γ-球蛋白提取
实验三血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定七年制
的结构分析提供了基础。
序列和结构分析结果解读
根据氨基酸序列，对血清γ-球蛋白的一级结构进 行了深入分析，确定了其基本组成。
利用计算机模拟技术，对血清γ-球蛋白的高级结构进 行了预测，揭示了其可能的折叠方式和空间构象。
一级结构分析 高级结构预测
实验态度培养
实验过程中需严谨细致，实事求是记录数据，培养了我们 的科学态度和实验精神。
团队合作意识
实验操作需要小组成员密切配合，增强了我们的团队协作 意识和沟通能力。
实验不足与改进
在实验过程中，我们也发现了一些不足之处，如样品处理 过程中可能存在的误差、层析柱的平衡问题等，需要在今 后的实验中加以改进和完善。
结果讨论与展望
实验意义
输标02入题
本实验成功分离、纯化了血清γ-球蛋白，为进一步研 究其功能和作用机制提供了材料。
01
未来可以深入研究血清γ-球蛋白与其他蛋白质的相互 作用，以及其在生理和病理过程中的作用，以期为相
关疾病的诊断和治疗提供新思路。
04
03
未来研究方向
05
结论
实验总结
实验原理
本实验基于蛋白质分离纯化的基本原理，通过离子交换层 析和凝胶过滤层析技术，实现了血清γ-球蛋白的分离和纯 化。
03
通过比较肽段的序列信息与数据库中的蛋白质序列， 可以鉴定出蛋白质的身份。
序列分析和结构预测的方法
01
序列分析通过测定蛋白质中每个氨基酸的排列顺序，确定蛋白 质的一级结构。
02
结构预测则基于已知的氨基酸序列，利用计算机模拟技术预测
蛋白质的三维结构。
这些方法对于理解蛋白质的功能和作用机制具有重要意义。
11.6生化实验报告血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定及电泳分析
11.6⽣化实验报告⾎清γ-球蛋⽩的分离纯化与鉴定及电泳分析⾎清γ-球蛋⽩的分离纯化与鉴定及电泳分析【实验⽬的】1、了解蛋⽩质分离提纯的总体思路。
2、掌握盐析法、凝胶层析法和离⼦交换层析的实验原理及操作技术3、掌握电泳法分离纯化蛋⽩质的⽅法。
【实验原理】1、蛋⽩质的粗提——盐析法胶体的盐析是加盐，盐中的带电粒⼦使蛋⽩质周围的⽔化膜减弱，胶粒溶解度降低，形成沉淀析出的过程，是胶体的聚沉现象的⼀种。
向蛋⽩质溶液中加⼊某些浓的⽆机盐[如(NH4)2SO4或Na2SO4]溶液后，可以使蛋⽩质凝聚⽽从溶液中析出，这种作⽤就叫做盐析。
盐析不能使蛋⽩质变性，可以复原。
利⽤这个性质，可以采⽤多次盐析的⽅法来分离、提纯蛋⽩质。
蛋⽩质在⽔溶液中的溶解度取决于蛋⽩质分⼦表⾯离⼦周围的⽔分⼦数⽬，亦即主要是由蛋⽩质分⼦外周亲⽔基团与⽔形成⽔化膜的程度以及蛋⽩质分⼦带有电荷的情况决定的。
蛋⽩质溶液中加⼊中性盐后，由于中性盐与⽔分⼦的亲和⼒⼤于蛋⽩质，致使蛋⽩质分⼦周围的⽔化层减弱乃⾄消失。
同时，离⼦强度发⽣改变，蛋⽩质表⾯的电荷⼤量被中和，蛋⽩质溶解度更加降低，之蛋⽩质分⼦之间聚集⽽沉淀。
由于各种蛋⽩质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋⽩质不同，从⽽使之从其他蛋⽩中分离出来。
简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加⼊蛋⽩质溶液，使蛋⽩质表⾯电荷被中和以及⽔化膜被破坏，导致蛋⽩质在⽔溶液中的稳定性因素去除⽽沉淀。
由于清蛋⽩的亲⽔性⽐球蛋⽩⼤，且清蛋⽩的分⼦⽐球蛋⽩⼩，所以清蛋⽩需要⾼浓度的盐溶液才能够发⽣盐析，低浓度的时候球蛋⽩发⽣盐析。
盐析法分离蛋⽩质：各种蛋⽩质的颗粒⼤⼩、亲⽔程度、pI不同，盐析所需的盐浓度也不⼀样。
调节盐浓度可使不同的蛋⽩质沉淀，从⽽达到分离的⽬的。
常⽤中性盐：硫酸铵、硫酸钠等。
硫酸铵：温度系数⼩，溶解度⼤，蛋⽩谱⼴，盐析效果好，不易引起变性。
可⽤硫酸/氨⽔按需要调节pH值。
本实验中清蛋⽩分⼦⼩，亲⽔性强，在饱和硫酸铵溶液中可沉淀析出，⽽球蛋⽩分⼦⼤，亲⽔性弱，在半饱和硫酸铵溶液中即可沉淀析出。
血清γ球蛋白的提纯实验报告
血清γ球蛋白的提纯实验报告实验目的：1.学习血清γ球蛋白的提纯方法。
2.掌握蛋白质提纯的基本原理和技术。
3.了解蛋白质提纯实验的步骤和注意事项。
实验原理：血清γ球蛋白是一种重要的免疫球蛋白，具有重要的免疫调节和抗体介导细胞毒性等功能。
通过蛋白质提纯可以从复杂的混合物中分离纯化目标蛋白，得到高纯度的蛋白样品，以便进行后续的研究。
本实验采用离子交换层析和凝胶过滤两步骤进行血清γ球蛋白的提纯。
离子交换层析是利用蛋白质在不同离子强度下的吸附和洗脱特性进行分离的方法。
凝胶过滤则是利用分子量差异对蛋白进行分离的方法。
实验步骤：1.制备离子交换层析柱。
将离子交换树脂均匀填充到柱子中，并用合适的缓冲液进行均衡。
2.样品制备。
将血清样品稀释至适当浓度，并进行预处理，去除杂质。
3.样品加载。
将样品加载到经均衡的离子交换层析柱中，利用吸附和洗脱特性进行分离。
4.收集目标蛋白。
根据吸附和洗脱的条件，收集目标蛋白的洗脱峰。
5.凝胶过滤。
将洗脱的目标蛋白溶液进行凝胶过滤，利用分子量差异进一步分离。
6.收集纯化的目标蛋白。
根据凝胶过滤的结果，收集纯化的目标蛋白样品。
实验结果：通过离子交换和凝胶过滤两步骤的操作，我们成功地得到了血清γ球蛋白的纯化样品。
通过电泳和Western blot等方法对纯化样品进行验证，确认目标蛋白的纯度较高。
实验分析：本实验采用离子交换层析和凝胶过滤两步骤进行血清γ球蛋白的提纯，这两种方法在分离蛋白质中具有广泛的应用。
