的发展过程.方法 15只恒河猴,1只为正常对照,其余14只静脉注射感染SIVmac239猴艾滋病病毒,分别于感染后1周,2周,1个月,2个月,12个月,18个月取腹股沟淋巴结及下丘脑组织进行透射电镜检查.结果感染后1周即可出现淋巴结内淋巴细胞病变,表现为线粒体肿胀,嵴溶解,出现自噬体等.感染后2周及1个月时淋巴细胞病变主要表现为线粒体肿胀,嵴溶解;感染2个月时淋巴细胞细胞核形态出现明显改变.感染后12个月淋巴结内多数淋巴细胞出现病变,细胞肿胀,细胞器正常形态大部分消失;部分细胞出现溶解性坏死的特征.至感染后期(18个月时),淋巴结内局部淋巴细胞稀疏,细胞核肿胀或形态不规则.中枢神经系统的病变在感染后1周出现,表现为神经纤维肿胀,感染后2周出现神经元的病变,表现为神经元线粒体肿胀,粗面内质网脱颗粒,尼氏体消失;神经纤维内出现空泡.感染后12个月及18个月时,神经元和神经纤维的病变加重.结论在SIV感染早期,淋巴结内淋巴细胞及中枢神经系统即可出现病变,维持一段相对稳定的时间后,至疾病后期,病变加重.中枢神经系统与淋巴结的超微结构病变发展规律有一定的相似性.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2012(022)006【总页数】6页(P5-8,后插1-后插2)【关键词】SIV;艾滋病动物模型;电镜;恒河猴;中枢神经系统;淋巴结【作者】徐艳峰;孙丽华;潘菊华;卢耀增【作者单位】中国医学科学院医学实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,北京100021;中国医学科学院医学实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,北京100021;中国中医科学院广安门医院,北京100053;中国医学科学院医学实验动物研究所,卫生部人类疾病比较医学重点实验室,国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室,北京100021【正文语种】中文【中图分类】R332在HIV感染的早期，HIV病毒即在淋巴结的CD4+T淋巴细胞内复制，导致病毒血症和CD4+T淋巴细胞减少，引起细胞免疫缺陷。
生物学中的恒河猴模型研究
生物学中的恒河猴模型研究在生物学中，动物模型是一种重要的研究工具，它可以被用来探究生命过程以及疾病发展的相关机理。
而对于灵长类动物来说，由于其与人类的近亲关系，因此成为了重要的研究对象。
其中，恒河猴模型即是一种被广泛应用的模型。
恒河猴的学名为Macaca mulatta，它最早被在印度的恒河流域地区发现，因而得名。
目前，恒河猴广泛分布于南亚、东南亚等地区，是一种主要栖息于丛林、山地等环境中，并且善于攀爬的灵长类动物。
而在生物学研究中，由于其生理结构、行为习性等方面的相似性，被广泛用作神经生物学、心理学、遗传学等领域的实验动物。
首先，恒河猴模型在神经生物学领域的应用十分广泛。
研究人员可以通过对恒河猴大脑中神经元活动的记录，来揭示大脑如何处理控制行为的信息。
例如，研究发现，当恒河猴目视一个定点时，其脑中的一定神经元就会被激活，而当其移动视线时，这些神经元又会被重新配置，这为解析大脑中信息处理方式的研究提供了依据。
其次，恒河猴模型在心理学领域的应用也非常广泛。
恒河猴能够表现出许多与人类相似的认知与行为，例如空间记忆、计数能力、抉择、决策等。
研究者可以利用其表现出的类似人类的行为和认知，来研究心理学和神经科学方面的问题。
例如，以恒河猴为对象进行的视觉注意力研究，发现了恒河猴大脑中视觉注意力的相关机制和神经途径，这对研究人类的注意力分配机制也有着重要意义。
除此之外，恒河猴模型在遗传学研究中也有着广泛的应用。
由于恒河猴与人类有着接近物种的亲缘关系，因此在研究动物模型遗传变异的过程中，对可以将恒河猴用作代替人类模型。
例如，研究发现恒河猴中存在一种可导致血糖水平升高的基因变异，与人类糖尿病的疾病遗传机制相关，这种研究成果对人类糖尿病的研究和治疗具有一定价值。
总之，恒河猴作为一种常用的生物模型，其在神经生物学、心理学、遗传学等研究领域中的应用非常广泛。
相信随着科学的不断发展，恒河猴模型还将会为其它更多领域的研究提供更加广泛和深入的应用。
恒河猴基因组组装与生物信息学分析
恒河猴基因组组装与生物信息学分析恒河猴，又称印度长尾猴，是我们熟知的一种猴子，主要分布在印度、孟加拉国、不丹以及中国的西藏和云南等地。
恒河猴是非常重要的生物模型，因为其在演化和认知科学、动物行为学、繁殖生态学等领域的应用十分广泛。
除此之外，恒河猴还是研究临床医学，如肿瘤、神经疾病以及心血管疾病等方面的研究对象。
近年来，基因组学在生命科学领域的应用日益广泛，而基因组组装是基因组学的核心技术之一。
基因组组装的目的是将大量的DNA序列拼接成完整的染色体螺旋，从而得到生物体的完整基因组序列信息。
本篇文章就以恒河猴的基因组组装与生物信息学分析为主题，向读者介绍一下基因组组装的相关技术和恒河猴基因组的组装情况以及进一步的生物信息学分析。
一、基因组组装技术基因组组装是基因组学研究的关键技术之一，其目的是将大量的DNA序列拼接成完整的染色体螺旋，从而得到生物体的完整基因组序列信息。
基因组组装的先决条件是要得到较长的DNA片段，常见的DNA提取方法包括传统的CTAB（阳离子表面活性剂）法、纯化酚法、菌落PCR法等。
得到DNA后，科学家们可以使用不同的序列技术来进行基因组测序，如链终止法、454测序技术、新一代Illumina测序技术、Ion Torrent PGM测序技术等。
得到了大量生物体DNA序列信息后，基因组组装的关键工作就是如何将这些序列麻烦组合成一个完整的基因组序列。
常见的组装策略可以分为两类：覆盖度策略和重叠度策略，其中覆盖度策略可以进一步分为重叠图法和De Bruijn图法两种。
重叠图法（Overlap Layout Consensus, OLC），顾名思义，是通过检测测序的DNA序列之间的重叠部分，将这些重叠部分组装起来的一种方法。
这种方法的主要思想是，首先找到所有可能的DNA序列重叠部分，构建一个重叠图，然后通过对重叠图进行图匹配，从而得到一个组装的基因组序列。
De Bruijn图法主要使用kmer（套路信息）技术来检测DNA序列之间的重叠度，从而获得组装基因组序列。
恒河猴基因组测序工作完成
恒河猴基因组测序工作完成
常君;铃儿
【期刊名称】《中国医药生物技术》
【年(卷),期】2007(002)003
【摘要】@@ 美国Baylor医学院George Weinstock博士领导的恒河猴基因组成功破译出了猕猴的基因组,这是继人类和黑猩猩之后,科学家破译出的第3种灵长类动物基因组.今年4月13日出版的Science以封面文章形式发表了这项最新成果.研究结果证实,虽然早在约2.5亿万年前,恒河猴从向人类进化的灵长类动物中分离出来,但人类和恒河猴基因组仍有93%的同源性.此项研究将有助于科学家进一步探索人类与恒河猴相似性及差异性背后的遗传学基础.通过比较人类和恒河猴基因组的异同可以获得许多有意义的结果.
