枸杞多糖的提取与含量测定
枸杞子多糖提取
枸杞子多糖提取枸杞子为茄科植物枸杞LyciumchinenseMill的成熟果实，是我国传统的滋补中药材。
《本草纲目》中记载枸杞子具有坚筋骨、补精气诸不足、明目安神、令人长寿等功效［1］。
近年来的研究发现，植物多糖具有抗肿瘤、增强机体免疫力等功效，已是当前国内外研究的热点［2～5］。
目前人们对枸杞子多糖进行了较广泛的研究，发现枸杞多糖具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗疲劳、护肝、防辐射、抗缺氧等功效［6～8］，同时对多糖的分离与纯化进行了一些研究［9，10］，但对提取的工艺条件研究较少。
本文对影响枸杞子多糖提取因素进行了正交实验，优选出最佳的枸杞子多糖提取的工艺参数，同时进行了枸杞子多糖的体外抗氧化活性研究，以期为研究开发枸杞子多糖新的药物功能及保健食品提供基础数据。
1材料与方法仪器与试剂上海尤尼柯仪器有限公司产WFJ2100型分光光度计；上海安亭精密仪器厂产TDL80-28台式离心机；所用试剂均为分析纯试剂。
药材枸杞子，原产宁夏，购于大连开发区。
枸杞子多糖的提取枸杞子多糖提取的工艺流程及方法在参考已有其它种类多糖提取方法［11］的基础上，利用水提的方法，采用正交实验对枸杞子多糖的提取条件进行优化，以确立最佳工艺条件。
枸杞子多糖提取的工艺流程见图1。
图1枸杞子提取工艺流程示意图准确称取已于70℃烘干并粉碎的枸杞子2g于三角瓶中，按设计好的正交实验条件在恒温水浴中进行提取，然后将其以4000r/min离心18min，得上清液，经浓缩，再加入5倍体积的乙醇，摇匀后，在4℃冰箱中放置过夜，以4000r/min离心20min。
沉淀经干燥后得到粗多糖。
采用硫酸－苯酚法［11］测定所提取的枸杞子多糖中多糖含量，然后根据所用枸杞子的质量计算出枸杞子中多糖得率。
正交实验选用L9正交实验，确定提取枸杞子多糖的最佳工艺参数，水平因素见表1。
表1正交水平多糖含量测定采用硫酸-苯酚法测定提取的枸杞子多糖含量［11］，葡萄糖标准曲线的相关系数为，线性方程为Y=。
枸杞中枸杞多糖的提取及分离纯化工艺的研究
枸杞中枸杞多糖的提取及分离纯化工艺的研究石油化工与工艺 05160111 倪宜海指导教师：史高峰教授摘要本文主要对枸杞黄酮类化合物的微波辐射辅助提取取枸杞粉末和提取最佳工艺进行研究。
取得的主要研究成果如下：加入一定料液比(1：8、1：10、1：12)的水溶液，放入微波搅拌器中放置一定时间（40-100min)，温度70-100摄氏度之间，功率（300-600w）。
取出过滤，取其溶液放置旋转蒸发仪中进行蒸馏。
枸杞渣滓放回搅拌器中进行二次提取，提出多糖混合液醇沉冷冻干燥后，为褐色絮状粉末固体。
确定最佳工艺：提取温度90 ℃；料水比1∶10(W∶V)，提取时间2h，功率600。
得出多糖再进行Sevage法脱蛋白，冷冻干燥后，为乳白色絮状粉末固体粗多糖。
在最佳条件下枸杞粗多糖提取率可达12.23%。
枸杞粗蛋白含量6.98%关键词：微波搅拌，冷冻干燥，Sevage法脱蛋白，分离纯化AbstractIn this paper, the main flavonoids of Lycium barbarum's the microwave-assisted extraction of radiation from wolfberry extract powder and the best technology for research. The main research results obtained are as follows: by adding some liquid ratio (1:8,1:10,1:12) aqueous solution into the microwave stirrer placed a period of time (40-100min), the temperature between 70-100 degrees Celsius , power (300-600w). Remove the filter, select the solution placed in Rotary Evaporator distillation. Barbarum waste back into the blender in the second extract, the polysaccharide mixture of freeze-drying alcohol, in order to brown flocculent solid powder. To determine the optimum process: extraction temperature 90 ℃; feed water ratio 1:10 (W: V), extraction time 2h, Power 600. Polysaccharide derived from another protein Sevage law, after freeze-drying for white flocculent powder Polysaccharide solid. Under the best conditions in barbarum Polysaccharide extraction rate of 12.23%. Barbarum 6.98% crude protein content.KEY WORDS: microwave mixing, freeze-drying, Sevage method of removing protein, purification 1.前言枸杞中的化学成分比较复杂，主要包括蛋白质、氨基酸、微量元素、糖类、脂肪、脂肪酸、菇类、甾醇类、维生素、色素类、生物碱类。
紫外分光光度法测定枸杞中多糖含量
紫外分光光度法测定枸杞中多糖含量摘要:目的：提供一种测定枸杞制品中功效成分多糖的方法，同时合理筛选枸杞品种。
方法：运用苯酚-硫酸紫外分光光度法测定3种枸杞品种中多糖的含量。
