实验 氨基酸纸层析
实验六 氨基酸的纸层析
２、纸层析法中要注意哪些问题？除了纸层析法
外，你还知ห้องสมุดไป่ตู้哪些层析法？
②剪纸：取层析滤纸（长22 cm、宽14 cm）一张。
在纸的一端距2～3 cm处用铅笔划一条直线，在此
直线上每隔2 cm作一记号如图。
③点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在这６ 个位点上，干后再点一次。每点在滤纸上扩散的 直径最大不超过3 mm。
④扩展：用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接
触。将盛有20 mL扩展剂的培养皿迅速置于密闭的
纸 层 析 法
溶质在滤纸上的移动速率用Rf表示： 原点到层析斑点中心的距离
Rf =
原点到溶剂前缘的距离
在一定的条件下某种物质的Rf是一个常数。 Rf的
大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析纸的
质量、pH值、层析温度等因素有关。此外，盐分、
其他杂质、点样过多等都会影响样品的有效分离。
分子筛层析
亲和层析
22cm
缝合
3cm
2cm
层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中（点样的一 端在下，扩展剂的液面需低于点样线１cm）。待 溶剂上升至15~20 cm时即取出滤纸，用铅笔描出 溶剂前沿界线，自然风干。
⑤显色：滤纸取出后置于95℃烘箱中显色5 ~ 10
min。
结果与讨论：
１、计算Rf值，并说明影响Rf的因素有哪些？
离子交换层析
试剂和器材：
①试剂：扩展剂[ 0.5%茚三酮的正丁醇-醋酸-水 （4:1:5，上层）]；0.5% Lys、Pro、Val、Phe、 Leu及它们的混合液。 ②器材：层析缸或大标本缸；毛细管；培养皿； 喷雾器；新华一号滤纸．
操作方法：
①平衡：将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层 析缸中。
氨基酸的分离鉴定纸层析法
氨基酸的分离鉴定纸层析法引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于生物体的正常生理功能至关重要。
因此，准确地分离鉴定氨基酸成分对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。
纸层析法是一种简单而有效的分离和鉴定氨基酸的方法。
本文将介绍氨基酸的分离鉴定纸层析法并探讨其应用。
一、纸层析法的原理纸层析法是利用气相平衡原理进行物质分离的一种方法，其原理是根据物质在纸上各组分的相对亲疏性，通过运动距离的差异来分离物质。
在氨基酸的分离鉴定中，纸层析法通过将待测氨基酸溶液滴于纸上，然后将纸立起来，将纸的下端浸入相应的溶剂中，使得溶剂上升，通过毛细作用将氨基酸上提，最终实现氨基酸的分离和鉴定。
二、纸层析法的步骤1. 准备工作：制备纸层析板和显色剂。
2. 样品处理：将待测氨基酸溶解于适量的溶剂中，使其浓度适宜，然后滴于纸层析板上。
3. 运行纸层析：将纸层析板立起，纸的下端浸入相应的溶剂中，待溶剂上升到一定高度后，取出纸层析板。
4. 显色：将纸层析板放置于显色剂中，通过氨基酸与显色剂的反应，使得氨基酸在纸上显色。
5. 结果鉴定：根据显色的位置、颜色和强度等特征，对氨基酸进行鉴定和定量分析。
三、纸层析法的应用1. 氨基酸组成分析：纸层析法可用于分析蛋白质中氨基酸的组成，从而揭示蛋白质的结构和功能。
2. 质量控制：纸层析法可用于对食品、药品等中氨基酸含量的快速检测，保证产品质量和安全性。
3. 生物体内氨基酸代谢研究：纸层析法可用于研究生物体内氨基酸的代谢途径和代谢产物。
四、纸层析法的优缺点纸层析法作为一种常用的分离和鉴定氨基酸的方法，具有以下优点：1. 简单易行：操作简单，不需要复杂的仪器设备，成本低廉。
2. 分离效果好：对于氨基酸的分离效果较好，可以得到较为准确的结果。
3. 易于观察：通过显色剂的反应，可以直观地观察到氨基酸在纸上的分离和鉴定结果。
然而，纸层析法也存在一些缺点：1. 分离效果有限：对于某些结构相似的氨基酸，纸层析法的分离效果不佳，难以实现准确鉴定。
实验六----氨基酸纸层析法
氨基酸的纸层析法一．目的了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。
二、原理以滤纸为支持物的层析法，称为纸层析法。
纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。
展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。
有机溶剂在滤纸上又下向上移动的，称为上行法；有上向下移动的，称为下行法。
将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。
在一定条件下（室温、展层剂的组成、滤纸的质量、PH值等不变），不同的氨基酸有固定的移动速率（Rf值）Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。
用混合氨基酸做样品时，如果只用一种溶剂展层，由于某些氨基酸的移动速率相同或相近，就不能将它们分开，为此，当用一种溶剂展层后，可将滤纸旋转90度，以第一次所的层析点为原点，在用另一溶剂展层，从而达到分离的目的。
这种方法称为双向层析法。
本试验主要介绍的是单向层析法。
其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成。
三、实验仪器1、新华滤纸2、层析缸3、细线4、点样管5、橡皮筋6、电吹风7、喷雾器四、实验试剂1、混合氨基酸（精氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸）2、展层剂：正丁醇：12%氨水：95%乙醇：蒸馏水=13：3：3：1（v:v）3、0.5%茚三酮—无水丙酮溶液：0.5g茚三酮溶于100ml无水丙酮，贮于棕色瓶中五、实验步骤1、取滤纸剪成20×10厘米的滤纸条一张，在一端打孔，系一根细线，在另一端2~3cm处用铅笔画一横线，中间画一圆点（原点）。