【总页数】1页(P227)
【作者】常君;铃儿
【作者单位】无
【正文语种】中文
【相关文献】
1.美国研究人员完成玉米全基因组测序工作 [J], ;
2.龙井43茶树品种叶绿体基因组已完成测序工作 [J], 叶晓倩
3.日本研究人员完成甘草全基因组测序工作 [J],
4.马来西亚完成3种油棕榈的基因组测序工作 [J],
5.科学家首次完成对亚洲前列腺癌患者的大规模基因组测序工作 [J],
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江阴市新桥中学高中数学选修2-3第三章《统计案例》测试题(有答案解析)
一、选择题1．下列四个命题中，正确的有（ ）①两个变量间的相关系数r 越小，说明两变量间的线性相关程度越低；②命题“x ∃∈R ，使得210x x ++<”的否定是：“对x ∀∈R ，均有210x x ++>”； ③命题“p g ∧为真”是命题“p q ∨为真”的必要不充分条件；④若函数322()3f x x ax bx a =+++在1x =-有极值0，则2a =，9b =或1a =，3b =.A ．0B ．1C ．2D ．32．为检测某药品服用后的多长时间开始有药物反应，现随机抽取服用了该药品的1000人，其服用后开始有药物反应的时间（分钟）与人数的数据绘成的频率分布直方图如图所示.若将直方图中分组区间的中点值设为解释变量x （分钟），这个区间上的人数为y （人），易见两变量x ，y 线性相关，那么一定在其线性回归直线上的点为（ ）A ．()1.5,0.10B ．()2.5,0.25C ．()2.5,250D ．()3,3003．2019年10月18日-27日，第七届世界军人运动会在湖北武汉举办，中国代表团共获得133金64银42铜，共239枚奖牌.为了调查各国参赛人员对主办方的满意程度，研究人员随机抽取了500名参赛运动员进行调查，所得数据如下所示，现有如下说法：①在参与调查的500名运动员中任取1人，抽到对主办方表示满意的男性运动员的概率为12；②在犯错误的概率不超过1%的前提下可以认为“是否对主办方表示满意与运动员的性别有关”；③没有99.9%的把握认为“是否对主办方表示满意与运动员的性别有关”；则正确命题的个数为（ ）附：22()()()()()n ad bc K a b c d a c b d -=++++男性运动员 女性运动员A．0 B．1 C．2 D．34．已知两个统计案例如下：①为了探究患肺炎与吸烟的关系，调查了339名50岁以上的人，调查结果如下表：②为了解某地母亲与女儿身高的关系，随机测得10对母女的身高如下表：则对这些数据的处理所应用的统计方法是（）A．①回归分析，②取平均值B．①独立性检验，②回归分析C．①回归分析，②独立性检验D．①独立性检验，②取平均值5．已知x与y之间的几组数据如下表:x1245y0235假设根据上表数据所得线性回归直线方程y=bx+a,若某同学根据上表中的前两组数据(1,0)和(2,2),求得的直线方程为y=b'x+a',则以下结论正确的是( ) A ．b>b',a>a' B ．b<b',a<a' C ．b>b',a<a'D ．b<b',a>a'6．为了解高中生作文成绩与课外阅读量之间的关系，某研究机构随机抽取了60名高中生，通过问卷调查，得到以下数据：2()P K k ≥ 0.0500.025 0.010 0.005 0.001 k3.8415.0246.6357.87910.828由以上数据，计算得到K 2的观测值k ≈9.643，根据临界值表，以下说法正确的是( ) A ．没有充足的理由认为课外阅读量大与作文成绩优秀有关 B ．有0.5%的把握认为课外阅读量大与作文成绩优秀有关 C ．有99.9%的把握认为课外阅读量大与作文成绩优秀有关 D ．有99.5%的把握认为课外阅读量大与作文成绩优秀有关7．为了检验设备M 与设备N 的生产效率，研究人员作出统计，得到如下表所示的结果，则（ ）设备M 设备N 生产出的合格产品 48 43 生产出的不合格产品27附：()2P K k >0.15 0.100.050.025 0.010 0.005 0.001 k 2.0722.7063.8415.0246.6357.87910.828参考公式：22()()()()()n ad bc K a b c d a c b d -=++++，其中n a b c d =+++.A ．有90%的把握认为生产的产品质量与设备的选择具有相关性B ．没有90%的把握认为生产的产品质量与设备的选择具有相关性C ．可以在犯错误的概率不超过0.01的前提下认为生产的产品质量与设备的选择具有相关性D ．不能在犯错误的概率不超过0.1的前提下认为生产的产品质量与设备的选择具有相关性 8．为了普及环保知识，增强环保意识，随机抽取某大学30名学生参加环保知识测试，得分如图所示，若得分的中位数为m e ，众数为m 0，平均数为x -，则( )A ．m e ＝m 0＝x -B ．m 0＜x -＜m e C ．m e ＜m 0＜x -D ．m 0＜m e ＜x -9．某市政府调查市民收入与旅游欲望时，采用独立性检验法抽取3 000人，计算发现k 2＝6．023，则根据这一数据查阅下表，市政府断言市民收入增减与旅游欲望有关系的把握是( ) P (K 2≥k ) … 0．250．150．100．025 0．010 0．005 …k…1．323 2．072 2．706 5．024 6．635 7．879 …A ．90%B ．95%C ．97．5%D ．99．5%10．以下四个命题中：①某地市高三理科学生有15000名，在一次调研测试中，数学成绩ξ服从正态分布()2100,N σ，已知()801000.40P ξ<≤=，若按成绩分层抽样的方式抽取100分试卷进行分析，则应从120分以上（包括120分）的试卷中抽取15分； ②已知命题:p x ∀∈R ，sin 1x ≤，则:p x ⌝∃∈R ，sin 1x >；③在[]4,3-上随机取一个数m ，能使函数()222f x x mx =++在R 上有零点的概率为37； ④在某次飞行航程中遭遇恶劣气候，用分层抽样的20名男乘客中有5名晕机，12名女乘客中有8名晕机，在检验这些乘客晕机是否与性别有关时，采用独立性检验，有97%以上的把握认为与性别有关．()2P k k ≥0．15 0．1 0．05 0．025 0k 2．0722．7063．8415．024其中真命题的序号为（ ） A ．①②③B ．②③④C ．①②④D ．①③④11．某家具厂的原材料费支出x 与销售量y （单位：万元）之间有如下数据，根据表中提供的全部数据，用最小二乘法得出y 与x 的线性回归方程为ˆ8ˆy x b =+，则^b为（ ） x 2 4 5 6 8 y2535605575A ．5B ．15C ．10D ．20 12．已知样本789x y 、、、、的平均数是8，标准差是2，则xy 值为 A ．8B ．32C ．60D ．80二、填空题13．