总花色苷含量测定
蛇莓果实总花色苷含量测定方法的比较
在总 花色 苷含 量线性 范 围内 ， 别用 ｐ ． 分 Ｈ １ ０的氯 化钾一 酸缓 冲溶 液和 ｐ ４ ５的醋 酸钠一 酸 缓 冲溶 盐 Ｈ ． 醋
液稀 释总 花色 苷洗脱 液成 不 同浓度 的样 品 ， 平衡 ２ ｎ后 ， ０ｍｉ 测定 两种 稀 释样 品在 最 大吸 收 波 长处 的吸 光度
车 菊色 素 、 天竺 葵色 素 、 飞燕 草色 素 、 药 色素 、 牛花色 素 和 锦葵 色 素 ， 芍 牵 由于花 色 苷分 子 上 连 接 的基 团 类 型
和 数量 的差 异 ， 自然 界 中存 在 的花 色苷 种类 呈现 多样 性¨ ． １ ］
蛇 莓是 蔷薇 科 龙吐珠 属 多年 生草 本植 物 ， 我 国 民问常 用作 中药 材使 用 ， 有清 热解 毒 、 在 具 散瘀 消肿 、 治疗 咽 喉肿 痛等 功效 ．经过 我们 前期研 究证 实 ， 蛇莓 成熟 果 实 中含 有 大 量 花色 苷 ， 其组 分 为矢 车 菊 素一一 香 糖 ３芸
９ ６
化
学
研
究
２１ ０ １年
法测 量结果 的差异 ， 为其 他样 品测 定总 花色苷 含量 提供 方法 借鉴 ． 并
１ 实 验 部 分
１ １ 材 料 与 仪 器 ．
蛇莓果 实 ， 西安采 摘 ； 水 乙醇 、 ６ 无 ３ ％盐 酸 、 氯化 钾 、 醋酸 钠 、 酸 、 醋 甲醇 均 为分 析 纯 ； ／ ０ｍＬ ＯＤ ２ｇ １ Ｓ固 相 萃取 柱 ， 博纳艾 杰尔 公 司 ； ３ １ Ｕ一３ ０紫 外 可 见分 光 光 度 计 ， 日本 日立 公 司 ； Ｂ １ Ｈ 计 ， 国 Ｓ ｒ ｒ ｓ公 Ｐ 一０ｐ 德 ａｔ ｉ ｏｕ
收 稿 日期 ： ０ １ ４ ６ ２ １ —０ —１ ．
植物花色苷含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法
植物花色苷含量检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1380规格：50T/24S产品内容：提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体30mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：花色苷是一类可食用的易溶于水等溶剂的天然色素。
花色苷使植物呈现多彩的颜色，本身更具有多种保健作用，因而在天然食用色素、保健品和医药行业都有着广阔的应用前景。
根据花色苷在不同pH下的结构性质测定花色苷含量，在pH为1时花色苷在530nm处有最大吸收峰,而当pH 为4.5时，花色苷转变为无色查尔酮形式在530nm处无吸收峰，通过测定不同pH下的530nm和700nm处的吸光度值计算样本中花色苷的含量。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理：按照样品质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g样品，加入1mL提取液），充分匀浆后转移到EP管中，封口膜封口防止挥发，60℃浸提30min，期间可震荡数次，提取后提取液定容至1mL。
12000rpm，常温离心10min，取上清液待测。
二、测定步骤：（1）可见分光光度计预热30min，蒸馏水调零。
（2）加样表：试剂名称（μL）测定管1测定管2样品100100试剂一900-试剂二-900充分混匀后测定测定管1和测定管2分别在530nm和700nm处的吸光度，测定管1在530nm和700nm处的吸光值记为A1、A1’，测定管2在530nm和700nm处的吸光值记为A2、A2’，计算ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）。
三、花色苷含量计算：1、按样本鲜重计算：花色苷含量（μmol/g鲜重）=[ΔA÷(ε×d)×103×F]×V提取÷W=0.037×ΔA×F÷W。
pH示差法测定不同种类蓝果忍冬总花色苷含量
pH示差法测定不同种类蓝果忍冬总花色苷含量王艺菲;辛秀兰;陈亮;霍俊伟【摘要】蓝果忍冬是一种营养丰富的小浆果，花色苷含量极高，其在我国有丰富的野生资源。
本文从吉林长白山地区，新疆阿尔泰地区分别收集了10株野生株系，利用pH示差法，对其总花色苷含量进行了测定。
测得吉林长白山地区的10株野生蓝靛果忍冬的总花色苷平均值为411.30 mg/100 g；新疆阿尔泰地区的10株野生阿尔泰忍冬的总花色苷平均值为403.28 mg/100 g。
在这20个野生株系中，总花色苷含量最低的为A2：238.24 mg/100 g，最高为C10，达到657.10mg/100 g。
%Lonicera cearulea L. is a nutrient-rich berry, its anthocyanin content is extremely high, and it has rich wildlife resources in China. Twenty high-quality wild varieties were collected from Changbai Mountain , Jilin and Altai area, Xinjiang in this article, and their total anthocyanin contents were determined by pH-differential spectrophotometry. The average of total anthocyanin content of 10 wild Lonicera edulis from the Changbai Mountains area was 411.30 mg/100 g, and the average of total anthocyanin content of 10 wild Lonicera altaica from the Xinjiang Altai area was 403.28 mg/100 g. of 20 wild Lonicera cearulea Linn., the lowest total anthocyanin content was A2:238.24 mg/100 g,the highest was C10:657.10 mg/100 g.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2014(000)007【总页数】4页(P75-77,78)【关键词】蓝果忍冬;总花色苷;野生资源;pH示差法【作者】王艺菲;辛秀兰;陈亮;霍俊伟【作者单位】东北农业大学园艺学院，黑龙江哈尔滨150030;北京电子科技职业学院，北京100029;北京化工大学化工资源有效利用国家重点实验室，北京100029;东北农业大学园艺学院，黑龙江哈尔滨150030【正文语种】中文蓝果忍冬（Lonicera caerulea L.）俗称山茄子、黑瞎子果、羊奶子等，在植物学分类上属于忍冬科（Caprifoliaceae）、忍冬属（Lonicera Linn.），主要分布在北半球的寒带浆果带，北美和北欧各国以及我国东北和新疆。