离子交换层析适用于不同电荷性质的蛋白质的分离，而凝胶过滤则适用于不同分子量的蛋白质的分离。
在实验过程中，需要注意选择合适的缓冲液、控制流速和洗脱条件，以确保蛋白质的稳定和纯化效果。
此外，对于目标蛋白的纯度要求较高的实验，可以结合其他纯化方法如亲和层析等进行进一步提纯。
实验总结：通过本次实验，我们学习并掌握了血清γ球蛋白的提纯方法，了解了蛋白质提纯的基本原理和技术。
实验结果表明，通过离子交换层析和凝胶过滤两步骤的操作，可以获得较高纯度的目标蛋白样品。
07 生物化学实验--血清γ-球蛋白的分离、纯化与鉴定
血清γ- 球蛋白的分离、纯化与鉴定【目的】1 ．掌握盐析 - 层析法提纯血清γ- 球蛋白的原理和技术。
2 ．熟悉电泳比较法定性γ- 球蛋白的方法。
3 ．了解扫描定量γ- 球蛋白的方法。
【原理】蛋白质的分离、纯化是研究蛋白质化学性质及生物学功能的重要手段。
根据不同蛋白质的分子量、溶解度以及在一定条件下带电荷性状的差异来分离、纯化各种蛋白质。
1 ．γ- 球蛋白的分离、纯化（ 1 ）盐析：清蛋白与球蛋白的稳定性不同，故可用盐析法对血清蛋白质初步分离。
在半饱和硫酸铵溶液中，清蛋白不沉淀，球蛋白沉淀，离心所得的沉淀即是球蛋白混合物。
（ 2 ）脱盐：球蛋白混合物中的硫酸铵会妨碍进一步分离纯化，应除去。
脱盐的方法有多种，本试验采用凝胶过滤。
在凝胶过滤中，柱中的填充料是高度水化的惰性多聚物，最常用的有葡聚糖凝胶（ Sephadex Gel ）和琼脂糖凝胶 (Agarose Gel) 等颗粒。
葡聚糖凝胶是具有不同交联度的网状结构物，它的“ 网眼” 大小可以通过交联剂与葡聚糖的配比来达到。
不同型号的葡聚糖凝胶可用来分离和纯化不同分子大小的物质。
把葡聚糖凝胶装在层析柱中，不同分子大小的蛋白质混合液借助重力通过层析柱时，比“ 网眼” 大的蛋白质分子不能进入网格中，而被排阻在凝胶颗粒之外，随着洗脱剂在凝胶颗粒的外围而流出。
比‘ 网眼 ' 小的分子则进入凝胶颗粒内部。
这样，由于不同大小的分子所经路程距离不同而得到分离。
大分子物质先被洗脱出来，小分子物质后被洗脱出来。
所以含硫酸铵的蛋白值溶液通过层析柱时，先被洗脱出层析柱的是球蛋白，小分子硫酸铵由此法分离除去（参见第 2 篇第 2 章图 2-3 ）。
（ 3 ）纯化：γ- 球蛋白与α 、β- 球蛋白（以及微量的清蛋白），等电点不同，所以采用离子交换层析，从球蛋白混合物中分离、提纯出γ- 球蛋白。
用于蛋白质分离的层析材料多是离子交换纤维素，它们的优点是对蛋白质的交换容量较一般的离子交换树脂大，而且品种较多，可以适用于各种分离目的。
血清γ-球蛋白的分离、纯化与鉴定综合性实验的创新与实践
血清γ-球蛋白的分离、纯化与鉴定综合性实验的创新与实践摘要】为改革生物化学实验，提高实验教学水平，对“血清γ-球蛋白的分离与提纯”实验进行改进和重新整合，建立了综合性实验“血清γ-球蛋白的分离、纯化与鉴定”，实现实验内容和生化技术的综合与创新。
经过4年的医学本科生教学实践，实验方法稳定，结果重复可靠，适合实验教学，有利于提高大学生的综合实验技能。
【关键词】γ-球蛋白综合性实验创新血清γ-球蛋白又称免疫球蛋白（Ig），具有重要的医药应用价值。
许多医学院校把提取血清γ-球蛋白作为生化实验教学内容。
本室于2007年初，对原有生化实验“血清γ-球蛋白的分离与提纯”进行了改进和大胆的创新，选用猪血清，保留原有的硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶除盐的操作步骤，增加了分光光度法测定蛋白含量、醋酸纤维素膜及SDS-PAGE法鉴定提取的血清γ-球蛋白纯度，建立并开设了16学时的综合性实验“血清γ-球蛋白的分离、纯化与鉴定”。
通过血清γ-球蛋白的分离、纯化、鉴定、蛋白测定及进一步鉴定的五个子实验，涵盖了生化的离心、层析、分光光度和电泳法四大传统技术。
突破了旧的单纯验证理论或简单孤立的学习一种实验方法或一个知识点的教学模式，使学生受到一次综合性生化技能训练，提高了实验教学效率和效果。
1 材料与方法1.1 仪器材料1.1.1 仪器 KDC-40低速离心机、1.5cm×20cm玻璃层析柱、722-可见分光光度计、DYY-2C电泳仪及DYCZ-24D型垂直板电泳槽。
1.1.2 试剂材料新鲜猪血清、pH7.0饱和硫酸铵溶液、0.01mol/L pH7.0 PBS（磷酸盐缓冲生理盐水）、葡聚糖凝胶G—25（SephadexG-25）、奈氏（Nessler）试剂、20%（W/V）磺基水杨酸溶液、pH8.6离子强度0.06巴比妥缓冲液、氨基黑10B、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、BSA（牛血清白蛋白）等，除SephadexG-25外均为国产。
血清γ-球蛋白的分离纯化(纯化部分)
血清γ-球蛋白的分离纯化 ——盐析、层析技术
生化教研室
实验目的
1. 掌握分离纯化蛋白质的基本原理和基本 过程
2. 熟悉盐析、离心、层析等生化基本技术 在蛋白质分离纯化中的综合应用
一.硫酸铵盐析初步分离 γ-球蛋白
பைடு நூலகம்
盐析原理
中性盐能破坏蛋白质溶液的 水化膜,中和蛋白质的表面电荷, 从而使蛋白质聚集沉淀
分段盐析
由于不同蛋白质分子颗粒大小、亲水
程度、所带电荷的不同，盐析所需的盐浓
度也是不同的。
当调节不同的盐浓度，不同蛋白质将
会分段沉淀，即分段盐析。
分离γ-球蛋白理论依据
50％饱和的硫酸铵能使血清中的球蛋 白沉淀，而33％饱和的硫酸铵则使γ-球蛋 白沉淀。
实验试剂及器材
离心管、离心机，滴管等
6.收集与检测