结果：宁夏枸杞中的多糖含量为4.01%，新疆枸杞中的多糖含量为3.85%，青海枸杞中的多糖含量为4.01%；同时发现使用紫外分光光度法测定精密度好、重复性好、方法简便。
结论：宁夏枸杞中多糖含量明显高于新疆枸杞和青海枸杞，差异达到显著水平；紫外分光光度法是一种测定枸杞多糖质量分数的理想方法，亦可为其它类多糖质量分数的测定提供依据。
关键词：苯酚-硫酸；紫外分光光度法；枸杞；多糖枸杞(Lycium Barbrum L.)属茄科枸杞，为落叶灌木植物干燥成熟果实。
近年的医学研究表明，枸杞含有多种营养成分和微量元素，其有效成分枸杞多糖(LBP)具有广泛的药理学作用，可促进造血、降血脂、保肝及治疗神经衰弱等。
枸杞多糖(LBP)是由多个单糖或衍生物聚合而成的大分子活性化合物，是枸杞生物学作用的主要有效成分之一，其结构按LBP-Ⅰ、LBP-Ⅱ、LBP-Ⅲ、LBP-Ⅳ的顺序水溶性依次递减，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。
枸杞多糖对机体具有非特异性免疫调解功能，可调节机体免疫力、抑制肿瘤生长和细胞突变、延缓衰老、提高适应能力，并具有抗疲劳和加速消除疲劳的作用，已成为保健食品中的一种重要功能性添加剂，显示出良好的应用前景。
为了进一步开发新疆黑枸杞的药用价值，本文采用紫外分光光度法测定了几种枸杞叶中的多糖含量。
1 材料与方法1.1 原理多糖在80%乙醇溶液中沉淀，与单糖和低聚糖及甙类物质分离。
沉淀用水溶解后，再用碱性二阶铜试剂选择性地从其它高分子物质中沉淀出具有葡聚糖结构的多糖。
苯酚-硫酸可与其中的多糖起显色反应，生成橙黄色化合物，可于485nm 处比色，定量。
1.2 材料与仪器TU-1901型紫外-可见分光光度计(北京普析通用)、岛津CS-9301PC薄层扫描仪、定量毛细管(美国Dummond)、手动点样仪(CAMAGIII型)、硅胶G(青岛海洋化工集团公司)自制板；D-无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所生产，批号110833200302)；试剂：所用试剂均为分析纯。
枸杞中多糖成分的分离和提取技术
枸杞的功效十分强大，《神农本草经》中记载，枸杞能补气益血，清肝明目。
在1981—2010年，一系列与枸杞和枸杞多糖相关的中成药和制剂也是层出不穷，据统计已经达到876种。
对于天然产物的分析检测而言，得率和纯度至关重要，因此在多糖成分的分离和提取技术研究中必须在优化条件的同时，确保多糖的生物活性不会因提取工艺受到影响。
现阶段，碱溶液、酸溶液、水溶液都常被用于多糖的提取。
其中，热水凭借着易于获取、溶解度强等显著优势成为了提取多糖时首选的溶剂。
然而，多糖中含有醛基等官能团，所以碱性溶液也常被用于多糖的提取。
随着科学技术的不断进步，超声波技术、超临界萃取等技术也被广泛用于枸杞中多糖成分的分离[1]。
1 枸杞多糖的结构和理化性质随着科技的进步，人们发现枸杞中的生物活性成分较为复杂，既包括氨基酸、生物碱、脂肪酸、色素类物质，也含有离子盐等无机元素。
其中，枸杞多糖因为抗癌、抗氧化、免疫调节等作用受到广泛关注。
然而，枸杞多糖多与蛋白质相结合，这给枸杞中多糖成分的提取和分离带来了一定的难度。
研究表明，枸杞多糖成分较为复杂，多由葡萄糖、甘露糖、木糖、鼠李糖、阿拉伯糖等己碳糖组成侧链（简单结构见图1），并与由氨基酸组成的多肽链紧密结合。
图1 简单多糖结构示意图2 多糖的提取分离方法2.1 多糖的提取方法枸杞中的多糖以不同形式存在，对于每种形式的多糖都需要采用针对性的预处理方法。
现阶段，在天然产物分离与提纯中常用的分析检测方法包括脱色处理、粉碎成末、清洗脱脂等。
其中，粉碎是为了促进枸杞中物质的溶解，最大限度的获取枸杞中的有效物质。
脱色处理主要是为了除去枸杞中的显色物质，避免对后续处理工艺的干扰。
脱脂是避免多余的脂质对后续结果的影响。
2.1.1 溶剂浸提法因为多糖在水溶液中的溶解度较高，故而可以用水、酸、碱等极性溶剂或者甲醇、乙醇等质子型溶剂溶解。
其中，热水因成本低、来源广等优势常用作溶媒介质。
虽然多糖在酸、碱性溶液中也存在一定的溶解度，但是酸碱会影响多糖成分的活性，例如，溶解糖苷键，破坏多糖的三维立体结构等，故而此类方法常被用于对生物活性要求不高的成分的提取。
枸杞子中多糖含量的测定(1)
枸杞子中多糖含量的测定柳婷，胡浩斌(陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳 745000)摘要：本文是用分光光度法测定枸杞子中的含糖量[1]。
先用80%乙醇提取以除去单糖、低聚糖、生物碱等干扰成分，然后用蒸馏水提取其中所含的多糖类成分。
多糖在硫酸作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物。
用紫外分光光度法[2]测定其枸杞子多糖含量，本法简便，显色稳定，灵敏度高重现性好。
关键词:枸杞子；多糖；紫外分光光度计Detection of Polysaccharide in Lycium barbarumLiu Ting, Hu Hao-Bin(College of Chemistry & Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 74500, China) Abstract:This paper is utilized spectrophotometry to detect Polysaccharide in Lycium barbarum..First,use 80% ethanol to remove simple sugars, oligosaccharides, alkaloids etc interference ingredients, and then extracted the ingredients. Of polysaccharose with distilled water. In Sulfuric acid condition, polysaccharide hydrolysis into monosaccharides, and rapidly dehydrated to furfural derivatives, then condense with phenol into colored compounds. Using spectrophotometry to detect polysaccharide in Lycium barbarum,the method is simple, color stability, high sensitivity and good reproducibility.Key words:Lycium barbarum; polysaccharose; spectrophotometry枸杞子（Lycium barbarum是我国传统的中药材和重要经济作物，性状呈类纺锤形，略扁，长6～21 mm,直径3～10 mm。