pH示差法测定黑米发酵饮料中花色苷的含量
大， 花色苷 又 相对很 稳 定的缓 冲溶 液 ｐ ＨＩ 】 。
目前 应 用 ｐ Ｈ 示 差 法 测 定 黑 米 发 酵 饮 料 中 花
色苷 含量 的研 究 尚无 报道 ， 如 果 直接 套 用 其 它 物 质 的检 测方法 ， 对 检 测 结 果 的准 确性 会 有 一 定 的
摘要 ： 为 建 立 和 优 化 适 合 黑 米 发 酵饮 料 中 花 色 苷含 量 测 定 的 方 法 ， 利用 ｐ Ｈ 示差 法测定 黑米发 酵饮料 中花 色 苷 的含 量 。 结 果表 明 ： 测定 波长为 ５ １ ０ ｒ ｉ ｍ， 测定吸光度 时的 ｐ Ｈ为 １ ． ０和 ４ ． ５ ， 平衡 温度 为 ３ ０℃ ， ｐ Ｈ １ ． ０缓 冲溶 液 中 平衡 ７ ０ ａｉ ｒ ｎ ， ｐ Ｈ ４ ． ５缓 冲 溶 液 平 衡 时 间 为 ３ ０ ａｉ ｒ ｎ ， ｐ Ｈ 示 差 法 测 定 出黑 米 发 酵 饮 料 中花 色苷 含 量 为
Ｈｅ ｉ ｌ ｏ ｎ 幽ｉ ａ ｎ ｇ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ
ｐ Ｈ 示 差 法 测定 黑 米 发 酵饮 料 中花 色 苷 的含 量
鲁 明， 付 欣， 迟 吉 捷
（ 辽 宁省农 业科 学 院 食 品与 加 工研 究所 ， 辽 宁 沈阳 １ １ ０ １ ６ １ ）
黑米发 酵 饮料 是 以黑 米 为 主要 原料 ， 接种 乳
ｌ 材 料 与 Βιβλιοθήκη 法 １ ． １ 材 料
酸菌 发酵 制得 的饮 料【 １ ］ 。黑米 的 花 色 苷 主要 集
实验四 葡萄果实中花色苷提取与测定
实验四葡萄果实中花色苷提取与测定一、实验目的1、了解并掌握葡萄果皮中花色苷提取的原理和操作；2、掌握葡萄果皮重花色苷含量的测定方法和步骤。
二、实验原理花色苷是红色葡萄果实中一类非常重要的呈色物质，并且多数情况下主要存在于果皮当中，只有极少数染色品种的果肉中存在花色苷。
花色苷主要有花色素（包括花翠素、花青素、甲基花青素、甲基花翠素及二甲花翠素）经过羟基化后以单体糖苷的形式存在。
三、实验材料红色葡萄果实、吸水纸、研钵、研杵、液氮、分光光度计等四、主要项目和方法1、果皮花色苷提取把每个样本（20粒）的葡萄果皮取下，然后用蒸馏水冲洗果皮，除去果皮粘连的部分果肉与糖分等并用吸水纸吸干，进行称重（M），然后再液氮中将果皮研磨成粉末，准确称取3.0000g粉末放入50ml离心管中，加入30ml酸化甲醇溶液（1mol/L HCl/MOH/水，1/80/19，v/v/v），在100%功率条件下超声辅助提取30min，温度控制在25摄氏度，然后将其只置于低温离心机中离心（8000r/min）15min，收集上清液。
向残渣中继续加入30ml酸化甲醇溶液，在此按照上述步骤进行提取，重复4次，合并所有上清液（120ml）于细口瓶中，-20摄氏度避光保存。
2、花色苷含量测定和计算采用pH示差法，提取液分别用pH值为1.0盐酸-氯化钠缓冲液稀释20倍。
然后分别在510nm与700nm下测定两种稀释液的吸光度。
吸光度A为：A=(A510nm-A700nm)pH1.0 - (A510nm-A700nm)pH4.5花色苷含量用矢车菊素-3葡萄糖苷（R CGE , mg/g）表示，即R CGE=（A × MW × DF × Ve × 1000）/（ε× 1 × M）式中 MW-矢车菊素-3葡萄糖苷相对分子量，取449DF-稀释倍数Ve-提取液总体积M-葡萄皮质量ε–摩尔吸光系数，取29600五、实验结果A=0.9007-0.0087-(0.0813-0.0065)=0.8172nmR CGE=因此该葡萄果实中，花色苷含量为 mg/g。
花色苷测定
3.3.1 花色苷含量的测定
（1）缓冲液的制备：
pH1.0缓冲液：使用电子分析天平准确称量1.86g氯化钾，加蒸馏水约980ml，用盐酸和酸度计调至pH1.0，再用蒸馏水定容至1000ml。
pH4.5缓冲液：使用电子分析天平准确称量32.81g无水醋酸钠，加蒸馏水约980ml，用盐酸和酸度计调至pH4.5，再用蒸馏水定容至1000ml。
（2）花色苷含量的测定：
采用pH示差法[33]：用pH1.0、pH4.5的缓冲液，将样液稀释到适当的倍数,放在暗处，平衡15min。
用光路直径为1cm的比色皿在可见分光光度计的510nm 和700nm处，分别测定吸光度，以蒸馏水做空白对照。
按下式计算花色苷的含量。
A=[ ( A510 - A700 ) pH1.0 - ( A510 - A700) pH4.5]
花色苷浓度C ( mg/L) = A×MW×DF×1000 /(ε×l)
两式中：
( A510 - A700 ) pH1.0—加pH1.0缓冲液的样液在510 nm和700 nm波长下的吸光值之差；
( A510 - A700) pH4.5—加pH4.5缓冲液的样液在510 nm和700 nm波长下的吸光值之差；
MW=449.2（矢车菊—3—葡萄糖苷的分子量，mg/mol）；
DF=样液稀释的倍数；
ε=26900（矢车菊—3—葡萄糖苷的摩尔消光系数，mol-1）；
l=比色皿的光路直径，为1cm。
花色苷的测定
4.1.4 材料处理
4.1.4.1 草莓果实中花色苷的提取
按照Orak（2007）的方法，并略作修改，选取多个具有代表性的草莓果实，在液氮保护下迅速研成粉状，从中准确称取1.00g转入10mL离心管，加入5mL甲醇-HCl（95:5）提取剂，超声30min (功率为100w，温度为30℃)，静置30min，12000g离心10min，倾上清液留存，同上再加入5mL提取液，超声30min，静置，离心，倾上清液留存，最后用提取剂再洗涤残渣2次，离心，最后将提取液合并定容至25mL。
提取液于-20℃冰箱中保存待液相分析用，液相测定前提取液样品经0.45μm微孔滤膜过滤。
4.1.5 HPLC色谱条件
LiChrospher 100RP-18e 色谱柱（250×4.0 mm I.D.，5 μm，Merck），保护柱为RP-18（10 mm×4mm，Merck），紫外检测波长为520 nm，柱温40℃，进样量为20 μl。
根据保留时间（RT）及吸收光谱与标准品对照定性，以峰面积外标法定量。
流动相A：水—甲酸，体积比100:1.5；
流动相B：水—甲醇体积比25:75，然后用甲酸调整pH值到2.35
把流动相按照比例配好，配好之后过流动相滤膜，然后超声20分钟。
洗脱程序：
0min:90%A，10%B；
0min-10min：90%A，10%B；
10-50min：90%A-40%A；10%B-60%B；
50-55min：40%A-10%A；60%B-90%B；
55-60min：10%A-90%A；90%B-10%B
天竺葵素-3-葡萄糖苷标准曲线。
花色苷研究
花色苷的研究状况引言花色苷又称花青素，属酚类化合物中的类黄酮，是构成花瓣、果实等颜色的主要水溶性色素，自然界中已知的花色素有22大类。