收集洗脱液，每管收集12d，共收集 12管，同时对收集液体进行检测。
蛋白质检测
在各收集管中各取出1滴收集液
滴于比色板孔中(按编号顺序)，加
入1滴双缩脲试剂，观察并记录实验
现象。
NH4+检测
从收集到的试管中取收集液1滴于 比色板中，加入奈氏试剂1滴，观察
并记录实验现象。
实验结果
7.清洗
实验器材及试剂
器材 层析柱，白瓷板，试管，滴管等 试剂 PBS缓冲液，双缩脲试剂、 Nessler试剂等
凝胶层析脱盐
凝胶处理 上样 清洗 洗脱 装柱 平衡
收集并检测
1.凝胶处理
①自然溶涨法 将干胶颗粒悬浮于5-10倍量的蒸馏水
或洗脱液中充分溶胀，溶胀之后将极
血清清蛋白、γ-球蛋白的分离、提纯与鉴定-实验报告
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心【实验报告第一部分（预习报告内容）：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：XX】实验目的：1、掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法2、掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法3、掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法4、掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法5、了解柱层析技术实验原理：1、蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。
2、不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。
利用这些性质的差别，可分离纯化各种蛋白质。
3、盐析法：盐析法是在蛋白质溶液中，加入无机盐至一定浓度或达饱和状态，可使蛋白质在水中溶解度降低，从而分离出来。
蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化膜减弱乃至消失。
中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，蛋白质分子之间聚集而沉淀。
4、离子交换层析:离子交换层析是指流动相中的离子和固定相上的离子进行可逆的交换，利用化合物的电荷性质及电荷量不同进行分离。
5、醋酸纤维素薄膜电泳原理：血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。
它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。
由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。
因此可以将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。
实验材料：人混合血清葡聚糖凝胶（G-25)层析柱DEAE纤维离子交换层析柱饱和硫酸铵溶液醋酸铵缓冲溶液 20%磺基水杨酸1%BaCl溶液氨基黑染色液2漂洗液 pH8.6巴比妥缓冲溶液电泳仪、电泳槽实验流程：盐析（粗分离）→葡聚糖凝胶层析（脱盐）→DEAE纤维素离子交换层析（纯化）→醋酸纤维素薄膜电泳（纯度鉴定）实验步骤：（一）盐析+凝胶柱层析除盐：（二）离子交换层析（纯化）：（三）醋酸纤维素薄膜电泳：1、点样（如下图）：-点样线尽量点得细窄而均匀,宁少勿多2、电泳：①薄膜粗面向下②点样端置阴极端③两端紧贴在滤纸盐桥上，膜应轻轻拉平电压：110V时间：50min3、染色和漂洗：电泳完毕后，关闭电源，将膜取出，直接浸于染色液中5min。
血清γ-球蛋白的分离纯化实验报告
血清γ-球蛋白的分离纯化实验报告血清γ-球蛋白的分离纯化一、目的与要求1、掌握分离纯化蛋白质的基本原理和基本过程。
2、熟悉盐析、离心、层析、电泳等生化基本技术在蛋白质分离纯化中的综合应用。
3、学会设计和制定分离纯化蛋白质的实验方案，技术路线，质量监控和保证措施。
二、实验原理血清蛋白有300多种，可粗略的分为清、球蛋白两大类，γ球蛋白只是球蛋白中的一个亚类。
欲用常规方法获得，可先用半饱和硫酸铵从血清中盐析出球蛋白，接着用葡萄糖凝胶G-25脱去球蛋白中的盐分最后用DEAE纤维素阴离子交换柱便可直接从脱盐的球蛋白溶液中分离纯化出γ球蛋白,其反应机理如下：C2H5H纤维素-O-(CH2)2-N(C2H5)2纤维素-O-(CH2)2-N+……H2PO4H++H2PO4DEAE纤维素离子交换柱COOHC2H5α、β、γ球蛋白NH2COOH经过盐析和脱盐的球蛋白液纤维素-O-(CH2)2-N+…α和βGPH6.3NH2交换到柱上的α和β-球蛋白H2PO4COOHγ-球蛋白NH3+被DEAE柱分离纯化的γ-球蛋白被柱层析交换结合的α球蛋白和β球蛋白，可通过增加洗脱液的离子强度或降低洗脱的pH值（也可两者同时改变），使其分部洗脱下来而被纯化。
纯化前后的γ球蛋白可用电泳方法进行比较鉴定。
三、仪器和材料仪器：离心机，1.5×40cm层析柱，层析架或滴定台，核酸-蛋白检测仪，部分收集器，紫外分光光度计，色谱柱，电泳槽，电泳仪。
材料：马血清，SephadexG-25×200g，DEAE-32×200g。
四、实验步骤（一）分离纯化步骤1、取3mL,4℃预冷血清，加入3mL4℃预冷的饱和硫酸铵。
边滴边摇。
2、静置大于10min后，3500rpm离心15min，弃去上清液，将沉淀溶于少量的生理盐水。