2、取毛细管一支(回收)，吸取氨基酸混合液，在原点处点样，样点直径不宜超过5mm,每点一次用吹风机吹干，点2~3次为佳。
3、点样后将滤纸放入层析缸中展层，注意点样线要高于层析液面，滤纸不要贴在层析缸璧上，当展层至另一端1~2cm处时，停止展层（大约2~3小时）。
实验六氨基酸的纸层析法
实验六氨基酸的纸层析法氨基酸是构成蛋白质的最基本的组成成分。
在生物化学和分子生物学实验中，常常需要对氨基酸进行分离和纯化。
纸层析法是一种常用的氨基酸分离和鉴定的方法，它采用纸张作为介质，利用氨基酸的性质在多次不同极性溶剂中的间歇性抽提来完成氨基酸的分离。
下面将介绍具体操作步骤。
一、实验原理氨基酸纸层析法是一种简单而有用的分离和鉴定氨基酸的方法。
其原理是根据氨基酸在不同相对极性的溶剂中的溶解度和色谱行为而进行分离。
实验中用的纸张是具有适当极性特性的滤纸，涂上0.001~0.002mol/L氯乙酸钠作为移动相。
固定相是纸张本身，通常取5×5 cm大小。
标记物一般是用19种常见氨基酸中的一种或混合某些氨基酸，它们分别在不同移动相中有不同的颜色分离性质。
标记物的溶液可以直接在纸上点斑或者先把样品在滤纸上打成碎粒，再加入稍许水均匀混合后点斑。
二、实验步骤1. 实验器材和试剂（1）氯乙酸钠；（2）19种氨基酸标准品；（3）滤纸。
2. 制备移动相将0.001~0.002mol/L氯乙酸钠溶液制备好，备用。
3. 准备试样将要分离的氨基酸标准品用适量的氯乙酸钠溶液稀释，制备出1~2mg/mL的样品，备用。
4. 载纸处理在纸片中央绘制一条垂直线，以绘制者的名字为记。
距离中央线约1cm处，打上精细的刻度线，用微孔钳取少量标样液，在对侧依次在距中央线约1.5cm处打上纸层印。
纸层印就是取少量液体滴到滤纸上产生的斑点。
约300ug/sample。
5. 开始层析在棉花球上，涂上一层氯仿，并立即用焊接器将其挥发掉，然后再涂一遍。
整个过程保持外壳密封状态。
涂的氯仿量要足够，可以完全覆盖整个纸层印，但不能过多。
否则，纸层印上的标样就会扩散到大范围，分辨率就失去了。
将试纸浸泡在移动相中。
移动相上升时，会将固定相上的氨基酸迅速带动并在移动相中逐级输送。
随着移动相液面逐渐提高，固定相的氨基酸成分逐渐被分离开来。
注意事项：（1）加样时，操作应小心、细致，尽可能用毫、微、纳级的物体。
氨基酸纸层析法
氨基酸纸层析法氨基酸纸层析法（paper chromatography of amino acids）是一种常用的分离和鉴定氨基酸的方法。
本文将详细介绍氨基酸纸层析法的原理、步骤、实验条件和数据处理方法等内容，以帮助读者更好地了解并应用这一实验技术。
一、氨基酸纸层析法的原理氨基酸纸层析法是利用氨基酸在纸上的分布系数和溶剂的渗透速度差异进行分离的方法。
其原理是在一根滤纸条上画上水平的线，将待测的氨基酸溶液直接点于纸条上，待溶液中的氨基酸离子在滤纸上沿渗透液前进，不同氨基酸在滤纸上的迁移速度不同，从而实现氨基酸的分离和测定。
二、氨基酸纸层析法的步骤1. 实验前准备（1）准备氨基酸样品，将其溶解在适当的溶剂中，并使用pH 计调节至适当的酸碱度。
（2）准备滤纸条，按照实验需要确定滤纸的宽度和长度。
（3）准备层析槽，将槽中的溶剂预先与上盖采光纸取代，避免有光照射到。
2. 进行层析实验（1）在滤纸条上绘制水平基线，并将标记的点分开，便于后续氨基酸的测定。
（2）将氨基酸溶液直接点于滤纸条上，点的位置要尽量靠近基线，以避免扩散的影响。
（3）将纸条的一端浸入含有适当溶剂的层析槽中，保持溶剂的面平稳。
（4）待溶液中的氨基酸在滤纸上渗透，不同氨基酸迁移的距离不同，最终在纸条上形成清晰的色斑。
（5）将纸条取出，用热风干燥，然后在紫外灯下进行观察和记录。
3. 数据处理将滤纸上的色斑分别用铅笔勾画出来，并测量它们与基线之间的距离。
然后，根据距离之间的比例关系来计算氨基酸在纸上的迁移速度，并与标准曲线进行比较，从而得出待测氨基酸的浓度。
三、氨基酸纸层析法的实验条件1. 溶剂体系常用的溶剂体系有正丙醇/ 乙酸/水 = 4:1:5、正丙醇/氨水/水 = 70:2:25等，需要根据实验需要确定溶剂的组成和比例。
2. 滤纸条的准备常用的滤纸有菱形滤纸和圆形滤纸，需要根据所需分离的氨基酸种类和数量决定滤纸的大小。
3. 实验条件实验应在干燥、通风的环境中进行，避免光照和温度过高。
实验一纸层析法分离鉴定氨基酸
【三、器材与试剂】
【三、器材与试剂】 器材： 1、层析缸 2、毛细管 3、喷雾器 4、培养皿 5、层析滤纸(新华一号) 试剂： 1、扩展剂 （正丁醇：水：冰醋酸= 4：3：1） 2、显色剂 0.1％茚三酮正丁醇溶液。 3、氨基酸溶液 0.5％的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸溶液 及它们的混合液
显色： 用喷雾器均匀喷上0。1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。
计算Rf值
【五、实验结果与分析】
【六、注意事项】
【七、思考题】
1、实验中作为固定相和流动相的物质分别是什么？ 2、Rf值的含义、影响因素？
下次实验 ： 实验二 蛋白质和氨基酸的颜色反应
值 日 生 值 日
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小实验
当滤纸接触到溶剂时，溶液将上升。 滤纸上的小圆点是4种不同的氨基酸的混合物。 看看接下来会发生什么事情…
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可以看出1号氨基酸上升的最高，在滤纸上跑得最快。 而4号氨基酸与滤纸的结合最紧，因此跑的速度比其他的氨基酸慢。