食品中重要的花色素有矢车菊色素、天竺葵色素、飞燕草色素、芍药色素、牵牛色素和锦葵色素等6类[1]。
花色苷作为一种天然食用色素，安全、无毒、资源丰富，而且具有一定的营养和药理作用，在食品、化妆品和医药领域有着巨大应用潜力[2]。
花色苷对人体具有许多保健功能如清除体内自由基、抗肿瘤、抗癌、抗炎、抑制脂质过氧化和血小板凝集、预防糖尿病、减肥、保护视力等。
目前花色苷作为一种天然色素，安全、无毒，且对人体具有许多保健功能，已被应用于食品、保健品、化妆品、医药等行业，随着人们崇尚自然消费观念的转变，花色苷必将得到更加广泛的应用。
摘要本文对花色苷的资源分布、结构性质、稳定性研究、提取、定性定量分析方法以及发展前景进行了综述。
1.花色苷的资源分布花色苷广泛存在于被子植物的花、果实、茎、叶、根器官的细胞液中，分布于27 个科，72 个属的植物中。
广泛存在于紫甘薯、葡萄、血橙、红球甘蓝、蓝莓、茄子皮、樱桃、红橙、红莓、草莓、桑葚、山楂皮、紫苏、黑(红)米、牵牛花等植物的组织中。
2.花色苷的结构及性质花色苷的结构如右图所示，不同的R1、R2代表不同的花色苷类型。
食品中重要的6中花色苷如表1。
表1花色苷溶于水和乙醇，不溶于乙醚、氯仿等有机溶剂，花色苷在酸性溶液中存在4种平衡转换如图1：自然界中的游离态花色苷极其少见，通常常与 1 个或多个葡萄糖（glucose）、鼠李糖（rhamnose）、半乳糖（galactose）、木糖（xylose）、阿拉伯糖（arabinose）等通过糖苷键连接形成花色苷，3-单糖苷、3-双糖苷、3，5-二糖苷和3，7-二糖苷是4类最常见的花色素配糖形式，其中矢车菊素-3-葡萄糖苷在自然界中分布最广[3]。
3.花色苷的稳定性研究影响花色苷稳定性的因素有很多，pH值、氧气、温度、花色苷浓度和结构、光、金属离子、酶，以及其他辅助因素等均能使花色苷的颜色产生变化。
果汁、饮料、天然着色剂及其酒中总花色苷含量的测定
37.1.68AOAC Official Method 2005.02Total Monomeric Anthocyanin Pigment Content of Fruit Juices, Beverages, Natural Colorants,and WinespH Differential Method First Action 2005(Applicable to the determination of monomeric anthocyanins in fruit juices, beverages, natural colorants, and wines within the range of 20–3000 mg/L as cyanidin-3-glucoside equivalents.)See Table 2005.02 for the results of the interlaboratory study supporting acceptance of the method.A. PrincipleMonomeric anthocyanin pigments reversibly change color with a change in pH; the colored oxonium form exists at pH 1.0, and the colorless hemiketal form predominates at pH 4.5. The difference in the absorbance of the pigments at 520 nm is proportional to the p i g m e n t c o n c e n t r a t i o n. R e s u l t s a r e e x p r e s s e d o n a cyanidin-3-glucoside basis. Degraded anthocyanins in the polymeric form are resistant to color change regardless of pH and are not included in the measurements because they absorb at pH 4.5as well as pH 1.0.B. Apparatus(a ) pH meter .—Standardized with pH 4.0 and 7.0 standard buffer solutions.(b ) Visible spectrophotometer .—Performance of the spectrophotometer at 520 nm should be verified with reference standards for wavelength accuracy, photometric accuracy,photometric linearity, and stray light.(c ) Glass or disposable cuvets for spectrophotometer .—1 cm pathlength.(d ) Volumetric flasks .—50 mL.C. Reagents(a ) pH 1.0 buffer (potassium chloride, 0.025M).—Weigh 1.86 g KCl into a beaker and add distilled water to ca 980 mL. Measure the pH, and adjust pH to 1.0 (±0.05) with HCl (ca 6.3 mL). Transfer to a 1 L volumetric flask, and dilute to volume with distilled water.(b ) pH 4.5 buffer (sodium acetate, 0.4M).—Weigh 54.43 g CH 3CO 2Na·3H 2O in a beaker, and add distilled water to ca 960 mL.Measure the pH, and adjust pH to 4.5 (±0.05) with HCl (ca 20 mL).Transfer to a 1 L volumetric flask, and dilute to volume with distilled water.D. Preparation of Test SolutionPerform all dilutions in 50 mL volumetric flasks, B (d ). Use volumetric pipets for addition of the test portion. The maximum test portion added should be £10 mL (1 part test portion, 4 parts buffer)so as not to exceed the buffer capacity of the reagents.Determine