实验六体外抑菌实验19页PPT
项目7药物体外抗菌试验技术_PPT幻灯片
是用来测定消毒剂效力的一种指标，是以石炭酸为标准，在相同的实验条件下， 将消毒剂和石炭酸的杀菌力作比较，所得的杀菌效力的比值，石炭酸系数≥2为合格。
（三）联合抗菌试验法
同时应用两种抗菌药物时，两种药物之间既可能 产生相互影响，也可能彼此不影响；产生影响时，既 可能是相互加强(协同作用)，或两药作用出现累加现 象(即两药作用之和)也可能是相互减弱(拮抗作用)， 要确定两种药物之间的作用关系时，通常需用联合抗 菌试验法。 最简便、最常用的方法：纸条或纸片试验法。
可吸收的止血剂：如凝血酶等用于止血并可被组织吸收的各种 药物制剂。
无菌检查法
（一）直接接种法。若被检品是液体，可直接接种于培养基内。 若被检品是固体粉末或冻干制剂，则需用无菌生理盐水溶解，或制成均匀悬液再作检验。若 被检品是无菌敷料，则以无菌操作打开包装，于各部位剪取1cmX3cm大小的样品，再接种到 培养基中。
(二)体外杀菌试验
用途：评价药物对微生物的致死活性
1．最小杀菌浓度的测定
是取MIC终点以上未长菌的各管培养液，分别取出并移种于无菌平板上，培养后凡 平板上无菌生长的药物最低浓度，即为该药物的MBC。对微生物广义而言，也可称之 为最小致死浓度 (MLC)。某药物能杀死微生物的最低浓度。
2．活菌计数法
在—定浓度的定量药物内，加入—定量的试验菌，作用—定时间后取样稀释，再 取—定量的此稀释液混入未凝固的琼脂培养基中，立即倾注成平板，培养后计算菌落 数。由于每个菌落是由—个菌细胞繁殖而来，则菌落数或菌落形成单位CFU)乘以稀释 倍数，再除以稀释液用量，即得该药物与试验菌的混合液中每毫升内存活的细菌数或 CFU，从而可算出该药物对细菌的致死率。
1、灭活法 ２、薄膜过滤法 ３、离子交换树脂法 4、稀释法
实验六、抗菌药物的体外药效试验
实验六、抗菌药物的体外药效试验（药敏试验）各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性有差异，检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选最有疗效的药物，用于临床对控制细菌性传染病的流行至关重要。
此外，通过药物敏感试验可为新抗菌药物的筛选提供依据。
药敏试验的方法很多，普遍使用的有滤纸片扩散试验（Kirby-Baueer Dice Diffusion）；最低抑菌浓度试验（Minimum Inhibitory Concentration, MIC）和最低杀菌浓度试验（Minimum Bactericidal Concentration, MBC）。
［目的要求］1、熟悉体外抗菌试验操作技术。
2、掌握药物抗菌能力体外测定的常用方法及其用途。
［实验原理］常用的体外测定药物抑菌能力的方法有两大类：琼脂渗透法与浓度系列稀释法。
琼脂渗透法时利用药物能够渗透至琼脂培养基的性能，将实验菌混入琼脂培养基后倾注成平板；或将试验菌均匀涂于琼脂平板的表面，然后用不同的方法将药物置于已含试验菌的琼脂平板上。
根据加药的操作方法不同而有滤纸片法、打洞法、管碟法及挖沟法等。
经适宜温度培养后观察药物的抑菌能力。
浓度系列稀释法时把药物稀释成不同的系列浓度，混入培养基内，加入一定量的试验菌，经适宜温度培养后观察结果，求得药物的最低抑菌浓度（MIC）。
1、细菌：所用细菌应包括主要致病菌。
革兰氏阳性球菌包括金黄色葡萄球菌(产酶与不产酶菌株)、表皮葡萄球菌，链球菌、肠球菌等。
革兰氏阴性球菌如淋球菌等。
革兰氏阴性杆菌包括流感杆菌、肠杆菌科细菌8～10种，绿脓杆菌与其它假单孢菌属及不动杆菌属等，厌氧菌包括脆弱类杆菌、消化球菌和消化链球菌等。
对临床应用有代表性的菌株数量，创新药应不小于1000株。
其它类新药根据新药抗菌谱宽窄可作200-500株。
试验时应包括有国际公认质控菌株(如金葡菌ATCC25925，大肠杆菌ATCC25922和绿脓杆菌ATCC27853等)。
药物的体外抑菌试验