枸杞子多糖含量的测定实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除枸杞子多糖含量的测定实验报告篇一：实验三多糖含量的测定实验三多糖含量的测定一、实验目的1、分光光度法测多糖的原理和方法2、用officeexcel作标准曲线二、仪器与试剂1、仪器：7200分光光度计、水浴锅、电子天平2、试剂：1水葡萄糖、5%苯酚溶液、浓h2so4、dh2o3、器皿：50ml容量瓶、10ml量筒、玻棒、洗耳球、烧杯、试管三、步骤1、标准曲线的绘制①取1水葡萄糖0.551g于50ml容量瓶，加入蒸馏水溶解并小心稀释至刻度，再取5ml于50ml容量瓶，加蒸馏水稀释,即1.0mg/ml。
②分别量取0.25ml,0.5ml,1.0ml,1.5ml,2.0ml,2.5ml分别置于已编号的50ml容量瓶，加蒸馏水定容。
③分别吸取上述溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4，摇匀后，室温5min，90oc水浴15min，冷却至室温。
空白对照：2ml蒸馏水+1ml5%苯酚+5ml浓硫酸吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程y=ax+b④准确量取多糖溶液（待测）2.0ml于50ml容量瓶中，加蒸馏水定容，方法同上述。
四结果①计算浓度（待测液）本组所测得多糖溶液（待测）的吸光度为的0.385，代入根据吸光度A得浓度c与吸光度的线性方程y=14.255x+0.0309，可得待测液的浓度为0.025*25=0.625mg/ml.。
②实验主要步骤（记录）步骤记录：Ⅰ首先配制浓度分别为0.005mg/ml、0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml、0.04mg/ml、0.05mg/ml的葡萄糖溶液；然后取配好的溶液各2.0ml,再加入5%苯酚1ml,摇匀后迅速加入5ml浓h2so4，；不断震荡，溶液逐渐变为褐色，放出热量，且随着葡萄糖浓度的增加，溶液的颜色也不断变深；室温5min，90oc水浴15min，反应更为充分，溶液颜色有稍微加深，冷却至室温；最后用7200分光光度计一一测量其吸光度，得到的的数据是0.098、0.19、0.337、0.412、0.584、0.774。
枸杞中枸杞多糖含量的测定
枸杞中枸杞多糖含量的测定一、实验内容用分光光度法测定枸杞中枸杞多糖的含量。
二、实验目的与要求(1)掌握用分光光度法测定枸杞中枸杞多糖含量的原理及方法。
(2)熟练掌握分光光度计的原理及使用方法。
三、实验原理用80%乙醇溶液提取以除去单糖、低聚糖、苷类及生物碱等干扰性成分，然后用水提取其中所含的多糖类成分。
多糖类成分在硫酸作用下，先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后和苯酚缩合成有色化合物，用分光光度法于适当波长处测定其多糖含量。
四、试剂80%乙醇溶液：用95%乙醇或无水乙醇加适量蒸馈水配制。
硫酸。
苯酚液：取苯酚100g，加铝片O.lg与碳酸氢钠0.05g，蒸馏收集1721馏分，称取此馏分10g，加水150mL，置于棕色瓶中即得。
葡萄糖标准溶液：精密称取105T：干燥至恒重的标准葡萄糖O.lOOOg，加水溶解并定容至lOOOmL即得。
五、仪器)实验室用样品粉碎机、分光光度计、电热恒温水浴。
六、操作步骤1-样品处理精密称取样品粉末0.4g (精确到0.000lg)置于圆底烧瓶中，加80%乙醇溶液 200ml回流提取lh，趁热过滤，残渣用80%热乙醇溶液洗涤（约10mL x 10次），残渣连同滤纸置于烧瓶中，加蒸馏水l00ml，加热提取1h，趁热过滤，残渣用热蒸馏水充分洗涤（约lOmLxl0次），洗液并入滤液，冷却后移入250mL容量瓶中，用水定容，待Ho2•标准曲线的绘制 %精密吸取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1-OmL 中，各加蒸馏水使体积为2. OmL，再各加苯酚液l.OmL，摇匀，迅速滴加硫酸5.0mL,摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出冷却至室温;另以蒸馏水 2mL，加苯酚和硫酸，同上操作为空白对照。
于490nm处测定吸光度，绘制标淮曲线。
3.试样的测定准确吸取待测液一定量（视待测液含量而定），加蒸馏水至2niL,以下操作按标准曲线绘制下的方法测定吸光度，根据标准曲线查出显色液中葡萄糖含量。
枸杞多糖组成及含量测定方法的改进
枸杞多糖组成及含量测定方法的改进1. 方法原理该研究旨在改进枸杞多糖组成及含量的测定方法。
将枸杞多糖进行水解衍生化处理，然后利用气相色谱法（GC）和高效液相色谱法（HPLC）测定单糖组成。
通过分析单糖组成结果，可以判断枸杞多糖的真伪。
在此基础上，根据各单糖组成物质的量比，配制单糖混合溶液，并使用苯酚硫酸比色法绘制标准曲线，从而建立枸杞多糖含量的测定方法。
通过该方法测定的枸杞多糖含量为30，而仅以葡萄糖作为标准溶液，使用硫酸苯酚法绘制标准曲线时，枸杞多糖含量仅为14。
这种改进的方法可以更准确地测定枸杞多糖的含量，并区分真伪枸杞多糖。