the appropriate dilution factor by diluting the test portion with pH 1.0 buffer, C (a ), until absorbance at 520 nm is within the linear range of the spectrophotometer. (For most spectrophotometers, the absorbance should be between 0.2 and 1.4AU.) Using this dilution factor, prepare 2 dilutions of the test sample, one with pH 1.0 buffer and the other with pH 4.5 buffer.E. DeterminationDetermine absorbance of test portion diluted with pH 1.0 buffer,C (a ), and pH 4.5 buffer, C (b ), at both 520 and 700 nm. The diluted test portions are read versus a blank cell filled with distilled water.Measure absorbance within 20–50 min of preparation.Note : The reason for measuring the absorbance at 700 nm is to correct for haze. However, if the diluted test portion is excessively turbid, clarify by centrifuging or filtering before measurement. Use a filter (e.g., Millipore TM membrane filter, £1.2 m m pore size,Millipore Corp., Bedford, MA) that will not absorb the anthocyanins.ã 2006 AOAC IN T ER N A T IONALTable 2005.02. Interlaboratory study results for the determination of total monomeric anthocyanin pigment content by the pH differential method MaterialMean, mg/LaNo. of labs, a (b)bs rcRSD r ,%d s ReRSD R ,%d rfRgHorRat Cranberry juice cocktail 13.610 (1)0.57 4.16 1.098.00 1.59 3.050.74Red wine 201.611 (0) 5.29 2.6215.997.9314.81 44.76 1.10Natural colorant 640.811 (0)11.97 1.8736.52 5.7033.52 102.25 0.94Strawberry juice 63.610 (1) 2.43 3.82 6.4410.12 6.8118.03 1.18Raspberry juice 336.711 (0)10.80 3.2117.62 5.2330.24 49.320.79Elderberry juice 3006.8 10 (0)31.78 1.06191.84 6.3888.97 537.15 1.33Standard44.811 (0)0.531.191.202.691.493.370.3a Expressed as cyanidin-3-glucoside equivalents.b a = Number of laboratories retained after removal of outliers; (b) = number of laboratories removed as outliers.c s r = Repeatability standard deviation.d RSD = Relative standard deviation.e s R = Reproducibility standard deviation.f r = Repeatability value.gR = Reproducibility value.F. CalculationsCalculate anthocyanin pigment concentration, expressed as cyanidin-3-glucoside equivalents, as follows:Anthocyanin pigment (cyanidin-3-glucoside equivalents, mg/L) =A MW DF´´´´1013ewhere A = (A520nm – A 700nm)pH 1.0 – (A520nm – A700nm)pH 4.5; MW (molecular weight) = 449.2 g/mol for cyanidin-3-glucoside (cyd-3-glu); DF = dilution factor established in D; l = pathlength in cm; e = 26 900 molar extinction coefficient, in L ´ mol–1´ cm–1, for cyd-3-glu; and 103 = factor for conversion from g to mg.Note: In some cases, the predominant anthyocyanin in a material may be known and different from cyanidin-3-glucoside. It is critical that the wavelength, molecular weight, and absorptivity used be specified if results are not expressed as cyanidin-3 glucoside equivalents. Report results as monomeric anthocyanins, expressed as cyanidin-3-glucoside equivalents in mg/L.G. Limitations and RestrictionsThe presence of ethanol in test samples does not interfere with the assay at the levels typically encountered in wine (10–14%). Although determination of total anthocyanin pigment is useful in assessing the quality of fruit juices and beverages, it is of limited value by itself in authenticity investigations and should be used in conjunction with analyses for individual anthocyanins. FD&C Red No. 40, cochineal, and beet powder did not interfere at concentrations of <10% of total color, but they did lead to a reduction in measured anthocyanin content at higher concentrations.Reference:J. AOAC Int. 88, 1269(2005).