中药化学实验指导—实验四 槐花米中芸香苷的提取及槲皮素的制备与检识
槐米中芸香苷及槲皮素的提取分离与检识
2014.07中医中药242槲皮素作为一种黄酮类的物质，在草本植物和食物中有广泛的分布。
同时槲皮素作为一种比较强的植物性抗氧化剂，能够防止动脉硬化等功能，在治疗冠心病等心脑血管疾病中具有重要的作用。
同时还能够清除自由基，保护心肌、降血压、降血脂以及抗菌消炎等作用，对于肿瘤细胞等均有良好的抑制效果。
在槲皮素的提取中已经出现了多种提取方法，而且其方法也越来越先进，对槲皮素的普及具有重要的作用。
[1]1 芸香苷及槲皮素的提取芸香苷是一种广泛存在于植物体内的黄酮类的化合物，在自然界的花、叶、果实等有广泛的存在，在槐米、罗布麻等植物中的含量比较高。
槲皮素可以用来作为中药制剂，能够有效的降低毛细血管的通透性，抗病毒、清除氧自由基等功能。
具有防止动脉硬化和增强人体毛细血管的重要功能，在临床上常常被用来作为治疗心血管疾病的辅助药物。
同时由于它是一种植物提取物，它对于人体没有毒性，因此在食品工业中还被用来作为抗氧化剂和天然黄色素。
取槐米若干，加入六倍体积的量水，在100摄氏度煮沸环境下教学提取。
加入石灰水缓慢的搅拌调整其pH 到8.0~9.0，然后加入适量的浓度为3%的硼砂溶液，并且煮20~30min 。
然后将得到的混合物过滤，过滤的残渣进行反复的减压过滤3次，然后将得到了滤液合并起来。
在60摄氏度的条件下，用浓硫酸将得到的滤液的pH 调整到5.0。
在室温下放置24小时，然后抽滤，将得到的沉淀物用水洗到中性，在60摄氏度的条件下干燥可以得到芸香苷的粗制品。
利用沸水重新结晶，在70摄氏度的环境下干燥从而得到精制的芸香苷。
精制的芸香苷仍然难以满足使用的需要，需要进一步的提纯，将得到了精制芸香苷按照1:80的比例加入到浓度为2%的硫酸溶液中进行水解，加热到100摄氏度保持二个小时，然后冷却进行过滤。
将得到的滤液利用浓度为95%的乙醇进行重结晶，然后进行分离，用甲醇作为洗脱液进行洗脱，槐米中芸香苷及槲皮素的提取分离与检识甄 真北京卫生职业学院 北京市 101101【摘 要】槐米味苦、微寒，有清肝泻火和凉血止血的作用，槐米中主要含有槲皮素和芸香苷，同时还有槐花米甲乙丙素、鞣制等成分。
27实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定
1.理化鉴别
(1)莫氏(Molish)反应
取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加2ml乙醇溶解，再加10%α-萘酚乙醇液1ml，振摇使之溶解，然后沿试管壁加浓硫酸约2ml，静置，观察，两液层界面变化，呈紫红色环者示分子中含糖结构。
(2)盐酸----镁粉反应
取芦丁和槲皮素各数毫克，分别置于两支小试管中，加2ml乙醇热溶，加镁粉少许，滴加浓盐酸，溶液由黄色逐渐变红者示有黄酮类化合物存在。
教学重点与难点
重点：
1.酸水解操作技术
2.化学方法区别芸香苷与槲皮素的原理及操作技术
3.纸色谱的操作技术并用其鉴别葡萄糖与鼠李糖和芸香苷与槲皮素
教学内容
备注
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定
三、实验内容
（二）芦丁的精制
2.减压过滤，用少量蒸馏水洗涤沉淀2-3次，抽干，即得芦丁精品，称重______g，计算提取率______
(3)喷1%三氯化铝试液后再观察。
（2）糖的纸色谱鉴定
支持剂：新华层析滤纸
点样：自制糖的供试品溶液及葡萄糖、鼠李糖对照品
展开剂：正丁醇－醋酸－水(4:1:5) (上层)
显色剂：苯胺—邻苯二甲酸试剂（喷后105℃烘10min显色）
画出图谱，计算Rf值。
讨论、练浊现象?
