薄层色谱的应用

薄层色谱法的原理
利用混合物中各组份的物理化学性质的差别，在层析过程 中，在不相溶的两个相中分布的不同，达到分离目的。这 两个相，一个是涂布在薄层板上的吸附剂，叫固定相，另 一个是在展开过程中流过固定相的展开剂（有机溶剂）， 叫流动相。 将待分离的样品溶液点在薄层板的一端，在密闭的容器中 用适宜的溶剂（展开剂）展开，由于吸附剂对混合物中不 同物质的吸附力大小不同，对极性大的物质吸附力强，对 极性小的物质吸附力弱。因此当溶剂流过时，不同物质在 吸附剂和溶剂之间发生连续不断地吸附、解吸附、再吸附、 再解吸附。宜被吸附的物质（极性大、被附力作用强的物 质）相对移动较慢，在薄层板上移动的距离就小；反之， 较难被吸附的物质（极性小、被附力作用弱的物质）相对 移动较快一些，在薄层板上移动的距离则大。经过一段时 间的展开，混合物中各组份在薄层板上连续不断地进行吸 附和解吸附过程，从而使各组份移动的速度产生差异，不 同物质就被彼此被分开，最后形成互相分离的斑点。
薄层色谱的应用及常见问题
薄层色谱法的定义
• 薄层色谱法（TLC）系将供试品溶液点于薄
层板上，在展开容器内用展开剂展开，使 供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜 的对照物按同法所得的色谱对比，并可用 薄层扫描仪进行扫描，用于，鉴别、检查 或含量测定。
薄层色谱法的发展和特点
• 薄层色谱法的发展：从经典的柱色谱及纸
• 供试品的溶剂在原点的残留会改变展开的选择性，
因此点样时同步干燥或继后干燥以除去残留的溶 剂是需要的。
• 点样时注意不要损伤薄层板表面。薄层表面的机
械损伤对色谱质量优较大影响。
薄层色谱法的基本操作过程
展开
• 展开剂的制备：按比例配制，现配现用。
• 先将展开剂放在层析缸中，盖上缸盖，让缸内溶剂蒸
气饱和5～10min。（薄层色谱与柱色谱区别之一就是 溶剂的蒸气相在展开缸中参与色谱展开行成三维的层 析过程。）再将点好试样的薄层板样点一端朝下放入 缸内，浸入深度距底边0.5－1.0cm，距原点5mm为 宜，切勿使样点浸入溶剂中，盖好缸盖，展开剂因毛 细管效应而沿薄层上升，样品中组分随展开剂在薄层 中以不同的速度自下而上移动而导致分离。展距以7 －15cm为宜，展距过大，斑点扩散，精确度差，展 距过小，分离效果差。取出薄层板，放平，标明溶剂 前沿位置，晾干。
薄层色谱分析的实验器材
2. 干燥板架：用于放置铺好的薄层板 3. 干燥箱：温度易于调控，用于活化薄层板。 4.干燥器：用于放置活化后的薄层板。 5.点样器：最常用、最方便的为微升毛细 管，规格有0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、 10μl等。也有选用色谱用微量注射器（平 头）、半自动或自动点样器材。 点样模式：点状、条状
色谱基础上发展起来的一种色谱技术。
• 薄层色谱法的特点：具有设备简单、操作
方便、分离快速、直观等特点。尤其对中 药分析，既可对已知有效成分的品种定性、 定量，又可对成分复杂的品种进行特征性 成分分析或进而作指纹图谱分析。
• 薄层色谱法的特点：薄层色谱是一种
“敞开系统”的色谱技术，与柱色谱 的区别之一是除材料及容器外，外界 环境条件对被分离物质的层析行为影 响很大，分离机制也很复杂；其次由 于分析的全过程是横向的离线多步骤 操作，所以操作技巧明显影响色谱质 量，注意控制影响色谱质量的因素是 非常重要的。
位置上，显相同颜色的斑点。
温湿度的影响
• 相对湿度：由于硅胶表面吸附水分的作用
是可逆的，在日常实验中薄层板的活性取 决于实验室的相对湿度，在其他条件相同 的情况下，相对湿度对色谱质量的影响是 很明显的。
• 温度：在相同湿度的条件下，一般在较高
温度展开时，Rf值高，在较低温度展开时， Rf值低。因温度不同，展开剂中各有机溶剂 因沸点、蒸气压、蒸发数目、相对密度等 不同蒸发程度各异，必然影响欲分离物质 的层析行为。
• 最理想的Rf值为0.4～0.5，良好的分离,Rf值为
0.15～0.75，如果Rf值小于0.15或大于0.75则分离 不好。
• 一种物质在固定的条件下有固定的Rf值，不同物
质在相同的条件下可有不同的Rf值。
• 因此，未知物与已知物（标准物质）在相同条件
下进行展开比较Rf值可提供定性依据。
薄层色谱分析的实验器材
薄层色谱法的基本操作过程
显色
• (1). 蒸气显色法：常用挥发性的酸、碱如盐酸、
硝酸、浓氨、二乙胺等蒸气显色。
• (2). 试剂显色法：常用喷雾法或浸渍法处理，显