如果根据性别与是否爱好运动的列联表得到K 2≈3．852＞3．841，则判断性别与是否爱好运动有关，那么这种判断犯错的可能性不超过________． 14．若两个分类变量X 与Y 的列联表为：y 1 y 2 x 1 10 15 x 24016则“X 与Y 之间有关系”这个结论出错的可能性为________． 15．已知方程是根据女大学生的身高预报她的体重的回归方程，其中的单位是，的单位是，那么针对某个体的残差是______.16．某市电信宽带私人用户月收费标准如下表：假定每月初可以和电信部门约定上网方案. 方案类别基本费用超时费用甲包月制70元乙有限包月制（限60小时）50元0.05元/分钟（无上限）丙有限包月制（限30小时）30元0.05元/分钟（无上限）若某用户每月上网时间为66小时，应选择__________方案最合算. 17．下列说法：①分类变量A 与B 的随机变量2K 越大，说明“A 与B 有关系”的可信度越大.②以模型kx y ce =去拟合一组数据时，为了求出回归方程，设ln z y =，将其变换后得到线性方程0.34z x =+，则,c k 的值分别是4e 和0.3.③根据具有线性相关关系的两个变量的统计数据所得的回归直线方程为y a bx =+中，1,1,3b x y ===则1a =.正确的序号是________________.18．在西非肆虐的“埃博拉病毒”的传播速度很快，这已经成为全球性的威胁，为了考察某种埃博拉病毒疫苗的效果，现随机抽取100只小鼠进行试验，得到如下联表：参考公式： ()()()()()22n ad bc K a b c d a c b d -=++++参照附表，在犯错误的概率最多不超过__________（填百分比）的前提下，可认为“该种疫苗由预防埃博拉病毒感染的效果”． 19．下列命题中：①已知点(3,0),(3,0)A B -，动点P 满足||2||PA PB =，则点P 的轨迹是一个圆； ②已知(2,0),(2,0),||||3M N PM PN --=，则动点P 的轨迹是双曲线； ③两个随机变量的线性相关性越强，则相关系数的绝对值就越接近于1；④在平面直角坐标系内，到点(1,1)和直线23x y +=的距离相等的点的轨迹是抛物线； 正确的命题是_________．20．下列说法正确的个数有_________（1）已知变量x 和y 满足关系23y x =-+，则x 与y 正相关；（2）线性回归直线必过点(),x y ；（3）对于分类变量A 与B 的随机变量2k ，2k 越大说明“A 与B 有关系”的可信度越大 （4）在刻画回归模型的拟合效果时，残差平方和越小，相关指数2R 的值越大，说明拟合的效果越好.三、解答题21．奥运会期间，为调查某高校学生是否愿意提供志愿者服务，用简单随机抽样方法从该校调查了60人，结果如下：（2）你能否在犯错误的概率不超过0.01的前提下认为该高校学生是否愿意提供志愿者服务与性别有关？ 下面的临界值表供参考：独立性检验统计量()()()()()2n ad bc a b c d a c b d χ-=++++，其中n a b c d =+++.22．某实验学校为提高学习效率，开展学习方式创新活动，提出了完成某项学习任务的两种新的学习方式.为比较两种学习方式的效率，选取40名学生，将他们随机分成两组，每组20人，第一组学生用第一种学习方式，第二组学生用第二种学习方式.40名学生完成学习任务所需时间的中位数40min m =，并将完成学习任务所需时间超过min m 和不超过min m 的学生人数得到下面的列联表：（Ⅰ）估计第一种学习方式且不超过m 的概率、第二种学习方式且不超过m 的概率； （Ⅱ）能否有99%的把握认为两种学习方式的效率有差异？附：()()()()()22n ad bc K a b c d a c b d -=++++，23．海水养殖场进行某水产品的新、旧网箱养殖方法的产量对比，收获时各随机抽取100 个网箱，测量各箱水产品的产量(单位：kg)，其频率分布直方图如图：（1）填写下面列联表，并根据列联表判断是否有99%的把握认为箱产量与养殖方法有关；箱产量<50kg箱产量≥50kg 合 计旧养殖法 新养殖法 合 计（2）在新养殖法养殖的网箱中，按照分层抽样的方法从箱产量少于50kg 和不少于50kg 的网箱中随机抽取5箱，再从中抽取3箱进行研究，这3箱中产量不少于50kg 的网箱数为X ，求X 的分布列和数学期望.()()()()()22n ad bc K a b c d a c b d -=++++，其中n a b c d =+++()2P K k ≥ 0.1000.050 0.010 0.005 0.001 k 2.706 3.8416.6357.87910.82824．为加强环境保护，治理空气污染，环境监测部门对某市空气质量进行调研，随机抽查了100天空气中的PM 2.5和2SO 浓度（单位：3μg/m ），得下表： 2SO PM 2.5[0,50](50,150] (150,475][0,35] 3218 4（1）估计事件“该市一天空气中PM2.5浓度不超过，且2浓度不超过”的概率；（2）根据所给数据，完成下面的22⨯列联表：PM2.5浓度与2SO浓度有关？附：22()()()()()n ad bcKa b c d a c b d-=++++，25．在传染病学中，通常把从致病刺激物侵入机体或者对机体发生作用起，到机体出现反应或开始现该疾病对应的相关症状时止的这一阶段称为潜伏期.一研究团队统计了某地区1000名患有某种传染病的患者的相关信息，得到如表：该传染病的潜伏期受诸多因素的影响，为研究潜伏期与患者年龄的关系，以潜伏期是否超过6天为标准进行分层抽样，从上述1000名患者中抽取200人，得到如下列联表.（Ⅰ）请将列联表补充完整；（Ⅱ）根据列联表判断是否有95%的把握认为潜伏期与患者年龄有关？附：()()()()()22n ad bcKa b c d a c b d-=++++，其中n a b c d=+++.26．2020年5月22日晚，国际权威医学杂志《柳叶刀》在线发表了全球首个新冠疫苗临床试验结果，该试验结果来自我国的陈薇院士和朱凤才教授团队､由于非人灵长类动物解剖生理､组织器官功能和免疫应答反应等性状与人类非常接近，所以常选择恒河猴进行科研和临床实验.某生物制品研究所将某一型号疫苗用在恒河猴身上进行科研和临床实验，得到部分数据如下表.现从注射疫苗的恒河猴中任取1只，取到感染病毒的恒河猴的概率为2 5 .95%把握认为注射此种疫苗有效？（2）在感染病毒的恒河猴中，按未注射疫苗和注射疫苗的比例抽取5只进行病理分析，然后从这5只恒河猴中随机抽取3只对注射疫苗情况进行核实，求恰好抽到2只未注射疫苗的恒河猴的概率.附：()()()()()22n ad bcKa b c d a c b d-=++++，n a b c d=+++.【参考答案】***试卷处理标记，请不要删除一、选择题 1．A 解析：A 【分析】根据相关系数的定义可知①错误；根据特称命题（又叫存在性命题）的否定可知②错误；根据真值表即可判断“p q ∧为真”是命题“p q ∨为真”的充分不必要条件，故③错误；由条件可得，(1)0,(1)0,f f '-=-= 解得a=2,b=9或a=1,b=3,经检验，当a=1,b=3时，22()3633(1)0f x x x x '=++=+≥恒成立，此时()f x 没有极值点，故④错误。