这就是纸色谱法。 对照上图，可知道1-4号的各代表什么氨基酸。 纸色谱法是分离鉴定蛋白质的氨基酸组成的重要工具。
实验一 纸层析法分离鉴定氨基酸
【一、实验目的】
【二、实验原理】
层析技术 是利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两相中，其中一相为固定相，另一相流过此相称作流动相，并使各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。 可分离物质 糖类、有机酸、氨基酸、核苷等
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固定相 在层析中起分离作用而不随层析过程移动的物质。如纸层析中固定相是滤纸纤维中结合的水。固定相被看成是样品移动的阻力。
纸层析法分离鉴定氨基酸
纸层析法分离鉴定氨基酸纸层析法是一种常用的分离和纯化化学物质的实验方法，被广泛应用于有机合成、生物化学和食品科学等领域。
本文将介绍纸层析法在氨基酸分析中的应用。
一、实验原理氨基酸的分离和鉴定是生物化学实验中常用的手段。
氨基酸分子中含有羧基和氨基，可以通过纸层析法实现其分离。
纸层析法是一种基于物质分子间不同的吸附性能而进行分离的方法。
在纸层析实验中，将试样涂在纸层析片（通常为滤纸）的一侧，并将其放入溶剂（通常为水、丙酮、甲醇等）中，溶剂会沿纸层析片向上移动，分离出不同物质组分。
氨基酸分子的羧基和氨基分别具有不同的亲水性和疏水性，因此在纸层析分离中会表现出不同的吸附行为。
例如，疏水性较强的疏水基团会被生物样品或溶剂吸附，从而较慢地从纸层析片上移动，这些氨基酸通常出现在较高位置；而亲水性较强的羧基团则会被水吸附，因此移动速度较快，这些氨基酸通常出现在较低位置。
二、实验步骤1、制备样品：取大约1mg的氨基酸标准品或被测样品，加入1mL的去离子水中，并轻轻搅拌，制成1mmol/L的溶液。
2、制备纸层析片：取一张长约50cm的滤纸，将其叠成4层，然后将中间部分剪成30cm的长条，每条的宽度为1cm左右，用铅笔在底部标记出位置，离开1cm到1.5cm的距离。
3、涂样：在每个标记位置上滴加不同氨基酸溶液，每次加约5µL。
所有样品均按照氨基酸的相对极性从小到大进行涂样，从左到右编号，以便于鉴定。
4、溶剂选择：选择一种适宜的溶剂，通常为水、丙酮、甲醇等。
将滤纸上端放入溶剂中，约1cm左右的位置即可。
5、开始实验：用三角架和夹子将滤纸张贴在玻璃板上，使其呈现较小的倾斜面。
在滤纸的底部悬挂一张白纸，以便于观察样品在纸层析上的位置变化。
待溶剂无法再升高时，实验结束。
6、结果读取：按照行（从上到下）顺序，观察样品的移动距离。
三、实验结果及分析纸层析法可以分离并识别出存在于试样中的氨基酸分子，在实验中，通过观察样品从纸层析片底部开始向上移动的情况，可以确认每个氨基酸的相对位置和含量。
实验四 氨基酸纸层析
05 注意事项与安全须知
实验安全须知
01
02
03
04
避免直接接触层析纸上的化学 物质，以免对皮肤和眼睛造成
刺激。
在操作过程中，应佩戴实验服 和化学防护眼镜，以防止化学
物质溅到身上和眼睛里。
实验结束后，应将层析纸妥善 处理，避免对环境造成污染。
实验步骤
制作纸层析柱
将滤纸卷成柱状，用玻璃棒固定，并标记 溶剂的起始线和终点线。
观察和记录
观察各氨基酸的展开情况，记录位置和颜 色。
点样
用微量注射器将氨基酸混合物点在起始线 上。
晾干
等待溶剂挥发，晾干滤纸。
展开
将溶剂缓慢沿玻璃棒加入柱内，使氨基酸 随溶剂展开。
数据记录
01
记录各氨基酸在滤纸上的位置，并标注名称。
在实验过程中，应保持实验室 通风良好，以降低有害气体浓
度。
实验注意事项
在进行氨基酸纸层析前，应确保所使用的层析纸质量良 好，无破损或受潮现象。
在展开过程中，应保持展开剂的均匀流动，避免出现展 开剂的干涸现象。
在点样时，应控制好点的直径和力度，避免样品点过大 或过小，影响分离效果。
在观察和记录实验结果时，应保持观察区域的明亮和整 洁，以免影响观察效果。
当氨基酸混合物在层析纸上进行纸层析时，由于不同氨基酸的极性、分子量和吸附性能存在 差异，导致它们在流动相和固定相之间的分配系数不同，从而在层析纸上形成不同的迁移距 离。
通过比较不同氨基酸在层析纸上的迁移距离和标准氨基酸的迁移距离，可以确定样品中氨基 酸的种类和含量。
实验步骤
将层析纸固定在层析架上，毛细 管蘸取少量混合氨基酸溶液，在 距层析纸底边约1cm处点样。
实验十二氨基酸的分离鉴定-纸层析法
原 到 析 心 距 点 层 中 的 离 = 原 到 剂 沿 距 点 溶 前 的 离
实验步骤: 三.实验步骤 实验步骤
1. 扩展剂的制备
20ml正 醇 丁 15ml → →分液漏斗 充分振→ 5ml冰 酸 醋
取 上层（油层） 扩展剂 5ml→层析缸→密闭，备用 → 静置分层→ 下层（水层） 弃掉 →
2. 纸层析操作 纸层析操作:
取层析滤纸,并画一条底线 用铅笔 取层析滤纸 并画一条底线(用铅笔 并画一条底线 用铅笔) 直线每隔１ 作标 用点样器点样 直线每隔１cm作标 记 缝线成筒状 扩展至上升 9~11cm 取出滤纸, 取出滤纸 并用铅笔描前沿 线 吹干 喷茚三酮 吹干显色 计算Rf值 计算 值
实验十三 氨基酸的分离鉴定 --------纸层析法 纸层析法
一.实验目的 实验目的: 实验目的 通过氨基酸的分离,学习纸层析法的 基本原理及操作方法
二.实验原理 实验原理: 实验原理
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分 配层析法.不同的氨基酸在滤纸上的移动 速度不同,最终层析的位置也不同,从而可 根据这个位置来确定各类氨基酸的比移 值Rf. Rf
四.数据记录及处理
1. 原点到溶剂前 沿的距离a= 2.原点到层析点中 心的距离b=
五. 分析讨论
氨基酸的分离鉴定—纸层析法
