细胞培养板的选择和使用
细胞培养板规格 -回复
细胞培养板规格-回复细胞培养板是细胞生物学研究中常用的实验工具之一。
它是一个由塑料或玻璃制成的浅平底容器，上面有一系列的小凹槽，用于放置细胞培养基和待培养的细胞。
细胞培养板广泛应用于细胞培养、细胞繁殖和药物筛选等实验中。
那么，细胞培养板的规格是怎样的呢？1. 次数尺寸细胞培养板的尺寸种类繁多，最常见的有6孔、12孔、24孔、48孔和96孔等。
其中，6孔细胞培养板每孔体积约为10ml，而96孔细胞培养板体积则比较小，每孔的体积约为0.2ml。
不同尺寸的细胞培养板可以根据实验需求来选择使用。
2. 材质细胞培养板主要分为塑料和玻璃两种材质。
塑料细胞培养板通常由聚苯乙烯（PS）或聚乙烯（PE）制成，具有良好的透明度、光滑的表面和耐温性。
而玻璃细胞培养板则由玻璃材料制成，具有更高的抗腐蚀性和热稳定性。
选择何种材质的细胞培养板主要取决于实验要求和个人偏好。
3. 表面处理细胞培养板的表面处理对细胞的附着和生长有很大影响。
常见的表面处理方式有无处理（即常规无涂层板）、均一涂层（如胶原蛋白、明胶或凝血素等）、多元化涂层（如胶原-明胶、胶原-明胶-纤维蛋白等）和纯度化涂层（如多聚赖氨酸等）。
选择何种表面处理方式的细胞培养板应该根据具体的实验要求和细胞类型来决定。
4. 防污染设计细胞培养板的设计还考虑了防污染的问题。
一种常见的设计是每个培养孔都有一个独立的蓋子（或称盖片），能够有效防止培养物之间的交叉污染。
此外，也有一些细胞培养板具有“无菌”的特点，即在生产过程中已经进行了严格的无菌操作，可以直接开封使用。
5. 设备兼容性与细胞培养板一起使用的其他设备的兼容性也是需要考虑的因素。
比如，培养板的尺寸需与显微镜的镜头相吻合，以便进行观察和记录。
此外，还需要考虑在离心机、孵化箱和高通风悬挂培养箱等设备配件的规格方面的匹配。
总之，细胞培养板规格多样，根据实验需求和细胞类型的不同，选择合适的尺寸、材质、表面处理和防污染设计的细胞培养板十分重要。
细胞爬片固定及免疫荧光的操作步骤
细胞爬片固定及免疫荧光的操作步骤细胞爬片：1.埋板准备：准备含有合适培养基的细胞培养板或培养皿。
将培养基预热至适宜的温度。
2.细胞处理：将需要爬片的细胞株从库存中取出，用PBS（磷酸盐缓冲液）或无酶胰蛋白酶溶解细胞外基质粘附，用培养基洗涤细胞。
3.细胞计数：用血细胞计数板或细胞计数仪计数细胞浓度，然后根据需要调整到合适的细胞密度。
4.接种细胞：将适量的细胞接种到埋板中，根据实验要求可以采用单细胞克隆或稀释传代法。
5.培养细胞：将埋板放入细胞培养箱的适当环境中，通常为37°C、5%CO2的培养箱。
根据实验需要，培养时间可以从几小时到几天不等。
固定：1.筛选固定剂：选择适合的固定剂，常用的固定剂包括乙醛和甲醛等。
2.固定细胞：使用适当的浓度的固定剂，将培养的细胞浸泡在固定剂中，通常需要15-30分钟的固定时间。
3.洗涤细胞：使用PBS等缓冲溶液洗涤固定的细胞，去除多余的固定剂。
免疫荧光：1.孔板准备：将需要进行免疫荧光染色的细胞或组织培养在培养皿或孔板中。
2.阻断非特异性结合：用0.1-5%BSA或牛血清等蛋白质溶液阻断非特异性结合位点，减少假阳性信号。
3.一抗染色：加入适当浓度的一抗（具体浓度由厂家确定）到需要染色的细胞上，对于细胞表面的抗原，可以直接在细胞外孔板中加入一抗。
4.清洗：用PBS或相应的缓冲液洗涤一抗残余的溶液。
5.二抗染色：加入与一抗同种小鼠或兔子抗体的特异性抗体（如荧光素、奥林染色试剂等）到孔板中，适当的浓度需根据实验所需，与一抗使用的缓冲液一致。
6.清洗：用PBS或相应的缓冲液洗涤二抗残余的溶液。
7.成图：用荧光显微镜观察样品，利用相应的激发波长和荧光滤镜观察和拍摄免疫染色的图像。
细胞爬片、固定和免疫荧光技术的步骤可以根据具体实验的要求进行调整和优化。
这些操作步骤在细胞和分子生物学研究中非常重要，可以用于检测和观察各种细胞结构和分子的表达和分布。
整个过程需要细心和耐心，并且需要严格控制各个步骤的条件以确保实验结果的准确性和可重复性。
各种孔板细胞接种量
各种孔板细胞接种量总结下各种孔板细胞接种量仅供参考细胞培养瓶（板）接种量生长面积容量细胞数（大约）96孔板4~5×10 4 35mm培养皿1×10 648 孔板 1.3×10 5 60mm培养皿 2.6×10 624孔板 2.5×10 5 100mm培养皿7×10 612孔板5×10 5 150mm培养皿 1.8×10 76孔板 1.2×10 6细胞瓶面积容量工作体积细胞数目612.5cm2 25ml 2ml 5×10 525cm2 50ml 5ml 1×10 635cm2 75ml 10ml 2×10 675 cm2 250ml 15ml 4×10 68150cm2 700ml 40ml 1.1×107补充：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2~3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量（参考下表）。
若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。
具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。
注：各种单层生长的细胞在培养皿中长满的细胞数，主要取决于器皿底表面积和细胞体积的大小。
上表以Hela细胞为例给出的可获细胞量仅作参考。
教你如何用WORD文档(2012-06-27 192246)转载▼标签：杂谈1. 问：WORD 里边怎样设置每页不同的页眉？如何使不同的章节显示的页眉不同？答：分节，每节可以设置不同的页眉。
文件――页面设置――版式――页眉和页脚――首页不同。