ã 2006 AOAC IN T ER N A T IONAL。
不同品种红葡萄酒 CIELab参数及总花苷含量的相关性研究
贺兰山东麓不同品种红葡萄酒CIELab参数及总花苷含量的相关性研究摘要本实验采集宁夏贺兰山东麓产区年份、酒龄以及陈酿方式相同的5种红葡萄酒品种的10个样品，通过光谱扫描分析计算 CIELab 颜色空间参数；通过pH示差法测定分析葡萄酒颜色各参数与总花色苷关系。
结果表明10个葡萄酒样品色调呈紫红色，明度大，彩度较大，颜色较为鲜艳，色相角靠近0度即颜色接近红色，色度分布图比较集中，总色差△E*ab感觉强烈。
总花色苷（ACY）与参数L* 、a*、Cab均具有强相关性，与Hab中度相关，与b*不具有相关性。
其中与L*和Hab负相关，与a*、b*、Cab正相关。
关键词：CIELab参数总花色苷贺兰山葡萄酒Analysis of CIELab Parameters of red wine in the East of Helan Mountains And Anthocyanidinsof Different Red WinesAbstractThe experiment collected 10 samples from five kinds of different wine in the same age and same vintage way. Through the spectrum method to analysis the CIELab color space parameter.Through the ph-differential method to test the total content of anthocyanin.Then analyze the relationship between the parameters of wine and total anthocyanin.The results showed that 10 samples present violet hue,tall lightness, biger saturation and color is more bright-coloured, Hue Angle is close to zero shown that is approximate red color,the chromaticity diagram is concentrate.Key words: CIELab parameters Anthocyanidins Red wine in the East of Helan Mountains目录1 引言 (1)1.1 CIE1976LAB（或L*a*b*）系统 (1)1.2 葡萄酒颜色与其花色素苷 (2)2 材料与方法 (2)2.1 实验材料 (2)2.1.1 葡萄酒样品 (2)2.1.2 仪器与试剂 (2)2.2 试验方法 (3)2.2.1 光谱分析 (3)2.2.2 总花色苷测定 (3)3 试验结果与分析 (4)3.1 CIE颜色参数 (4)3.2 花色苷分析 (8)4 结论与讨论 (9)4.1 结论 (9)4.1.1颜色参数 (9)4.1.2色差 (10)4.1.3总花色苷 (10)4.2 讨论 (10)4.2.1颜色及色差讨论 (10)4.2.2花色苷讨论 (11)参考文献 (12)致谢 (14)1 引言葡萄酒的感官质量包括葡萄酒颜色、香气和口感。
总花色苷含量测定
总花色苷含量测定—分光光度法1、综合国内外资料,主要有以下几种计算吸光值A的方法[1]:(1) 当叶绿素是该样品中主要存在的干扰色素时,需消除叶绿素吸收含量的影响;此时,计算公式为: A = (Amax - A620) - 0.1(A650 - A620)(2) 含有其它干扰物质时花色苷总量的测定:a) 直接法:在新鲜的植物提取物中,因为很少含有在花色苷的最大吸收区发生吸收的干扰物质,花色苷总量可以直接由可见区最大吸收波长处的吸光度来测定。
计算公式为: A = Amax直接法吸收光谱测定:用××分光光度计于250 - 800nm 下全波长扫描,得到花色苷在0.1 % 盐酸—80 % 乙醇中的可见光区最大吸收波长,在此最大波长下测定各样品的吸光值A 。
b) pH 示差法:在加工或储藏过程中,会产生褐色降解物,这些降解物和花色苷具有相同的能量吸收范围。
这类花色苷总量的测定,通常用pH示差法[8] 。
计算公式为: A = (Amax - A700) pH1.0 - (Amax - A700) pH4.5pH 示差法吸收光谱测定:先确定合适的稀释因子,使样品在λma x下的吸光度在分光光度计的线性范围内;然后制备两个样品稀释液,其中一个用氯化钾缓冲液(0.025M,pH1.0) 稀释,另一个用醋酸钠缓冲液(0.4M,pH4.5) 稀释,将稀释液平衡15min 后,用蒸馏水做空白,分别测定两种样品稀释液在λm ax和700nm处的吸光值A。
2、花色苷总含量的测定[2]：通过波长扫描,确定××花色苷在可见区的最大吸收波长为λmax。
利用花色苷的结构特性,当pH为1.0时在λmax处有最大吸收峰,而当pH 为4.5时,花色苷转变为无色查尔酮形式,在λmax处无吸收峰,用示差法计算溶液中总花色苷含量。
花色苷含量鉴定红葡萄酒真伪的研究
花色苷含量鉴定红葡萄酒真伪的研究陈颖秋 马小星 黄永俊 邓泽丽（西南大学，重庆 400715）【摘 要】花色苷是葡萄酒中的一种红色素，主要存在于葡萄皮中，其骨架是苯并吡喃，通常与一分子葡萄糖结合成糖苷形式。
酒龄较低的红酒中，呈色物质主要是花色苷，花色苷类物质的浓度与组成决定了葡萄酒颜色的深度，而颜色对于葡萄酒的感官质量起着重要作用。
对于同一品种的葡萄酒，花色苷的含量在一定范围内有所增减，一般来说花色苷在新酿制的葡萄酒中含量为200～500mg/L。
花色素可与酸性亚硫酸根离子结合成无色络合物的性质，在添加过量的酸性亚硫酸盐之后，酒的颜色会发生变化。
这种变化是和花色苷的含量成正比例发展。
100%葡萄汁酿造的葡萄酒通常在酸性条件下即pH值为4.0左右显红色；用碱滴定后，在pH值5.8～6.4范围内红色褪尽，酒液呈暗绿色或灰黑色；pH值8.9～10显示为黑色或深紫色。