2)、氨基酸溶液0．5％的赖氨酸、脯氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液(各组份浓度均为0．5％)各配置5mL。
3)、显色剂50～100mL 0．1％水合茚三酮正丁醇溶液。
【实验步骤】
（1）检查培养皿是否干燥、洁净；若否，将其洗净并置于干燥箱内120℃烘干。
（2）平衡：剪一大块塑料薄膜铺在桌面上，将层析缸或大烧杯到置于塑料薄膜上，再把盛有约5mL展层溶液的小烧杯置于倒置的层析缸或大烧杯中，用塑料薄膜密封起来，平衡20min。
【注意事项】
⑴.点样时要避免手指或唾液等污染滤纸有效面(即展层时样品可能达到的部分)。
⑵.点样斑点不能太大，防止层析后氨基酸斑点过度扩散和重叠，且点样后吹风温度不宜过高，以免样品变性(斑点发黄)。
⑶.展层开始时切勿使样品点浸入溶剂中。
⑷.展层剂要临用前配制，以免发生酯化，影响层析结果。
⑸.如果样品中溶质种类较多，且某些溶质在某一溶剂系统中的Rf值十分接近时，单向层析分离效果不佳，则可采用双向层析，即将样品点在一方形滤纸的角上，先用一种溶剂系统展层。滤纸取出干燥后，再将滤纸转90度角，用另一溶剂系统展层。所得图谱分别与这两种溶剂系统中作的标准物质层析图谱对比，即可对混合物样品中各成分进行鉴定。
在一定的条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与被测物的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用单向纸层析法分离氨基酸。
氨基酸的纸层析实验报告
氨基酸的纸层析实验报告实验目的：掌握氨基酸纸层析技术，通过纸层析分离和定性鉴定氨基酸。
实验原理：氨基酸的纸层析是利用氨基酸对不同的升华剂的选择性吸附而实现分离的一种分析方法。
纸层析方法较简便、快速，并能够同时分离、定量、定性分子。
这使它在生物化学、蛋白质化学、微量分析等领域中得到了广泛应用。
实验过程：1.准备氨基酸标准溶液：取苯丙氨酸、天门冬酰胺酸、色氨酸、赖氨酸、小麦谷氨酸和组氨酸各10毫克，加入10毫升0.02mol/L HCl和1滴10%酚酞指示剂，用水定容至100毫升。
2.制备氨基酸样品：取10毫升氢氧化钠溶液和0.3克氨基酸溶液混合，使其溶解并加热至沸腾，将样品冷却到室温，并加入1毫升0.02mol/L盐酸。
3.准备纸层析板：将富马酸纸(6cm*0.8cm)沿宽度中心折叠，使其成为4cm*0.8cm的大小；将纸上端用20毫升1-丙醇-甲醛-草酸钾(6:0.4:4)振荡2次，再用烘箱烘干，使其完全干燥。
4.纸层析：将样品以细滴的形式滴在纸层析板下端处，将纸放入深度为2-3厘米的玻璃瓶中，瓶底加入1毫升0.2mol/L HCl溶液，并将其密封。
板上的液相在升华过程中被移动，当溶剂距离顶端紫色标记线1厘米时把纸层析取出，用乙醇-水(1:1)固定，并在水龙头下冲洗。
5.涂上氨基酸显色剂：将纸层析用10%磷酸液浸泡5-10分钟，使显色剂透彻纸层析板。
6.观察分析：根据分离的结果和标准溶液进行比较，以鉴定和定量分析被检测的氨基酸。
实验结果：在纸层析板上，分离了7种氨基酸。
在试验中，我们发现沿着纸层析板距离最短的氨基酸为小麦谷氨酸，距离最远的是组氨酸。
结果与标准溶液分析结果相符，可以证明该方法可以用于氨基酸的分离和定性鉴定。
实验结论：该实验使用氨基酸纸层析技术，成功地将氨基酸分离并鉴定。
该方法应用广泛，简便易行，能够分离、定性、定量不同的化合物。
种类繁多、方法不断丰富，成为分析化学领域中重要的分析手段。
氨基酸的纸层析
氨基酸的纸层析引言：纸层析是一种简单而有效的分离和检测化合物的方法，它通过利用化合物在固定相（通常是纸张）上的迁移速度差异来实现分离。
氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究蛋白质的组成和性质具有重要意义。
因此，氨基酸的纸层析成为了研究氨基酸的常用方法之一。
一、纸层析的原理纸层析是一种液相分离技术，其原理基于化合物在固定相和流动相之间的分配行为。
固定相通常是由纸张组成的，而流动相则是溶液。
当试样溶液被加到纸上时，流动相开始向上渗透，溶解试样中的化合物。
然后，随着流动相继续上升，化合物会在纸上产生不同的迁移速度，从而实现分离。
二、氨基酸的纸层析方法氨基酸的纸层析方法通常涉及以下几个步骤：1. 准备纸层析纸：选择适合的纸张作为固定相，常用的有滤纸和纸胶片。
纸张应具有较好的吸水性和化学稳定性。
2. 制备流动相：根据需要选择合适的溶剂和缓冲液，以便溶解样品和调节pH值。
3. 样品制备：将待测氨基酸样品溶解在适当的溶剂中，并进行必要的稀释和调节pH值。
4. 上样：用毛细管或吸管将样品涂抹在纸上，通常在距离纸底端2-3厘米处。
5. 纸层析：将纸张立起放入含有流动相的容器中，使纸底端浸入溶液中，然后盖上盖子避免溶剂挥发。
让溶剂上升至合适的高度，以保证分离的有效性。
6. 可视化：取出纸张，干燥后，利用适当的显色剂或检测剂将化合物可视化。
常用的显色剂有尼尼醛试剂和二硝基苯胺。
7. 定量分析：通过比较样品斑点的Rf值（迁移率）和标准氨基酸的Rf值，可以对氨基酸进行定性和定量分析。
三、氨基酸纸层析的应用氨基酸的纸层析在生物化学和生物医学领域中得到了广泛的应用。
以下是一些常见的应用：1. 氨基酸分析：通过纸层析可以快速、简便地对复杂的氨基酸混合物进行分析，包括氨基酸的组成和相对含量。
2. 蛋白质组成分析：蛋白质是由氨基酸组成的，通过纸层析可以分析蛋白质中各种氨基酸的相对含量，进而了解蛋白质的组成和结构。
3. 蛋白质纯化：纸层析可以用于蛋白质的初步纯化，通过分离出目标氨基酸，从而减少后续纯化步骤的复杂性。
氨基酸的分离鉴定(纸层析法)
氨基酸的分离（纸层析法）一、实验原理1、层析法又称色谱法，是一种物理的分离方法。
利用混合物中各组分物理化学性质的差异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等），使各组分以不同程度分布在固定相和流动相两相中，并使各组分以不同速度移动，从而得到有效的分离。