2. 问：请问word 中怎样让每一章用不同的页眉？怎么我现在只能用一个页眉，一改就全部改了？答：在插入分隔符里，选插入分节符，可以选连续的那个，然后下一页改页眉前，按一下“同前”钮，再做的改动就不影响前面的了。
简言之，分节符使得它们独立了。
这个工具栏上的“同前”按钮就显示在工具栏上，不过是图标的形式，把光标移到上面就显示出”同前“两个字来。
谈谈在选择、配制和使用培养基时应注意哪些方面的内容。你们在试验中是如何做的有何体会？
试结合微生物学实验课的内容，谈谈在选择、配制和使用培养基时应注意哪些方面的内容。
你们在试验中是如何做的?有何体会？答：一、选择、配制和使用培养基时应注意以下几个方面的内容。
①明确目的，明确微生物的营养类型。
了解我们是用来培养什么样的微生物，是为了得到菌体还是得到发酵产物。
总体，所有微生物生长繁殖都需要培养基含有碳源，氮源，无机盐，生长因子和水。
就微生物的营养类型而言，有自养型（化能自养与光能自养）和异养型（化能异养与光能异养）。
这样才能更好的培养细胞。
②营养协调，营养物质浓度与配比要合适，有时候还要加入抗生素或者微量元素，或者血清。
③条件适宜：微生物的生长除了取决于营养因素，还受pH值、渗透压、氧气和氧化还原电位等理化因素。
④经济节约任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理，主要的灭菌方法：整体常规高压蒸汽灭菌，相关成分分开灭菌，有些成分或整个培养基过滤灭菌，分开灭菌的成分在临用前混合。
在使用过程中必须保持无菌环境。
二、实验中的做法上网查找需要培养的细菌的特点选择合适的培养基，按照相应配方准确称量所需物质。
需要制备固体培养基记得加入琼脂粉。
同时注意适宜该菌生长的pH值，用pH缓冲液对培养基pH进行调试，定容至所需体积。
加塞包扎好后加入高压灭菌锅灭菌。
灭完菌后放入无菌操作台。
在使用培养基或者是倒平板的过程中，时刻保持无菌的环境，不要碰触到三角瓶颈部，不要碰到棉塞内部。
培养基如果是使用完之后多余的不用处理时记得不能倒在水池里，要倒在垃圾桶内。
体会：在选择，配制培养基和使用时要小心仔细把握每一个环节，不懂的可以问老师或者自己上网百度，尽量照顾到所培养的细胞的喜好。
同时，全程都需要处于无菌的环境，尽量避免染菌。
培养基：人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。
任何培养基在配置时都应该考虑微生物生长所需要六大营养要素：碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水。
细胞传代、铺板 、冻存、复苏等细胞培养相关操作步骤和注意事项
细胞传代的步骤（贴壁细胞为例）
首先，镜下观察细胞密度，90%以上即可传代培养（为了细胞的稳定，距离上 一次传代至少间隔一天。）。
准备工作：无菌枪头、培养瓶、离心管、废液桶等所需物品，培养基、血清、 PBS、胰酶等试剂类，可根据情况，提前放入生物安全柜，进行紫外灭菌；
细胞传代的步骤（贴壁细胞为例）
培养液量 （ml）
0.1 0.2 0.5 1 2 2 5 10 5 15-30
100%细胞量（105） （约） 1 2.5 5 10 25 20 52 137 50 200
培养板需要加入的细胞量
细胞培养板中加入细胞的数量，需要考虑一下几点： 1. 常规实验的设计：转染siRNA（约30%-50%），转染质粒（约70%-
结合镜下观察，调整浓度。 ❖2. 计数细胞：参考前文中各种规格中100%满时细胞的大概数量，再根据实验的
要求，计算加入的细胞的数量。（使用计数板）
细胞计数板的使用
细胞计数板
0.1ul
干净的盖玻片
细胞计数板的使用
10-20 ul 细胞悬液 注意: 避免有气泡！
数上不数下，数左不数右
计算公式： n/4 x104 （个/ml）
4.其他：轻轻移动他人的细胞，轻轻关闭培养箱的门等
细胞冻存
准备工作：FBS，完全培养基，DMSO，或无血清冻存液，冻存管，冻存盒。 常规的细胞传代步骤，至细胞消化后离心完毕，根据细胞的量以及需要冻存的管
数配制冻存液； 冻存液： 10%DMSO+90%FBS/完全培养基（A），或者无血清冻存液（B）。 冻存程序： A ： 1. 使用冻存盒：可直接放入-80℃冰箱，第二天转移入液氮罐中。
把细胞转移到生物安全柜中，吸去培养基，加入无菌PBS（只要没过即 可），轻轻摇动清洗细胞，尽量弃尽PBS。
细胞培养板规格 -回复
细胞培养板规格-回复细胞培养板规格指的是在细胞培养过程中常用的标准化容器。
细胞培养板是一种用于细胞培养的实验平台，可以提供适当的环境，以支持细胞的生长和繁殖。
细胞培养板具有各种不同的规格和特性，以满足不同类型和需求的细胞培养实验。
本文将逐步介绍细胞培养板的规格，从外观、材料、尺寸、壁底涂层等多个方面进行详细阐述。
一、外观细胞培养板的外观通常呈现为一个平面的矩形形状，上部为一个开放式的通气膜。
通气膜可以使培养物与外界充分接触，有利于气体交换和预防细菌浸润。
另外，在细胞培养过程中，通气膜还可以防止液体外溢，起到盖子的作用。
二、材料细胞培养板通常使用无菌聚苯乙烯或聚丙烯材料制成。
这些材料有良好的耐酸碱性和化学性能，不会对细胞生长和繁殖产生不良影响。
此外，细胞培养板的材料还要耐高温高压灭菌，保证无菌状态。
三、尺寸细胞培养板的尺寸通常有两种常见的规格，即96孔板和24孔板。
96孔板的孔径较小，每孔体积一般为350 μl，适用于大规模高通量实验和快速筛选。
24孔板的孔径较大，每孔体积一般为3-6 ml，适用于大规模培养和细胞扩增。
四、壁底涂层细胞培养板的壁底通常都会涂层有特定的物质，以增强细胞附着和生长的效果。
常见的涂层物质有聚-L-赖氨酸、明胶、凝胶atin等。