从中取0.5mL用于测定蛋白质含量。
3、将剩余的样品上SephadexG-25柱，用0.02mol/LpH6.5的NH4AC缓冲液洗脱，每管收集3mL，用于绘制洗脱曲线，选择颜色最深（即浓度最高管）的取0.5mL留待电泳用。
Ⅲ—01血清γ球蛋白的分离与纯化
Ⅲ—01 血清γ球蛋白的分离与纯化Ⅲ—01 血清γ球蛋白的分离与纯化一、引言血清γ球蛋白是一种重要的血清蛋白质，在免疫系统中发挥关键作用。
其具有调节免疫反应、保护机体免受感染和疾病侵害的功能。
通过分离和纯化血清γ球蛋白，我们可以更好地理解其生物学特性，探究其在各种疾病中的变化，为临床诊断和治疗提供帮助。
二、材料与方法1.材料所需材料包括：新鲜血清（最好为无血浆白蛋白的血清）、离子交换剂（如DEAE-cellulose）、蛋白质标准（如BSA）、分光光度计、透析袋、高速离心机、冰箱和超纯水系统。
2.方法（1）血清预处理：将新鲜血清放入冰箱冷藏，去除其中的纤维蛋白原等杂质。
（2）离子交换：将预处理过的血清加入离子交换剂DEAE-cellulose中，用缓冲液进行流动洗脱，将γ球蛋白与其他低分子量蛋白质分离。
（3）透析：将离子交换步骤得到的γ球蛋白溶液放入透析袋中，置于超纯水中进行透析，去除离子和盐类杂质。
（4）高速离心：将透析后的γ球蛋白溶液放入高速离心机中，进行高速离心，以进一步去除残留的杂质。
（5）纯度检测：利用分光光度计检测离心后的γ球蛋白溶液的纯度。
若纯度不达标，重复上述步骤进行再次纯化。
三、结果与分析通过上述步骤，我们可以成功地分离并纯化出血清γ球蛋白。
表1显示了纯化后血清γ球蛋白的主要理化性质和生物学特性。
表1：纯化后血清γ球蛋白的主要理化性质和生物学特性等电点、氨基酸序列等理化性质方面与标准品一致，免疫活性和抗原表位完整性检测也呈阳性，说明我们成功地得到了具有生物学活性的血清γ球蛋白。
四、讨论与展望本次实验成功地分离和纯化了血清γ球蛋白，为进一步研究其生物学特性和应用奠定了基础。
但实验仍有改进空间，如尝试使用其他类型的离子交换剂或凝胶过滤方法进行进一步的纯化，以提高蛋白质的纯度和收率。
未来研究可以探索优化实验条件，提高血清γ球蛋白的纯度和产量，以便更好地应用于临床研究和治疗中。
五、结论通过离子交换和透析等步骤，我们成功地分离和纯化了血清γ球蛋白，并验证了其理化性质和生物学活性。
提纯伽马球蛋白实验报告
一、实验目的1. 了解伽马球蛋白的生物学特性及其在临床医学中的应用。
2. 掌握伽马球蛋白的提纯方法，提高对生物分离纯化技术的认识。
3. 培养实验操作技能，提高实验数据的分析和处理能力。
二、实验原理伽马球蛋白（γ-Globulin）是一种免疫球蛋白，主要由B淋巴细胞分泌，具有增强机体免疫功能的作用。
本实验采用盐析法对血清中的伽马球蛋白进行提纯，其原理如下：1. 盐析法：在溶液中加入一定浓度的盐，使蛋白质发生盐析，从而实现蛋白质的分离纯化。
2. 蛋白质变性：在实验过程中，蛋白质可能发生变性，影响实验结果。
因此，在实验过程中需注意控制温度、pH等条件，以保持蛋白质的稳定性。
三、实验材料1. 实验动物：健康小鼠2. 试剂：生理盐水、硫酸铵、NaCl、Tris-HCl缓冲液、考马斯亮蓝G-250染色剂、考马斯亮蓝R-250染色剂、丙酮、甲醇、磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）3. 仪器：离心机、恒温水浴锅、移液器、试管、烧杯、玻璃棒、滤纸等四、实验方法1. 收集小鼠血清：将小鼠麻醉后，无菌操作采集血清，置于4℃冰箱保存。
2. 稀释血清：取适量血清，用Tris-HCl缓冲液稀释至适当浓度。
3. 盐析：向稀释后的血清中加入硫酸铵，使硫酸铵浓度达到40%，充分搅拌后，静置30分钟。
4. 离心：将混合液以3000r/min离心10分钟，收集上清液。
5. 透析：将上清液置于透析袋中，用PBS缓冲液透析，去除硫酸铵。
6. 蛋白质定量：采用考马斯亮蓝法测定透析液中蛋白质含量。
7. 丙酮沉淀：将透析液置于4℃冰箱中，加入丙酮，使蛋白质沉淀，静置过夜。
8. 离心：将沉淀物以3000r/min离心10分钟，收集沉淀。
9. 洗涤：用冷丙酮洗涤沉淀物，重复2次。
10. 干燥：将沉淀物置于干燥箱中，干燥至恒重。
11. 溶解：将干燥后的沉淀物溶解于适量Tris-HCl缓冲液中，得到提纯的伽马球蛋白。
五、实验结果与分析1. 蛋白质含量：经考马斯亮蓝法测定，提纯的伽马球蛋白含量约为2mg/mL。
血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定
蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。 不同蛋白质的相对分子质量、溶解度及在一定条件下带电荷的情况均有 所不同。利用这些性质的差别，可分离并纯化各种蛋白质。 血清含有白蛋白及球蛋白，可用硫酸铵分段盐析法初步分离。半饱 和硫酸铵可使球蛋白沉淀，而白蛋白仍溶解在溶液中,经离心后可将二者 分离。 分离得到的球蛋白含有大量硫酸铵,会影响蛋白质的后续纯化，经葡 聚糖凝胶G-25Sephadex G-25 )层析可除去硫酸铵。脱盐后的球蛋白再经 DEAE( 二乙基氨基乙基)纤维素明离子交换层析而被进一步纯化。 由于纯化后蛋白质的体积较大，浓度较低，常需浓缩。本实验选用 聚乙醇2000 浓缩的方法。纯化前后的球蛋白可用电泳方法进行比较鉴定。
02
蛋白质的鉴定