实验五药物的体外抗菌试验药物的抗菌试验是为了检查药物的抗菌能力.该项试验方法已广泛应用于新药研究和指导临床用药。
如抗菌药物的筛选，提取过程的生物追踪、抗菌谱的测定、耐药谱的测定、药敏试验、药物血浓度测定等各个方面。
药物的体外抗菌试验在实验室进行，优点是方法简便、需时短、用药量少，不需要活的动物、实验条件容易控制.因此,药物的体外抗菌试验已广泛应用各种测定了。
药物的体外抑菌试验是常用抗菌试验方法,其中最常用的方法用系列稀释法和琼脂扩散法。
（一)稀释法(结果示教)稀释法有液体培养基连续稀释法和固体稀释法（斜面法）两种。
这两种方法都可以用来测定药物的最小抑菌浓度（MIC）：是指该药物能抑制细菌生长的最低浓度,通常用μg∕ml或U/ml表示。
（二)琼脂扩散法它是将抗菌药物加至接种试验菌的平板表面，抗菌药物在琼脂胶内向四周自由扩散，其浓度随扩散距离增大而降低，在药物一定的扩散距离内,由于药物的抗菌效应，试验菌不能生长,此无菌生长的范围称为抑菌圈，抑菌圈的大小与药物的抑菌效应成正比。
琼脂扩散法常有纸片法、管碟法、打洞法和挖沟法。
滤纸片法（K-B纸片法）－学生操作滤纸片法是最常用的方法，适用于新药的初筛试验（初步药物是否有抗菌作用）及临床的药敏试验（细菌药物第三性试验、以便选择用药）。
滤纸片分湿、干两种，可以在试验时用无菌纸片沾取药物溶液放在含菌的平板表面，也以预先做成一定浓度的干燥纸片.一般来说预先做成的干燥纸片实用一些而且准确一些。
至于干燥纸片的制备方法:选用吸水力强而且质地均匀的滤纸，用打洞机制成6mm直径的圆纸片，120℃干燥灭菌2小时.然后把配制好的各种适宜浓度的抗生素溶液,每100张纸片加入0。
5ml药液，使它均匀浸润，放在无菌平皿中，37℃，使它干燥，分装小瓶中，封口，4℃保存。
如果是β－内酰胺类抗生素还要放在—20℃保存。
这就制成了干燥的含药液的纸片.一般药敏试验常采用滤纸片法，我们可以根据抑菌圈的大小，来判断菌种对药物的敏感性，是敏感，中度敏感还是耐药.世界卫生组织规定了抗菌药物的敏感性评定标准，在标准实验条件下根据抑菌圈大小来判断.步骤：活化试验菌→涂布试验菌于平板→贴加含药纸片→37度培养24h→观察结果打洞法（结果示教）在含菌琼脂平板上打洞（一般打6个孔,4个小孔加不同浓度标准溶液，另外2个小孔加血清样品,放在37℃，12—18小时，测定其抑菌圈直径。
药物的体外抗菌试验
于平板上，培养后观察结果，量取抑菌圈直 径以此判断试验药物抑菌作用的强弱。
❖ 用于新药的初筛及临床的药敏试验。
❖ 挖沟法： ❖ 1、在琼脂平板上挖沟，沟两边垂直划线接种
各种试验菌，沟内加入药液。 ❖ 2、培养后，根据沟两边所生长的试验菌离沟
❖ 2、再于各管中加入等量的实验菌，经 16～ 24 h培养后，与阴性及阳性对照管进行对照 观察。
❖ 3、将未长细菌的培养液取出，分别转种琼脂 平皿。如培养后重新长出试验菌，说明该药 仅有抑菌作用。如无菌生长则可以认为该药 物有杀菌作用。
❖ 在测定中草药煎剂时，由于有些煎剂颜色 较深，肉眼不易分辨是否有效；需再于每管 中取数环移种于适当的培养基上，经培养后 观察有无细菌生长而决定之。
药物的体外抗菌试验
❖ 用途： ❖ 抗菌药物的筛选、药物的抗菌谱测定及
临床药物敏感性试验等方面。
常用的体外抑菌试验
琼脂扩散法 滤纸片法
❖
挖沟法
连续稀释法
琼脂扩散法
❖ 原理： 药物可以在琼脂培养基中自由扩散，形成一定浓度的含药
区域。 由于各种微生物对不同药物或同一药物不同浓度的敏感性
不同，因而形成一定大小的抑菌圈或抑菌距离，根据其大小， 可以了解药物的抗菌作用大小或是微生物对试验药物的敏感性。
的距离来判断药物对试验菌的抗菌作用强弱。
❖ 适用于在一个平板上试验一种药物对几种不 同试验菌的抗菌作用。
❖ 琼脂扩散法具有方法简便，技术要求不 高，易掌握操作的特点。但精确度不高，一 般能用于定性或初步判断其作用的强弱。
❖ 液体稀释法是一种测定药物的抗菌作用 定量方法，较琼脂扩散法精确，因而运用较 普遍 。
❖ 凡能抑制试验菌生长的最高药物稀释度为该 药的最低抑菌浓度 （Minimal inhibitory concentration，MIC）。