这些物质可以提供支持细胞附着和扩增所需的适宜表面和微环境。
五、特殊规格除了常见的96孔板和24孔板，细胞培养板还有一些特殊规格，如6孔板、12孔板、48孔板等。
这些特殊规格的细胞培养板在特定实验需求下使用，例如需要较大容量的培养物或者需要更少的孔数。
六、其他特点细胞培养板还具有一些其他的特点，例如具有通气膜的培养板可以避免气泡的产生，有助于细胞的生长；有编码的底部涂层可以方便实验记录和管理；具有无菌软盖的培养板可以避免污染，保护培养物的纯度。
综上所述，细胞培养板的规格在外观、材料、尺寸、壁底涂层等多个方面有所不同。
选择合适的细胞培养板规格对于细胞培养的成功至关重要，因此，在实验中应根据具体需求选择适合的细胞培养板。
细胞板方法和注意事项
细胞板方法和注意事项
以下是 6 条关于细胞板方法和注意事项的内容：
1. 细胞板的使用呀，就像搭积木一样，得有耐心和技巧呢！比如说在进行细胞培养时，放置细胞板可不能随随便便，得轻轻的、稳稳的，就像呵护小宝宝一样。
你可别用力过猛把它给弄碎了呀！不然一切都前功尽弃啦！
2. 嘿，细胞板方法里面学问可大了去啦！就拿细胞接种来说，那得均匀地把细胞铺在板上，这可不是随便撒撒就行的哦。
你想想看，要是这边一堆那边没有，那不是乱套了嘛！所以一定要仔细认真呀，可别犯糊涂哟！
3. 细胞板的注意事项可不能小瞧呀！好比说保持细胞板的清洁，这就像是给家里做大扫除一样重要。
要是脏兮兮的，细胞能生长好才怪呢！你说对吧？千万不能偷懒不做好清洁这一步呀！
4. 哇塞，细胞板方法如果没掌握好，那可不得了呀！就像做饭时调料放错了，味道全变了。
像细胞培养的条件，温度呀、湿度呀，都得严格把控，不能有一点差错呢，你难道不想把细胞养得健健康康的嘛？
5. 哎呀呀，细胞板的这些注意事项你可得牢记在心呀！比如不要让细胞板受到污染，这就好像保护自己的宝贝不让别人碰到一样。
稍有不慎，整个实验可能就毁了呢！你可别不当回事呀！
6. 细胞板呀，要小心对待它哟！像操作的时候动作得轻柔，不能毛毛躁躁的。
这就跟对待一件珍贵的瓷器一样，稍微粗鲁点就可能损坏啦。
你说是不是得
格外小心呢？总之，一定要重视细胞板的方法和注意事项，这样才能让实验顺顺利利的呀！。
包被细胞培养板的相关问题
包被细胞培养板的相关问题培养板的包被及相关问题：为了适应不同的实验需要，可对培养板用不同的物质进行包被后使用，这其中有促进细胞黏附的，也有用于一些特殊检测需要的。
不同的实验目的可能具体的方案亦不同，根据需要灵活掌握。
(一)多聚赖氨酸包被：问：我要培养原代神经细胞培养，要用多聚赖氨酸铺细胞培养板，请问赖氨酸液怎么配，怎样铺扳子答：配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。
最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。
保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。
注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。
(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。
我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。
一个能最多有效过滤200ml。
铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。
消毒后30分钟进入实验室。
事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。
具体细节就不多说了。
首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。
将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。
取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。
换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。
再将水吸出来。
反复三次。
注意换吸管，要无菌操作的。
最后将铺好的板子放于培养箱待用。
如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。
问：PLL的分子量有3-5万，7-15万，15-30万几种，应怎样选择？？谢谢：）答：我们养神经细胞，用的是分子量3万到7万的pll 。
细胞培养板规格
细胞培养板规格
细胞培养板是用于细胞培养的基本设备，其规格和设计因应用和实验需求而异。
以下是一些常见的细胞培养板规格：
1. 96孔板：这是最常见的细胞培养板规格，通常用于高通量筛选和研究。
每个孔的体积通常为1-2毫升，可以容纳约100,000个细胞。
96孔板的设计使得它可以方便地进行自动化操作，例如使用移液机器人。
2. 24孔板：与96孔板类似，但每个孔的体积更大，通常为3-4毫升，可以容纳约300,000个细胞。
24孔板适用于需要更多培养空间的实验，例如某些类型的药物筛选或毒性研究。
3. 6孔板：每个孔的体积通常为5-10毫升，可以容纳约500,000个细胞。
6孔板适用于需要更多细胞的培养，例如某些类型的药物研究或基因转染。
4. 12孔板：每个孔的体积通常为15-20毫升，可以容纳约1,000,000个细胞。
12孔板适用于需要更多细胞的培养，例如某些类型的组织工程或免疫学研究。
5. 24/48/72/96孔板：这些是具有不同数量的孔的细胞培养板，可以根据实验需求选择不同规格。
这些板通常具有可调节的盖子，以保持培养环境的湿度和气体平衡。