操作方式：纸层析、薄层层析、柱层析等分离机理：分配层析、吸附层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析等2、纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，展层溶剂由有机溶剂和水组成。
滤纸纤维上的羟基具有亲水性，在滤纸上水就被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相。
当有机溶剂（流动相）沿纸流动经过层析点时，层析法上溶质就在水相和有机相之间不断进行分配。
由于溶质就在水相和有机相之间不断进行分配。
由于溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。
分配系数=溶质在固定相中的浓度溶质在流动相中的浓度物质被分离后在滤纸上的移动速率用R f值表示：R f=原点到层析点中心的距离原点到溶剂前沿的距离只要条件（如温度、展层溶剂的组成）不变，R f值是常数，故可根据R f值作定性依据。
氨基酸无色，利用茚三酮反应，可将氨基酸层析点显色作定性、定量用。
二、实验器材标准氨基酸溶液、滤纸、层析缸、保鲜膜、剪刀、毛细管、电吹风。
三、实验试剂1、酸相溶剂：V[正丁醇（A.R）]：V[88%甲酸]：V[水]=15：3：22、显色贮备液：V（0.4mol/L茚三酮-异丙醇）：V（甲酸）：V（水）=20：1：5四、实验操作1、点样量取30mL层析溶剂、1mL显色贮备液于层析缸中，混匀密闭，静置。
戴好手套，在桌上铺好一层保鲜膜。
取一张干净滤纸，将其剪彩为18cm*14cm。
在纸的一端距边缘2cm处用铅笔轻轻划一条直线，在此直线上等距离分出几个点作为点样原点。
用毛细管将标准氨基酸和未知样品分别点在点样点上，每次点样后用电吹风冷风吹干再点下一次，点样点直径不超过5mm。
2、层析与显色将滤纸卷成圆筒形，用钉书针固定成圆筒状，纸的两边不能接触。
氨基酸的分离鉴定——纸层析法
实验原理
• 茚三酮的显色原理 氨基酸与茚三酮水合物在弱酸条件下共加热时， 氨基酸被氧化脱氨、脱羧，而茚三酮水合物被 还原，其还原物可与氨基酸加热分解产生的氨 结合，再与另一分子茚三酮缩合成为蓝紫色化 合物，称为罗曼紫（Ruhemann's purple）。
实验试剂与仪器
• 试剂 纯净的赖氨酸、亮氨酸、丙氨酸、天冬氨酸 8×10E-3mol/L溶液；四种氨基酸混合溶液（每 种浓度与对应纯净溶液一致）；2.5%茚三酮丙 酮溶液；酸性展层剂（正丁醇：88%甲酸：水 =60：17：8）。 • 仪器 钟罩×1、培养皿×1、小烧杯10ml×1、层析 柱×1、小漏斗×1、新华一号滤纸 （14cm×17cm）×1、电吹风、烘箱、毛细管、 订书机，及其他常用仪器。
实验结果及分析
——图像实例
实验结果及分析
——各氨基酸比移值Rf
氨基酸
Rf
赖氨酸
0.2294
天冬氨酸
0.3814
丙氨酸
0.5771
亮（白）氨酸
0.8609
在同一实验条件下，比移值Rf主要取决于分配系数，不同的物质分配 系数不同，也就有不同的Rf 。此外，溶剂的溶质的性质、滤纸的性质、展 层的温度和p H值均会影响比移值Rf。 实验中，Rf值与个人操作及具体实验条件息息相关，存在一定波动， 但总体趋势相同。
• 纸层析 纸层析法属于分配层析，层析滤纸为载体， 流动相是指层析液，在毛细拉力作用下， 层析液能不断由下向上流动。固定相是指 被吸附在滤纸纤维之间的水分。由于纤维 素上的羟基具亲水性使这部分水束缚在纤 维素周围，不易扩散而成为固定相。
实验原理
• 在层析过程中，当层析液在毛细拉力作用 下，上升流经滤液滴点时，滴点上的氨基 酸就相继融入层析液，随着层析液上升， 并发生在分配，即有一部分色素从层析液 分配溶解到固定相中，直到平衡。由于分 配系数的不同，那些分配系数大的氨基酸 分子，随层析液向上移动得快，形成的斑 点集中在滤纸的上部；而分配系数小的氨 基酸分子，随层析向上移动得慢，形成的 斑点集中在滤纸的下面。
氨基酸的分离鉴定--纸层析法
实验一：氨基酸的分离鉴定--纸层析法一、目的：通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理：层析法也叫色谱法，是一种物理分离方法，它是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差异，使各组分以不同的程度分布在两个相中，其中一个相为固定相，另一个相则流过此固定相（称流动相）并使各组分以不同的速度移动从而达到分离。
层析法是近代生物化学最常用的分析方法之一，运用这种方法可以分离性质极为相似而用一般化学方法难以分离的各种化合物。
如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。
层析法有许多种类，根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。
纸层析是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗生素等物质的一中分离分析工具。
纸层析属于分配层析法。
分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数的不同而得到分离。
纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。
水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相：由于纤维素上的羟基具有亲水性，和水以氢键相连，使这部分水不易扩散，所以能与跟水混合的溶剂仍然形成类似不相混合的两相。
当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上的溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相而进入无溶质的区域，这时，又重新分配，一部分溶质从有机相进入水相。