【关键词】红葡萄酒；花色苷；人工色素；褪色；pH值【中图分类号】TS262.6 【文献标识码】A 【文章编号】1008-1151(2011)06-0094-03红酒醇厚醉人，却难以鉴别真伪。
同是一瓶芬芳的红色液体，可能是货真价实的加州红酒,也可能是添加了人工色素的红糖水。
根据国际葡萄和葡萄酒组织（OIV，2006）的规定，葡萄酒是用新鲜的葡萄或葡萄汁经发酵酿成的酒精饮料。
一般来说，市场上的葡萄酒可分为全汁和非全汁两大类，全汁葡萄酒是指用100%葡萄汁酿造而成的酒，以干红和干白为代表，是百分之百的纯葡萄酒。
而非全汁葡萄酒是指用水、酒精、糖精、葡萄香精以及色素、酸、增稠剂、防腐剂等勾兑而成的“葡萄酒”。
我国已经明令废止半汁葡萄酒的行业标准，半汁葡萄酒2007年5月起企业均停止生产；从去年7月1日起市场停止流通。
按照《食品添加剂使用卫生标准》及《葡萄酿酒技术规范》的规定，葡萄酒中不允许添加甜蜜素、糖精钠、某些合成色素、增稠剂等食品添加剂。
但是某些葡萄酒生产厂家为了降低生产成本，获取更多利益，通过添加合成色素、甜蜜素、糖精钠等减少葡萄汁的用量，损害消费者利益。
高效液相色谱法测定蓝莓提取物中花色苷含量的测量不确定度评定
时间 /min 0 35 45 46 60
60.01 75
1.4 建立数学模型
A 相 /% 93 75 35 0 0 93 93
B 相 /% 7 25 65 100 100 7 7
1.4.1 检测程序 称取分析试样，质量用 m 表示；用一定体积 2%
盐酸甲醇溶液超声处理，定容 V1；分取 V2，用 10% 磷酸水溶液稀释定容至 V3；试样液及标准品过膜经 HPLC 分析测定，得到样液中矢车菊素葡萄糖苷含量 c； 计算样品中矢车菊素葡萄糖苷含量 x。
匀分布取 k=
3
，则
uµ (v1）=
0.03 3
=
0.017
mL。
（2）定容温度变化所产生的标准不确定度。实
ห้องสมุดไป่ตู้
验室环境温度为常温（20±5）℃，容量瓶检定温度为
20 ℃，此时水的膨胀系数是 0.001 8 /℃，取均匀分布
k= 3 ，则 uµ(T ) = 0.0018× 25× 5 = 0.130 mL。 3
从均匀分布 k= 3 ，标品称量产生的相对不确定度为：
ur（el ms）=
0.0001 = 7.2 ×10-4 3 × 0.08
（3）标样定容引入的不确定度。标准品定容过
程产生的不确定度来自定容的容量瓶和温度变化，计
算方法同 2.2.2，标品定容至 20 mL，20 mL 容量瓶的 最大允差为 ±0.03 mL，试验温度为（20±5）℃，经 计算得 urel(v2-3)=0.005 27。
关键词：蓝莓；花色苷；矢车菊素 -3-O- 葡萄糖苷；不确定度；高效液相色谱法 Abstract：Blueberries are rich in anthocyanins, which have great potential for applications in medicine, food, cosmetics and other fields. An evaluation model of Uncertainty was established for evaluating the Determination results of Cyanidin-3-O-glucoside in Blueberry Extract by HPLC. The uncertainty of six aspects, including volume, sample solution dilution, standard solution preparation, instrument precision, and sample parallel determination are evaluated. Meanwhile, the contribution of different factors to the uncertainty is discussed. The method model is reasonable, practical, simple, pertinent and easy to understand as a reference for the uncertainty evaluation of the HPLC anthocyanins detection. Keywords：blueberry; anthocyanin; cyanidin-3-O-glucoside; uncertainty; high performance liquid chromatography 中图分类号：O657.7
PH示差法测量花青素含量
PH示差法测定火棘果花青素含量原理：花青素是具有2-苯基苯并吡喃阳离子结构的衍生物，广泛存在于植物中的水溶性天然色素。
花青素在自然状态下常与各种单糖形成糖苷，称为花色苷。
溶液PH不同，花色苷的存在形式也不同。
对于一个给定的PH值，在花色苷的4种结构之间存在着平衡：蓝色的醌式（脱水）碱，红色的花烊正离子，无色的甲醇假碱和查尔酮。
花色苷在PH值很低时，其溶液呈现最强的红色。
随着PH值的增大，花色苷的颜色将褪至无色，最后在高PH值时变成紫色或蓝色。
PH示差法测定花色苷含量的依据是花色苷发色团的结构转换是PH的函数，起干扰作用的褐色降解物的特性不随PH变化。
因此在花青素最大吸收波长下确定两个对花青苷吸光度差别最大但是对花色苷稳定的PH值。
原料与仪器原料：火棘果花青素提取液，乙醇95%（AR），盐酸仪器：PHs-3B型酸度计，紫外分光光度计实验步骤：1，火棘果的定性分析取提取液稀释至一定的体积，用稀氢氧化钠和稀盐酸调节PH，观察提取液在不同PH下的颜色变化。
对提取液进行200~800nm全波长扫描，绘制光谱图2，测定波长的选择取火棘果花青素提取液用5%HCL-EtOH（15:85）溶液稀释至一定体积，进行光谱扫描，确定最大吸收波长。
紫外可见吸收光谱3，PH示差法中PH的选择在选定PH时应考虑以下因素：在此两个PH处测定的花青素的吸收值差异应是最显著的；单一PH的轻微变动，对花青素吸光值的影响是极小的；花青素在所处的两个PH下，应是相当稳定的。
由于花青素只有在酸性介质中是稳定的，因此只测定PH小于7条件下花青素吸光值的变化。
PH为1.0时，花青素以红色的2-苯基苯并吡喃的形式存在PH为4.5时，花青素以无色的甲醇假碱的形式存在。
因此选择PH为1.0和4.5。
4，平衡时间的确定因为花青素在溶液介质中存在4种结构形式，这4种结构形式在某一PH下处于动态平衡，当PH改变时，动态平衡发生转移，总的趋势是PH降低时，平衡向红色的2-苯基苯并吡喃阳离子移动；PH 升高时平衡向蓝色醌式移动。
野生和栽培蓝靛果中花色苷含量的测定及分析
[4 ] 张秀美,刘志,王宏,等‘. 岳阳红’苹果改良主干形光照分 布与产量和品质的关系研究 [J]. 西南农业学报, 2014,27 （1）:248-252.
[5] 冉辛拓. 苹果果实适期采收的标准 [J]. 河北果树, 1998,3: 40-41.