除了以上规格外，还有一些其他规格的细胞培养板，例如66孔板、1536孔板等，这些板适用于特定类型的实验和研究。
在选择细胞培养板规格时，需要考虑实验需求、细胞类型、培养时间、细胞密
度等因素。
细胞培养板分类
细胞培养板分类细胞培养板是生物学实验中常用的一种实验器皿，用于培养和繁殖细胞。
根据不同的需求和实验目的，细胞培养板可以分为多个不同的分类。
本文将介绍几种常见的细胞培养板分类。
1. 基础细胞培养板基础细胞培养板是最常见的细胞培养板类型，用于一般的细胞培养实验。
这种细胞培养板通常由聚苯乙烯或聚丙烯等材料制成，具有良好的透明度和耐受性。
基础细胞培养板通常具有6孔、12孔、24孔等不同孔数的设计，以适应不同实验需求。
2. 组织培养板组织培养板是用于培养组织片段或器官的特殊类型细胞培养板。
与基础细胞培养板相比，组织培养板通常具有更大的孔径，以容纳更大的组织块。
此外，组织培养板还可以具有特殊的涂层或添加剂，以提供更适合组织培养的环境。
3. 低黏附细胞培养板低黏附细胞培养板是用于培养不易附着于基质的细胞类型的细胞培养板。
这种细胞培养板通常具有特殊的涂层，如聚乙烯醇（PVA）或聚乙二醇（PEG），可以减少细胞与培养板表面的黏附。
低黏附细胞培养板可用于培养造血干细胞、神经干细胞等不易附着的细胞类型。
4. 转染细胞培养板转染细胞培养板是用于进行DNA或RNA转染实验的特殊类型细胞培养板。
这种细胞培养板通常具有特殊的涂层，如聚乙烯亚胺（PEI）或聚赖氨酸（PLL），可以增强细胞与质粒DNA或siRNA的结合能力。
转染细胞培养板可用于进行基因转染、RNA干扰等实验。
5. 高通量细胞培养板高通量细胞培养板是用于进行大规模细胞培养和筛选实验的特殊类型细胞培养板。
这种细胞培养板通常具有更多的孔数，如96孔、384孔甚至1536孔，以提供更高的实验通量。
高通量细胞培养板可用于进行高通量筛选、药物筛选等实验。
细胞培养板的分类多样化，满足了不同实验需求的细胞培养要求。
在选择合适的细胞培养板时，需要根据实验目的、细胞类型和实验要求等因素进行综合考虑。
同时，合理使用不同类型的细胞培养板，可以提高细胞培养的效率和实验的可靠性。
细胞侵袭实验-transwel法
实验意义：上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，中间的聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，细胞欲进入下室，先要分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质胶降解，方可通过聚碳酸酯膜。
计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。
一、试剂1、Matrigel 基质胶：用时加入0.5ml的DMEM；Matrivgel在冰上维持液态，室温时可迅速凝结成胶。
使用前应从-80 度取出至4℃待其自然溶化（如过夜放置），避免反复冻融。
使用时需接触Matrivgel的试管、枪头、移液管、Transwell 小室等均应预冷于4℃；注意无菌操作，BD 公司2、RPMI 1640 培养基（含10% 低毒无支原体新生牛血清的pH 为6.5，可培养HCT116），Gibco 公司3、DMEM 高糖培养基（DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基、含10%小牛血清，可培养SW480 细胞），Gibco 公司4、McCOY's 5A培养液（可培养HT29、HCT116），Gibco 公司5、10%胎牛血清FBS，Gibco 公司或者Hyclone美国6、100 U /mL 青霉素，100U /mL链霉素7、甲醇8、0. 1% 结晶紫染液9、PBS磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline）10、0.05%-0.2% BSA牛血清白蛋白11、纤维粘连蛋白FN或者胶原（collagen）12、胰蛋白酶二、器材1、Transwell 小室，孔的大小有8、12两种，一般用8论坛里常用的是Costar、Corning、BD生产的小室，2、细胞培养板，需与小室相配套，常用24孔2、CO2细胞培养箱3、倒置显微镜4、移液枪、枪头5、离心机6、镊子、烧杯三、简略步骤1、Matrigel在4℃过夜融化；稀释分为1：1、1：5、1：8，根据肿瘤细胞的侵袭能力来选择用4℃预冷的无血清培养基稀释Matrigel至终浓度1mg/ml？，冰上操作；所用试剂和仪器-20或者4℃预冷取300ul无血清条件培养基，加入60ul（或50ug/每室）Matrigel ，这里是1：5稀释，混匀，（4℃操作，最好在冰浴上）用无血清培养基稀释Matrigel胶至300 ul/ml（1：8）黄芩素对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、侵袭的影响及机制：Matrigel 稀释10 μg /μL，不同浓度黄芩素处理48 h，SW480 细胞调整浓度为1 ×105 /mL，200 μL 加入上室，下室加入600 μL，先擦细胞，4% 甲醛溶液，结晶紫染色。
包被细胞培养板的相关问题
培养板的包被及相关问题：为了适应不同的实验需要，可对培养板用不同的物质进行包被后使用，这其中有促进细胞黏附的，也有用于一些特殊检测需要的。
不同的实验目的可能具体的方案亦不同，根据需要灵活掌握。
(一)多聚赖氨酸包被：问：我要培养原代神经细胞培养，要用多聚赖氨酸铺细胞培养板，请问赖氨酸液怎么配，怎样铺扳子答：配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。