当有机相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的方向移动，不断分配。
溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。
纸上层析法的一般操作是将混合物点到纸上，干后让溶剂从有样品的一端经毛细作用流到纸的另一端。
在密闭的容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向反复抽提，由于混合氨基酸在两相中的分配系数（当把一种物质在两种不相溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀分配。
实验5 氨基酸纸层析
实验五氨基酸纸层析法一、目的1、了解并掌握氨基酸纸层析的原理、意义和具体操作。
2、了解不同溶剂体系对样品的分离效果；3、了解氨基酸的一些理化性质。
二、原理用滤纸为支持物进行层析的方法，称为纸层析法。
纸层析所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，水是固定相，有机溶剂是流动相。
溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向下移动的，称下行法。
将样品点在滤纸上（此点称为原点），进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。
出于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。
溶质在滤纸上的移动速率用R f值表示：R f=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离只要条件（如温度、展层溶剂的组成）不变，R f值是常数，故可根据R f值作定性依据。
样品中如有多种氨基酸，其中某些氨基酸的R f值相同或相近，此时如只用一种溶剂展层，就不能将它们分开。
为此，当用一种溶剂展层后，将滤纸转动90°，再用另一溶剂展层，从而达到分离的目的，这种方法称为双向纸层析法。
氨基酸无色，利用茚三酮反应，可将氨基酸层析点显色作定性、定量用。
三、实验器材滤纸（大滤纸，新华双圈滤纸60cm×60cm等）烧杯，剪刀，层析缸，毛细管，电吹风，培养皿，小订书机等。
四、实验试剂四种氨基酸：组氨酸，酪氨酸，脯氨酸，精氨酸各1g正丁醇（A.R.），正丙醇（A.R），95%乙醇，甲酸，0.4mol/L茚三酮-异丙醇五、操作1、配制氨基酸溶液：分别称取组氨酸，酪氨酸，脯氨酸，精氨酸60mg，分别溶解在10mL 0.1mol/L的盐酸溶液中，贴好标签（6mg/ml）。
极性不相似样品：分别称取60mg组氨酸，酪氨酸，脯氨酸，混合溶解在10mL 0.1mol/L的盐酸溶液中。
极性相似样品：分别称取60mg组氨酸、精氨酸，混合溶解在10ml 0.1mol/L的盐酸溶液中。
实验一氨基酸的分离鉴定纸层析法
02
实验原理
纸层析法的原理
纸层析法是一种基于物质在固定相和 流动相之间分配系数的差异进行分离 的方法。在纸层析中，固定相是纸纤 维上的水分子，而流动相是溶剂。当 流动相通过固定相时，物质在两相之 间的分配系数不同，导致它们在固定 相和流动相之间的移动速度不同，从 而实现分离。
01
02
03
改进实验操作流程
进一步规范实验操作步骤， 提高实验效率。
优化实验条件
尝试不同的实验条件，如 温度、湿度、展开剂等， 以提高实验结果的准确性 和可靠性。
引入先进技术
考虑引入高效液相色谱等 技术手段进行氨基酸的分 离鉴定，以提高分离效果 和鉴定精度。
THANKS
感谢观看
通过纸层析法，可以根据氨基酸的极性大小将其分离成不同的组分。
影响氨基酸分离的因素
01 02
流动相的组成
流动相的组成对氨基酸的分离效果有显著影响。改变流动相的组成可以 调整氨基酸在固定相和流动相之间的分配系数，从而改变它们的移动速 度。
固定相的性质
固定相的粒径、吸附能力等性质也会影响氨基酸的分离效果。选择合适 的固定相可以提高分离效果和分辨率。
准备实验材料
选择适当的滤纸、展开剂、氨 基酸样品等。
展开
将滤纸悬挂在展开剂中，控制 展开剂的流速和高度，确保展 开充分。
观察和记录
观察各氨基酸在滤纸上的位置， 记录各组分的Rf值（相对迁移 率）。
了解氨基酸的理化性质和分离鉴定方法
氨基酸的理化性质包括极性、溶解度、酸碱性、光学活性等。这些性质决定了氨 基酸在纸层析法中的分离效果。
生物化学实验氨基酸的纸层析法
生物化学实验氨基酸的纸层析法实验氨基酸的纸层析法一、目的了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。
二、原理以滤纸为支持物的层析法，称为纸层析法。
纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。
展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力强;有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。
有机溶剂在滤纸上又下向上移动的，称为上行法;有上向下移动的，称为下行法。
将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。
在一定条件下(室温、展层剂的组成、滤纸的质量、PH值等不变)，不同的氨基酸有固定的移动速率(Rf值)Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离用混合氨基酸做样品时，如果只用一种溶剂展层，由于某些氨基酸的移动速率相同或相近，就不能将它们分开，为此，当用一种溶剂展层后，可将滤纸旋转90度，以第一次所的层析点为原点，在用另一溶剂展层，从而达到分离的目的。