体外抗菌实验PPT精选文档
1
药物的体外抗菌试验
药物的体外抗菌试验是在体外测定微 生物对药物敏感程度的试验，
已广泛地应用于科研、生产和临床。如抗菌 药物的筛选、提取过程中的追踪、抗菌谱的定、 药物含量的测定、药物血浓度测定、指导临床用 药的药敏试验等。
抗菌试验包括抑荫试验和杀菌试验。
抑菌：即抑制微生物的生长繁殖，但不能杀死微 生物，在药物除去后微生物又能生长. 杀菌：即能杀死微 生物，当药物除去后，微生 物也不能再生长繁殖。
2
第一节 常用的体外抑菌试验
连续稀释法：
可用于测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀 菌浓度(MBC)。可以用液体培养基，也可用固体培 养基。
1．液体培养基连续稀释法 2．固体培养基连续稀释法
分平板法和斜面 法。
3
琼脂扩散法：
是利用药物可以在琼脂培养基中扩散，在药 物有效浓度的范围内形成抑菌圈或抑菌距离，以 抑菌圈直径或抑菌距离的大小来评价药物抗菌作 用强弱。
7
第三节 联合抗菌试验
在药学上作中，常需检查两种抗菌药物 在联合应用时的相互作用以及抗菌药物与不 同pH值或不同离子溶液的相互影响。如加强 药物抗菌作用的为协同(synergism)；减弱药 物作用的为拮抗(antagonism)；相互无影响的 为无关(indjfference)；作用为二者之和的为累 加(addition)。
8
纸条试验
即在已接种试验菌的平板表面垂直放置两条各浸有 一种药液的滤纸条，培养后根据抑菌区的加强、减弱或 无影响来判断它们在联合应用时的效应。
梯度平板纸条试验
需先制备含药的梯度平板。将试验菌悬液涂布于 平板表面，取滤纸条浸透另一待检药液，按梯度平板 中药物浓度递减的方向置于平板表面。培养后，如该 待检药液对平板内的药物有加强作用，则可见沿纸条 两边的抑菌区被扩大。
实验六抗菌药物的体外药效试验
实验六抗菌药物的体外药效试验Document serial number【KK89K-LLS98YT-SS8CB-SSUT-SST108】实验六、抗菌药物的体外药效试验（药敏试验）各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性有差异，检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选最有疗效的药物，用于临床对控制细菌性传染病的流行至关重要。
此外，通过药物敏感试验可为新抗菌药物的筛选提供依据。
药敏试验的方法很多，普遍使用的有滤纸片扩散试验（Kirby-Baueer Dice Diffusion）；最低抑菌浓度试验（Minimum Inhibitory Concentration, MIC）和最低杀菌浓度试验（Minimum Bactericidal Concentration, MBC）。
［目的要求］1、熟悉体外抗菌试验操作技术。
2、掌握药物抗菌能力体外测定的常用方法及其用途。
［实验原理］常用的体外测定药物抑菌能力的方法有两大类：琼脂渗透法与浓度系列稀释法。
琼脂渗透法时利用药物能够渗透至琼脂培养基的性能，将实验菌混入琼脂培养基后倾注成平板；或将试验菌均匀涂于琼脂平板的表面，然后用不同的方法将药物置于已含试验菌的琼脂平板上。
根据加药的操作方法不同而有滤纸片法、打洞法、管碟法及挖沟法等。
经适宜温度培养后观察药物的抑菌能力。
浓度系列稀释法时把药物稀释成不同的系列浓度，混入培养基内，加入一定量的试验菌，经适宜温度培养后观察结果，求得药物的最低抑菌浓度（MIC）。
1、细菌：所用细菌应包括主要致病菌。
革兰氏阳性球菌包括金黄色葡萄球菌(产酶与不产酶菌株)、表皮葡萄球菌，链球菌、肠球菌等。
革兰氏阴性球菌如淋球菌等。
革兰氏阴性杆菌包括流感杆菌、肠杆菌科细菌8～10种，绿脓杆菌与其它假单孢菌属及不动杆菌属等，厌氧菌包括脆弱类杆菌、消化球菌和消化链球菌等。
对临床应用有代表性的菌株数量，创新药应不小于1000株。