2. 实验材料和仪器枸杞样本：选用宁夏枸杞（Lycium barbarum L.）为实验材料，购买自当地市场，经鉴定为优质品种。
试剂：包括但不限于葡萄糖、硫酸、苯酚、盐酸、乙醇等，均为分析纯。
高效液相色谱仪（HPLC）：配备示差折光检测器，用于枸杞多糖的定性和定量分析。
多糖纯化：通过Sevage法去除蛋白质，然后用透析法去除小分子杂质。
多糖含量测定：采用改进的苯酚硫酸法，通过紫外可见分光光度计测定多糖含量。
这个段落详细列出了实验所需的材料和仪器，并简要介绍了实验方法，为后续实验结果的准确性和可靠性提供了基础。
3. 实验步骤本实验选用宁夏枸杞（Lycium barbarum L.）为原料。
将枸杞样品在40下烘干至恒重，粉碎后过80目筛。
准确称取0g枸杞粉末，置于圆底烧瓶中。
采用改进的超声波辅助水提法提取枸杞多糖。
将枸杞粉末加入100mL去离子水中，在功率为200W、频率为40kHz的超声波辅助下提取30分钟。
提取完成后，离心（4000 rpm, 10 min）取上清液，残渣重复提取两次，合并上清液。
在上清液中加入Sevage试剂（三氯甲烷正丁醇 51，vv），剧烈振荡后静置分层，重复此步骤至无蛋白层出现，收集上清液。
将上清液减压浓缩至原体积的15，加入4倍体积的无水乙醇，置于4冰箱中醇沉过夜。
不同提取方法对枸杞多糖提取率及糖含量的影响
Vol.6 No.6Dec. 2020生物化工Biological Chemical Engineering第 6 卷 第 6 期2020 年 12 月不同提取方法对枸杞多糖提取率及糖含量的影响李玲梅，张娟娟（洛阳师范学院 食品与药品学院，河南洛阳 471934）摘 要：枸杞多糖是枸杞子的主要有效成分,是评价枸杞子质量的重要标准。
采用热水浸提法、碱提取法、超声提取法、微波提取法4种方法提取枸杞多糖，4种提取方法固定料液比1∶20（g ∶mL），提取温度90 ℃，浸提2次，比较不同提取方法对枸杞多糖提取率及多糖含量的影响。
结果表明，微波提取法提取率最高，然后依次是超声提取法、碱提取法、热水浸提法；超声提取法多糖含量最高，然后依次是微波提取法、碱提取法、热水浸提法。
通过研究不同提取方法对枸杞多糖提取率及多糖含量的影响，为枸杞多糖的质量研究奠定了基础。
关键词：枸杞多糖；提取率；多糖含量中图分类号：R284.2 文献标识码：AEffects of Different Extraction Methods on the Extraction Rate and Sugar Content of Lycium Barbarum PolysaccharideLI Lingmei, ZHANG Juanjuan(College of Food and Drug, Luoyang Normal University, Henan Luoyang 471934)Abstract: Lycium barbarum polysaccharide is the main effective component, which is the standard to evaluate the quality of Lycium barbarum. Therefore, four extraction methods, hot water extraction, alkali extraction, ultrasonicextraction and microwave extraction, were used to measure the quality of Lycium barbarum by comparing its polysaccharide and sugar content. Four extraction methods were fixed ratio of material to liquid 1∶20(g ∶mL), extraction temperature 90 ℃, and extraction twice. The effects of different extraction methods on the extraction rate and sugar content of Lycium barbarum polysaccharide were compared. The results showed thatmicrowave extraction had the highest extraction rate, followed byultrasonic extraction, alkali extraction, hot water extraction; the ultrasonic extraction method had the highest sugar content, followed by microwave extraction, alkali extraction, hot water extraction. Through The effects of different extraction methods on the extraction rate and sugar content of Lycium barbarum polysaccharide, it can lay foundation for the quality of Lycium barbarum polysaccharide.Keywords: lycium barbarum polysaccharides; extraction rate; sugar content目前,评价枸杞质量的指标通常是枸杞多糖（Lycium Barbarium Polysaccharides，LBP）、甜菜碱、总糖的含量，尤其以枸杞多糖为主[1]。
枸杞多糖提取方法及两种不同产地枸杞中多糖含量的比较研究
枸杞多糖提取方法及两种不同产地枸杞中多糖含量的比较研究阿依姑丽・艾合麦提,王颖,杨晓君,韩海霞,包晓玮,朱金芳,于娜娜(新疆农业大学药学院,乌鲁木齐 830052)摘 要:采用传统提取方法和超声提取法提取来自两种不同产地的枸杞(即宁夏枸杞和新疆精河枸杞)中的有效成分枸杞多糖,对其得率和含量进行分析比较。