最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。
保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。
注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。
(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。
我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。
一个能最多有效过滤200ml。
铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。
消毒后30分钟进入实验室。
事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。
具体细节就不多说了。
首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。
将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。
取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。
换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。
再将水吸出来。
反复三次。
注意换吸管，要无菌操作的。
最后将铺好的板子放于培养箱待用。
如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。
问：PLL的分子量有3-5万，7-15万，15-30万几种，应怎样选择？？谢谢：）答：我们养神经细胞，用的是分子量3万到7万的pll 。
以PBS配成1mg/ml的母液，－20度保存。
细胞培养板规格
细胞培养板规格细胞培养板是一种用于细胞培养的常见实验室用具。
它是由多个小孔或小槽组成的平板，可以容纳细胞培养所需的培养基和细胞。
细胞培养板的规格可以根据实际需要进行设计和定制。
一般而言，细胞培养板的规格包括孔数、材料和尺寸等方面的要素。
首先，细胞培养板的孔数可以根据需要进行选择。
常见的细胞培养板有6孔、12孔、24孔、48孔和96孔等不同规格。
不同孔数的细胞培养板适用于不同的实验需求。
孔数较少的细胞培养板适用于细胞培养和扩增，而孔数较多的细胞培养板则适合于高通量筛选等需要处理大量细胞的实验。
其次，细胞培养板的材料也是十分重要的。
常见的细胞培养板材料有塑料和玻璃两种。
塑料细胞培养板通常采用聚苯乙烯（PS）或聚丙烯（PP）等材料制成，具有优良的耐化学药品性能和透明度。
玻璃细胞培养板由玻璃材料制成，具有优良的生物相容性和耐高温性能。
选择细胞培养板的材料要根据实验需要和所培养细胞的特性来决定。
最后，细胞培养板的尺寸也是要考虑的因素之一。
常见的细胞培养板尺寸有60mm×15mm、35mm×10mm和25mm×75mm等。
尺寸较大的细胞培养板适用于细胞扩增和细胞培养的需要，而尺寸较小的细胞培养板则适合于高通量筛选实验等需要进行大规模实验的情况。
细胞培养板在细胞培养和细胞实验中起着重要的作用。
它不仅可以提供一个适宜的环境来维持和培养细胞的生长，还可以方便地进行细胞处理、观察和实验操作。
在细胞培养板中，每个小孔或小槽都是一个独立的细胞培养室。
每个小孔或小槽都有一个底部透明的底板，可以通过显微镜观察细胞的生长情况。
细胞培养板还有一个周围的边缘区域，可以用于添加培养基、药物和试剂等。
细胞培养板的使用非常方便。
首先，通过无菌技术处理细胞培养板，以避免细菌、真菌和病毒的污染。
然后，在每个小孔或小槽中加入适当的培养基，并将细胞悬液加入到培养基中。
细胞培养板可以放置在恒温培养箱或细胞培养箱中，在合适的温度和湿度下培养细胞。
包被细胞培养板的相关问题
培养板的包被及相关问题：为了适应不同的实验需要，可对培养板用不同的物质进行包被后使用，这其中有促进细胞黏附的，也有用于一些特殊检测需要的。
不同的实验目的可能具体的方案亦不同，根据需要灵活掌握。
(一)多聚赖氨酸包被：问：我要培养原代神经细胞培养，要用多聚赖氨酸铺细胞培养板，请问赖氨酸液怎么配，怎样铺扳子答：配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来si gma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。
最后加三蒸水达250m l，过滤除菌分装与小瓶中即可。
保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。
注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。
(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。
我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。
一个能最多有效过滤200ml。
铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。
消毒后30分钟进入实验室。
事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。
具体细节就不多说了。
首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。
将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。