实验六、抗菌药物的体外药效试验
实验六、抗菌药物的体外药效试验（药敏试验）各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性有差异，检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选最有疗效的药物，用于临床对控制细菌性传染病的流行至关重要。
此外，通过药物敏感试验可为新抗菌药物的筛选提供依据。
药敏试验的方法很多，普遍使用的有滤纸片扩散试验（Kirby-Baueer Dice Diffusion）；最低抑菌浓度试验（Minimum Inhibitory Concentration, MIC）和最低杀菌浓度试验（Minimum Bactericidal Concentration, MBC）。
［目的要求］1、熟悉体外抗菌试验操作技术。
2、掌握药物抗菌能力体外测定的常用方法及其用途。
［实验原理］常用的体外测定药物抑菌能力的方法有两大类：琼脂渗透法与浓度系列稀释法。
琼脂渗透法时利用药物能够渗透至琼脂培养基的性能，将实验菌混入琼脂培养基后倾注成平板；或将试验菌均匀涂于琼脂平板的表面，然后用不同的方法将药物置于已含试验菌的琼脂平板上。
根据加药的操作方法不同而有滤纸片法、打洞法、管碟法及挖沟法等。
经适宜温度培养后观察药物的抑菌能力。
浓度系列稀释法时把药物稀释成不同的系列浓度，混入培养基内，加入一定量的试验菌，经适宜温度培养后观察结果，求得药物的最低抑菌浓度（MIC）。
1、细菌：所用细菌应包括主要致病菌。
革兰氏阳性球菌包括金黄色葡萄球菌(产酶与不产酶菌株)、表皮葡萄球菌，链球菌、肠球菌等。
革兰氏阴性球菌如淋球菌等。
革兰氏阴性杆菌包括流感杆菌、肠杆菌科细菌8～10种，绿脓杆菌与其它假单孢菌属及不动杆菌属等，厌氧菌包括脆弱类杆菌、消化球菌和消化链球菌等。
对临床应用有代表性的菌株数量，创新药应不小于1000株。
其它类新药根据新药抗菌谱宽窄可作200-500株。
试验时应包括有国际公认质控菌株(如金葡菌ATCC25925，大肠杆菌ATCC25922和绿脓杆菌ATCC27853等)。
体外抑菌实验
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二、纸片法
取已经制备好的6种药敏片：青霉素 20000μ/ml、链霉素、多西环素、10％磺胺二甲嘧 啶钠，10％恩诺沙星，碘酒2.5％ ，放置在已接种 细菌的琼脂平板表面的不同区域。为了位置间隔 准确，最好事先在平皿底用蜡笔作上记号。 将培养皿置37℃培养24h，观察纸片周围有无 抑菌环，并测量抑菌圈的直径，比较各药的抗菌 效力。样例如下图：
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试管号 牛肉膏汤 （ml） 青霉素（ml） 葡萄球菌液 （ml）
1
1 1
2
1 1
3
1 1
4
1 1
5
1 1
6
1 1
7
1 1
8
1 1
9
1 1
10
1 弃1
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0
0.5
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• １－８，１０管各加入培养18 h并用牛肉膏 汤稀释至5X１０７～ １０８ｃｆｕ／ｍｌ的 金黄色葡萄球菌菌液０．５ml。放入37℃培 养箱内培养24h后，取出观察细菌生长情况。 • 以能抑制细菌生长的最小浓度为青霉素对该 细菌的最低抑制浓度（MIC）。 • 结果记录于下表：
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【思考题】
• 分别以抑菌圈的大小和MIC值来比较 常见药物对金黄色葡萄球菌的作用强度。
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Careful ,then successful !