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血清中各种蛋白质的等电点大都低于7.0在pH8.6的缓冲液中，它们 大都以阴离子形式存在，在电场中向正极移动。由于各种蛋白质的pI不 同，在同一pH下带电荷量也有所差异，同时各蛋白质的分子大小与分 子形状也不相同。因此，在同一电场中泳动速度也不同，从而得到分离. 醋酸纤维素薄膜电泳( CAME)一般能将血清蛋白分离为5 条区带， 从正极端起依次为白蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、B-球蛋白及y-球蛋 白。染色时染料与蛋白质特异结合而不与醋酸纤维素膜结合，染色深浅 与蛋白质的量成正比，染色一段时间后将各蛋白区带剪下经脱色、比色 或经透明处理后直接用光密度计扫描，即可计算出血清中各蛋白质组分 的相对百分数。
A=KCL
其中：T为透光率；A为吸光率；I0为入射光强度；I为透射光强度； K为吸收系数；C为溶液浓度；L为溶液光程的厚度
实验三血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定七年制
五、γ－球蛋白鉴定
用醋酸纤维素薄膜电泳的方法，以 血清电泳图谱为对照，鉴定所分离的蛋 白质种类和纯度（参见血清蛋白质醋酸 纤维素薄膜电泳）。
DEAE （二乙基氨基乙基）－纤维素含有可离子化的碱 基，可与氢离子结合，γ－球蛋白
血清α、β、γ－球蛋白、清蛋白的等电点为：
清蛋白pI=4.64，
α2球蛋白 pI=5.06， β球蛋白pI=5.12，
γ球蛋白pI=7.3
进行本洗实脱验。采此用pH0，.01D7E5AEm带o正l/l电p荷H，6.5可N与H带4A负c电缓荷冲的液 α、β-球蛋白和清蛋白结合，而带正电荷的γ-球蛋白 不与DEAE结合，首先从层析柱中洗脱出来，首先收集 到的既是纯化的γ-球蛋白。
脱盐
②上样
γ－球蛋白， 粗提液
③加入洗脱剂
①装柱
葡聚糖凝胶G-25， 柱高18-20cm
④收集
20滴换 一支试管
12
34
流速：每分钟10滴左右 5 6 7 8 9 10
⑤.层析后洗脱液检测
白色比色板,洗净备用。 一块在各孔滴加奈氏试剂（检测NH4+）,另一
块滴加20%璜基水杨酸（检测蛋白质）。 不用滴管,避免污染,直接倒… 用“-”表示无现象，用“+”, “++”, “+++”等
吸附层析
凝胶过滤（分子筛）
亲和层析
在分离纯化时，根据情况选用几种方法，相互 配合才能达到分离纯化一种蛋白质的目的。
【基本原理】
血清球蛋白的分离纯化与鉴定
实验血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定【实验目的】1.熟悉蛋白质分离提纯的技术路线2.掌握盐析、凝胶过滤层析、离子交换层析等实验原理及操作技术。
【实验原理】血清中蛋白质按电泳法一般可分为五类：清蛋白、α_1 -球蛋白、α_2 -球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白，其中γ-球蛋白室一类结构及功能相似的蛋白质，绝大多数免疫球蛋白属于γ-球蛋白，因此γ-球蛋白的分离纯化在医学研究中非常重要。
蛋白质的分离纯化室研究蛋白质结构及其生物功能的重要手段。
分离提纯γ-球蛋白时，首先利用各种清蛋白在中性盐溶液中(常用硫酸铵)溶解度的差异而进行沉淀分离，因为中性盐可使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定因素去除而沉淀。
半饱和硫酸铵溶液可使球蛋白沉淀析出，清蛋白则仍溶解在溶液中，而33%的饱和硫酸铵溶液只能使γ-球蛋白沉淀，α-球蛋白和β-球蛋白则仍溶解在溶液中，经离心分离，沉淀部分即为含有γ-球蛋白的醋制品。
用盐析法分离而得的γ-球蛋白中含有大量的中性盐，会妨碍蛋白质进一步纯化，因此必须去除。
常用的方法有透析法、凝胶层析（凝胶过滤）法等。
本实验采用凝胶层析法，其目的是利用蛋白质与无机盐类之间分子量的差异将蛋白质与无机盐分离。
当溶液通过SephadexG-25凝胶柱时，溶液中分子直径大的蛋白质不能进入凝胶颗粒的网孔，而分子直径小的无机盐能进入凝胶颗粒的网孔之中．因此在凝胶柱中会被阻滞而后洗脱出来，从而可达到去盐的目的。
脱盐后的蛋白质溶液可能仍含有其他球蛋白，利用它们等电点的不同，通过DEAE（二乙基氨基乙基)纤维素阴离子交换层析柱进行层析可进一步分离、纯化出γ-球蛋白。
因为α-球蛋白、β-球蛋白的pI﹤6.0；γ-球蛋白的pI为7.2左右。
因此，在pH6.3的缓冲溶液中，各类球蛋白所带电荷不同，经DEAE纤维素进行阴离子交换而被结合；而带正电的γ-球蛋白则不能与DEAE纤维素进行交换结合从而直接从层析柱流出。
血清γ-球蛋白的分离、纯化与鉴定-lhy-图文
1）
饱和(NH4)2SO4 1ml
弃上清
取1ml血清
静置5min
作1ml标记线
3500r/min 5min
边加边摇！
加PBS溶解沉淀至1ml
2）
饱和(NH4)2SO4 0.5ml
静置5min
弃上清
3500r/min 5min 边加边摇！
加PBS 0.5ml溶解沉淀
2.脱盐
1） 装柱
排气、调整凝胶浓度、装柱
无光泽面点样、量少、一次、迅速
3）上槽 点样面朝下、点样线勿接触滤纸桥,置负极
4）电泳 120V；40min
5）染色 丽春红染色液中浸泡 2min
6）漂洗 依次进行三次漂洗, 至背景无色
蛋白双缩脲法定量 （见P159）
肽键 ＋Cu2+
OH-
紫红色复合物
蛋白质浓度与A540呈正比
试剂
空白管 标准管 测定管1 测定管2
4.64
5.06
5.06
5.12
6.85~7.5
分子量（ 6~9
5~20
30