取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。
换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。
再将水吸出来。
反复三次。
注意换吸管，要无菌操作的。
最后将铺好的板子放于培养箱待用。
如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。
细胞计数板使用方法
细胞计数板使用方法
细胞计数板是一种常用的实验室工具，用于快速而准确地计算细胞数量。
以下是详细的使用方法：
1. 准备细胞计数板及相关材料：细胞计数板、细胞悬液、显微镜、移液器、吸头、生理盐水或细胞培养基。
2. 从细胞培养物中取出适量悬浮细胞，使用移液器将细胞悬液滴在细胞计数板的数格中。
3. 注意避免气泡，确保细胞悬液充分填满数格。
可以稍微轻轻摇晃细胞计数板，使细胞均匀分布在数格内。
4. 将细胞计数板放在显微镜下，使用10倍或20倍的物镜放大倍数。
调整焦距以清晰地观察数格中的细胞。
5. 在显微镜下，以一个正方形的数格为单元，计数该数格中的细胞数量。
遵循计数板上线计数规则，即计数板的四条边（上下左右）的数格细胞只计算该边上线格的细胞，而中央任意一格线格的细胞都要计数。
6. 将所计数的细胞数除以该数格的体积（通常为0.1或0.2 mm³），得到细胞的浓度。
7. 选取不同的数格进行计数，通常建议计数至少3个数格，以提高数据的准确性。
将多个数格的计数结果求平均，得到最终的细胞浓度。
8. 根据实验需要，可以根据细胞计数得到的浓度调整细胞悬液的体积，以达到所需的细胞数目。
9. 清洗细胞计数板，用生理盐水或细胞培养基反复冲洗数格，确保细胞悬液完全清除。
细胞计数板是一种简单而实用的细胞计数方法，但需要注意的是，在操作过程中要严格遵守无菌和安全操作规范，以确保实验结果的准确性和可靠性。
细胞培养孔板相关知识。
细胞培养孔板相关知识。
细胞培养孔板是一种用于细胞培养的实验器具，具有多个孔洞，每个孔洞都可以进行单独的细胞培养实验。
下面将为您介绍细胞培养孔板的相关知识。
细胞培养孔板的主要特点是其多孔性，每个孔洞都是一个独立的单元，可以分别进行不同的细胞培养实验。
这种设计使得实验过程更加灵活，方便进行各种不同的细胞培养实验，例如药物筛选、细胞毒性测试等。
细胞培养孔板的材质一般选用高品质的塑料或玻璃，具有优良的耐腐蚀性和热稳定性。
其表面经过特殊处理，能够促进细胞的贴附和生长。
此外，孔板的底部通常带有透气性良好的微孔，以保持细胞的氧气供应。
使用细胞培养孔板时，需要先将细胞接种到孔洞中，然后加入适量的培养基和其它必要的试剂。
细胞在适宜的环境下生长，经过一段时间的培养后，可以进行后续的实验操作，例如药物处理、荧光染色等。
细胞培养孔板的应用范围非常广泛，包括生物学、医学、药物研发等多个领域。
例如，在肿瘤学研究中，可以使用细胞培养孔板进行抗癌药物的筛选和测试；在神经学研究中，可以用来模拟神经元的生长和行为。
总之，细胞培养孔板是一种非常有用的实验器具，能够方便地进行各种细胞培养实验，并且具有广泛的应用前景。
随着科技的不断发展，相信未来还会有更多新型的细胞培养孔板问世，为科学研究提供更多的便利和可能性。
不同实验中transwell小室的选择和使用
不同实验中transwell 小室的选择和使用Transwell 小室在细胞实验中很常用，共培养实验、趋化实验、细胞迁移、细胞侵袭以及药物转运实验都会用到，但小室的规格有很多种，不同的实验需要用到的小室规格也不同。
根据transwell 板的不同，transwell 小室可以分为 6 孔板小室、12 孔板小室和24 孔板小室以及和transwell 皿配套的75 mm 直径的小室；根据孔径的不同，从小孔径到大孔径又分为0.4μm 规格、3μm 规格、5μm 规格、8μm 规格，不同实验对小室孔径的要求也不一样。
小于3μm 孔径的小室，细胞不会迁移通过,研究不涉及细胞运动能力,不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，应该选择3μm 以下的孔径.例如共培养实验和caco-2 细胞转运模型实验。
共培养实验:常用0。
4、34μm，将细胞 A 种于上室，细胞 B 种于下室，可以研究细胞B 分泌或代谢产生的物质对细胞 A 的影响.caco—2 细胞转运模型：选用0.44μm 膜，将Caco—2 细胞以约l×10 个/mL，每孔0.5 mL 的密度接种在Transwell 内培养21d 左右,前 1 周隔天换液，1 周后每天换液。
在模型建立的同时对其跨膜电阻值及碱性磷酸酶活性进行监测来判断模型是否达到转运实验要求。
涉及到细胞迁移的实验：要用 5.0、8。
0、12.0μm 的小室,这样上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室，计数进入下室的细胞量可反映细胞的趋化能力、迁移能力和侵袭能力.趋化性实验:细胞 B 对细胞 A 的趋化作用，将细胞 A 种于上室，细胞 B 种于下室，可以研究细胞 B 分泌或代谢产生的物质对细胞 A 的趋化作用；趋化因子对细胞的趋化作用，将细胞种于上室，下室加入某种趋化因子,可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。
细胞迁移实验：常用8。
0、12。
0μm 膜，上室种细胞，下室加入FBS 或某些特定的趋化因子，细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映细胞的迁移能力。
细胞培养耗材应用