（三）芦丁的水解
1.取精制芦丁2g，尽量研细，置于500ml圆底烧瓶中，加2%硫酸250ml，于直火加热微沸回流1.5小时，放冷
2.减压过滤，所得沉淀即为槲皮素，称重______g；滤液保留作糖部分的鉴定。
3.取水解母液约20ml，小心地用BaOH细粉中和至近中性，自然过滤，滤液蒸干，加2～3ml乙醇溶解，作为糖的供试液。
(3)醋酸镁纸片反应
槐花米中芦丁和懈皮素的制备
槐花米中芸香苷和懈皮素的提取：邱斌学号：10151802241.实验原理1.1背景介绍芸香苷是一种广泛存在于植物体内的黄酮类的化合物，在自然界的花、叶、果实等有广泛的存在，在槐米、罗布麻等植物中的含量比较高。
槲皮素可以用来作为中药制剂，能够有效的降低毛细血管的通透性，抗病毒、清除氧自由基等功能。
具有防止动脉硬化和增强人体毛细血管的重要功能，在临床上常常被用来作为治疗心血管疾病的辅助药物。
同时由于它是一种植物提取物，它对于人体没有毒性，因此在食品工业中还被用来作为抗氧化剂和天然黄色素。
[1]。
槐花米中芸香苷的含量较高，达12％一20％，可作为大量提取芸香苷的原料。
[2] 懈皮素作为一种黄酮类的物质，在草本植物和食物中有广泛的分布。
同时槲皮素作为一种比较强的植物性抗氧化剂，能够防止动脉硬化等功能，在治疗冠心病等心脑血管疾病中具有重要的作用。
同时还能够清除自由基，保护心肌、降血压、降血脂以及抗菌消炎等作用，对于肿瘤细胞等均有良好的抑制效果。
[2]懈皮素可以直接从芸香苷中提取出来。
1.2 提取方法介绍在槲皮素和芸香苷的提取中已经出现了多种提取方法，而且其方法也越来越先进，对槲皮素的普及具有重要的作用。
(热)碱提取酸沉淀法[4]、热水提冷析出的方法[4]、超声辐射法[5-6]、微波辅助提取法拉[7-8]等。
这次实验我们使用醇提取法。
醇提取法利用芸香苷在已醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大.以及在热水中溶解度大.在冷水中溶解度小的性质分高。
芸香苷用溶剂加熟溶解后，趁熟抽滤，滤液放冷后能析出而达到分高的目的(如不纯可再重夏操作进行分高)。
也可采用醇溶水纯法进行精制。
1.3芸香苷和懈皮素的理化性质芸香苷为浅黄色针状结晶(水)熔点: 176。
C-178。
C, [a]23D+13.87。
(乙醇)，[a]23D-39.43。
(吡啶)。
1g芦丁溶于7ml甲醇，8000ml水，200ml沸水。
在空气中逐渐变深，把芦J加热至185-192。
槐花米中芦丁和懈皮素的制备
槐花米中芸香苷和懈皮素的提取姓名：邱斌学号：241.实验原理1.1背景介绍芸香苷是一种广泛存在于植物体内的黄酮类的化合物，在自然界的花、叶、果实等有广泛的存在，在槐米、罗布麻等植物中的含量比较高。
槲皮素可以用来作为中药制剂，能够有效的降低毛细血管的通透性，抗病毒、清除氧自由基等功能。
具有防止动脉硬化和增强人体毛细血管的重要功能，在临床上常常被用来作为治疗心血管疾病的辅助药物。
同时由于它是一种植物提取物，它对于人体没有毒性，因此在食品工业中还被用来作为抗氧化剂和天然黄色素。
[1]。
槐花米中芸香苷的含量较高，达12％一20％，可作为大量提取芸香苷的原料。
[2] 懈皮素作为一种黄酮类的物质，在草本植物和食物中有广泛的分布。
同时槲皮素作为一种比较强的植物性抗氧化剂，能够防止动脉硬化等功能，在治疗冠心病等心脑血管疾病中具有重要的作用。
同时还能够清除自由基，保护心肌、降血压、降血脂以及抗菌消炎等作用，对于肿瘤细胞等均有良好的抑制效果。
[2]懈皮素可以直接从芸香苷中提取出来。
提取方法介绍在槲皮素和芸香苷的提取中已经出现了多种提取方法，而且其方法也越来越先进，对槲皮素的普及具有重要的作用。
(热)碱提取酸沉淀法[4]、热水提冷析出的方法[4]、超声辐射法[5-6]、微波辅助提取法拉[7-8]等。
这次实验我们使用醇提取法。
醇提取法利用芸香苷在已醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大.以及在热水中溶解度大.在冷水中溶解度小的性质分高。
芸香苷用溶剂加熟溶解后，趁熟抽滤，滤液放冷后能析出而达到分高的目的(如不纯可再重夏操作进行分高)。
也可采用醇溶水纯法进行精制。
芸香苷和懈皮素的理化性质芸香苷为浅黄色针状结晶(水)熔点: 176。
C-178。
C, [a]23D+。
(乙醇)，[a]。
(吡啶)。
1g芦丁溶于7ml甲醇，8000ml水，200ml沸水。
在空气中逐渐变深，把芦J加热至185-192。
C时，变成棕色胶状体，约在215C时分解;芦丁在冷水中极微溶(1:10000)，在沸水中微溶(1:200)，在沸乙醇中略溶(1:60) ;在碱性溶液中易溶，芦丁可溶于甲醇及乙丙醇，在氯仿、乙醚和苯中不溶。