这种方法称为双向层析法。
本试验主要介绍的是单向层析法。
其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成。
、实验仪器三1、新华滤纸2、层析缸3、细线4、点样管5、橡皮筋6、电吹风7、喷雾器四、实验试剂1、混合氨基酸溶液(甘氨酸，苯丙氨酸)，甘氨酸溶液，苯丙氨酸溶液2、展层剂:正丁醇:12%氨水:95%乙醇:蒸馏水=13:3:3:1(v:v)3、0.5%茚三酮—无水丙酮溶液:0.5g茚三酮溶于100ml无水丙酮，贮于棕色瓶中五、试验步骤1、取滤纸剪成20×10厘米的滤纸条一张，在一端打孔，系一根细线，在另一端2~3cm处用铅笔画一横线，中间画一圆点(原点)。
2、取毛细管一支(回收)，吸取氨基酸混合液，在原点处点样，样点直径不宜超过5mm,每点一次用吹风机吹干，点2~3次为佳。
3、点样后将滤纸放入层析缸中展层，注意点样线要高于层析液面，滤纸不要贴在层析缸璧上，当展层至另一端1~2cm处时，停止展层(大约2~3小时)。
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2011-2-8
3
层析技术( 层析技术(chromatography 色谱技术) 色谱技术)
一、发展史：
层析分离技术在20世纪初就已得到应用： 层析分离技术在20世纪初就已得到应用： 20世纪初就已得到应用 1903年用于植物色素的分离, 1903年用于植物色素的分离,各种色素以不同的速率流动后形成不 年用于植物色素的分离 同的色带而被分开，由此得名为“色谱法” 同的色带而被分开，由此得名为“色谱法” 1931年用氧化铝柱分离了胡萝卜素的两种同分异构体； 1931年用氧化铝柱分离了胡萝卜素的两种同分异构体； 年用氧化铝柱分离了胡萝卜素的两种同分异构体 1944年出现了以滤纸作为支持物的纸层析； 1944年出现了以滤纸作为支持物的纸层析； 年出现了以滤纸作为支持物的纸层析 20世纪六十年代末出现了高效液相色谱(HPLC)。 20世纪六十年代末出现了高效液相色谱(HPLC)。 世纪六十年代末出现了高效液相色谱(HPLC)
2011-2-8 8
分配层析法： 分配层析法：
利用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的 分配系数不同，而达到分离目的的一种实验方法。 分配系数不同，而达到分离目的的一种实验方法。 在一定条件下， 在一定条件下，一种物质在某种溶剂系统中的分配系
是一个常数。 数α是一个常数。
溶质在固定相的浓度 溶质在固定相的浓度(Cs) 固定相的浓度(Cs)
2011-2-8 10
移动速率(比移值 ： 移动速率 比移值)： 比移值
原点到层析点中心的距离 Rf = 原点到溶剂前沿的距离
2011-2-8
11
影响R 值的主要因素： 影响 f值的主要因素：
Rf决定于被分离物质在两相间的分配系数以及 两相间的体积比。由于在同一实验条件下， 两相间的体积比。由于在同一实验条件下，两相体 积比是一常数，所以主要决定于分配系数。 积比是一常数，所以主要决定于分配系数。不同物 质分配系数不同， 也就不同。 质分配系数不同，Rf也就不同。 （1）物质的结构和分子极性： 物质的结构和分子极性： 物质的结构不同极性不同， 物质的结构不同极性不同，在两相中的溶解度也 就不同， 就不同，物质的极性决定了物质在水和有机溶剂之间 的分配系数，极性大的易溶于水中即固定相中， 的分配系数，极性大的易溶于水中即固定相中，Rf 反之,R 则较大。 小；反之,Rf则较大。
显色： 5、显色
用喷雾器将0 25 ％ 茚三酮显色剂均匀喷在滤纸上 均匀喷在滤纸上， 用喷雾器将 0.25％ 茚三酮显色剂 均匀喷在滤纸上 ， 热风（加快反应）反应吹干显色。 热风（加快反应）反应吹干显色。
2011-2-8 23
实验结果与计算： 五、实验结果与计算：
用铅笔将层析色谱轮廓和中心点描出来； 1、用铅笔将层析色谱轮廓和中心点描出来； 测量原点至色谱中心和至溶剂前沿的距离， 2、测量原点至色谱中心和至溶剂前沿的距离，计算 各种已知氨基酸和未知氨基酸的R 各种已知氨基酸和未知氨基酸的Rf值。 分析混合样品中未知氨基酸的组分。 3、分析混合样品中未知氨基酸的组分
Please be quiet, 上课了！！ 上课了！！
2011-2-8
1
实
验
一
氨基酸纸层析
学时： 学时：3
2011-2-酸的分离，学习并掌握纸层 通过氨基酸的分离，学习并掌握纸层 析的原理和操作技术； 析的原理和操作技术； 2、掌握分配层析法； 掌握分配层析法； 3、掌握影响分配系数的因素。 掌握影响分配系数的因素。
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展开方式： （6）展开方式：
上行法R 下行法（ 上行法Rf小；下行法（层析缸上部有一盛展开剂 的液槽，滤纸点样端向上进入槽中，重现性差， 的液槽，滤纸点样端向上进入槽中，重现性差，斑点 易扩散） Rf大；环行法（最好用无方向性的特制滤 易扩散） 环行法（ 用圆形滤纸层析时，由于内圈较外圈小， 纸）用圆形滤纸层析时，由于内圈较外圈小，限制了 溶剂的流动， 较小。 溶剂的流动，Rf较小。
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（2）层析溶剂： 层析溶剂：
首先，溶剂的纯度要高。 首先，溶剂的纯度要高。 其次， 其次，溶剂系统选择应考虑被分离的物质在溶剂系统中的 05～ 85。 Rf在0.05～0.85。 再次，溶剂系统必须新鲜配制，如正丁醇- 甲酸-水系统久 再次，溶剂系统必须新鲜配制，如正丁醇- 甲酸放易引起酯化。 放易引起酯化。 （3）pH值： ） 值 溶剂、滤纸和样品的pH值都会影响物质的解离 值都会影响物质的解离， 溶剂、滤纸和样品的 值都会影响物质的解离，从而影响物 质的极性和溶解度 极性和溶解度， 改变； 质的极性和溶解度，使Rf改变； 改变
