722分光光度计

（10）把比色皿定位装置的拉杆轻轻地拉出一格（注意应使 滑板处在定位槽中），使试样溶液进入光路，这时电表指 针偏离零位。 （11） 转动读数电位器旋钮，重新使电表指针移到“ 0 ”位 上，此时刻度盘上的读数即为试样的透光率和相应的光吸 收值。 （12） 取得读数后，应即时将暗电流闸门重新关上，以保 护光电管，防止受光时间过长而疲劳。
1. 使用方法：
（1）打开电源开关之前,检查一下试样室是 否放置遮光物。 （2）试样槽置“参考”位置。 （3）接电源开关（如果波长工作在200～ 360 nm时需按氘灯触发按钮）。 显示器显示"754"后，数显：“100.0”， 则表示仪器已通过自检程序。
（4）仪器预热30 min后开始测试。 （5）数显为100.0后，稳定2～3s，即可把 试样槽置“样品”位置进行测试。待第一 个数据打印完毕后，再将试样槽置第二个 “样品”位置测试。 （1）每当需要调换波长时，必须把试样槽置 “参考”位置，重新调满度。
(6) 盖上样品室盖，将参比溶液比色皿置于光路，调节透过 率“100%T”旋钮，使数字显示为“100.0T”（如果显示不 到100%T，则可适当增加灵敏度的档数，同时应重复 “3”，调整仪器的“00.0”） （7）将被测溶液置于光路中，数字表上直接读出被测溶液 的透过率（T）值。 （8）吸光度A百度文库测量，参照“3”“6”调整仪器的“00.0”和 “100.0”，将选择开关置于A 旋动吸光度调零旋钮，使得 数字显示为.000，然后移入被测溶液，显示值即为试样的 吸光度A值。（9）浓度C的测量，选择开关由A旋至C， 将已标定浓度的溶液移入光路，调节浓度按钮，使得数字 显示为标定值，将被测溶液移入光路，即可读出相应的浓 度。
• 用公式表示为： • T = I／I0 • 则 A = lg（1／T） =Kbc • 式中 T — 透光率 • I — 透过光强度 • I0 — 入射光强度 • A — 吸光度 • K — 比例常数 • b — 溶液的厚度 • c — 溶液的浓度
2、植物学实验室常用类型
（一）722型分光光度计 722型分光光度计能在近紫外、可见光 谱区域内对样品物质作定性和定量的分析。 其色散元件为衍射光栅，波长精度比721好， 且数字显示读数。
（二）751G 型分光光度计
• 可测定各种物质在紫外区可见光和近红外 区的吸收光谱，供实验室进行各种物质的 定性及定量的分析。
1. 使用方法 包括以下几点：
（1）检查电源电压是否与仪器所要求的电压相符，然后再 插上电源插头。 （2）根据测定所要求的波长选择光源灯。在波长 320 ～ 1 000nm 范围内用钨灯作为光源。在波长 200 ～ 320nm 范围内，用氢弧灯作为光源。拨动光源选择杆使所需要的 光源灯进入光路。根据需要可以把滤光片推入光路，以减 少杂散光，但通常情况下没有这种必要。把波长刻度旋到 所要的波长上。
（6）把选择开关拨到“校正”位置上。调节暗电流使电表 指针指到“ 0 ”。为了得到较高的准确度，每测量一次都 应校正一次暗电流。 （7）在一般情况下，旋转灵敏度旋钮从左边停止位置顺时 针转动三圈左右。 （8）旋转读数钮，使刻度盘位于透光率 100 ％位置上。把 选择开关拨到“× 1 ”处，然后拉开暗电流闸门，使单色 光进入光电管。 （9）调节狭缝，使电表指针接近零位。尔后再用灵敏度旋 钮细致调节，使电表指针正确地指在“ 0 ”上。
2. 注意事项 主要要注意以下 几点：