细胞培养耗材应用细胞培养是生物学研究中常用的一种实验技术，通过将细胞放置在适宜的培养基中，提供适当的营养物质和环境条件，使细胞能够在体外生长和繁殖。
细胞培养耗材是进行细胞培养实验时所必需的工具和材料，它们的应用范围广泛，包括生物医学研究、药物研发、生物工程等领域。
常见的细胞培养耗材包括培养皿、培养瓶、离心管、移液器、细胞培养板等。
这些耗材通常由聚苯乙烯、聚丙烯等材料制成，具有良好的透明度和耐受性，能够提供良好的细胞附着表面，同时能够耐受细胞培养所需的消毒和清洗过程。
培养皿是进行细胞培养的基本容器，通常由聚苯乙烯制成。
培养皿的底部为平整的生长面，可以提供细胞附着的表面。
培养皿的尺寸有多种规格可选，通常根据实验需求选择合适的尺寸。
培养皿通常需要经过高温高压灭菌处理，以确保实验的无菌性。
培养瓶是用于大规模细胞培养的容器，通常由聚丙烯制成。
培养瓶具有较大的容积和较宽的底部面积，可以提供更多的细胞生长空间。
培养瓶通常配有螺纹盖或滤膜盖，以便通气和预防污染。
培养瓶的选择要根据细胞的生长特性和培养的规模来确定。
离心管是进行细胞离心和样品分装的常用工具，通常由聚丙烯制成。
离心管具有良好的耐受性和密封性，能够承受高速离心的力矩。
离心管通常有不同容量的规格可选，可以满足不同实验需求。
移液器是进行细胞培养液的移液和分配的常用工具，通常由聚乙烯制成。
移液器分为手动移液器和电动移液器两种类型，可以根据实验需要选择不同类型的移液器。
移液器通常配有不同容量的移液头，可以方便地进行微量和大容量的移液操作。
细胞培养板是进行细胞培养的特殊容器，通常由聚苯乙烯制成。
细胞培养板的底部覆盖有一层特殊的涂层，可以提供良好的细胞附着表面。
细胞培养板通常有不同孔数和不同规格可选，可以满足不同实验需求。
细胞培养耗材的选择和应用对于细胞培养实验的成功与否至关重要。
在选择细胞培养耗材时，需要考虑实验的目的、细胞类型、培养规模等因素，并根据实验需求选择合适的耗材。
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细胞培养板的选择和使用（四）点击次数：1678 作者：clearair00 发表于：2008-07-23 10:32转载请注明来自丁香园来源：丁香园（一）培养板的清洗和消毒培养板一般为一次性使用，尤其在接触了有毒、有害等物质后更应该处理后丢弃。
但如果要反复使用则一定要进行正确的清洗和消毒，以保证细胞培养的效果。
问：只有紫外照射可以保证无菌吗?可不可以从清洗方面做点工作?答：看你什么用途了，一般贴壁生长的细胞用重复利用的培养板效果不是很好，因为培养板表层在生产时涂有一层促进细胞贴壁的物质，在清洗后多半会失去。
悬浮或是半悬浮生长的细胞还可以。
我们一般是先泡酸过夜，清洗干净，三蒸水清洗，再用无水酒精浸泡清洗，再在工作台里用无菌水过一遍，在盖上盖子在烘箱里烤干，待烤干后，打开在超净工作台里近紫外（距离紫外灯<２０ｃｍ）照射半个小时以上，效果很好，没有污染过。
其实不管老板有钱没钱，我们做实验室尤其是预实验或是摸条件时，我们一般都能省就省了，留点钱还不如买点好试剂呢：）我们一般是先清洗干净，泡酸过夜，三蒸水清洗，在盖上盖子在烘箱里烤干，待烤干后，有两种选择：1、在超净台里近紫外灯（距离紫外灯<3０ｃｍ）照射半个小时以上，六孔板一般半个小时，24孔板一个小时，96孔板时间更长，效果很好，没有污染过；2、到放射科照Co60，照完了尽快用。
我们这里肿瘤细胞耐性很好，所以重复利用没什么问题，如果原代培养比较娇贵的细胞最好用新板子，也不是很贵。
我们的经验是:清洗后用消毒液浸泡，泡酸过夜，自来水反复冲洗，双蒸水冲洗三遍，无尘环境晾干，用之前紫外灯照射半小时以上，效果很好。
我们现在的穷同仁一直在应用。
永久了也会变黄，因此如果做mtt或比色时是不能用的，在不熟悉细胞培养的时候可以先学学细胞记数，熟练了用新的，不过肿瘤细胞可以在旧板子上长得很好哟，原代的细胞比较难养，塑料的较好。
紫外的穿透能力很弱，板子紫外照射时是否将盖子翻过来一起照射那？还有，细胞瓶紫外效果如何？板子泡酸后和瓶子一样的清洗方法清洗后，60度烤干，然后放在工作台里（打开盖子）用紫外线照射半小时以上，最好一小时或两小时，盖子同时反过来照。
瓶子照射没有效果，要用其他方法同意楼上大家的意见。
96孔和24孔板子在做完了后要先泡清洗计，在用棉花搽洗每个孔，这样有些贴壁细胞才不会有细胞碎片的残留，在做mtt是很重要，要不很不准的。
后面就是冲洗，泡酸，3蒸水洗，紫外照射30－60分钟，不要时间太长，这样板子容易变色！但是如果是做MTT还是建议用新板子！旧板子做，结果不准！泡酸时不要用刚配好的浓酸，因为那样会把培养板表面促进细胞贴附的一层膜腐蚀掉，细胞就无法贴壁了。
用酸泡完后用自来水清洗，再用蒸馏水清洗3－5次，然后泡在75％的酒精里（酒精用纯的无水乙醇），用前在紫外线下照射1h。
基本可保证95％以上无菌，用这些板做做预实验是没问题的。
1.钴60照射适合大量的板同时灭菌，最好攒一箱，再送去灭菌。
2.紫外消毒适合少量的培养皿或培养板，比如培养板，将盖打开，翻过来，连同板一起在紫外下照射2小时即可，事先不用酒精泡。
(二)方法讨论细胞培养板常用来进行不同的处理效应观察，有些检测可能直接就在培养板中进行，这里面有些什么样的经验或小窍门呢？1．细胞培养与MTT问:做MTT时，96孔培养板细胞浓度该是多少？答:我觉得细胞的浓度并不需要那么精确，关键是接种于每孔的细胞数就大致处于同一水平。
比如我做MTT，起初用的细胞浓度为5000/ml，每孔100ul，培养3天观察，发现细胞数太少，各孔OD值反面难于比较。
后来我换用10000/ml，结果就很好。
当然细胞数也不能太多，这其实取决于你细胞的生长速度，生长快的细胞，可接种浓度低点。
这主要是使细胞增殖率不致受处理因素之外的其他因素影响，比如接触抑制，营养竞争。
