细菌的简单染色法和革兰氏染色法 1

细菌的简单染色法和革兰氏染色法

陈慧霞食品13102班201313040201

一引言

1.学习并掌握细菌简单染色法的原理和方法。

2. 掌握革兰氏染色法的原理和操作技术，进一步巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。

二实验原理

1.简单染色法

用单一染料进行细菌染色，操作简便，适于菌体一般形状和细菌排列的观察。

一般情况下，细菌细胞通常带负电荷，易于和带正电荷的碱性染料结合而被染色。因此，常用碱性染料进行简单染色。

常见的碱性染料有亚甲蓝、甲基紫、结晶紫、碱性复红、中性红、孔雀绿和番红等。

2.革兰氏染色法

革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。革兰氏染色的原理主要是因为两类细菌的细胞壁成分和结构不同。革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，

脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫－碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了番红的颜色，因此呈现红色。而革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是肽聚糖的含量多且交联度大，类脂质含量少，当用乙醇处理时，肽聚糖层的孔径变小，通透性降低，使

结晶紫－碘复合物被保留在细胞内而不易着色，因此，细胞仍保留初染时的颜色即呈现紫色。

细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液媒染（以增加染料与细胞的亲和力）后，用乙醇脱色，再用番红染色。不被脱色而保持原颜色者为革兰氏阳性菌（G+）；被脱色后又被染上复染剂的颜色者为革兰氏阴性菌（G-）。

三实验材料

1简单染色法

菌种：枯草芽孢杆菌

试剂与器材：复红，接种环，酒精灯，打火机，载玻片，吸水纸。2革兰氏染色法

菌种：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌

染液：结晶紫染液，碘液，95%乙醇，番红染液，香柏。

器材和试剂：洗净的载玻片，显微镜，酒精灯，接种环，擦镜纸，吸水纸，镊子，玻璃废液缸，蒸馏水等。

四实验步骤

1.无菌操作：

1.关闭窗户和风扇

2.用酒精棉双手表面消毒

3.接种环取菌前后焚烧灭菌

4.棉塞靠近火焰不离手

5.实验在酒精灯附近进行

6.少说话

2.简单染色法：

●准备玻片：取清洁干净的载玻片。

●涂片：滴一小滴无菌水于玻片中央，用接种环取枯草芽孢杆菌少

许，与玻片上无菌水混匀，并涂成适当大小的薄层涂片。

●干燥：将涂片在酒精灯火焰上方小心的轻微挥动使其干燥。

●固定：将干燥涂片（涂菌面向上）以适当的温度的从酒精灯火焰

上通过2至3次。

●染色：滴1至2滴复红于涂片部位，染色1至3min。

●水洗：用洗瓶从玻片上端轻轻冲洗，直到下端流出的水无色，水

流不宜太大。

●干燥：用吸水纸吸干玻片上的水

●镜检：用显微镜观察玻片。

2革兰氏染色法：革兰氏染色

◆制片：取两块载玻片，在第一块玻片两个地方各滴一滴无菌水，

用接种环分别取大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混在其中，再拿第二块玻片，用接种环取玻片1两处液体制作一个混合菌的玻片。

◆干燥：将载玻片放在酒精灯火焰上方小心地轻微挥动使其干燥

◆固定：将干燥涂片不快不慢地从酒精灯火焰上方通过2—3次。

◆染色：1 初染：在混合菌的玻片上滴加结晶紫，染色1min;

● 2 媒染：用碘液媒染1min;

● 3 脱色：用95%乙醇脱色18s—20s;

● 4 复染：滴加番红复染2min—5min。

◆水洗：用洗瓶从玻片上端轻轻冲洗，直到下端流出的水无色。

◆干燥：用吸水纸轻轻的将玻片上的水吸干。

◆镜检：用显微镜观察玻片。

五结果与分析

1)枯草芽孢杆菌的形态是杆状的，经简单染色菌体变成红色

2)大肠杆菌的形态是杆状的，经革兰氏染色菌体颜色变成红色，

说明大肠杆菌是革兰氏阴性（G﹣）细菌。金黄色葡萄球菌的形态是球状的，经革兰氏染色菌体颜色变成蓝色，说明金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性（G﹢）细菌。

革兰氏染色

简单染色

六作业与思考

1细菌染色法的原理是什么？

答：一般情况下，细菌细胞通常带负电荷，易于和带正电荷的碱性染料结合而被染色。

2染色前细菌涂片为什么要用火焰固定？

答：杀死了细菌,失细胞膜失去选择透过性,利于染液进入细胞中进行染色。

七．讨论与结论

1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰

氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革

兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短受

涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。

2.涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性