细菌一般染色方法
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结晶紫初染
1分钟水洗
卢戈碘液媒染
1分钟水洗
wenku.baidu.com
(4)
95%乙醇脱色
30秒水洗
复红复染
30秒水洗吸干
结晶紫初染1分钟
水
洗
碘液媒染 1分钟
水 洗
酒精脱色 30秒
水 洗
复红复染
30秒
水 洗
滤纸吸干 油镜镜检
抗酸染色法(acid-fast stain)
分枝杆菌属的细菌(包括结核分枝杆菌、 麻风分枝杆菌等)为抗酸性细菌,一般染 色法不易着色,须用抗酸染色法。 注意事项
常采用美蓝,结晶紫等碱性染料进行染色。 多数染料都是中性有机盐。据着色基的不同 可分为以下类型:
碱性染料(basic dye)—带正电染料。其阳离子 部分为发色基团,可与细胞中带负电的组分结合。 酸性染料(Acid dye)—带负电染料。其阴离子 部分为发色基团,可与细胞中带正电的组分结合。
革兰染色原理
结核分枝杆菌(M.tuberculosis)
形态:
细长,略弯曲的杆菌,多聚集成团。无鞭毛,芽胞。
染色性:
不易着色,抗酸染色阳性。菌体呈红色,背景中其他物质 蓝色。
细菌基本形态结构观察
基本形态
球菌 杆菌 弧菌
葡萄球菌 链球菌 肺炎球菌 脑膜炎球菌 革兰阴性 革兰阳性
特殊结构
芽孢 枯草杆菌,破伤风梭菌 荚膜 肺炎球菌 鞭毛 变形杆菌
使细菌的细胞凝固,使菌体与玻片粘得 更牢固 可改变菌体对染料的通透性 加热固定可杀死细菌,比较安全 固定的方法将制成的标本匀速通过火焰 三次
革兰染色
染色:
初染(结晶紫) 媒染 (碘液) 脱色(酒精) 复染(复红)
Crystal violet
滤纸吸干 油镜镜检
safranin
染色步骤
(1) (2) (3)
肺炎(双)球菌
荚膜
细菌的等电点较低,约在pH 2~5之间, 故在中性、碱性或弱碱性溶液中,菌体 蛋白质电离后带负电荷,易与带正电荷 的碱性染料如龙胆紫及碱性复红等结合, 使细菌被染成紫色或红色。
一、细菌染色标本片的制备
细菌染色检查,首先要进行细菌标本制 备。制备细菌标本一般包括涂片、干燥、 固定三步。
固定的目的和方法
涂片要略厚 加温染色或延长染色时间,加温时随时补加 染色液 分枝杆菌呈红色(+) 其他细菌和背景为蓝色(-)。
操作过程
取痰液→ 涂片(略厚)→干燥→固定 →
石炭酸复红加温染色8~10分钟后→ 用3%的盐酸酒精脱色约1~2分钟, 脱色时轻摇玻片,直到涂片颜色脱去为止 水洗后,用碱性美蓝复染1分钟→水洗, 印干 → 镜检
常用的细菌染色方法
革兰染色 抗酸染色 细菌基本形态结构观察
细菌染色意义
由于细菌个体微小,基本上无色透明, 故将其用适当染料染色观察,方能显示 它的形态、大小、构造及染色特性等, 在细菌鉴别上有重要意义。 革兰染色是细菌学中使用最广泛的一种 染色方法,籍此染色法,可将所有细菌 区分为两大类。
细菌染色方法及原理