蓝靛果果实花色苷的提取 准确称取匀浆 后的样品 5g于 150mL烧杯中，加入 95%的乙醇:1.5mol/L 的盐酸为 85: 15 (体积比) 的提取剂 100mL，静止 30min后，超声 15min两次，合并抽滤液转移至 250mL 容量瓶，滤渣加入 30~40mL提取剂浸提 3~4 次，过 滤洗涤后用提取剂定容至 250mL[8]。
pH示差法测定总花色苷含量 1.2.3.1 缓冲液的配制。pH1.0 缓冲液：精密称取 1.49g氯化钾，用蒸馏水定容至 100mL，精密量取 1.7mL盐酸，用蒸馏水定容至 100mL；将 0.2mol/L氯 化钾与 0.2mol/L盐酸按体积比 25: 67 的比例混合， 用氯化钾溶液调节pH(1.0±0.1)。pH4.5 缓冲液:精密 称取 1.64g乙酸钠，用蒸馏水定容至 100mL，用盐酸
基金项目:管护区经济技术人才培养项目。项目编号: RC2018001。 作者简介: 齐会娟，长期从事林下资源基础研究与开发工作。
一步发展。
4 参考文献
[1] 魏钦平,李嘉瑞,束怀瑞.苹果品质与生态因子关系的研究 [J].山东农业大学学报,1998,29 (4):532-536.
[2] 王昆,刘凤之,曹玉芬,等.苹果资源鉴定评价描述规范和数 据标准[M].中国农业出版社,2005，11:21-27.
外，其他区试点都表现出原品种果个大、易于着色、 酸甜适口，果面光滑、易于结果的特点，可以在当地 进一步发展。铁岭青河和吉林船营两地需要高接栽 培才能安全越冬，建议在当地慎重发展。
不同品种山葡萄果皮中花色苷种类及含量比较
不同品种山葡萄果皮中花色苷种类及含量比较赵权【摘要】以4个品种山葡萄(Vitis amurensis Rupr.)为试验材料,对比不同品种间果皮花色苷含量的差异.结果表明,总花色苷含量左山一最高,为13.782 mg/g,显著高于其他3个品种,野生山葡萄最低,为9.361mg/g;单糖苷含量左红一最高,为4.945 mg/g,野生山葡萄最低,为1.837 mg/g;双糖苷含量左山一最高,为11.909 mg/g,左红一最低,为6.703 mg/g.左山一、双红、野生山葡萄、左红一双糖苷与单糖苷之比分别为6.35∶1、4.48∶1、4.09∶1、1.35∶1.【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2015(054)013【总页数】3页(P3171-3173)【关键词】山葡萄(Vitis amurensis Rupr.);花色苷;含量比较【作者】赵权【作者单位】吉林农业科技学院,吉林吉林132101【正文语种】中文【中图分类】S663.1山葡萄（Vitis amurensis Rupr.）属葡萄科葡萄属植物，具有多酚含量高、含糖量低的特点，主要用于酿酒［1－3］。
葡萄按起源中心不同，有欧亚种群、美洲种群和东亚种群，中国东北地区的吉林、辽宁已经大面积种植，同时林区野生藏量丰富［4，5］。
花色苷（Anthocyanins）是类黄酮途径的一个产物，葡萄中的花色苷分布于果皮、果肉、葡萄子中，果皮中含量最高［6］。
花色苷是由花色素和糖形成的糖苷，属于C6－C3－C6骨架结构。
在花色素A环3位上结合一个葡萄糖后形成单糖苷，在3位和5位上分别结合一个葡萄糖形成双糖苷［5］。
前人研究表明山葡萄花色素双葡萄糖苷所占比例大于单葡萄糖苷［7-9］。
目前山葡萄花色苷方面的研究主要集中在色素提取、生物合成调控、抗氧化等方面［10－16］，对于品种间总花色苷、单双糖苷及五类花色苷的比较研究鲜见报道，特别是对野生资源丰富的山葡萄花色苷和山－欧杂交种花色苷研究报道很少。
花色苷定性及定量分析方法综述
花色苷定性及定量分析方法综述李子江;张家国;刘亚栋【摘要】The article summarized the recent development of the quantitative and qualitative analysis method of the anthocyanins. The qualitative analysis method contains four methods, including paper chromatography and thin layer chromatography method, uv -vis absorption spectrometry, high performance liquid chromatography and infrared absorption spectrometry method. Its quantitative analysis method consists of 4 methods, including a single pH value method, poor subtraction, pH and differential method and high performance liquid chromatography （HPLC） method, which provides analysis for production and testing of anthocyanins.%综述了花色苷的定性及定量分析方法的最新进展，其定性分析方法有纸层析与薄层层析法、紫外一可见吸收光谱法、高效液相色谱法及红外吸收光谱法4种方法；其定量分析方法有单一pH值法、差减法、pH示差法及高效液相色谱法4种方法，以求给生产和检测花色苷提供分析依据。
【期刊名称】《山东商业职业技术学院学报》【年(卷),期】2011(011)006【总页数】4页(P99-101,104)【关键词】花色苷;定性;定量【作者】李子江;张家国;刘亚栋【作者单位】山东商业职业技术学院,山东济南250103;山东商业职业技术学院,山东济南250103;山东商业职业技术学院,山东济南250103【正文语种】中文【中图分类】O6561 花色苷的定性分析方法1.1 纸层析与薄层层析法要判断花色苷的类别，可以根据花色苷的颜色和其在薄层层析或者纸层析中的的迁移值(Rf)来确定。