（1）在接通电源之前，应该对于仪器的安全性进行检查， 电源线接线应牢固，通地要良好，各个调节旋钮的起始位 置应该正确。 （2）电表的指针必须位于零刻线上。若指针偏离，则可用 电表上的校正螺丝进行调节。 （3）仪器底部放有 2 只干燥剂筒，用以保持仪器的干燥， 此外在仪器停止工作期间，在比色皿暗箱内，塑料仪器套 内都应放防潮硅胶袋。 （4）仪器的连续使用时间不应超过 2 h。使用后必须间歇 0.5h，才能再用。 （5）务必保持比色皿透光面的清洁。不要用手摸比色皿的 光滑的表面，更不要用毛刷刷洗比色皿，以免影响读数的 准确。
（3）检查仪器的各种开关和旋钮使之处于关闭位置。然后 再打开电源开关，使仪器预热 20 min。
（4）选择适当波长的光电管。如测定的波长在 200 ～ 625 nm 范围内，用紫敏光电管，此时应 将手柄推入。如测定的波长在 625 ～ 1 000 nm 范围，用红敏光电管，应将手柄拉出。
（5）根据波长选择比色皿。测定的波长在 350 nm 以上时，用玻璃比色皿。测定波长在 350 nm 以 下时，则需用石英比色皿。在比色皿中装好溶液， 放在暗箱内的托架上，然后把暗箱盖好。
（6）脏的比色皿可浸泡在肥皂水中，然后再用自 来水和蒸馏水冲洗干净。倒置晾干备用。 （7）每台仪器所配套的比色皿不能与其它仪器上 的比色皿单个调换。 （8）如果大幅度改变测试波长时，需等数分钟后 才能正常工作（因波长由长波向短波或短波向长 波移动时，光能量变化急剧，光电管受光后响应 较慢，需一段光响应平衡时间）。
722型分光光度计
1.数字显示器；2.吸光度调零旋钮；3.选择开关；4.吸光度调斜率电位器；5.浓度 旋钮；6.光源室；7.电源开关；8.波长手轮；9.波长刻度窗；10.试样架拉手； 11.100%T旋钮；12. 0%T旋钮；13.灵敏度调节旋钮；14.干燥器
1. 使用方法
（1）将灵敏度旋钮调整“1”档（放大倍率最 小）。 （2）开启电源，指示灯亮，仪器预热20分 钟，选择开关置于“T”。 （3）打开试样室盖（光门自动关闭），调节 “0%T”旋钮，使数字显示为“00.0”。 （4）将装有溶液的比色皿放置比色架中。 （5）旋动仪器波长手轮，把测试所需的波长 调节至刻度线处。
（13） 在读取透光率和相应消光值的数值时，若选择开关 在“× 1 ”处，透光率范围为 0 ％～ 100 ％，相应消光值 范围由∞～0 。当透光率小于 10 ％时，则可把选择开关 拨到“× 0.1 ”位置，此时所读取的透光率数值，应以 10 除之。而所读出的消光值应加上 1.0 。 （14） 需要用同一标准溶液测定几个样品时，可重复以上 的操作。
分光光度计
南京师范大学 生命科学学院
1、分光光度计的原理
• 分光光度计是根据物质对光的选择性吸收 来测量微量物质浓度的仪器，具有灵敏度、 准确度高，操作方便、快速等特点。其工 作原理为光的吸收定律（朗伯—比尔定 律）：一束单色光(强度为I0)通过某吸光物 质的溶液时，其光能量的被吸收与该物质 浓度的关系符合朗伯—比尔定律，即当入 射光波长、温度和溶液的厚度一定时，吸 光度与溶液的浓度成正比。
（15） 测定完后，应把各个旋钮和开关复原或关闭，拔下 插销，并把仪器罩好。
（三）754型荧光分光光度计
• 一种可供在紫外到红外区(200-1000nm)测 量吸收光谱的较高级分光光度计。此仪器 的光学部分与721型分光光度计相类似，但 它采用石英棱镜作单色光器，有钨丝灯和 氢弧灯两种光源.754型分光光度计的电学 部分较为复杂。光电流经过放大线路加以 放大后,此时得到的样品信号变为与透光率 成比例的值。其后，调零，变换对数，浓 度计算，打印数据等均由微处理机进行。