金莲花化学成分提取及抗菌作用研究_李世相

萄球菌、绿脓杆菌、枯草芽孢杆菌为受试菌，采用 制 好 不 同 浓 度 各 化 合 物 溶 液 和 灭 菌 MH 培 养 基
体 外 抑 菌 研 究 发 现 ， 金 莲 花 水 提 物 体 积 分 数 为 按 1 ∶9 配 制 成 含 药 浓 度 为 200、100、50、25、12.5、
80%的乙醇溶解部分的氯仿萃取物对革兰氏阳性 6.25、3.12 μg/mL 琼 脂 平 板 ， 冷 却 后 将 制 备 好 的
氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。氯仿萃取物（9.6 g） 2．92（1 H，d，J =16．0 Hz，H -3），2.82（1H，d，J =13.75
经硅胶柱、正己烷丙酮梯度洗脱，得到化合物 6 Hz，H -5），2．54 （1H，d，J =16.5 Hz，H -3）；13C -NMR
（50 mg）、7（7 mg）、8（10 mg）和 9（5 mg）。乙酸乙 （125 M Hz，CD3OD）δ：176.2 （C -1），170．5 （C -4）， 酯萃取物（20.0 g）经硅胶柱、氯仿甲醇梯度洗脱， 156．1（C-4'），131．2（C-2'，C-6'），126．4（C-1'），114.4
菌具有抑制作用，而乙酸乙酯萃取物对革兰氏阳 菌液接种于平板表面，每点菌数约为 104 cfu，置
性菌和阴性菌均具有抑制作用。通过色谱和波谱 于恒温培养箱 35 ℃培养 24 h 后 ，观 察 各 化 合 物
数据分析，从中分离并鉴定了 10 个化合物，其中 抑菌活性，测定结果见表 1。
化合物 2-4 为首次从该属植物中分离得到。
（ 温度未校正，日本 Yanaco 公司）；薄层色谱用硅 提取物 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 绿脓杆菌 枯草芽孢杆菌
胶 GF254 和柱色谱用硅胶（51-71 μm，青岛海洋化 工 厂）；其 他 试 剂 均 为 分 析 纯 ；所 用 药 材 由 甘 肃 省 药检所鉴定。 2 方法与结果 2.1 金莲花化学成分的分离提取
[7] Shama M. The isoquinoline alkaloids [M]. New
中 4 种生物碱[J].色谱，2013，31（3）:249-253.
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[10] 刘 虹，郝 彧，朱晓月，等.HPLC 测定血浆中
[8] 刘玉霞，刘 斌，石任兵，等.RP-HPLC 法测定
1 仪器与材料
表 1 目标化合物的最小抑菌浓度 MIC/μg·mL-1
Bruker-Am 400 MHz 核磁共振仪（D2O、DMSO-d6 为溶剂，TMS 为内标）；MP S3 型显微熔点测定仪
Table 1 Minimal inhibitory concentration of target compounds/μg·mL-1
稠膏，加 300 g 硅胶拌样，晾干，研细，上样于 1 500 g 提物 b 对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的抑制作用
硅胶（200-300 目）柱，用氯仿－甲醇（10∶0-7∶3）梯度 优于双黄连提取物 d，乙酸乙酯提取物 c 抑菌活
洗脱，薄层检查，合并相同组分，再经硅胶柱色谱、 性与双黄连提取物 d 相近。
Sephadex LH－20、MCI 柱色谱分离纯化，得化合物 2.3 结构鉴定
1（130 mg）、2（105 mg）、3（120 mg）、4（200 mg）、
化合物 1：白色粉末；ESI-MS m/z：39.3。1H－
5（110 mg）。将其余提取液浓缩至 1.5 kg/L，加乙醇 至体积分数为 80%，静置 12 h，回收乙醇，得浸膏
d ，J = 7 ． 45 Hz ，H - 1'''），3 . 79 brd （J =10．9 Hz）， （C-2'，6'），121.7 （C-1'），115.9 （C-3'，5'），104.7
3.58 m（2H，H-6''），3.50（1H，t，J=8．88 Hz，H-3''）， （C -8），104.1（C -10），102.5（C -3），98.2（C -6），
NMR（500 MHz，CD3OD）δ：7.05（2H，d，J =8．6 Hz， H-3'，5'），6.66 （2H，d，J=8．55 Hz，H-2'，6'），3.33
920 g。取浸膏 460 g，溶解于 900 mL 水中，依次用 （1H，s，OH -2），2．93 （1H，d，J =13．75 Hz，H -5），
理化性质不同的 10 个化合物。醇提物 a 对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、枯草芽孢杆菌的抑菌
活性较高，水提物 b 对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的抑制作用优于双黄连提取物 d，乙酸乙酯