总之，做MTT时细胞数应较低，目的就是为了排除其他因素的影响，以使每孔细胞生长情况尽可能地反映出处理因素的影响。
细胞接种的浓度和你的实验目的、要求、细胞种类、处理因素的特殊要求都有关系。
没有简单的，每孔接种多少的一个标准。
当然，可以用楼上建议的浓度开始摸索。
同时，注意肿瘤细胞核正常细胞的生长数度也不一样，前者生长快，后者慢，细胞数的量也有讲究。
到底多少合适，得根据你的实验具体要求来摸索。
我做b16转染时，因为脂质体要求细胞融合度为30%-50%，曾经没孔接种过300-500个细胞，效果非常好，问:我做的MTT为什么同一组的两孔差别那么大呢？做了两次都是这样！答:产生差别的原因有多种1.在加细胞时，细胞沉淀下来，导致两孔细胞数不同。
我们通常用磁力转子对细胞缓慢搅拌，时刻保持细胞处于悬浮状态。
2.96孔板在培养箱中，由于湿度不够，而培养箱由于具有一定的温度，使得边缘的孔水分蒸发较快，导致培养基中各种成分浓度变化增大，导致细胞状态不同。
对于这种现象，要保证培养箱中的湿度，减少开关培养箱的次数和时间。
对于生长较快的细胞，例如每12小时到24小时就传代一次的细胞，应该起始浓度低一些，我一般是96孔板每孔加10 4个细胞，培养液每孔加200ul。
有些细胞生长较慢，例如72小时才传代一次，或者是原代细胞，起始浓度应高一些，我一般是96孔板每孔加2X10 4个细胞，培养液每孔加200ul。
问:96孔板培养板能否代替酶标板测吸光度？是可以拆成一条一条的那种好还是不可以拆的好？1.最好是用酶标板，因为96孔板的各孔透光性不一致;2.拆成一条条的方便使用一些。
MTT法计数细胞的相对数，可以对96孔板培养的细胞在用药物刺激后的直接计数；也可以把细胞制备成细胞悬液，加到96孔板中，然后加MTT孵育、计数。
所以，如果是前者，必须用培养板；如果是后者，可以用酶标板。
平底的，酶标板好一些。
问：我的干预因素是乳剂（白色），对结果可能会有影响吧，如何才能减少这些干扰?答：当然可以用，如果你害怕干扰因素对实验产生影响，那么建议你设定一空白调零孔，如100ul的培养基加上10ul的药物，测定的样品吸光度减去空白调零孔即可！测单一时间点的OD值，直接在培养板里就是了。
测不同时间点的，需要在不同的培养板里。
细胞在培养板里侧就是了。
干扰因素可以测前离心一下。
问：看到很多讨论说96孔四周不做数据处理，那么还是要加细胞或培养基吗？如果我把四周设为空白孔（不加细胞）作为阴性对照，可以用来调零或计算抑制率不？答：可用只加培养基组作为正常对照组，来计算细胞生存率=给药组MTT/正常组MTT×100%，余空可不加任何物质。
MTT不同与做ELISA需要设立空白对照、阴性对照和阳性对照，这其中的空白对照一般用PBS，目的是去除板底效应。
实际上，对于96孔板的细胞培养可以采取一个方法来改变出现误差的情况，就是将你的分组打乱，不要让你同一组的细胞集中排在一个区域，尽量打乱，就可以了首先，分析原因，即必须知道在96孔板四周做数据处理会有什么影响。
因为96孔板的密封性比较良好，也就是说培养箱内空气中的O2是透过板四周很小的空隙进入培养板的，细胞代谢产生的CO2也是通过四周空隙从板内排出来的。
在板内外气体交换时，37度条件下，板内的水汽也被大量带出板外。
这样，就会造成96孔四周孔内的体积减少，如果细心一点，就会发现外外周孔内培养基的体积明显小于内部的体积。
因此，如果最外一周有细胞进行培养，则会因培养基成分的浓度偏高而对细胞有影响，同时也会因为体积变化在做加入药物干预实验时，药物浓度偏高而对测定结果有影响。
因此，在具体操作时，可以采用以下对策：知道原因，我们可以跟据实验情况选择PBS或D－Hanks溶液，因为外周加入这种成本低廉的溶液，一方面可以减少内部各孔中细胞培养液中水份的损失，另一方面，可以做为分析染菌等突发事故的原因，进行排查，找到染菌源头。
当然，因为作MTT时，你本身会做空白对照与阳性对照，所以你可以完全不用管本底带来的误差了（建议你采用中间列6个孔为空白对照组，剩下共有9组54个孔，正好可以做三个药，每个药可设高、中、低三个浓度；加细胞时，你采用随机加细胞法，反正60孔细胞你加满就可以放心去培养了！）。
2．细胞培养板与ELISA问：请教各位，做ELISA能否用培养板呢，有什么差别呢？答：应该用ELISA试验专用板子。
细胞培养板是不行的。
ELISA专用板条，是经过处理的，要求每孔的均一性要好；而细胞培养板同样经过处理，但是是为了细胞更好地贴壁生长，使用细胞培养板可能会造成孔与孔之间的显色没有可比性。
所以，细胞培养板可以做要求不严格的定性ELISA实验，而其他情况，应当使用正规ELISA板条。
问：大家的ELisa板有没有重复利用啊，我们这里重复利用，但是没有洗板机，就人工洗一下，然后煮沸，再烘干，不知这样是否合理啊，我感觉还是新板的效果好些，还请高手指教！答：细胞培养板用于定性或要求不是很高还可以，对于定量试剂最好用酶标板，可以提高均一性减少差异，而且强吸附酶标板还可以减少包被抗原或抗体的用量，因此最好用酶标板。
ELisa板一般不能重复利用。
一是对板子均匀性的要求高，重复使用难达到。
二是不划算，一块板子的试剂便宜的要几百元，贵的要几千元，而一块空板贵的也就几十元，便宜的还不到10元，再将样本的价格和耗费的时间加上，而得到不靠的结果，你说应该如何办？洗板机不是清洗重复使用板子的，而是在加样过程中为了提高自动化程度洗板子用的（洗涤是ELIS A实验步骤之一）。
3．细胞培养板与免疫组化问：在塑料的细胞培养板上，进行免疫组化应当怎样合适，有没有这样的技巧？答：完全没有什么特别的，只是在最后封片的时候，有些不同。
还有需要注意的是每一步加液体时应从培养孔的壁上轻轻加上。
使液体慢慢到达孔底，我第一次作时，没注意到这一点，到最后细胞所剩无几，所以虽是细节问题，但很重要。