色试剂常用硫酸、碘的氯仿溶液、碱性高锰酸钾 溶液、磷钼酸等。 检视
• (1). 有色物质：日光下直接观察或在紫外灯下观
察荧光斑点。
• (2). 无色物质：在紫外灯下（指定波长）下观察
常用吸附剂
• 硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254 • 聚酰胺 • 硅藻土 • 氧化铝 • 纤维素 • 表面改性固定相
硅胶：具有表面活性、略带酸性（pH4-5）的多孔 硅胶（Sio2·xH2O），是至今薄层色谱法使用得最 普遍的薄层材料。
聚酰胺：属特殊类型有机薄层材料。具有表面酰胺 基，对酚、羧酸、氨基酸等能形成氢键的物质具 有特别的选择性。常用来鉴别黄酮、酚类化合物。
薄层色谱法的优点
1. 展开时间短，一般十至几十分钟； 2. 分离能力强，斑点集中； 3. 灵敏度高，通常几至几十微克的物质即可被检出； 4.显色方便，可直接喷洒腐蚀性的显色剂，如浓硫
酸等； 5.所用仪器简单，操作方便，可以普及； 6.薄层板价格低廉，一块板可同时检测多个样品； 7.色谱直观性强。
薄层色谱法的应用
谢 谢！
薄层色谱分析的实验器材
6.展开容器（展开缸）：
• 上行法：平底展开室、双槽展开室。以双
槽层析缸为佳，双槽层析缸具有节省溶剂 及方便预饱和等优点。
• 水平展开：水平式展开室
7.显色设备
• 喷雾器：不受试剂腐蚀并能使显色剂呈细
而均匀的雾状喷出。
• 显色剂浸渍槽：显色均匀但易扩散 • 紫外光灯：显色前或后观察
• 鉴别样溶解后，放入安瓿瓶中而不要放在蒸发皿
中。
• 对照品溶液及对照药材溶液的制备：按规定的方
法制备。
薄层板制备或准备：
• 取自制或市售薄层板置110℃活化0.5小时，置干
燥器内备用，1周内可使用，超出1周，用前需再 次活化，不主张反复活化，长期使用。（“活化” 就是在高温除去水分）
• 聚酰胺薄膜不需要活化
薄层色谱法的基本操作过程
点样
• 点样量不能过大，原点直径不宜过大。圆点状直
径一般不大于3mm；条带状宽度一般为5-10mm、 高效板条带宽度一般为4-8mm。点样基线距底边 为10-15mm，高效板为8-10mm，距两边不少于 1.0cm，两个样点距离可视斑点扩散以不影响检 出为宜，一般为1.5-2.0cm，点样基线与薄层板地 边平行。
薄层色谱分析的实验器材
8.记录设备
• 示意图 • 普通相机或专业设备拍摄 • 薄层扫描仪（定量）
9.试剂
• (1). 样品处理用一般为分析纯，按样品稀释
要求处理。
• (2). 配制展开系统用分析纯，不能与被分离
物发生化学反应。
薄层色谱法的基本操作过程
薄层色谱法的基本操作过程
供试品溶液的制备：按规定的方法制备。
薄层板的制备：铺板，一般取一份吸附剂 加三份水，研磨调成糊状，调制时慢慢搅 拌，勿使产生气 泡。涂布厚度一般为0.30.5nm，室温下晾干。
薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果， 薄层应尽量铺得均匀，厚度在0.25～ 0.5mm之间。
硅胶和氧化铝的粘性差，使用前必须加粘 合剂。市售的硅胶G 和氧化铝G 均已含有 粘合剂半水石膏，可直接加入水调匀后铺 层。
• 以特征成分鉴别药材或处方中的药味 • 鉴别药材真伪 • 区别不同药用部位 • 毒性成分的检查 • 检查是否掺有伪品、色素等。 • 同时鉴别多个药材的多种成分 • 生物活性成分检测
比移值（Rf值）
• 在固定的条件下（吸附剂、温度、展开剂等），Leabharlann Baidu
不同化合物如甲和乙在薄层上以不同的速度移动， 当停止展开后，各组分的色斑在薄层上的位置可 用尺来测量，以比移值（Rf值）表示。
1.薄层板
• 市售薄层板 • 自制薄层板
(1). 玻璃板：10×10cm、10×20cm、5×20cm、 20×20cm等。表面及四边要求光滑、平整（四角 均为直角）、薄厚均匀、质地均匀。洗净后不应 附水珠，于无尘处晾干，不应有斑痕，备用。必 要时用前用酒精棉球擦净晾干。
(2). 铺板器：能使吸附剂在载体(玻璃板)上铺成一 层厚度符合要求的平整、均匀的薄层。分自动铺 板器和手动铺板器两种。手动铺板器包括铺板架 和涂布器，涂布器用金属或有机玻璃均可，规格 有0.2-1.0mm不等。
化合物本身不同颜色的暗斑或荧光斑点，或显色 后按有色物质进行检视.
薄层色谱法的记录内容
• 实验时间、实验人员 • 温、湿度 • 供试品、对照物质制备过程 • 薄层板（自制或市售、类别） • 点样量 • 展开剂 • 显色剂、检视方法 • 图谱记录（最好拍摄照片） • 结果判定：供试品色谱中在与对照品色谱相应的