提取物 c 抑菌活性与双黄连提取物 d 相近。结果表明河北围场金莲花具有抗菌活性。
关键词：金莲花；抗菌活性；有效成分
中图分类号：S85ຫໍສະໝຸດ .74WANG Ming-gang1，2，YU Guo-qing2，ZHANG Xin-guo2，YANG Zhong-duo2，PENG Yi-nan2， ZHANG Chun-sheng2，LIU Ying-juan2
（Key Laboratory for Yak Genetics，Breeding & Reproduction Engineering of Gansu Province，Lanzhou Gansu 730050；College of Life Science and Engineering，Lanzhou University of Technology， Lanzhou Gansu 730050，China）
取干燥金莲花 6.0 kg，加 10 倍量水提取 3 次，
a
6.25
12.50
12.50
6.25
b
6.25
6.25
6.25
6.25
９
c
12.50
25.00
25.00
12.50
d
6.25
50.00
12.50
12.50
调
查
研
由表 1 可以看到，醇提物 a 对金黄色葡萄球 究
将提取液分成 2 份。取 1/4 量合并提取液并浓缩至 菌、绿脓杆菌、枯草芽孢杆菌的抑菌活性较高，水
黄 色 葡 萄 球 菌（Staphyloccocus aureus）、绿 脓 杆 菌
化合物 2：黄色粉末；ESI-MS m/z：611。1H－NMR
（Pseudomonas aeruginosa）、枯草芽孢杆菌（Bacillus （500 MHz，DMSO -d6）δ：13.15（1H，s，5 -OH），7.52 subtilis），由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究 （1H，dd，J=8．3，2.3 Hz，H-6'），7.47（1H，d，J=2．3 Hz，
所提供。
H-2'），6.87 （1H，d，J=8．6 Hz，H-5'），6.62（1H，s，
2.2.2 测定方法与结果 采用琼脂平板稀释法测 H -3），6.21（1H，s，H -6），4.79（1H，d，J =9．75 Hz，
Ｊ ＴＣＶＭ
2013 年 第 5 期
H-1'），4.04（1H，t，J=9．18 Hz，H-2''），3.91（1H， 7），161.2（C-4'），160.5（C-5），156.1（C-9），129.1
海拔 1 000-2 000 m 的山地草坡或疏林地带。金
查
作者简介：李世相（１９６３－），男，高级工程师，主要从事新药研究与教学。 莲花在中药、蒙药中均有很高的医用价值。现代药
研
通讯作者：赵凤舞，主要从事生物学研究，Ｅ－ｍａｉｌ：５２９１６６２６６＠．ｃｏｍ
理研究表明，其水煎液对多种细菌有显著的抑制
文献标志码：Ａ 文章编号：１０００－６３５４（２０１３）０５－０００８－０５
金莲花为毛蓑科植物长瓣金莲花的干燥花， 有旱金莲、金梅草、旱地莲、金芙蓉等之称，主要分 ８
布于我国河北、山西、黑龙江、内蒙古等省区，生于
收稿日期：２０１３－０７－２０
调
基金项目“：十二五”农村领域国家科技计划（２０１１ＡＡ１０Ａ２１４）
荷叶碱的浓度及其在大鼠体内药代动力学研
Beagle 犬血浆中荷叶碱的浓度 及 药 动 学 研 究
究[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（12）:156-
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Determination of plasma concentration of N-methyl asimilobine，an acetyl cholinesterase inhibitor，by HPLC in rat
究
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! [6] 杨中铎，张 旭.一种荷叶提取物及其单体成 [9] 亓 亮，张 婧，张志琪.以离子液体作流动相
分和用途[P]. CN，200910117596，2010-05-26.
添加剂的高效液相色谱法测定复方苦参注射液
Key words：HPLC；N-methyl asimilobine；plasma concentration
Ｊ ＴＣＶＭ
2013 年 第 5 期
作用，临床对急慢性扁桃体炎、咽炎及上呼吸道感 定化合 物 抑 菌 活 性 ，以 双 黄 连 提 取 物 d（郑 州 鼎
染等疗效显著[1-3]。笔者等以大肠杆菌、金黄色葡 驰科技有限公司生产）原药作阳性对照。将已配
3．47（1H，m，H-4'''），3.43（1H，t，J=9．15 Hz，H-4''）， 81.9（C -5''），78.7（C -1''），73.5（C -2''），70.9（C －