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室验室的温度和时间: （5）室验室的温度和时间: 温度影响物质在两相中的溶解度，即影响分配系数 分配系数； 温度影响物质在两相中的溶解度，即影响分配系数； 也影响滤纸纤维的水合作用从而影响固定相的体积 固定相的体积； 也影响滤纸纤维的水合作用从而影响固定相的体积；也影 响溶剂系统的含水量，即影响流动相的组分比例。层 响溶剂系统的含水量，即影响流动相的组分比例。 析必须在恒温条件下进行。 析必须在恒温条件下进行。
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3、点样： 点样：
用毛细管点样，中间点混合氨基酸， 用毛细管点样 ，中间点混合氨基酸， 两侧点四种 标准氨基酸；每个，每点一次用晾干后再点下次， 标准氨基酸 ； 每个， 每点一次用晾干后再点下次 ，点 样点的直径应控制在2mm左点样点重复点 左点样点重复点5 样点的直径应控制在 2mm左点样点重复点5次右 ，点样 完毕用大头针将滤纸做成筒形 点样面向外。 筒形， 完毕用大头针将滤纸做成筒形，点样面向外。
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三、层析技术的种类
1、按流动相的状态分类： 按流动相的状态分类：
（1）液相层析（色谱） 液相层析（色谱） （2）气相层析（色谱）； 气相层析（色谱）
2、按固定相的使用形式分类： 按固定相的使用形式分类：
（1）柱层析（2）纸层析（3）薄层层析； 柱层析（ 纸层析（ 薄层层析；
3、按分离过程所主要依据的物理化学性质分类： 按分离过程所主要依据的物理化学性质分类：
（1）吸附层析 （2）分配层析 （3）离子交换层析 亲和层析等。 （4）凝胶层析 （5）亲和层析等。
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实验原理: 二、实验原理:
纸层析法：是以滤纸作为惰性支持物的分配层析。 纸层析法：是以滤纸作为惰性支持物的分配层析。 分配层析 滤纸纤维上羟基具有亲水性，因此吸附水作为固定相， 滤纸纤维上羟基具有亲水性，因此吸附水作为固定相， 固定相 通常把有机溶剂作为流动相。 通常把有机溶剂作为流动相。 流动相 将样品点在滤纸上，进行展层， 将样品点在滤纸上，进行展层，样品中的各种氨基酸在 两相溶剂中不断进行分配。由于它们的分配系数不同， 两相溶剂中不断进行分配。由于它们的分配系数不同， 不同氨基酸随流动相移动的速率就不同， 不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些 氨基酸分离开来， 氨基酸分离开来，形成距原点不等的层析点
分配系数α= 分配系数
溶质在流动相的浓度 溶质在流动相的浓度（Cl) 流动相的浓度（
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溶剂系统： 正丁醇：甲酸： 溶剂系统： 正丁醇：甲酸：水=15：3：2 ： ： 固定相：水和滤纸纤维素有较强的亲和力， 固定相 水和滤纸纤维素有较强的亲和力， 水和滤纸纤维素有较强的亲和力 固定相; 因而其扩散作用降低形成固定相 因而其扩散作用降低形成固定相; 流动相：有机溶剂和滤纸亲和力弱，所以在 流动相： 有机溶剂和滤纸亲和力弱， 滤纸毛细管中自由流动，形成流动相。 滤纸毛细管中自由流动，形成流动相。 流动相 由于混合液中各种氨基酸的α值不同， 由于混合液中各种氨基酸的α值不同，所以 移动速率（ 迁移率R 就不同， 移动速率 （ 即 迁移率 Rf 值 ） 就不同 ， 从而达 到分离的目的。 到分离的目的。
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四、实验步骤： 实验步骤：
样品的准备： 1、样品的准备：
称取谷氨酸、组氨酸、脯氨酸、 称取谷氨酸、组氨酸、脯氨酸、亮氨酸标准品各 1mg混合溶于10%异丙醇中 0.01M。 混合溶于10%异丙醇中， 1mg混合溶于10%异丙醇中，0.01M。
滤纸的准备： 2、滤纸的准备：
取一长方形滤纸，在滤纸横向对应的两边， 取一长方形滤纸，在滤纸横向对应的两边，距边沿 2cm处 各画两条平行线，一条作前沿标志， 2cm处，各画两条平行线，一条作前沿标志，一条作点 样线，在点线上每隔2cm画一个“ 作为点样位置 2cm画一个 作为点样位置， 样线，在点线上每隔2cm画一个“+”作为点样位置，共5 个点。 个点。
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层析的基本概念 二、定义
是根据被分离的混合物中各组分的理 层析技术是根据被分离的混合物中各组分的理 化性质（分子的形状和大小、分子极性、吸附力、 化性质（分子的形状和大小、分子极性、吸附力、 分子亲和力、分配系数等）的不同， 分子亲和力、分配系数等）的不同，使各组分在两 相（一相为固定的，称为固定相；另一相流过固定 一相为固定的，称为固定相； 固定相 相，称为流动相）中进行分配。 称为流动相）中进行分配。 流动相
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层析的基本概念
固定相：固定相是层析的一个基质。它可以是固 固定相 体物质（如吸附剂，凝胶，离子交换剂等），也可 以是液体物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶液）。 流动相：在层析过程中，推动固定相上待分离的 流动相 物质移动的液体、气体等，都称为流动相。柱层析 中一般称为洗脱剂，薄层层析时称为展层剂。
样品溶液中杂质： （7）样品溶液中杂质：
如氯化钠的存在会影响氨基酸的R 如氯化钠的存在会影响氨基酸的Rf值。
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