槐花米中芸香苷和槲皮素的提取全解
有机综合实验综述编号有机综合实验综述题目：槐花米中芸香苷及槲皮素的提取食品学院食品科学与工程专业学号**********学生姓名赵维阳指导教师毛明富二〇一六年六月目录目录摘要 (1)第1章槐花米 (1)1.1 简介及来源 (1)第2章芸香苷 (1)2.1 简介及来源 (1)2.2 功能 (2)2.3 提取方法 (3)2.3.1 碱提取法 (3)2.3.2 醇提取法 (3)2.3.3 回流提取 (3)2.3.4微波与超声交替提取法 (4)2.3.5超临界CO2萃取法..................................................................................... 错误!未定义书签。
第3章槲皮素 . (4)3.1 简介及来源 (4)3.2 功效 (5)3.3 芸香苷水解制槲皮素 (5)3.3.1 中药动态提取法 (5)3.3.2酸水解法 (5)3.3.3 星点设计效应面法 (5)参考文献 (9)芸香苷槐花米中芸香苷及槲皮素的提取摘要本文就槐花米中芸香苷和槲皮素的提取展开讨论，介绍了槐花米、芸香苷以及槲皮素的来源和性能。
通过查找资料，深入了解了芸香苷及槲皮素的提取方法：芸香苷的提取方法主要有水提取法、碱提取法、微波法、超声波法、超临界二氧化碳提取法等。
分析比较各个方法的优缺点，选取收益较高的提取方法。
槲皮素是芸香苷的水解产物，也属于黄酮类化合物。
第一章槐花米1.1 简介及来源槐米广义是为豆科植物槐（Sophora japonica L.）的干燥花蕾及花。
中国各地区产，以黄土高原和华北平原为多。
夏季花未开放时采收其花蕾，称为“槐米”；花开放时采收，称为“槐花”。
采收后除去花序的枝、梗及杂质，及时干燥，生用、炒用或炒炭用。
花蕾卵形或椭圆形，长2—6mm，直径约2mm。
花萼黄绿色，下部有数条纵纹。
萼的上方为黄白色未开放的花瓣。
花梗细小。
实验四--槐米中芸香苷的提取分离与鉴定
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定芦丁(Rutin)亦称芸香甙(Rutisude)，广泛存在于植物界中。
现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。
尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。
槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L。
)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达12%~16%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。
芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。
临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。
槐花米中主要化学成分的结构及性质：1.芦丁(Rutin)淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。
溶解度：水：1:100(冷)，1:200(热)甲醇：1:100(冷)，1:9(热)乙醇：1:650(冷)，1:60(热)吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热)不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。
可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。
2. 槲皮素(Quercetin)即芸香甙甙元，为黄色结晶，mp.313℃~314℃(含2分子结晶水)，316℃(无水物)。
溶解度：乙醇：1:290(无水乙醇)，1:23(热)可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、吡啶、冰醋酸。
不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。
3. 皂甙粗品为白色粉末，mp.210℃~220℃(分解)。
易溶于水、吡啶，能溶于200倍的甲醇中。
酸水解后得白桦脂醇、槐二醇二种皂甙元及葡萄糖，葡萄糖醛酸及葡萄糖醛酸内酯。
(1) 白桦脂醇(Betulin)无色针晶，mp.251℃~252℃。
能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯、乙醚等溶剂，难溶于石油醚及水。