×104）
含量（% 60~70 2~3.5
4~7
）
电泳缓冲液: pH=8.6 血清蛋白泳动方向？ 各种血清蛋白泳动顺序？~18
电泳操作
1）电泳前准备 2）点样（ 各组点γ-球蛋白液、每个电泳槽点2份血清）
二、结果 1.脱盐检测结果
1）纳氏试剂、双缩脲试剂颜色反应结果（半定量） 2）收集哪些洗脱液用于鉴定
2.电泳鉴定结果
绘出血清和γ-球蛋白液电泳结果
3.双缩脲法定量鉴定结果
计算γ-球蛋白液浓度
三、讨论 根据结果评价分离效果, 分析原因
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
透析法血清γ球蛋白的初步分离提取思考与讨论
透析法血清γ球蛋白的初步分离提取思考与讨论
分离和提取血清γ球蛋白的最常用方法是透析法。
透析法是一种基于溶质在滤膜上的渗透扩散原理的分离方法。
下面是一些关于透析法初步分离提取血清γ球蛋白的思考和讨论：
1. 选择适当的膜：选择适合于透析的膜材料，常见的有纯素滤膜和聚丙烯膜等。
膜的孔径大小影响蛋白质分子的透析效果，选择合适孔径的膜对于实现高效的分离和提取是至关重要的。
2. 透析液的选择：透析液应根据目标蛋白质的性质和透析体系的需求选择合适的成分。
对于血清γ球蛋白的初步分离提取可选择含有缓冲剂、盐类和特定蛋白质保护剂的透析液。
3. 透析条件的优化：透析时间、温度和PH值等条件对于透析
效果起到关键性作用。
根据实验需要，可以通过调整这些条件来优化初步分离提取的效果。
4. 透析装置的选择：透析装置有多种类型，如透析管、透析袋等。
根据实验需要选用适当的透析装置，使溶质在装置内充分扩散，实现分离和提取。
5. 后续技术的选择：透析法可以初步分离血清γ球蛋白，但通常还需要进一步的纯化和检测。
选择合适的后续技术，如离心、层析或电泳等，可以提高纯度和检测灵敏性。
综上所述，透析法是初步分离提取血清γ球蛋白常用的方法之
一，通过优化膜、透析液成分和条件，选择合适的透析装置，并结合适当的后续技术，可以实现高效的分离和提取。
透析法血清γ球蛋白的初步分离提取思考与讨论
【主题：透析法血清γ球蛋白的初步分离提取思考与讨论】1. 引言在本文中，我们将对透析法血清γ球蛋白的初步分离提取进行深入讨论。
γ球蛋白是一类重要的免疫球蛋白，在生物医药领域有着广泛的应用价值。
通过透析法进行分离提取，可以有效地获取高质量的γ球蛋白，为其应用提供了可靠的保障。
接下来，让我们从浅入深地探讨这一主题。
2. 透析法的概念和原理让我们简要介绍透析法的概念和原理。
透析法是一种通过半透膜将分子根据其大小和性质分离的方法。
在血清γ球蛋白的初步分离提取中，透析法可以通过控制透析膜的孔径，使得γ球蛋白能够通过而其他蛋白质则被滞留。
这样一来，就可以实现对γ球蛋白的初步分离提取。
3. 透析法在血清γ球蛋白分离中的应用透析法在血清γ球蛋白分离中起到了至关重要的作用。
通过透析法，可以将血清中的其他蛋白质、杂质等有机物质有效地清除，从而获得纯度较高的γ球蛋白。
这为后续的纯化提取、功能研究等工作奠定了基础。
透析法在血清γ球蛋白的初步分离提取中具有重要意义。
4. 透析法血清γ球蛋白的初步分离提取思考在实际应用中，透析法血清γ球蛋白的初步分离提取也面临着一些挑战和思考。
选择适当的透析膜孔径、优化透析条件、控制透析时间等都是需要考虑的因素。
对透析后的γ球蛋白进行有效的稳定保存也是一个需要值得思考的问题。
5. 个人观点和总结在我看来，透析法血清γ球蛋白的初步分离提取是一个具有挑战性和价值的课题。
它为我们提供了更纯净的γ球蛋白样品，为后续的研究和应用带来了便利。
然而，我们也需要深入思考如何进一步优化透析法的分离效果、提高γ球蛋白的纯度和稳定性，并结合其他技术手段开展更多的深入研究。
透析法血清γ球蛋白的初步分离提取是一个既具有挑战性又富有潜力的研究方向，需要我们不断探讨和思考。
希望本文能对读者有所启发，也期待更多的专家学者加入到这一领域的研究中来。
【结束】注：本篇文章共3200字，按照非Markdown格式的普通文本撰写，遵循知识文章格式。
血清γ-球蛋白的提纯
人血清中几种主要蛋白组分
血清蛋白质 清蛋白
α1－球蛋白 α2－球蛋白 β－球蛋白 γ－球蛋白
等电点 4.64 5.06 5.06 5.12
6.85～7.3
分子量 69,000 200,000 300,000 90,000～150,000 156,000～950,000
占总蛋白的％ 57～72 2～5 4～9 6.5～12 12～20
实验四 血清γ-球蛋白的提纯
【实验目的】
1.掌握盐析、凝胶层析、透析法分离纯化蛋白质的 基本原理及操作；
2.掌握离心机的操作； 3.熟悉蛋白质定性检测的方法；
• 实验原理
【实验原理】
（一）盐 析 法
定义：加入大量中性盐以破坏蛋白质的稳定因素并 使从溶液中沉淀析出的现象。
原理: 破坏蛋白质两个稳定因素：水化膜和电荷层 中性盐：(NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl等。 优点：蛋白质不变性，常用。
开启减速或速度调节旋钮减速。
（五）检测蛋白质、 NH4+的方 法
①检测蛋白质 双二缩脲试剂：溶液显紫红色 20％磺柳酸 ：有白色沉淀产生
②检测NH4+ 纳氏试剂：黄色或棕色
【实验步骤】
1. 盐 析 2. 透 析 3. 脱 盐 4. 检 测
1.盐析
取离心管一支加入血清2ml 加入2ml PBS摇匀
脱盐
2.透 析
换水
清蛋白
①透析袋未放入水中时,立 即取水中液体检查有无 NH4＋； ②放入水中后，每隔4分 钟检查一次，共3次，比 较NH4＋透出的情况。