【实验目的】
掌握药敏试验的方法，了解药物对常见 菌的作用。
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药物的体外抗菌试验
A
11
连续稀释法
❖ 可用于测定药物的最低抑菌浓度（MIC）和 最低杀菌浓度（MBC）。可以用液体培养基， 也可用固体培养基。
❖ 凡能抑制试验菌生长的最高药物稀释度为该 药的最低抑菌浓度 （Minimal inhibitory concentration，MIC）。
A
20
抗菌试验的影响因素
2、培养基
❖ 抗菌试验的培养基应按试验菌的需求配制，如链球 菌常用含血清的肉汤培养基，抗真菌药物试验需用 沙氏培养基。
❖ 培养基的酸碱度、电解质、还原性物质等均可影响 试验结果，实验时应尽可能排除各种影响实验结果 因素的掺入。
❖ 经无菌检查合格。
A
21
抗菌试验的影响因素
3、抗菌药物 ❖ 药物的浓度、pH及含有的其他成分均可
作用二者之和为累加（addition）。
A
15
联合抗菌试验的常用方法
一、纸条试验（paper strip test）
即在已接种实验菌的平板表面垂直放置两条浸有一 种药液的滤纸条，培养后根据抑菌区的加强、减弱 或无影响来判断它们在联合应用时的效应。 图20-2是纸条实验的示意图。
A
16
图20-2是纸条实验的示意图。图中A列的两纸条中只有一条含 有抗菌药物，另一条不含抗菌药物；B列的两纸条均含有抗菌
微生物与药学的关系
❖ 1.某些微生物可以生产药物（微生物制药） ❖ 2.微生物可能会污染药品（药物的微生物检查） ❖ 3.某药物有能抑菌或是杀菌（药物的抗菌试验）
A
1
药物的体外抗菌 试验
A
2
药物的体外抗菌试验
体外抑菌实验报告
为了评估不同抗生素药物的抗菌能力，本实验通过体外抑菌实验，观察并记录抗生素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌等常见细菌的抑菌效果，以期为临床合理用药提供参考。
二、实验材料1. 菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌等。
2. 药物：头孢克洛、氨苄西林、阿莫西林、庆大霉素、红霉素等。
3. 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、M-H肉汤培养基。
4. 实验器材：培养皿、移液器、无菌试管、锥形瓶、酒精灯、高压蒸汽灭菌器等。
三、实验方法1. 菌株培养：将菌株接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，37℃培养24小时。
2. 药物制备：将抗生素药物溶解于M-H肉汤培养基中，制成不同浓度的药物溶液。
3. 抑菌实验：将培养好的菌株接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，制成平板。
将不同浓度的药物溶液滴加于平板上，37℃培养24小时，观察抑菌圈直径。
4. 数据记录：记录不同浓度药物溶液的抑菌圈直径，计算抑菌率。
四、实验结果1. 头孢克洛对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌的抑菌效果较好，抑菌圈直径分别为18mm、15mm、13mm。
2. 氨苄西林对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果较好，对铜绿假单胞菌的抑菌效果较差，抑菌圈直径分别为12mm、10mm、5mm。
3. 阿莫西林对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果较好，对铜绿假单胞菌的抑菌效果较差，抑菌圈直径分别为10mm、8mm、4mm。
4. 庆大霉素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌的抑菌效果较好，抑菌圈直径分别为20mm、18mm、16mm。
5. 红霉素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果较好，对铜绿假单胞菌的抑菌效果较差，抑菌圈直径分别为14mm、12mm、6mm。
1. 头孢克洛、庆大霉素等抗生素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌具有较强的抑菌效果，可作为临床治疗此类细菌感染的首选药物。
2. 氨苄西林、阿莫西林等抗生素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果较好，但对铜绿假单胞菌的抑菌效果较差，临床应用时需注意。
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实验一 影响药物作用的因素 实验二 药物代谢动力学实验 实验三 处方与药物的配伍禁忌 实验四 中毒与解救试验 实验五 药物对离体肠的影响 实验六 抗微生物药物的体外抑菌实验 实验七 生物碱的提取及其药敏实验 实验八 药物对离体心脏的影响
实验六、抗菌药物的体外抑菌实验
【实验目的】
掌握药敏试验的方法，了解药物对常见 菌的作用。 意义： • 体外抗菌试验对临床用药具有参考价值。 • 鉴定新药是否具有抗菌活性。
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【思考题】
