生化分析仪常用分析方法—课件

2）计算公式
Cu=（A2-a×A1）×K
a=(Sv+R1v)/(Sv+R1v+R2 v) K=Cs/As
(因加入R2后总体积不同，需要根据体积进行校正，式中a为体积校 正因子，目前全自动生化分析仪均具有自动校正功能，不必手工校 正）
3）临床应用
●两点终点法能有效消除样本溶血（hemolysis)、黄疸（icterus)和 脂浊（lipo-turbid)等造成的光吸收干扰
样品和试剂的识别 样品和试剂的自动吸加、混合及恒温 结果计算及打印 数据处理
二、检测的基本原理
（一）
自动生化分析仪是根据 光电比色原理来测量体 液中某种特定化学成分 的仪器
（二）
原理：分析仪中的单色器将光源 发出的复色光分成单色光，特定 波长的单色光通过装有样品溶液 的比色杯，光电转换器将透射光 转换为电信号后送入信号处理系 统进行分析
①概述 ②分类
一点终点法 两点终点法
①概述
1）终点法（end assay):样本中待测物与试剂发生特定的化学反应生 成系统可检测的产物，当反应达到平衡时产物不再增加，吸光度不 改变，根据平衡点吸光度的大小即能算出被测物浓度。
2）正向终点法：多数化学反应利用产物在某一波长处具有很强的 光吸收，随反应的进行吸光度升高，到终点时 吸光度最大。
2）快速反应干扰物：在样本中含有明显干扰待测物反应的物质时， 固定时间法能有效去除这些干扰，提高特异性。某些干扰物比待测 物更快与试剂发生反应。
3）慢反应干扰物：一些干扰物在待测物反应完全后才开始发生反 应。
②计算公式
C=（A2-A1）×K K为校准系数 K=Cs/As
③临床应用
主要应用于样本中有物 质明显干扰待测物反应 的情况，如苦味酸法测 定肌酐、溴甲酚氯法测 定血清白蛋白等
3）负向终点法：少数被测物本身在某波长处具有光吸收，经化学 反应后随着被测物的消耗吸光度下降。
②分类
分类
一点终点法 两点终点法
一点终点法（one point end assay)
1）定义：在反应达到平衡时选择一个测光点的吸光度计算待测物 浓度，主要用于单试剂的测定。如图
2）计算公式
Cu=Au×Cs/As=Au×K
（三）自动生化分析仪检测项目
常包括肝功能、血糖、血脂、 肾功能、心肌酶谱、骨代谢、 尿蛋白等，例如AST、ALT、 GGT、LDH、TBA、TG、TC、 ALP、GLU、UREA、UA、LDL、 HDL、CK、TP等
三、生化分析仪常用分析方法
常用方法
终点法 固定时间法 连续监测法 比浊法
（一）终点法（end assay)
●常用于临床酶法测定葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯、尿酸、肌酐 等的测定
（二）固定时间法（fixed-time assay)
①概述 ②计算公式 ③临床应用
①概述
1）固定时间法（fixed-time assay):指在时间-吸光度曲线上选择两个 测光点，此两点既非反应初始吸光度，亦非终点吸光度，即样品和 试剂混合后读取延滞期后的吸光度A1和反应一定时间的吸光度A2， 这两点的吸光度差值用于计算结果。如图
样品处理系统
样品架和样品盘 试剂架和试剂盘 加液器：包括定量吸量器和加样针
搅拌器：由电机和搅拌棒组成
检测系统
光路系统：前分光光路、后分光光路 分光装置：滤光片和单色器
比色杯：反应杯 信号检测器：光电信号转换 恒温装置：保持恒温，25℃、30℃、37℃
清洗装置：吸液针、吐液针、擦拭刷
计算机系统
2）正向连续监测法：指Baidu Nhomakorabea应吸光度升高的反应 3）负向连续监测法：指反应吸光度降低的反应
②计算公式
酶活性（U/L）=▲A/min×K 代谢物浓度Cu=▲A/min×K 校准K值=（校准品酶活性U/L)s/（校准品▲A/min)s
③常用分类
1）两点速率法：在酶促反应的过程中，观察两个时间点的吸光度 变化，用两个吸光度的差值▲A除以时间（分钟），得到每分钟的 吸光度，计算酶的活性或浓度。如图
(三）连续监测法（continuous monitoring assay)
①概述 ②计算公式 ③常用分类
两点速率法 多点速率法
①概述
1）连续监测法（continuous monitoring assay）：又称速率法（rate assay),是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时，连续选取时间— 吸光度曲线的线性期内（如图）4个以上测光点测定吸光度，计算 单位时间吸光度变化值 ▲A/min，其大小与被测酶活性成正比。
生化分析仪常用分析方法
一、概述
主要内容
二、检测的基本原理
终点法
三、常用分析方法
固定时间法 连续监测法
比浊法
一、概述
（一）
自动生化分析仪是集电子 学、光学、计算机技术和 各种生物化学分析技术于 一体的临床生物化学检测 的主要工具
（二）自动生化分析仪基本结构
自动生化分析仪主要由样 品处理系统、检测系统和 计算机系统组成
2）多点速率法：在酶促反应的过程中，每隔一定时间（2—30秒） 监测一次，连续监测多次，求出单位时间内吸光度的变化，计算酶 活性或浓度。如图
（四）比浊测定法（turbidimetric assay)
①概述
②分类
化学比浊法 免疫比浊法
①概述
1）比浊法（turbidimetric assay):是通过测定微粒性物质对光的散射 或透射强度来测定物质的浓度，主要用于测定能形成悬浮体的微粒 物质。当光线通过一浑浊溶液时，悬浮的颗粒物质一方面选择性地 吸收一部分光能，另一方面向各个方向散射一部分光能，使透过溶 液的光强度减弱。
K=Cs/As
（K为校准系数）
Cu为待测物浓度
Au为待测物终点吸光度值
Cs为标准液（校准品）浓度 As为标准液终点吸光度值
3）临床应用
临床常用于测定 总蛋白、白蛋白 等的浓度
两点终点法（two point end assay)
1)定义：常应用于具有双试剂的测定项目中，第一试剂（R1）通常 只含缓冲液等成分，它与样本一般不起特异性反应，在第二试剂 （R2）加入前，选择某一点读取吸光度值A1，它是由样品本身或 第一试剂与样品非特异性反应引起，相当于样品空白；加入第二试 剂（R2）后经过一段时间反应达终点（平衡）后选择第二个点读取 吸光度A2，根据两个吸光度差，计算出待测物浓度。如图