结果表明,以传统法提取宁夏枸杞多糖得率为7.87%,新疆精河枸杞的多糖得率为9.41%;而以超声提取法提取宁夏枸杞多糖得率为8.61%,精河枸杞的多糖得率为13.77%。
证明超声提取法提取枸杞多糖具有快速、高效、节能、不破坏提取物性状等特点,与传统提取法相比能够提高药材有效成分的利用率。
同时还表明,采用同种提取方法提取出的新疆精河枸杞的多糖得率高于宁夏枸杞。
关键词:枸杞多糖;传统提取法;超声提取法;得率中图分类号:S5671099 文献标识码:A 文章编号:1001-4330(2007)05-0724-05Study on Extraction Method and Assay of Polysaccharidesof Lycium barbarum L.from Tw o Different SourceAyiguli ・Aihemeiti ,W ANG Y ing ,Y ANG X iao -jun ,H AN Hai -xia ,BAO X iao -wei ,ZH U Jin -fang ,Y U Na -na(College o f Pharmacology ,Xinjiang Agricultural Univer sity ,Urumqi ,Xinjiang 830052,China )Abstract :The Lycium barbarum polysaccharides (LBP )were extracted by the traditional extraction method and method of ultras onic extraction and the contents and yield of the polysaccharides extracted with those tw o kinds of methods were analyzed.The result showed that ,the yield of LBP from Ningxia lyceum extracted with traditional method was 7.87%,and 9.41%from Jinghe ,X injiang Lyceum ;but the yield of LBP from Ningxia Lyceum extracted with ultras onic method was 8.61%and 13.77%from Jinghe Lyceum.The results als o showed that extraction efficiency of ultras onic extraction was higher than that of traditional extraction.The utilization ratio of active constituent of medicinal materials can be increased in com paris on with the traditional method.Also the yield of Lycium polysaccharide from Jinghe extracted with the same method w as higher than that of NingxiaLycium.K ey w ords :Lycium polysaccharide ;LBP traditional extraction method ;ultras onic extraction method ;yield枸杞属植物枸杞(Lycium barbarum L.)为多棘刺落叶小灌木,抗旱能力很强,其浆果枸杞子在《神农本草经》中引为上品,是我国传统名贵中药材,素有“红宝”美称[1],其甘寒无毒,治五内不足,味甘、淡,具有清肝、润肺、滋肾明目、益气生精,祛虚痨、强筋骨、抗癌等功效,它既含有碳水化合物、蛋白质、脂肪、胡萝卜素、核黄素、钙、磷、铁、锌,还含有多种维生素及玉蜀黍黄素[2],因而一直受到中外医学与食疗专家的高度重视。
枸杞多糖含量的准确检测
申请科研资助项目申报书项目或课题名称：枸杞多糖含量的准确检测申请单位：宁夏瑞碧枸杞产业有限公司联系者姓名：联系者电话：宁夏瑞碧枸杞产业有限公司二00八年二月一、申请单位的基本情况：宁夏瑞碧枸杞产业有限公司是由陕西方舟健康产业集团投资，以枸杞汁﹑枸杞干果﹑枸杞冻干粉﹑枸杞提取物等枸杞系列产品为主的专业供应商。
目前，公司在宁夏枸杞原汁产业中属龙头企业。
公司注册资本1800万，员工63人，与南梁农场等通过有机认证的基地建立了稳定的鲜果原料供应关系，并建成目前国内最大的枸杞原汁加工线，每榨季产量可达2000吨以上。
公司严抓质量管理，已通过ISO 认证﹑HACCP认证及Kosher认证。
为加强公司技术力量，我们先后与中国科学院上海有机化学研究所、陕西师范大学生命科学院﹑北京食品研究所、西北大学生命科学学院、西安理工大学理学院、第四军医大学等建立了密切的合作关系，在科研开发上不断精进，以增强公司核心竞争力。
二、课题研究的目的及意义：国内一些大专院校科研单位的科技工作者近几年来从事宁夏枸杞有效成份分析，认为枸杞多糖是宁夏枸杞最主要的生物活性物质。
科学试验证明，枸杞里的一种特有成份能使P—24抗体测值增加，促进T淋巴细胞增高。
所谓的一种特有成份就是指枸杞多糖(LBP)。
研究表明，枸杞多糖是由阿拉伯糖、鼠李糖、术糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖及半乳糖醛酸组成的酸性杂多糖的糖链与蛋白质的肽链以共价键的形式结合的含肽链多糖，分子量均大于1万。
北京医科大学、华中农业大学和中科院上海有机化学研究所等单位对枸杞多糖进行了分离纯化，并且对分子量、结构、基本性质进行了深入的研究工作，但在枸杞多糖的准确测量方面研究很少，这为我们的市场开拓带来了很多困惑。