恒河猴源犬瘟热病毒N、F基因的克隆与序列分析
恒河猴源犬瘟热病毒N、F基因的克隆与序列分析邱薇;王文博;胡挺松;余静;郭平;郑颖;张富强;范泉水【摘要】为了进一步明确引起恒河猴类麻疹综合征的病原体及其来源,对恒河猴源犬瘟热病毒的N、F全基因进行了克隆和序列分析.得到全长1 572 bp的N基因和2 080 bp的F基因,测序后分别与不同CDV毒株的N、F基因核苷酸和氨基酸序列进行分析,N基因核苷酸(氨基酸)与CDV疫苗株Onderstepoort、vaccine x、标准野毒株A75-17同源性分别为93.6％(96.9％)、97.3％(99.0％)和97.3％(99.0％);F基因核苷酸(氨基酸)与上述毒株同源性分别为91.0％(97.8％)、94.9％(98.6％)和94.4％(97.9％).N、F基因的系统发育分析表明,恒河猴CDV毒株与黑龙江狐狸毒株(CDV-FOX-HLJNM)遗传关系较近,与其他分离株遗传关系相对较远.本研究从分子水平上证明了引起恒河猴发病的病原体为一株CDV野毒株,而非疫苗株.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2017(053)002【总页数】3页(P26-28)【关键词】恒河猴;犬瘟热病毒;N基因;F基因;序列分析【作者】邱薇;王文博;胡挺松;余静;郭平;郑颖;张富强;范泉水【作者单位】中国人民解放军成都军区疾病预防控制中心,云南昆明650118;中国人民解放军成都军区疾病预防控制中心,云南昆明650118;中国人民解放军成都军区疾病预防控制中心,云南昆明650118;中国人民解放军成都军区疾病预防控制中心,云南昆明650118;中国人民解放军成都军区疾病预防控制中心,云南昆明650118;中国人民解放军成都军区疾病预防控制中心,云南昆明650118;中国人民解放军成都军区疾病预防控制中心,云南昆明650118;中国人民解放军成都军区疾病预防控制中心,云南昆明650118【正文语种】中文【中图分类】S854.4+3犬瘟热病毒(CDV)是当前对我国养犬业、毛皮动物养殖业和野生动物保护业危害最大的犬瘟热的病原，经常引起大批犬、貂、狐等动物发病，病死率30%～80%，雪貂高达100%，经济损失惨重。
恒河猴犬瘟热病毒基因疫苗单克隆抗体的制备
恒河猴犬瘟热病毒基因疫苗单克隆抗体的制备邱薇;王文博;胡挺松;郭平;周卫国;张富强;郑颖;范泉水【摘要】To prepare the monoclonal antibody of Canine distemper virus which infect rhrsus monkey,the H gene of the virus was amplified by RT-PCR and cloned into pVAX.The DNA vaccine pVAX-H was injected into Balb/c mice and induced a strong immunity.The spleen cells were fused with SP2/0 cells and 5 hybridoma strains secreting monoclonal antibodies against CDV H gene were achieved.The five different McAbs didn't react with CPV and MV but could neutralize CDV in vitro.Two of them had high neutralization antibody above 1 ∶ 256.The result import that the CDV H gene vaccine can be used to prepare monoclonal antibody.%从感染犬瘟热病毒死亡的恒河猴肝脏组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增H全基因并克隆到真核表达质粒pVAX中,构建了基因疫苗pVAX-H.用制备的基因疫苗免疫BaLb/c小鼠,小鼠可以产生免疫应答,免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合后,经间接ELISA 法筛选,获得5株稳定分泌抗CDV H蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株.该5株单抗对应不同的病毒抗原表位,且均不与CPV和MV发生反应,McAb诱生的腹水可体外中和犬瘟热病毒,其中2株中和效价大于1∶256.结果表明,CDV H基因疫苗可制备具有一定中和效价的抗CDV的单克隆抗体.【期刊名称】《四川大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(054)005【总页数】5页(P1089-1093)【关键词】恒河猴;犬瘟热病毒;基因疫苗;单克隆抗体【作者】邱薇;王文博;胡挺松;郭平;周卫国;张富强;郑颖;范泉水【作者单位】成都军区疾病预防控制中心,昆明650118;成都军区疾病预防控制中心,昆明650118;成都军区疾病预防控制中心,昆明650118;成都军区疾病预防控制中心,昆明650118;成都军区疾病预防控制中心,昆明650118;成都军区疾病预防控制中心,昆明650118;成都军区疾病预防控制中心,昆明650118;成都军区疾病预防控制中心,昆明650118【正文语种】中文【中图分类】Q78犬瘟热病毒(Canine parvovirus，CDV)属副粘病毒科麻疹病毒属成员，其引起的犬瘟热是当前对我国养犬业、毛皮动物养殖业和野生动物保护业危害最大的传染病，经常引起大批犬、貂、狐等动物发病，病死率30%～80%，雪貂高达100%，经济损失惨重.CDV自然感染的动物范围在不断扩大，特别是恒河猴等灵长类动物的CDV感染[1,2]，使CDV的危害更加突出.犬瘟热病毒为负链单股不分节段的RNA 病毒，其基因组全长 15690 个核苷酸，编码6种蛋白，其中 H 蛋白是诱导机体产生中和抗体的主要蛋白之一，是 CDV感染细胞过程中侵袭宿主所必须的，决定着病毒感染细胞嗜性.近年来国内外许多研究发现野毒株与疫苗株的 H 蛋白基因存在较大差异，认为可能与犬瘟热频繁爆发有一定的联系[3].H蛋白也是抗CDV免疫的很重要的抗原，抗CDV H蛋白单克隆抗体(McAb)具有中和病毒活性，对实验鼠的保护力强于抗F蛋白的McAb[4].