微生物限度检查操作规程中国药典四部通则样本

—、范围：本标准规定了微生物限度的检查方法和操作要求；适用于检品

需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、控制菌的检查。 二、 引用标准：《中国药典》(

通则1105-1106) 三、 目录1.微生物限度标准

2.设备.仪器及用具

3・消毒液、稀释剂.试液及培养基

4. 检查总则(通则1105:非无菌产品微生物限度检查：微生

物计数法，通则1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法)

5. 微生物计数法检查

6. 控制菌检查法

7. 实验技术

&附件

1. 微生物限度标准

非无菌药用原料及辅料的微生物限度标准

*未做统一规定。

L1成品微生物限度标准

(1).” 一”为不得检出。

(2).目测霉变者以不合格论。

(3).”无”为标准依据或无相应规定。

1.2工艺用水微生物限度标准

1.3内包装材料微生物限度标准

说明：1・”一”为每100 cm2中不得检出。2.目测霉变者以不合格论。3.”无”为标准依据或无相应规定。

2.设施、仪器及用具

2.1、设施：

2丄1・微生物限度检查室及相关设施：微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区域、工作台直及环境应定期进行监测。

2.12其它设备：高压蒸汽灭菌器；细菌培养箱（30〜35©）;霉菌培养箱（25-280 ；电炉（或其它适宜的加热装置）；恒温水浴；电热干燥箱（250~300匕）；电冰箱。生化试剂储存箱。

2.2仪器及器mi

2.2.1.菌落计数器；显微镜（1500X）;电子天平或药物天平（感量O.lg）; pH系列比色计。

222•玻璃器皿：锥形瓶（250〜300ml,内装玻璃珠若干）.研钵（玻璃或陶瓷制,f 10〜12cm）、培养皿（f 9cm）.量筒（100ml）.试管（18x 180mm）及塞、吸管（lml分度0.01, 10ml分度0.1）、载玻片、盖玻片、玻璃消毒缸（带盖）。

2.2.3新购的玻璃器皿的清洁：先用流水冲洗，浸泡于1%〜2%盐酸（工业用）液中约2〜6小时，除去游离碱质，再用流水冲洗。用于化学分析的玻璃仪器，需用重洛酸钾清洁液浸泡数分钟后，再用流水冲洗，最后以纯化水涮洗2〜3次，晾干备用。

2.3用过的玻璃器皿：

231未被病原微生物污染的器皿：可随时洗涤。用清水冲洗（或浸泡），除容量仪器外，

可用毛刷和肥皂粉，内外刷洗，再用清水涮洗干净，晾干备

用。容量仪器宜用清洁液浸泡或涮洗，再用流水冲洗，最后以纯化水涮洗

2~3 次。

232己被病原微生物污染的器皿：需先经过灭菌处理后再按常法洗涤。

试管及培养Ell：先正放或直立于高压蒸汽灭菌器内，经121C灭菌30 分钟。趁热倾出培养物，再以清水或用毛刷及肥皂粉刷洗，最后以流水涮净。

吸管：全部直立浸没于清洁液的长筒形容器中，筒底应衬有棉或橡皮垫，以防管尖损坏。24小时后，逐支用流水重复冲洗洁净，晾干后包扎灭菌备用。

载、盖玻片：应分别浸泡于清洁液12〜24小时后，取出用流水冲洗, 再放入

3%~5%肥皂水或5%碳酸钠液内煮沸10〜15分钟，待自然冷却后, 再用流水冲洗。沥干后置95%乙醇中浸泡，晾干备用。

2,3,3玻璃器皿用前应洗涤干净，无残留抗菌物质。吸管□上端距0.5 cm 处塞入约2cm 的适宜疏松棉花，置吸管桶内或牛皮纸袋中。锥形瓶、量筒、试管均应加棉塞或硅胶塞，若用振荡器制备混悬液时，尚需用玻璃纸包裹瓶塞（以免振荡时供试液污染瓶塞），再用牛皮纸包扎。玻璃器皿，均于160*0干热灭菌2小时或高压蒸汽121C灭菌30分钟，烘干备用。

2.4用具

2.4.1大、小橡皮乳头（放于干净带盖的容器中，并应定期用70%〜75%乙醇溶液浸泡）O

242无菌衣、帽、□罩、手套（洗净后配套，用牛皮纸包严）灭菌，备用。也可用一次性无菌衣、帽、□罩、手套。

2.4.3接种环（白铉金或镇辂合金，环径4〜5mm、长度6〜10cm）、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、灭菌剪刀或灭菌手术刀和灭菌银子、灭菌称样纸、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔.白瓷盘、洗手盆、陶瓦盖（12 cm）、实验记录纸等。

3消毒液.稀释剂.试液及培养基3」消毒液、稀释剂及试液。

3.1.1 0.1 %苯扎溟披溶液：供洗手、擦拭操作台面用。

3.1.2 5%石碳酸溶液：配制后装入玻璃消毒缸内，供消毒带菌吸管用，抑

或选用其它适宜消毒液。

3.13 75%乙醇溶液：配好后制乙醇棉球，供擦手、擦拭操作工具用。

3.1.

4. 0.9%无菌氯化钠溶液：取氯化钠9.0g,加水使溶解成1000ml, 121C 灭菌20分钟。

3.1.5.司盘・80、单硬脂酸甘油醍、吐温・80:供非水溶性供试品供试液

制备用。

3.16无菌0.1 %氯化三苯四氮0坐溶液（TTC）:取氯化三苯四氮呼O.lg,加水使溶解成10 ml。

3.1.7.甲基红指示液：取甲基红O.lg,加入95%乙醇300ml,水适量，使溶解，再加水至500ml o

3.1.8. V-P试液：①氢氧化钾试液：取氢氧化钾40.0g,加水使溶解成100ml;

②a ■奈酚乙醇试液：取a -奈酚6.0g,加无水乙醇使溶解成100ml o

3.19革兰染色液：①沙黄染液：取沙黄0.25g,加95%的乙醇10ml,使完全溶解后，加水至100ml;②结晶紫染液：取结晶紫l.Og,加95%的乙醇20ml,使溶解，加1%的草酸钱溶液80ml,混匀。静置48小时使用，置密闭棕色瓶中储存；③碘试液：取碘化钾2.0g,加水3〜5ml使溶解，加入碘片l.Og,使全部溶解后，加水稀释至300ml,置密

闭棕色瓶中储存。