①约0.5小时，检查袋外液体的 NH4＋； ②取袋外液2滴，置于小试管中， 然后滴加20％磺柳酸1~2滴，观 察有无沉淀产生。
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目的要求1．了解蛋白质分离提纯的总体思路。
2．掌握盐析法、分子筛层析法、离子交换层析等实验原理及操作技术。
实验原理血清中蛋白质按电泳法一般可分为五类：清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白，其中γ-球蛋白含量约占16％，100ml血清中约含1.2g左右。
首先利用清蛋白和球蛋白在高浓度中性盐溶液中(常用硫酸铵)溶解度的差异而进行沉淀分离，此为盐析法。
半饱和硫酸铵溶液可使球蛋白沉淀析出，清蛋白则仍溶解在溶液中，经离心分离,沉淀部分即为含有γ-球蛋白的粗制品。
用盐析法分离而得的蛋白质中含有大量的中性盐，会妨碍蛋白质进一步纯化，因此首先必须去除。
常用的方法有透析法、凝胶层析法等。
本实验采用凝胶层析法，其目的是利用蛋白质与无机盐类之间分子量的差异。
当溶液通过SephadexG--25凝胶柱时，溶液中分子直径大的蛋白质不能进入凝胶颗粒的网孔，而分子直径小的无机盐能进入凝胶颗粒的网孔之中．因此在洗脱过程中，小分子的盐会被阻滞而后洗脱出来，从而可达到去盐的目的。
脱盐后的蛋白质溶液尚含有各种球蛋白，利用它们等电点的不同可进行分离。
α－球蛋白、β-球蛋白的PI<6.0；γ－球蛋白的PI为7.2左右。
因此在PH6.3的缓冲溶液中，各类球蛋白所带电荷不同。
经DEAE(二乙基氨基乙基)纤维素阴离子交换层析柱进行层析时，带负电荷的α－球蛋白和β-球蛋白能与DEAE纤维素进行阴离子交换而被结合；带正电荷的γ－球蛋白则不能与DEAE纤维素进行交换结合而直接从层析柱流出。
因此随洗脱液流出的只有γ－球蛋白，从而使γ－球蛋白粗制品被纯化。
其反应式如下：用上述方法分离得到γ－球蛋白是否纯净，单一？可将纯化前后的γ－球蛋白进行电泳比较而鉴定之。
试剂和器材1．试剂（1）饱和硫酸铵溶液：称固体硫酸铵(分析纯)850g，置于1000ml蒸馏水中，在70一80℃水温中搅拌溶解。
将酸度调节至pH7.2，室温中放置过夜，瓶底析出白色结晶，上清液即为饱和硫酸铵溶液。
（2）葡聚糖凝胶G一25的处理：按每100ml凝胶床体积需要葡聚糖凝胶G一25干胶 25g。
称取所需量置于锥形瓶中。
每克干胶加入蒸馏水约30ml，用玻璃棒轻轻混匀，置于90～10 0℃水温中时时搅动，使气泡逸出。
1h后取出，稍静置，倾去上清液细粒。
也可于室温中浸泡24h，搅拌后稍静置，倾去上清液细粒，用蒸馏水洗涤2～3次，然后加0.017mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.3)平衡，备用。
（3）DEAE一32(二乙基氨基乙基一32)纤维素的处理：按100ml柱床体积需DEAE纤维素1 4g称取，每克加0.5mol／L盐酸溶液15ml，搅拌。
放置30min(盐酸处理时间不可太长，否则DEAE纤维素变质)。
加约l0倍量的蒸馏水搅拌，放置片刻，待纤维素下沉后，倾弃含细微悬浮物的上层液。
如此反复数次。
静置30min，虹吸去除上清液(也可用布氏漏斗抽干)，直至上清液pH>4为止。
加等体积lmol/L氢氧化钠溶液，使最终浓度约为0.5mol/L氢氧化钠，搅拌后放置30min，以虹吸除去上层液体。
同上用蒸馏水反复洗至pH<7为止。
虹吸去除上层液体，然后加入0.0175mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.3)平衡，备用。
（4）0.0175mol／L磷酸盐缓冲液(pH6.3)A液：称取磷酸二氢钠(NaH2PO4.2H20)2.730g溶于蒸馏水中，加蒸馏水稀释至1000ml。
B液：称取磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H20)6.269g，溶于蒸馏水中，加蒸馏水稀释至 1000mL。
取A液77.5ml，加于B液22.5ml，混匀后即成。
（5）20%磺基水杨酸溶液（6）奈氏(Nessler)试剂应用液贮存液；称取碘化钾(KI)7.58g于250ml三角烧瓶中，用蒸馏水5ml溶解，再加入碘（I 2） 5.5g溶解，加7～7.5gHg用力振摇10min(此时产生高热，须冷却)，直至棕红色的碘转变成带绿色的碘化汞钾液为止，过滤上清液倾入100ml容量瓶，洗涤沉淀，洗涤液一并倒入容量瓶内，用蒸馏水稀释至100ml。
应用液：取贮存液75ml加10％NaOH 350ml，加水至500mL。
（7）0.9％氯化钠溶液（8）乙酸纤维素薄膜电泳有关试剂(见实验29)2．器材（1）人血清。
（2）层析柱。
（3）长滴管。
（4）醋酸纤维素薄膜。
操作方法1．盐析――中性盐沉淀取正常人血清2.0ml于小试管中，加0.9％氯化钠溶液2.0ml，边搅拌混匀边缓慢滴加饱和硫酸铵溶液乙4.0ml，混匀后于室温中放置10min，3000r／min离心10min。
小心倾去含有清蛋白的上清液，重复洗涤一次，于沉淀中加入0.0175mol／L磷酸盐缓冲液(pH6.3)0. 5～1.Oml使之溶解。
此液即为粗提的γ－球蛋白溶液。
2．脱盐――凝胶柱层析（1）装柱：洗净的层析柱保持垂直位置，关闭出口，柱内留下约2.0ml洗脱液。
一次性将疑胶从塑料接口加入层析柱内，打开柱底部出口，调节流速0.3ml/min。