当客户要我们提供枸杞的活性成分以及检测方法时，我们并不能拿出令客户信服的数据，这在重视科学数据而又对枸杞知之甚少的欧美市场尤为明显，严重影响了我们扩大欧美市场。
因此本课题力图回答这些问题：得到枸杞多糖样品，用药理学实验证明我们所分离的枸杞多糖的活性，在此基础上建立枸杞多糖的准确检测方法。
枸杞多糖含量测定方法的比较分析
作用 ，并 促进肝细胞再生 。 枸杞 多糖 由于具有 重要 的生 物学功 能 ，因此 ，多
糖 的检测 方法也备 受关注 。付 艳丽等 针对枸 杞多糖 含量进行研究 ，于室温下反应 １５ ｍｉｎ后 ，静 置于室温 ， 在 ４９０ ｎｍ波长处测定枸杞 多糖含量 ；《中国药典》中枸 杞多糖含量 的测定方法 是 ：于 ４Ｏ℃水浴 中保 温 １５ ｍｉｎ 后 ，静置 至室温后 ，在 ４９０ ｎｍ波长进行检 测 ；任一 平【 ｏｌ 对香菇 多糖产 品简易预处理 ，选用硫 酸钠溶液 作为 流 动相 ，在示 差折 光检测 器下 检 测 ，选 择 右旋 糖酐 为标 准物质 ，用外标法完成 了香菇 ｏｏｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍ ｅｎｔ
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－６５２１．２０１６．１１．０３３
２０１６年 ６月 第 ３７卷第 １１期
枸杞 多糖含量测定 方法 的 比较分析
李 良，金文娟 （武汉 天龙黄 鹤楼酒 业有限公司 ，湖北 武汉 ４３００７０）
ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅ ａｄｖａｎｔａｇｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅ ｃｏｒ— ｒｅｌａｔｉｏｎ ｃｏｅｆ ｉ ｃｉｅｎｔ ｗｅｒｅ ０．９３０ ９，０．９９１ ８，０．９９６ ８，ＲＳＤ ｏｆｌｉｇｈｔ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｖａｌｕｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｗｅｒｅ １０．９５ ％ ，２．１３％ ， ０．１ ３％ ：ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｒｒｏｒ ｏｆ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ｏｆ ｍｅｔｈｏｄ １１１ ｗａｓ ｓｍａｌｌ，ｗｈｉｃｈ ｓｈｏｗｅｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ．Ｉｔ ｍｅａｎｔ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｌｌ１ ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ． Ｋ ｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍ ｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ；ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ
紫外分光光度法测定枸杞中多糖含量
紫外分光光度法测定枸杞中多糖含量摘要:目的：提供一种测定枸杞制品中功效成分多糖的方法，同时合理筛选枸杞品种。
方法：运用苯酚-硫酸紫外分光光度法测定3种枸杞品种中多糖的含量。
结果：宁夏枸杞中的多糖含量为4.01%，新疆枸杞中的多糖含量为3.85%，青海枸杞中的多糖含量为4.01%；同时发现使用紫外分光光度法测定精密度好、重复性好、方法简便。
结论：宁夏枸杞中多糖含量明显高于新疆枸杞和青海枸杞，差异达到显著水平；紫外分光光度法是一种测定枸杞多糖质量分数的理想方法，亦可为其它类多糖质量分数的测定提供依据。
关键词：苯酚-硫酸；紫外分光光度法；枸杞；多糖枸杞(Lycium Barbrum L.)属茄科枸杞，为落叶灌木植物干燥成熟果实。
近年的医学研究表明，枸杞含有多种营养成分和微量元素，其有效成分枸杞多糖(LBP)具有广泛的药理学作用，可促进造血、降血脂、保肝及治疗神经衰弱等。
枸杞多糖(LBP)是由多个单糖或衍生物聚合而成的大分子活性化合物，是枸杞生物学作用的主要有效成分之一，其结构按LBP-Ⅰ、LBP-Ⅱ、LBP-Ⅲ、LBP-Ⅳ的顺序水溶性依次递减，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。
枸杞多糖对机体具有非特异性免疫调解功能，可调节机体免疫力、抑制肿瘤生长和细胞突变、延缓衰老、提高适应能力，并具有抗疲劳和加速消除疲劳的作用，已成为保健食品中的一种重要功能性添加剂，显示出良好的应用前景。
为了进一步开发新疆黑枸杞的药用价值，本文采用紫外分光光度法测定了几种枸杞叶中的多糖含量。
1 材料与方法1.1 原理多糖在80%乙醇溶液中沉淀，与单糖和低聚糖及甙类物质分离。
沉淀用水溶解后，再用碱性二阶铜试剂选择性地从其它高分子物质中沉淀出具有葡聚糖结构的多糖。
苯酚-硫酸可与其中的多糖起显色反应，生成橙黄色化合物，可于485nm 处比色，定量。
1.2 材料与仪器TU-1901型紫外-可见分光光度计(北京普析通用)、岛津CS-9301PC薄层扫描仪、定量毛细管(美国Dummond)、手动点样仪(CAMAGIII型)、硅胶G(青岛海洋化工集团公司)自制板；D-无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所生产，批号110833200302)；试剂：所用试剂均为分析纯。
枸杞子水提物中多糖含量的测定
312 讨 论
酚法显色测出多糖相当于葡萄糖的含量 ,这样可避免
(1) 苯酚2硫酸比色法测定枸杞多糖的原理是枸 直接用葡萄糖作为标准引起的系统误差 ,结果更准
杞多糖成分在浓 H2 SO4 的作用下 ,水解成单糖 ,并迅 速脱水生成糠醛衍生物 ,与苯酚缩合成有色化合物 , 再用分光光度法测定其枸杞多糖含量 。本法操作简