抗CDV H蛋白7个抗原决定簇中的6个McAb能中和CDV，阻止CDV的感染.H蛋白基因序列的系统发生分析表明CDV存在不同基因型，新分离病毒H蛋白基因的遗传变异可能是近来爆发CD的重要原因[5-10].McAb技术已达20多年，可以说其各个方面都已经较完善，但它对抗原质量要求较高[11]，否则，如果抗原纯度不高，则杂交瘤的阳性率低，筛选工作困难，因而不易克隆到较多的McAb，而那些针对非优势抗原表位的McAb又更难筛选到.应用基因疫苗制备单抗为免疫学研究及疾病治疗提供了一个全新的方法.Barry A报道了利用基因疫苗制备抗人生长激素单克隆抗体，从而首次证明了基因免疫制备单克隆抗体的可行性[12].以基因疫苗作免疫原只须克隆得到该抗原蛋白基因，然后构建成真核表达质粒即可，简单省时，并且基因疫苗产生的抗原蛋白绝对纯净，且其存在状态与天然的完全一致[13]，容易研制得到高质量的McAb.恒河猴感染CDV引起的疫病在部分养猴场、野生动物园及动物实验中心等造成了严重的影响，本研究针对猴源CDV进行了通过构建H基因的基因疫苗来制备单克隆抗体的研究，以期能获得可用于治疗或检测的单克隆抗体.2.1 材料E.coli JM109 、BL21(DE3)pLysS、真核表达载体pVAX、Vero传代细胞和SP2/0骨髓瘤细胞由本室保存.Balb/c小鼠购自昆明医学院实验动物中心.病毒总RNA/DNA提取试剂盒、RT-PCR 试剂盒、DNA胶回收试剂盒、质粒(小量)柱式提取试剂盒及其它试剂均购自TaKaRa生物技术有限公司.引物合成及测序由上海生物工程技术服务有限公司完成.2.2 方法2.2.1 引物合成根据已发表CDV Onderstepoor株的序列，设计合成了一对引物，在其5′端引物引入BamHⅠ酶切位点，3′端引物引入EcoRⅠ酶切位点.用ddH2O 按20pM稀释，-20℃冻存.引物序列：P1：5′-GCAGGATCCATGCTCTCCTACCAAGACAAG-3′,P2：5′-GCCGAATTCATCTAAGTCCAATTGAGAT-3′2.2.2 猴源CDVH基因的克隆按病毒总RNA/DNA提取试剂盒说明书提取发病死亡猴肝组织的总RNA，以总RNA为模板，应用合成的特异引物进行RT-PCR.反应体系为10×one step RNA PCR Buffer 5μL，dNTP(各10mM)5μL，MgCl2 (25mM)10μL，上下游引物各1μL，RNase Inhibitor(40U/μL)1μL，Amv XL酶1μL，Amv Taq酶1μL，总RNA模板2μL，加RNase Free H2O至总反应体积为50μL.扩增条件：50℃反转录45min ，94℃变性2min，35个循环为95℃ 15s，50℃ 30s，70℃ 30s；72℃延伸10min，4℃保存.取5μL进行凝胶电泳，紫外灯下观察结果.电泳回收H蛋白基因片段并与用BamHⅠ和NotⅠ双酶切后与回收的pVAX载体进行连接，然后转化大肠杆菌，筛选阳性克隆并测序.2.2.3 单克隆抗体的制备将阳性克隆质粒制成基因疫苗后免疫Balb/c小鼠.选择8～12周龄Balb/c小鼠，每只鼠两后肢胫前肌各注射50μL乳化好的质粒，两周后加强免疫同样剂量的质粒，融合前10d最后一次免疫.第一次免疫后第3周和第5周分别采血，测定抗体水平.将免疫鼠的脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞的(SP2/0)融合并将融合细胞加入到含有饲养细胞的96孔培养板中，每孔50μL，37℃、5%CO2培养箱中培养.用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞，阳性杂交瘤细胞经3～4次克隆纯化.2.2.4 腹水的制备将0.5mL高压灭菌的石蜡油注射到小鼠腹腔，一周后注入1×106个杂交瘤细胞于小鼠腹腔.7～10d后当小鼠腹部极度膨胀时，抽取腹水，1500r/min离心10min，取上清，加等体积的灭菌甘油，混匀，放-20℃冰箱冻存备用.沉淀的细胞可作进一步培养或注射小鼠之用.2.2.5 杂交瘤细胞上清与腹水效价的测定将杂交瘤细胞上清用PBS分别作4×、8×、16×、32×、64×、128×、256×稀释，作间接ELISA检测，正常SP2/0细胞培养上清作阴性对照， OD值超过阴性对照1倍即判为阳性，其最大稀释度为杂交瘤细胞上清的抗体效价.将制备的腹水用PBS分别作6.4×102、1.28×103、2.56×103、5.12×103、1.024×104、2.048×104稀释，做间接ELISA检测，正常小鼠腹水作阴性对照，每个细胞株腹水2孔重复，取其平均OD值，OD值超过阴性对照1倍即判为阳性，其最大稀释度为杂交瘤细胞腹水的抗体效价.2.2.6 单克隆抗体特异性鉴定用犬瘟热病毒(CDV)、麻疹病毒(MV)、犬细小病毒(CPV)、以及Vero细胞分别包被酶标板，加入1∶2000稀释的腹水，进行间接ELISA，检测制备的McAb的特异性.2.2.7 单克隆抗体对应抗原表位分析在CDV抗原包被的酶标板中，先加入第一株McAb与之反应，洗涤后再加入另一株McAb与之反应，两株McAb均用1∶100稀释的腹水，反应完毕后，再加入兔抗鼠IgG-HRP与之反应、洗涤、显色、测定OD值.受试的McAb均两两配对，根据相加ELISA试验的OD值的变化来分析各株McAb所对应的病毒抗原表位之间的关系.2.2.8 单克隆抗体体外中和试验采用固定病毒稀释抗体的中和试验法分析McAb在细胞上对CDV的中和能力.用MEM营养液将CDV的细胞培养物稀释成200TCID50/0.1mL，将无菌采取的各McAb腹水分别用MEM营养液做64×、128×、256×、512×、1028×、2056×稀释，取每个稀释度的腹水0.1mL加入0.1mL病毒液，37℃置1h，然后同步接种到Vero细胞培养孔中，每稀释度重复4孔，于37℃、5% CO2及饱和湿度条件下继续培养，观察其生长情况.同时设立病毒、阳性血清、阴性血清(正常Balb/c小鼠血清)、腹水和营养液对照.3.1 CDV H基因疫苗的克隆用引物P1-P2对猴肝组织进行RT-PCR扩增，扩增片段的理论值分别为1859bp，PCR产物电泳结果与理论值相符(见图1).回收扩增片段与载体连接，筛选到的阳性克隆经测序并与KM-01 株 (HM852904)的H基因序列和氨基酸序列相比较，同源性均为100%且阅读框架正确，将重组质粒命名为pVAX-H，即为构建的基因疫苗.3.2 单克隆抗体的制备基因疫苗免疫Balb/c小鼠后，分别在第3周和第5周对经基因疫苗免疫的小鼠采血，血清按1∶200稀释，间接ELISA检测抗体水平，检测结果见表2.pVAX-CDV H基因疫苗免疫小鼠可诱导免疫应答，第二次免疫后血清中抗体水平明显高于第一次免疫.其中2号和6号小鼠抗体水平较高，选其脾脏做细胞融合.