组织芯片技术在乳腺癌相关指标检测中的应用

组织芯片技术在乳腺癌相关指标检测中

的应用

（作者： _________ 单位：___________ 邮编：___________ ）

【摘要】目的:探讨组织芯片免疫组化方法在乳腺癌相关指标检测中的应用。方法：采用组织芯片免疫组化和传统免疫组化的方法分别检测了183例和30例乳腺癌组织中MMP2，MMP9，MMP13的表达水平。结果：组织芯片免疫组化染色与传统免疫组化染色不存在统计学差异（P005 ）。结论：高通量组织芯片免疫组化的方法在乳腺癌相关指标检测中可一次对多个样本进行多指标检测，大大节省了人力、物力和财力，值得进一步推广使用。

【关键词】组织芯片；免疫组化；乳腺癌

【ABSTRACT ] Objective: To investigate the application of Microarray immun ohistochemical tech nique in the detecti on of the index correlated with breast cancer. Methods: MMP2, MMP9 and MMP13 were detected by Microarray immuno histochemical tech nique and traditi onal immuno histochemical tech nique in 183 patients and 30 patients with breast cancer respectively. Results:

Microarray immunohistochemical technique has no significant differe nee compared with traditi onal immuno histochemical technique. ( P005 ) . Conclusion: Highflux Microarray immunohistochemical technique can detect several indexes for many samples one time in the detection of the index correlated with breast can cer. It could save man power, materials and finan cial resources. It is worth to be spread and applicated.

【KEY WORDS ] Microarray, Immunohistochemical technique, Breast can cer

组织芯片(tissue microarray , TMA)是将多个微小组织片汇集在一

张固相载体上所形成的组织微阵列生物芯片，简称组织芯片。TMA 克服了传统病理学技术步骤繁琐、试验速度慢和效率低的缺点，具有

小体积、多样本、大信息、可同时分析数百种组织样品的优点。本研究中我们采用组织芯片免疫组化的方法检测了183例乳腺癌组织中MMP2，MMP9，MMP13的表达水平，同时采用传统免疫组化的方法对其中30例进行相同指标的检测，并对其阳性率进行比较，目的是为组织芯片免疫组化方法在乳腺癌相关指标检测中的应用进一步提供理论依据。

1材料与方法

11材料试验组：天津医科大学附属肿瘤医院乳腺病理科1993年手术切除乳腺癌石蜡包埋标本183例。年龄24~75岁，平均4926 岁。浸

润性导管癌124例，浸润性小叶癌28例，其他类型癌31例。临床分期I期22例，II 期93例，皿W期68例。组织学分级I级67例, H级57例，皿级59例。有淋巴结转移者97例，无淋巴结转移者86 例。对照组：于183例中按10%的抽样比例随机选取30例作为对照组。

12方法

121制作组织芯片①HE切片于显微镜下明确并标记癌巢。②借

助HE切片于供体蜡块的相应部位进行标记作为取材部位。③组织芯片模块制作：将普通病理石蜡熔化，反复沉淀3次，加入3%精制蜂蜡，制作40cm X20cm X10cm大小的空白蜡块，室温冷却。④组织芯

片的设计和制备：设计10 $点组织列阵，用打孔机制成模块，用直径06mm的打孔针从供体蜡块的选定部位逐个取出组织芯，随即放入预先设计的阵列模块中，排列成组织芯片模块，将制成的组织芯片模块置于60 C温箱中50min，轻压模块使组织芯在模块中排平。将制成的模块常规切成4呵的切片裱于硅化玻片上，60C温箱过夜。

122对照组切片制备将病理蜡块切成4 g的切片裱于硅化玻片上, 60 C温箱过夜。

123采用免疫组织化学SP法检测鼠抗人MMP2 ,MMP9 ,MMP13 单克隆抗体均购自北京中杉生物技术有限公司。SP试剂购自福州迈新生物技术开发有限公司，按说明书要求做抗原热修复处理。用己知阳性的乳腺癌组织切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

13阳性结果判断标准结果判断按Shimizu方法［1］，对每张切片阳性细胞的阳性强度按无着色、淡黄色、棕黄色和棕褐色分别打0、1、

2、3分，着色阳性面积按无着色、着色1/

3、1/3〜2/3、2/3分别打0、1、2、3分，然后根据两项打分之和判断其结果：0分为阴性，》3分为阳性，其中5分者为强阳性（注：每张切片选择有代表性的区域，在400倍视野下进行计数，共计5个视野，取其平均值以避免随意性）。

14统计学方法组织芯片免疫组化染色与传统免疫组化染色阳性

率的比较米用行X列表进行x 2检验，a值等于005为显著检验水准。

用SPSS 130统计软件进行分析。

2结果

实验组MMP2染色阳性141例，阳性率为770% ; MMP9染色阳性120例，阳性率为656% ;MMP13染色阳性99例，阳性率为541%。对照组MMP2染色阳性23例，阳性率为767% ; MMP9染色阳性20例，阳性率为667% ; MMP13染色阳性16例，阳性率为533%。结果显示组织芯片免疫组化染色与传统免疫组化染色不存在统计学差异

（P005），详见表1。

3讨论

1998年Kononen等［2］在《Nature》杂志上发表了“组织芯片在肿瘤分子高通量分析中的应用”，为病理学及生物分析技术开辟了新的领域。组织芯片可根据实验要求和目的，设计出不同的排列组合，在疾病的分子诊断、流行病学调查、个体化治疗、预后指标筛选以及新基因的发现等方面发挥重要作用［2~7］。

31组织芯片的优点和局限性表1组织芯片与传统免疫

组化染色的比较