红叶石楠红色素中花色苷成分的定性和定量研究
红叶石楠红色素中花色苷成分的定性和定量研究作者：胡旭芳来源：《农学学报》 2013年第12期胡旭芳（新昌制药厂，浙江新昌312500）摘要：对石楠叶中的色素成分进行相关分析，以便为石楠这一林业资源的开发提供一些数据上的支持。
笔者采用大孔吸附树脂分离的方法，从石楠中分离出石楠红色素。
经过简单的化学鉴定和紫外吸收光谱鉴定，可初步判断石楠红色素中主要成分为花色苷类，同时，以2 种方便而常用的花色苷定量方法为依据，计算出试验所提取得到的石楠红色素中，总花色苷含量为13.5%，色价为45.6。
关键词：石楠；树脂；分离；红色素；花色苷中图分类号：TS202.3 文献标志码：A 论文编号：2013-02980 引言红叶石楠(Photinia serrulata)是蔷薇科石楠属杂交种的统称，为常绿小乔木，株高4~6 m，叶革质，长椭圆形至倒卵披针形，春季新叶红艳，夏季转绿，秋、冬、春三季呈现红色，霜重色逾浓，低温色更佳。
素有“红衣卫士”、“绿篱之王”的美誉，分布于长江流域、华北大部、华东、华楠及西楠各省，是园林绿化的重要彩色植物之一。
国内外对其的研究基本集中在栽培管理、病虫害防治等方面[1]。
花色苷则是一种水溶性的红色系天然色素，且具有许多的生理活性功能[2]，很有可能是一种非常理想的植物红色素储备资源。
红叶石楠叶片中也含有丰富的花色苷成分[3]，若能将此资源合理的利用，必将为天然食品着色剂开辟一个新品种。
刘会超等[3]提取得到了红叶石楠花色苷，并对其稳定性的影响进行了研究，但此研究所提取得到的红色素并未进行相应的分离，而仅仅是一种乙醇提取物浸膏。
关注花色苷的研究有很多，如Jin-Ming Konga等[4]主要是对花色苷的理化性质和生物活性进行了详细的叙述；而Gongjian Fan等[5]，主要是研究发酵的紫甘薯中花色苷的组成和颜色稳定性，但在不同的植物资源中，花色苷的种类和组成往往会有很大的不同，因此，对于石楠红色素中的花色苷的组成也应进行相应的分析，所以启动了本研究。
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总花色苷含量测定—分光光度法
1、综合国内外资料,主要有以下几种计算吸光值A 的方法[1]:
(1) 当叶绿素是该样品中主要存在的干扰色素时,需消除叶绿素吸收含量的影响;此时,
计算公式为: A = (Amax - A620) - 0.1(A650 - A620)
(2) 含有其它干扰物质时花色苷总量的测定:
a) 直接法:在新鲜的植物提取物中,因为很少含有在花色苷的最大吸收区发生吸收的干扰物质,花色苷总量可以直接由可见区最大吸收波长处的吸光度来测定。
计算公式为: A = Amax
直接法吸收光谱测定:用××分光光度计于250 - 800nm 下全波长扫描,得到花色苷在0.1 % 盐酸—80 % 乙醇中的可见光区最大吸收波长,在此最大波长下测定各样品的吸光值A 。
b) pH 示差法:在加工或储藏过程中,会产生褐色降解物,这些降解物和花色苷具有相同的能量吸收范围。
这类花色苷总量的测定,通常用pH示差法[8] 。
计算公式为: A = (Amax - A700) pH1.0 - (Amax - A700) pH4.5 pH 示差法吸收光谱测定:先确定合适的稀释因子,使样品在λmax下的吸光度在分光光度计的线性范围内;然后制备两个样品稀释液,其中一个用氯化钾缓冲液(0.025M,pH1.0) 稀释,另一个用醋酸钠缓冲液(0.4M,pH4.5) 稀释,将稀释液平衡15min 后,用蒸馏水做空白,分别测定两种样品稀释液在λmax和700nm处的吸光值A。
2、花色苷总含量的测定[2]：通过波长扫描,确定××花色苷在可见区的最大吸收波长为λmax。
利用花色苷的结构特性,当pH为1.0时在λmax处有最大吸收峰,而当pH 为4.5时,花色苷转变为无色查尔酮形式,在λmax处无吸收峰,用示差法计算溶液中总花色苷含量。
计算公式为: C (mg/ g) = (A0 - A1) ×V ×n ×M / (ε×m )
式中: A0 、A1 —分别为pH1.0、pH4.5时花色苷在λmax处的吸光值
V —提取液总体积(mL )
n —稀释倍数
M —cy-3-glu (矢车菊- 3-葡萄糖苷)的相对分子质量(449.4)
ε—cy-3-glu的消光系数( 29600)
m —样品质量( g)
3、花色苷含量TAcy的计算公式为(以天竺葵色素-3-葡萄糖苷计)[3] :
TAcy (mg/ hg) =(A ×433 ×10 ×V）÷(22 400 ×m)×100
A = (OD500nm - OD700nm) pH1.0 - (OD500nm -OD700nm) pH4.5
式中: V —提取液的总体积(mL)
m —取样量(g)
22 400 —天竺葵色素-3-葡萄糖苷的摩尔消光系数
433 —天竺葵色素-3-葡萄糖苷的摩尔分子量。
4、花色苷含量测定[4]
样品处理: 将各品种的干燥样品粉碎(40目)后,准确称取0.5 g用10 mL 65%的酸性乙醇提取24 h,提取3次,然后将3次提取液混合抽滤,真空旋转挥发回收乙醇,用蒸馏水定容到100 mL,摇匀,静止备用。
测定方法:含量测定用pH示差法,按照下面公式计算,测定3 次取其平均值。
C(mg/L ) = (OD ×M ×DF ×1000)/ α×1
式中: OD 为吸光度, DF为稀释倍数,M 为分子量,α=26900。
花色苷[5]：将提取液稀释合适倍数，用1cm 比色杯测其吸光值，参照Fuleki[6]的计算方法转换成总花色苷浓度，公式如下：
C/(mg/mL)=(A×MW × DF × 1000)/(ε×1)
式中：A为吸光值；MW 为分子量（以矢车菊素-3-葡萄糖苷为标准[7]，449.4）；
DF为稀释倍数；ε为消光系数，26900 L.cm-1.mg-1。
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