3 结果与讨论
311 精制枸杞多糖的得率
250 g 干燥的枸杞子按 211 方法制得的精制枸杞
多糖 5153 g ,得率 2121 % ( n = 3) 。
31112 换算因子
f = 3126 ( n = 5) 。
31113 枸杞子水提物的得率
50 g 枸杞子制得红色枸杞子水提物 34126 g ,得
吸光度 ,计算多糖的含量 。 216 稳定性试验
精密 吸 取 按 21411 方 法 制 备 的 样 品 溶 液 110 mL ,补水至 210 mL ,每隔 30 min 测定 1 次吸光度 ,连 续 4 h 考察其稳定性 。 217 回收率测定
精密称取精制的枸杞多糖 10 mg , 加水定容至 100 mL ,摇匀 ,得 100 μg/ mL 的多糖精品溶液 ,精密 吸取 6 份该溶液 015 mL ,并分别加入 21211 中配制 的葡萄糖贮备液 011 、012 、013 、014 、015 、016 mL ,补 水至 210 mL ,按照 21213 方法测定吸光度 ,计算加样 回收率 。
1 罗 琼 ,李瑾玮 ,张声华. 枸杞多糖 - X 组分对糖尿病家兔 降血糖的效果[J ] . 营养学报 ,1997 ,19 (2) :173～177
2 罗 琼 ,阎 俊 ,李瑾玮等. 枸杞及其枸杞多糖对家兔血脂 的影响[J ] . 营养学报 ,1997 ,19 (4) :415～417
枸杞多糖的提取分离纯化
枸杞多糖的分离
酸性亚组分的分离 取WLBP4.0g溶于75mL蒸 馏水中，加入50mL十六烷基三甲基溴化铵，过 夜沉淀12h，然后以4000r/min、4℃离心 20min，收集沉淀。沉淀用10%NaCl溶解后， 加入3倍体积95%乙醇，产生沉淀，4000r/min、 4℃离心20min收集沉淀，蒸馏水溶解并透析3天， 冻干得WLBP。
ห้องสมุดไป่ตู้
材料预处理及提取方法 Sevage法脱蛋白 枸杞多糖的分离 枸杞多糖的纯化 成分分析结果
材料预处理
(1)粉碎 将枸杞子洗净晾干，再放入烘箱供至干透(烘箱温 度50℃，避免温度过高使之焦糊)。烘干后取出，冷却至 室温，然后用粉碎机将干燥的枸杞子粉碎，备用。 (2)脱脂 将粉碎的枸杞粉末置于大烧杯中，加入4倍体积 95%的乙醇，60℃水浴加热搅拌脱脂2小时，滤去乙醇， 重复脱脂3次，收集滤渣，晾干，装袋备用。
…
枸杞多糖的纯化 枸杞多糖的纯化釆用SephadexG-150色 谱柱层析法纯化多糖样品。填料为 SephadexG-150葡聚糖凝胶，层析柱规 格为2.5×50cm，用蒸馏水洗脱。选取冻 干后的WLBP组分40mg溶于5mL蒸馏水中， 上SephadexG-150色谱柱，用蒸馏水洗 脱，自动收集每管3mL。用苯酚-硫酸法检 测多糖含量，合并出峰管，浓缩，冻干， 得纯化多糖WLBP-I、WLBP-II
同学们好
枸杞多糖的提取、分离纯化及其 构成
枸杞
果实含枸杞多糖，甜菜碱、阿托品、天仙子 胺；另含玉蜀黍黄素、酸浆红素、隐黄质、 东莨菪、胡萝卜素、核黄素、烟酸、维生 素B1、 B2及C． 有增强非特异性免疫作用 、延缓衰老作用 、 抗肝损伤 、降血糖 、补肾功能 、保肝功 能 、抗脂肪肝作用 、对血压的作用 、抗 疲劳作用 、抗肿瘤作用 。
枸杞多糖的提取与含量测定
2022/1/18
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实验原理
易溶于水的多糖的提取 水提取多糖中的多糖大多是中性多糖。用水作溶剂
来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提 。
结合多糖的提取 结合多糖主要指黏多糖。以新鲜组织或丙酮脱水的组
织为原料，可用水或盐溶液提取部分多糖。但是，以为大 多数的黏多糖是与蛋白质结合的，需要用酶降解蛋白质部 分或用碱使多糖和蛋白质之间的糖肽键断裂，以促进黏多 糖在提取时的溶解。在碱性提取的同时用蛋白酶处理组织 ，可将提取过程简化。提取液中存在的蛋白质可用普通蛋 白质沉淀剂沉淀，也可用其他方法进行多糖的提纯。
或羟甲基糠醛后，与蒽酮（C14H100）脱水缩合，形成糠 醛的衍生物，成蓝绿色。该物质在620nm处有最大吸收， 在150ug/ml范围内，其颜色深浅可与可溶性糖含量成正 比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量30ug左右就可进 行测定，所以可作为微量测糖含量只用。一般样品少的 情况下，采用这一方法比较合适。
在进行620nm波长的吸光度测量时，一定要进行比色池的校准， 否则将会带来较大的误差，比色池的校准，直接用标准曲线绘制时 第一组试剂进行校准即可，且必须在实验开始前进行校准，及时交 换吸光度不同的比色池，用吸光度小的比色池做100%吸光度的校准 池。
2022/1/18
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2022/1/18
谢谢！
在进行枸杞多糖的提取提纯的时候，一定要注意沉淀枸杞多糖所 需乙醇的浓度，切不可加入无水乙醇而没有意识到乙醇浓度的降 低，引起提取枸杞多糖的量的降低。
2022/1/18
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注意事项
■ 在Sevag法中，可以通过配合蛋白质酶消化法达到更好的提纯效 果。
在进行枸杞多糖的定量测量的时候，一定要注意葡萄糖标准溶液 以及样品的用量，否则会造成较大误差，标准曲线的绘制中要用线 性回归进行拟合。
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注意事项
■ 在Sevag法中，可以通过配合蛋白质酶消化法达到更好的提纯效 果。
在进行枸杞多糖的定量测量的时候，一定要注意葡萄糖标准溶液 以及样品的用量，否则会造成较大误差，标准曲线的绘制中要用线 性回归进行拟合。
实验原理
易溶于水的多糖的提取 水提取多糖中的多糖大多是中性多糖。用水作溶剂来