•
分别以抑菌圈的大小和MIC值来比较
常见药物对金黄色葡萄球菌的作用强度。
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能够杀灭培养基中细菌的最低浓度。
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【试剂与器材】 细菌菌液（如金黄色葡萄球菌、链球
菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌）、药液（青 霉素、链霉素、磺胺嘧啶钠、四环素）、 碘酒、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、氢氧化 钠、高压灭菌器、小试管、试管架、吸管、 平皿等。 256μ/ml青霉素溶液： 药敏试纸的准备：
二、试管二倍稀释法 取灭菌小试管10支，按照1至10编号，
排列于试管架上。按照无菌操作，从第一 管到第10管，分别加入牛肉膏汤1ml。用吸 管吸取256μ/ml的青霉素溶液1ml放入第一 管，并反复吹匀；接着从第一管吸出1ml放 入第二管同样吹匀后吸出1ml放入第三管， 依次逐管进行稀释到第８管，第10管不加 青霉素液，作细菌对照组，第９管只加药 物，不加菌液，作为药物对照组。
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• 【实验步骤】
• 一、纸片法 以灭菌小棉签取金黄色葡萄球菌液（每
ml约含3亿个细菌），注意不宜蘸取过多， 以刚浸湿整个棉签为度，轻轻地从四个不 同方向平行交叉划线，使菌液均匀涂布于 整个琼脂平板上。同样方法，也可制作大 肠杆菌平板备用。
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金色葡萄球菌
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【注意事项】
1. 接种细菌时要在无菌条件下均匀涂抹；用过的棉 签火焰烧灼后丢弃。
2. 用试管二倍稀释法测MIC值，稀释时注意 稀释的顺序；每次移液前注意清洗吸管。
3. 药敏片之间要间隔适当距离，以免抑菌圈 出现交叉。
4. 四人一组，纸片法每人一个平皿，作四种药物对 一种菌的作用，同组每人所接菌种不同，平皿上 做好记号。结果记录时将本组结果综合。
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试管号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
牛肉膏汤 （ml）
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
青霉素（ml） 1 1 1 1 1 1 1 1 弃1 0
葡萄球菌液 （ml）
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0ห้องสมุดไป่ตู้5
0.5
0
0.5
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• 1-8，10各加入培养18 h并用牛肉膏汤稀释至 5×107～108 cfu/ml的金黄色葡萄球菌菌液 0.5ml。放入37℃培养箱内培养24h后，取出 观察细菌生长情况。
二、纸片法
取已经制备好的4种药敏片：青霉素16万u/ml 、 链霉素10万u/ml 、10%磺氨嘧啶钠、四环素0.05g / ml ，放置在已接种细菌的琼脂平板表面的不同区 域。为了位置间隔准确，最好事先在平皿底用蜡 笔作上记号。
将培养皿置37℃培养24h，观察纸片周围有无 抑菌环，并测量抑菌圈的直径，比较各药的抗菌 效力。样例如下图：
• 以能抑制细菌生长的最小浓度为青霉素对该 细菌的最低抑制浓度（MIC）。
• 最低杀菌浓度（MBC） • 结果记录于下表：
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记录实验结果
管号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
稀释倍数
1
1/2
1/4
1/8
1/1 6
1/3 2
1/6 4
1/1 28
1/2 56
0
稀释浓度(u/ml) 128 64 32 16 8 4 2 1 0.5 －
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实验结果记录：抑菌直径（mm）
药物 细菌
青霉素 （16万 u/ml）
链霉素 （1.0万 u/ml）
磺氨嘧啶钠 (1% )
四环素 (25 %)
金葡菌 链球菌
大肠杆菌 沙门氏杆菌
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【实验原理】
抗菌作用 耐 药性
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【基本原理】
抗菌活性：是指抗菌药抑制或杀灭病原微 生物的能力。
两种测定方法：体外与体内（化学治疗实 验）；
评价指标： （1）最低抑菌浓度（MIC）： 能够抑制培养基中细菌生长的最低
浓度。 （2）最低杀菌浓度（MBC）：