融合后的杂交瘤细胞经间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞，阳性杂交瘤细胞经4次克隆纯化，获得了5株稳定分泌抗犬瘟热病毒H蛋白的杂交瘤细胞株.3.3 杂交瘤细胞上清与腹水效价的测定将杂交瘤细胞上清用PBS分别作4×、8×、16×、32×、64×、128×、256×、512×稀释，正常SP2/0细胞培养上清作阴性对照，每个细胞株上清做2孔重复，间接ELISA检测，结果见表3；将制备的腹水用PBS分别作3.2×103、6.4×103、1.28×104、2.56×104、5.12×104、1.024×105稀释，正常小鼠腹水作阴性对照，每个细胞株腹水做2孔重复，间接ELISA检测，结果见表4.3.4 单克隆抗体对应抗原表位分析对5株McAb两两配对进行ELISA相加试验，两抗体相加后的OD值均明显升高，表明这5株McAb所对应的病毒抗原表位不同(表5).3.5 单克隆抗体的特异性鉴定间接ELISA结果表明，5株McAb只与CDV发生反应，均不与试验中的CPV、MV及Vero细胞抗原发生反应(见表6).3.6 单克隆抗体中和试验在病毒中和试验中，McAbH-2 和McAbH-3两株单抗对病毒有较强的中和能力，腹水的中和效价分别为1∶256和1∶512，而其它3株McAb腹水的中和效价小于1∶128.单克隆抗体技术已经20多年，可以说其各方面都已较完善，但它要求抗原质量较高，因而，一些稀有抗原、不易纯化或纯化后易失效的抗原，均不易研制出高质量的单抗.但以基因疫苗作免疫原只需克隆得到该抗原蛋白基因，然后构建成真核表达质粒即可得到特异性单抗.应用基因疫苗制备单抗为免疫学研究及疾病治疗提供了一个全新的方法.人们可以根据需要，将针对任何抗原表位的基因克隆到真核表达载体中，免疫小鼠制备所需的抗体.可以将具有某种病原体属、型、群特征的基因克隆至真核表达载体中，制成基因疫苗免疫小鼠，得到可用于鉴别目的的的单抗.对那些难以制备和纯化的抗原以及在纯化过程中结构易被破坏的抗原来说尤为适用.对于一些烈性传染病，应用基因疫苗制备单抗，比直接用病原体作抗原要安全得多. 到目前为止，已有基因免疫制备单抗的报道.Barry等(1994)以人生长激素(hGH)的基因疫苗免疫Balb/c小鼠，一次融合，即克隆筛选到20株抗hGH的单抗，这是最早以基因疫苗制备单抗的报道，从而首次证明了基因免疫制备单抗的可行性.SchmoLke等(1998)以人乙型肝炎病毒(HGV)E2糖蛋白基因疫苗研制出8株抗HGV的单抗，用于鉴定HGV病毒粒子，这为基因疫苗及其单抗的研制提供了强有力的技术支持.对犬瘟热病毒单抗的研究也是犬瘟热抗体研究的热点之一，之前已用疫苗株和水貂源犬瘟热病毒分离株制备了单抗，获得了效价较高的CDV单抗[14,15].还有以CDV F基因原核表达产物为免疫原，制备犬瘟热F 蛋白单克隆抗体[16].本研究通过基因疫苗免疫制备单抗的方法制备CDV H 基因的单抗，为CDV的快速诊断方法研究与改进及CDV的治疗奠定基础.由于基因免疫抗原的表达有个过程，表达出抗原后，诱导机体产生抗体也需要一段时间，所以在实验中将检测血清抗体的时间较传统的蛋白免疫的检测时间适当延长，即第一次采血是在初次免疫后第3周，第二次采血是在第5周，使表达的抗原能充分诱导机体产生抗体，才能获得好的杂交瘤细胞株.本实验在细胞融合后获得了十余株稳定分泌抗犬瘟热病毒H蛋白抗体的杂交瘤细胞株，但在多次克隆纯化的过程中，由于污染、效价过低及其他原因，使最终获得的单抗杂交瘤细胞株仅有5株，可通过多次融合、筛选的办法来增加获得的杂交瘤细胞株数量.通过基因疫苗免疫制备单抗的方法研制的单抗效价普遍不够高，但有可能从中发现尽管效价不高但特异性较好的单抗，为下一步研究血清学快速诊断方法奠定基础.【相关文献】[1] Sun Z，Li A，Ye H，et al. 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Genetic diversity of the attachment (H) protein gene of current field isolates of canine distemper virus[J]. Gen ViroL， 1997, 78: 367.[8] Mochizuki M，Hashimoto M，Hagiwara S，et al. Genotypes of canine distemper virus determined by analysis of the hemagglutinin genes of recent isolates from dogs inJapan[J]. J Clin Microbiol， 1999, 37: 2936.[9] LoffLer-S，Lottspeich-F，Lanza-F，et al. CD9, a tetraspan transmembrane protein, renders cells susceptible to canine distemper virus[J]. Virol， 1997, 71: 42.[10] 何洪彬，李金中，夏咸柱，等.熊猫等动物犬瘟热病毒附着蛋白基因的遗传多样性[J].病毒学报，2000, 17: 238.[11] Schmolke S. Identification of hepatitis G virus particles in human serum by E2-specificmonoclonal antibodies generated by DNA immunization[J]. J Virol，1998, 72: 4541. [12] Barry A. Production of monoclonal antibodies by Genetic immunization[J]. Biotechques，1994, 16: 616.[13] Iwasaki A，Stiernholm B J，Chan A K，et al. Enhanced CTL responses mediated by plasmid DNA immunogens encoding costimulatory molecules and cytokines[J]. 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恒河猴气管粘膜杯状细胞分泌颗粒异质性的免疫细胞化学研究
恒河猴气管粘膜杯状细胞分泌颗粒异质性的免疫细胞化学研究王石平;Geor.,JA
【期刊名称】《兽类学报》
【年(卷),期】1989(009)002
【摘要】应用一组(10种)抗恒河猴气管分泌物单克隆抗体,在超微结构水平上揭示了气管粘膜上皮中不同杯状细胞之间的异质性。
其异质性具体表现为:同一杯状细胞对不同抗体表现出不同反应;不同杯状细胞对同一抗体呈现出不同反应强度;同一杯状细胞中的不同分泌颗粒对同一抗体的亲和力不同。