提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。
结合多糖的提取 结合多糖主要指黏多糖。以新鲜组织或丙酮脱水的组
织为原料，可用水或盐溶液提取部分多糖。但是，以为大 多数的黏多糖是与蛋白质结合的，需要用酶降解蛋白质部 分或用碱使多糖和蛋白质之间的糖肽键断裂，以促进黏多 糖在提取时的溶解。在碱性提取的同时用蛋白酶处理组织， 可将提取过程简化。提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白 质沉淀剂沉淀，也可用其他方法进行多糖的提纯。
理是利用蛋白质变性沉淀而多糖不沉淀出去蛋白质。将样 品提取液与Sevag试剂按照5:1的比例混合，剧烈震荡后离 心除去变性的蛋白质，反复多次至蛋白质除尽为止。该方 法较为温和，配合蛋白质水解酶消化法使用效果更佳。
实验原理
蒽酮-硫酸比色法进行多糖的含量测定 糖类在较高温度下可被硫酸作用而脱水生成糠醛
实验试剂仪器
实验试剂
干燥枸杞子、葡萄糖标准溶液、蒽酮、浓硫酸、95% 乙醇、无水乙醇、三氯甲烷‐正丁醇（4:1）。
实验仪器
分析天平、托盘天平、离心机（大）、离心机（小）、 水浴锅、电炉、漩涡震荡仪、真空烘箱、分光光度计、 800ml烧杯、100ml烧杯、离心管、分液漏斗、50ml容量瓶、 玻璃棒、量筒、加盖试管若干。
实验原理
多糖的提取液一般浓度较低，需在提取后对提取液进 行浓缩。浓缩的方法可根据性质确定，如对热比较稳定的 多糖，可用加热蒸发或减压蒸出水分法；对于相对分子质 量大的多糖可用超滤法。向多糖溶液中加入一定量的与水 混溶的有机溶剂（如乙醇）可得到粗多糖的沉淀物。
Sevag法 Sevag法是自多糖中去除蛋白质的最缓和的方法，原
或羟甲基糠醛后，与蒽酮（C14H100）脱水缩合，形成 糠醛的衍生物，成蓝绿色。该物质在620nm处有最大吸 收，在150ug/ml范围内，其颜色深浅可与可溶性糖含量 成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量30ug左右 就可进行测定，所以可作为微量测糖含量只用。一般样 品少的情况下，采用这一方法比较合适。
枸杞多糖的含量计算
根据已经查得的数值，可以进行一下计算
c（样品1）= （0.02367 mg / 0.5 ml）* 50 ml / 21.4 mg * 100% = 11.06%
c（样品2）= （0.04735 mg / 1.0 ml）* 50 ml / 21.4 mg * 100% = 11.06%
实验内容
标准曲线的绘制
取干燥试管6 支，按下表数据配置一系列不同浓度的葡萄糖溶液。
在620nm波长下以第一管为空白试验，迅速测量吸光值，以葡 萄糖含量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘出标准曲线。
实验内容
枸杞多糖的含量测定
精密称定20mg 多糖粗品，溶于50ml 蒸馏水中，制成样品液。 分别吸取0.5ml，1ml 多糖溶液至试管中，加蒸馏水至总体积为 1ml。冰浴中冷却，再加入4ml 蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min， 取出后自来水冷却，620nm 比色，其他条件与作标准曲线同。 测得吸光度值由标准曲线查出样品液的糖含量。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
实验内容
提取
粗略称取20g 枸杞于，粉碎后放入800ml 烧杯中，加500ml 蒸馏水， 热水提取2h。过滤，加入1/4 体积的三氯甲烷‐正丁醇（4:1），剧 烈振摇15min，3000rpm 离心25min，弃去中间变性蛋白和氯仿层，留 用上清液。上清液于80℃水浴搅拌浓缩至50ml。在搅拌状态，将浓缩 液加入3 倍体积95%乙醇中，室温静置1h 左右，3000rpm 离心10min， 固形物用95% 乙醇洗涤，3000rpm离心10min,然后用无水乙醇洗涤， 3000rpm离心10min, 真空干燥, 得LBP 粗品。
实验数据记录与处理
标准曲线的绘制
以下表格是不同浓度的标准葡萄糖溶液吸光度的实验数据。
即可得到如下标准曲线。
实验数据记录与处理
实验数据记录与处理
枸杞多糖的含量测定
根据标准曲线可以查得枸杞多糖样液吸光度的数值。
样液1含0.02367mg枸杞多糖， 样液2含0.04735mg枸杞多糖。
实验数据记录与处理
枸杞多糖的提取与含量测定
实验目的
1、掌握提取多糖的原理和方法； 2、掌握多糖的纯化原理及方法； 3、掌握多糖含量测定的原理及方法。
实验原理
多糖的提取方法 生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多
糖等等3大类。多糖的提取首先要根据多糖的存在形式 及提取部位，决定在提取之前是否要做预处理。动物多 糖和微生物多糖多有脂质包围，一般提取时需要加入丙 酮、乙醚、乙醇或是乙酸乙酯的混合液进行回流脱脂， 释放多糖。植物多糖提取时应该注意一些含脂较高的根、 茎、叶、花、果及种子类，在提取前应先用低极性的有 机溶剂对原料进行脱脂预处理，目前多糖的提取方法主 要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等等。
注意事项
蒽酮-浓硫酸比色法的注意事项：该法的特点是几乎可以测定所 有的碳水化合物，所以蒽酮法测出的碳水化合物的含量，实际上 是溶液中可溶性碳水化合物的总量。不同的糖类和蒽酮试剂显色 的深度不同，果糖最深，葡萄糖、半乳糖、甘露糖和五碳糖依次 降低，因此测定糖的混合物的时候，常常因不同糖类的比例不同 造成误差，但是测定单一糖类则可以避免此类误差。
在进行620nm波长的吸光度测量时，一定要进行比色池的校准， 否则将会带来较大的误差，比色池的校准，直接用标准曲线绘制时 第一组试剂进行校准即可，且必须在实验开始前进行校准，及时交 换吸光度不同的比色池，用吸光度小的比色池做100%吸光度的校准 池。
谢谢！
所有实验报告内容。