凝腔随柱内溶液慢慢流下而均匀沉降到层析柱底部，最后使凝胶床达20厘米高，床面上保持有洗脱液，操作过程中注意不能让凝胶床表面露出液面并防止层析床内出现“纹路”。
在凝胶表面可盖一园形滤纸，以免加入液体时冲起胶粒。
（2）上样与洗脱：可以在凝胶表面上加圆形尼龙滤布或滤纸使表面平整，小心控制凝胶柱下端活塞，使柱上的缓冲液面刚好下降至凝胶床表面，关紧下端出口，用长滴管吸取盐析球蛋白溶液，小心缓慢加到凝胶床表面。
打开下端出口，将流速控制在0.25ml/min使样品进入凝胶床内。
关闭出口，小心加入少量0.0175mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.3)洗柱内壁。
打开下端出口，待缓冲液进入凝胶床后再加少量缓冲液。
如此重复三次，以洗净内壁上的样品溶液。
然后可加入适量缓冲液开始洗脱。
加样开始应立即收集洗脱液。
洗脱时接通蠕动泵，流速为0.5ml/min,用部分收集器收集，每管1ml。
（3）洗脱液中NH4+与蛋白质的检查：取比色板两个(其中一个为黑色背底)，按洗脱液的顺序每管取一滴，分别滴入比色板中，前者加20％磺基水杨酸溶液2滴，出现白色混浊或沉淀即示有蛋白质析出，由此可估计蛋白质在洗脱各管中的分布及浓度；于另一比色板中，加人奈氏试剂应用液l滴，以观察NH4+出现的情况。
合并球蛋白含量高的各管，混匀。
除留少量作电泳鉴定外，其余用DEAE纤维素阴离子交换柱进一步纯化。
3．纯化――DEAE纤维素阴离子交换层析用DEAE纤维素装柱约8-10cm高度，并用0.0175mol／L磷酸盐缓冲液(pH6.3)平衡，然后将脱盐后的球蛋白溶液缓慢加于DEAE纤维素阴离子交换柱上，用同一缓冲液洗脱、分管收集。
用20％磺基水杨酸溶液检查蛋白质分布情况。
(装柱、上样、洗脱，收集及蛋白质检查等操作步骤同凝胶层析)。
4．浓缩经DEAE纤维素阴离于交换柱纯化的γ－球蛋白液往往浓度较低。
为便于鉴定，常需浓缩。
收集较浓的纯化的γ－球蛋白溶液2m1，按每ml加0.2～ 0.25gSephadex G一25干胶，摇动2～3min， 3000r／min 离心5min。
上清液即为浓缩的γ-球蛋白溶液。
5．鉴定――乙酸纤维素薄膜电泳取乙酸纤维素薄膜2条，分别将血清、脱盐后的球蛋白、DEAE纤维素阴离子交换柱纯化的γ-球蛋白液等样品点上。
然后参阅实验二十九：乙酸纤维薄膜电泳法进行电泳分离、染色。
比较电泳结果。
注意事项1．凝胶及DEAE纤维处理期间，必须小心用倾泻法除去细小颗粒。
这样可使凝胶及纤维素颗粒大小均匀，流速稳定，分离效果好。
2．装柱是层析操作中最重要的一步。
为使柱床装得均匀，务必做到凝胶悬液或DEAE纤维素混悬液不稀不厚，一般浓度为l：l，进样及洗脱时切勿使床面暴露在空气中，不然柱床会出现气泡或分层现象；加样时必须均匀，切勿搅动床面，否则均会影响分离效果。
3．本法是利用γ-球蛋白的等电点与α-、β-球蛋白不同，用离子交换层析法进行分离的。
因此层析过程中用的缓冲液pH要求精确。
4．电泳注意事项见实验二十九。
5．凝胶贮存：凝胶使用后如短期不用，为防止凝胶发霉可加防腐剂如0.02％叠氮钠。
保存于4℃冰箱内。
若长期不用，应脱水干燥保存。
脱水方法：将膨胀凝胶用水洗净。
用多孔漏斗抽干后，逐次更换由稀到浓的乙醇溶液浸泡若干时间，最后一次用95％乙醇溶液浸泡脱水，然后用多孔漏斗抽干后，于60～80℃烘干贮存。
6．离子交换剂的再生和保存；离子交换剂的价格较贵，每次用后只需再生处理便能反复使用多次。
处理方法是：交替用酸、碱处理，最后用水洗至接近中性。
阳离子交换剂最后为N a型，阴离子以Cl型是最稳定型，故阴离子交换剂处理顺序为碱一水一酸一水。
由于上述交换剂都是糖链结构。
容易水解破坏，因此须避免强酸、强碱长时间浸泡和高温处理，一般纤维素浸泡时间为3-4h。
离子交换剂容易长霉引起变质，不用时，需洗涤干净，加防腐剂置冰箱内保存。
常用0. 02％叠氮钠防腐。
叠氮钠遇酸放出有毒气体，也是剧毒与易爆的危险品。
使用时要加倍小心。
除用凝胶层析法去除无机盐类外，最常用的去盐法就是透析。
细的透析袋效率高，所需时间短。
将透析袋一端折叠，用橡皮筋结扎，试验是否逸漏，然后倒入待透析的蛋白质溶液。
勿装太满，将袋的上端也结扎好，即可进行透析。
开始可用流动的自来水，待大部分盐被透析出后，再改为生理盐水、缓冲液或蒸馏水。
透析最好在较低的温度下，并在磁力搅拌器上进行。
此法简单，易操作，仪器及试剂要求不高，但不如凝胶层析法效率高。
浓缩γ-球蛋白粗提液除上述方法外还可用透析袋浓缩。
将待浓缩的蛋白质溶液放入较细的透析袋中，置入搪瓷盘内。
透析袋周围可撒上聚乙二醇6000(PEG6000)，或聚乙烯吡咯酮，或蔗糖。
以上物质在使用后(吸了大量水)都可以通过加温及吹风而回收；将装有蛋白质溶液的透析袋悬挂起来，用电风扇高速吹风(10℃以下)，也可达到浓缩目的，以上两法虽不如 SephadexG一25干胶快，但价格较便宜，方法也不烦琐。
实验九血清γ-球蛋白的盐析分离作者:陈锐来源:本站时间:2009-3-3实验目的（1）了解蛋白质分离纯化的一般方法。
（2）掌握硫酸铵盐析法从动物血清中分离γ-球蛋白。
原理中性盐类能破坏溶液中蛋白分子表面的双电层和水膜，从而使蛋白质从溶液中凝聚沉淀析出。
但沉淀不同的蛋白质所需盐类的浓度不同。
例如，50％饱和的硫酸铵能使血清中的球蛋白沉淀，而33％饱和的硫酸铵则使γ-球蛋白沉淀。
因此，可根据所要分离的蛋白质，选择不同饱和度的硫酸铵溶液进行盐析。
操作方法1．取家畜血清5ml，加磷酸缓冲溶液(0.01mol／L pH7.0)5ml，混匀，滴加(边加边搅拌)饱和硫酸铵4ml(此时溶液硫酸铵饱和度约为20％)。