观察结果表明,免疫细胞化学方法所显示的杯状细胞间的异质性由以下因素造成:(1)不同杯状细胞的分泌颗粒中存在不同抗原物质;(2)不同杯状细胞的分泌颗粒中含不等量同种抗原物质;(3)同一杯状细胞的不同分泌颗粒中存在不等量同种抗原物质。
【总页数】5页(P98-102)
【作者】王石平;Geor.,JA
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】S858.902.4
【相关文献】
1.恒河猴呼吸道粘膜上皮中杯状细胞的形态计量学分析 [J], 姜文剑;张子安;李真;史娜娜;高慧英;李亚鲁
2.大肠癌及癌旁粘膜中胃泌素、生长抑素细胞的免疫细胞化学研究 [J], 赵荣华;王
元和;陈咏莲;施靖华;叶挺军
3.哮喘患者支气管粘膜内嗜酸粒细胞分泌颗粒的形态立体计量分析 [J], 刘学军;李国顺;孙本韬
4.哮喘患者支气管粘膜内嗜酸粒细胞分泌颗粒的形态立体计量分析 [J], 刘学军;李国顺;孙本韬
5.大鼠鼻粘膜SP及CGRP逆向释放的免疫细胞化学研究 [J], 赵长青;宋发全;陶正德;肖健云;赵素平
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人工饲养条件下恒河猴病理分析的研究
人工饲养条件下恒河猴病理分析的研究代解杰;谢晋;和占龙【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】1999(009)001【摘要】作者对本所近6年(1991～1997年)来饲养中死亡的328例恒河猴进行尸体剖析,临床病理分析结果表明:死亡病因统计,呼吸系统病最高(39.6%),消化系统为第二位(27.1%),合并症次之(14.0%);全年中1～4月份为猴子死亡高峰,占全年死亡率的43.4%.按死亡猴年龄统计,幼年猴中雄性猴死亡率(64.2%)高于雌性猴(35.8%),青年猴中雄性猴死亡率(56.6%)略高于雌性猴(43.4%),但成年猴中雌性猴死亡率(73.4%)高于雄性猴(26.6%).本文根据恒河猴饲养的环境条件,死亡猴的病理变化,对动物疾病的观察、诊断、治疗及预防进行分析和讨论.【总页数】5页(P34-38)【作者】代解杰;谢晋;和占龙【作者单位】中国医学科学院,中国协和医科大学医学生物学研究所,昆明;中国医学科学院,中国协和医科大学医学生物学研究所,昆明;中国医学科学院,中国协和医科大学医学生物学研究所,昆明【正文语种】中文【中图分类】Q95【相关文献】1.人工饲养条件下恒河猴血液学、血液生化正常参考值测定及分析 [J], 代解杰;唐东红;鲁帅尧;匡德宣;杨帆;程树军;黄韧2.人工饲养条件下死亡恒河猴肺脏病理改变分析 [J], 赵玺龙;杨举伦;王力;李峰;赵稳兴;李涛;王丽;杨丽琳;陈玥3.人工饲养条件下死亡实验恒河猴肠道病理改变特点分析 [J], 赵玺龙;杨举伦;宋蜀伶;徐文漭;潘鑫艳;黎贵芸;李锋4.人工饲养恒河猴血液生化正常参考值的测定与分析 [J], 季芳;饶军华;刘晓明5.人工饲养恒河猴脱毛病因分析和治疗 [J], 鲁帅尧;甘文斌;和占龙;赵远;王俊斌;陈丽雄因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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恒河猴CD1d基因的克隆及其组织表达差异性分析作者：张萍, 周慧芳, 孙正华, 邵晓丽, 张华堂, 徐小宁【摘要】目的: 克隆非人灵长类疾病动物模型恒河猴的CD1d 基因并检测其在不同组织中的表达差异情况。
方法: 提取恒河猴血液及各组织的RNA, 以反转录得到的cDNA为模板, 用特异性引物扩增CD1d; 以管家基因GAPDH为内参, 用半定量RT PCR的方法对CD1d 的组织表达差异性进行分析。
结果: 成功扩增了恒河猴CD1d基因的编码区序列; 首次用半定量RT PCR的方法检测了CD1d mRNA在恒河猴部分组织中的表达情况, 发现其表达水平存在明显的组织差异性, 其中, 在肝脏、脾脏和心脏中的表达水平较高, 在血液、小肠和肺中次之, 在脑中表达最少。
结论: 研究结果为今后表达恒河猴CD1d蛋白并制备其四聚体进而研究恒河猴NKT细胞在众多疾病中的作用奠定了基础; 组织表达差异的研究结果提示其在相关疾病的发生发展过程中可能扮演着重要的角色, 具体作用还有待深入研究。
【关键词】 CD1d; NKT细胞; 恒河猴; 组织分布［Abstract］ AIM: To amplify the CD1d and analyze its tissue distribution in Rhesus macaque. METHODS: Extracting total RNA from different tissues of Rhesus macaque. CD1d amplification wascarried using specific primers and tissue distribution was analyzed by semiquantification RT PCR, using the house keeping gene GAPDH as an internal control. RESULTS: The CD1d coding region was obtained in this experiment and tissue distribution was analyzed: a highest level of CD1d expression was detected in heart, liver and spleen, lower level in blood, lung, small intestine and stomach, and least in brain. CONCLUSION: The successful amplification of CD1d is useful to produce antiCD1d antibody and CD1d tetramer to study NKT cells in Rhesus macaque. The expression profile of CD1d mRNA in Rhesus macaque is in accordance with the tissue distribution and the functions of NKT cells in other species. These results will provide important insights for future research on the relationship of CD1d/NKT cells and their roles in different tissues.［Keywords］CD1d; NKT cells; Rhesus macaque; Tissue distributionCD1家族是一类非经典的抗原递呈分子, 包括CD1a、 b、 c、 d 和e 5个成员, 其中CD1 a、 b、 c和e属于第Ⅰ组, CD1d属于第Ⅱ组。
在灵长类中两类CD1分子均有表达, 但在小鼠等啮齿类动物中仅表达CD1d, 称为CD1d 1［1］。
CD1家族成员在进化中表现的非常保守。
与经典的抗原递呈分子MHCⅠ结构类似, CD1d分子也包括胞膜外区（α 13）、跨膜区和胞质区, 并通过重链α3结构域与β2m非共价结合形成异源二聚体发挥抗原递呈的功能; 与MHCⅠ不同的是, CD1d递呈的是脂类抗原, 而非肽类抗原。
作为抗原递呈分子, CD1d可以将外来或自身的脂类抗原递呈给CD1d限制性的NKT细胞。
NKT细胞是一类数量很少但很重要的免疫细胞, 在细胞免疫和体液免疫中均起重要作用［2］。
鉴于NKT 细胞表现出的CD1d限制性, 承载αGalCer（一种从海绵中提取的鞘糖脂）的CD1d四聚体已经成为检测和认定NKT细胞的关键性标记之一［3］, 因此, 克隆并表达功能性的CD1d已经成为研究NKT细胞的重要环节。
目前, 许多物种的CD1d基因序列已经得到了公布, 其编码区长度在不同物种中稍有差别, 人的CD1d基因编码区全长有1 008 bp, 恒河猴为1 014 bp, 小鼠CD1d 为1 011 bp。
尽管如此, 不同物种间CD1d 的同源性及功能上均表现了高度的保守性。
有研究表明, CD1d分子主要表达在脾细胞、树突状细胞（DC）和胃肠道上皮细胞上。
Canchis 等［4］曾通过免疫组化染色方法检测到人的CD1d在小肠、肝脏、胰脏、肾脏、胃以及皮肤等组织中均有表达。
Kasai等［5］结合原位杂交及免疫组化方法发现在大鼠的脾脏、胸腺、肝脏、肺、心脏、肾脏、小肠等组织中均有CD1d 1的表达。
但尚未见到关于恒河猴的CD1d组织表达差异情况的详细报道。
本试验中, 我们对人类疾病发生和治疗等研究中被广泛应用的非人灵长类动物模型恒河猴的CD1d分子进行了克隆和研究。
成功克隆了恒河猴的CD1d编码区序列, 并首次用半定量RTPCR的方法检测了部分组织中CD1d的表达情况, 为今后研究CD1d/NKT细胞的分布及其在不同组织中的功能特点给出了提示。
1 材料和方法1.1 材料恒河猴各组织总RNA由昆明动物研究所比较基因组学研究组提供; rTaq聚合酶 (DR001A)、 DNA Marker DL 2 000 (D501A)、pMD19T（D102A）载体、及其他生化常用试剂购自TaKaRa公司; 大肠杆菌DH5α为中科院昆明动物研究室免疫生物学实验室制备并保存; RNAprep培养细胞总RNA提取试剂盒（DP430）、琼脂糖凝胶回收试剂盒（DP21402）、 pfu高保真聚合酶（EP10101）、 TIANscript M MLV逆转录酶（ER10404）购自Tiangen公司; iCyclerTM Thermal Cycler PCR仪购自Bio Rad公司; Sal I （ER0641）和BamH I （ER0051）内切酶购自Fermentas公司。
1.2 方法1.2.1 组织cDNA模板的获得取10 μL总RNA(约5 μg), 按TIANscript M MLV逆转录酶的说明书进行反转录: 加入2 μL dNTP (10 mol/L)和2 μL oligo (dT)引物(10 μmol/L), 混匀后70℃反应5 min; 冰上冷却, 加入1μL DTT, 4 μL 5×First Strand Buffer, 混匀, 42℃反应2 min; 加入1 μL反转录酶 M MLV (200 U), 42℃反应50 min; 最后95℃放置5 min终止反应即得到第1链cDNA。
1.2.2 基因的扩增、质粒的构建、提取及鉴定根据GenBank 中恒河猴CD1d序列（NM_001033114）设计引物（表1）, 利用恒河猴血液的cDNA作模板进行扩增; 同时用管家基因GAPDH作为参照进行CD1d基因在各组织中表达差异性的半定量分析。
用pfu高保真酶进行CD1d扩增的条件为: 50 μL反应体系, 96℃预变性4 min, 扩增30个循环（95℃变性30 s, 55℃退火30 s, 72℃延伸2 min）, 最后72℃充分延伸10 min。
扩增完成后将产物进行加A处理: 50 μL产物中加2 μL dNTP和1 μL rTaq, 72℃反应40 min。
扩增产物经10 g/L琼脂糖凝胶电泳检测, 得到预期长度的片段后割胶回收, 然后连入pMD19T载体, 转化入DH5α感受态, 菌液涂到含Amp的LB平板上, 37℃过夜培养, 随机挑取长出的克隆摇菌, 12 h后提质粒; 提出的质粒用Sal I和BamH I进行双酶切鉴定, 鉴定正确的克隆送去测序, 进一步确认所得到的产物是恒河猴的CD1d基因。
1.2.3 恒河猴CD1d mRNA的组织表达差异性分析以管家基因GAPDH为参照, 用半定量RT PCR的方法检测恒河猴不同组织中CD1d mRNA的表达水平。
表1 扩增人和恒河猴的CD1d全长基因及GAPDH片段的引物 2 结果2.1 恒河猴的CD1d基因的扩增以人和恒河猴的血液cDNA为模板, 用如表1中设计的特异性引物扩增人和恒河猴的CD1d基因编码区, 经10 g/L琼脂糖凝胶电泳检测发现我们得到的片段长度为1 000 bp 左右, 与预期结果相符（图1）。
2.2 重组质粒的鉴定 PCR产物经割胶回收后连入pMD19T载体, 转化入DH5α感受态, 涂含Amp的LB平板, 挑取长出的克隆摇菌, 12 h后提质粒并用Sal I和BamH I进行双酶切鉴定, 经鉴定发现所提的重组质粒中确实含有1 000 bp左右的插入片段（图2）。
为进一步确认所得到的片段确为恒河猴CD1d基因, 我们将初步鉴定正确的克隆送出测序。
测序结果显示, 我们得到的片段为1 014 bp, 经BLAST序列比对显示该序列与GenBank中恒河猴的CD1d序列一致编码336个氨基酸, 用EditSeq软件预测其蛋白的相对分子质量（Mr）约为37 861, 说明我们成功获得了恒河猴CD1d的编码区序列, 为今后表达该蛋白和研究该分子的功能奠定了基础。
2.3 恒河猴CD1d mRNA的组织表达分布情况的初步分析以恒河猴血液及各组织总RNA反转录得到的cDNA为模板, 用管家基因GAPDH (669 bp)为参照对不同组织中CD1d（1 014 bp）的表达水平进行了检测（图3）, 结果表明, 检测的各组织中均有CD1d mRNA的表达, 但以心脏、肝脏和脾脏中表达最多, 小肠、血液、肺和胃中的表达相对较少, 脑中CD1d的表达水平最低。
3 讨论Canchis等利用免疫组化和原位杂交的方法检测了人和大鼠中的CD1d在各组织中的表达情况［4, 5］, 而恒河猴CD1d的组织表达谱至今还没有研究报道。