(2) 槐二醇(Sophoradiol)无色针晶，mp.219℃~220℃或224℃。
能溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇中，难溶于水。
中药化学实验指导(全套
实验一大黄中游离蒽醌的提取分离与检识（一）目的要求学习羟基蒽醌类化合物的提取分离和检识，通过实验要求：1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。
2.掌握用pH梯度萃取法分离不同酸性的羟基蒽醌类化合物。
3.掌握蒽醌类化合物的主要检识方法。
4.熟悉蒽醌类化合物的色谱检识方法。
5.了解用柱色谱法分离蒽醌类成分。
（二）主要化学成分的结构及性质大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim. ex Reg.和药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎。
大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷，总含量约3％～5％。
1．大黄酸(rhein) 分子式C15H8O6，分子量284.21。
黄色针状结晶（升华法），mp.321～322℃，330℃分解。
能溶于碱水、吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚，几不溶于水。
2．大黄素(emodin) 分子式C15H10O5，分子量270.23。
橙色针状结晶(乙醇)，mp.256～257℃，能升华。
易溶于乙醇、碱水，微溶于乙醚、氯仿，几不溶于水。
3．芦荟大黄素(aloe-emodin) 分子式C16H10O5，分子量270.23。
橙色针状结晶（甲苯），mp.223～224℃。
易溶于热乙醇，可溶于乙醚和苯，并呈黄色；溶于碱液呈红色；氨水及硫酸中呈绯红色。
4．大黄酚(chrysophanol) 分子式C15H10O4，分子量254.23。
橙黄色六方形或单斜结晶（乙醇或苯），mp.196～197℃，能升华。
易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸，极微溶于石油醚、冷乙醇，几不溶于水。
5．大黄素甲醚(physcion) 分子式C 16H 12O 5，分子量284.26。
砖红色单斜针状结晶，mp.203～207℃，溶于苯、氯仿、吡啶及甲苯，微溶于醋酸及醋酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮。
芸香苷和槲皮素
（二）芸香苷的水解
称取芸香苷粗品2克，尽量研细，投入500ml圆底烧瓶中，加
2%H2SO4溶液150 ml,接上冷凝管，直火加热煮沸1.5小时，滤取沉
淀物（即苷元槲皮素） ，滤液保留以鉴定糖部分，槲皮素沉淀经水洗 涤抽干，自然干燥，称重并计算水解得率。
:200），溶于热甲醇（1:7）,冷甲醇（1:100）,热乙醇（1:30）,
冷乙醇（1:650）,难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、
石油醚，易溶于吡啶及稀碱液中。
槲皮素（quercetin）,分子式 务 已。O7,分子量302.23,黄色针 状结晶，mp.314C（分解）。溶于热乙醇（1:23）,冷乙醇（1:300）,
四、相关知识点
槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾，主要含
芸香苷（芦丁）,含量高达12~20%，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李 糖。
芸香苷（rutoside）,分子式C27出。分子量610.51，淡黄色 针状结晶，mp.177~178C。难溶于冷水（1:8000）,略溶于热水（1
三）芸香苷、槲皮素重结晶
称取芸香苷粗品2克，加甲醇50ml，加热溶解，趁热过滤， 滤液浓缩一半， 放置析晶， 过滤。滤液适当浓缩后放置， 复析出结晶， 滤取结晶。必要时结晶再用甲醇重结晶一次。
取槲皮素全部，加适量95%乙醇，同上法重结晶一次。
四）芸香苷、槲皮素和糖的纸色谱鉴定
1、点样：取新华一号色谱滤纸，规格20cmx20cm,在滤纸下
端约2cm处用铅笔画一直线， 间隔2cm分别点上下列样品或标准溶 液：
芸香苷与槲皮素的提取、分离及鉴定实验(含现象结论讨论)
芸香苷与槲皮素的提取、分离及鉴定实验（含现象结论及讨论）一、目的和要求1.通过芸香苷的提取与精制，掌握利用溶解度差异与酸碱性，提取黄酮类合物的原理和操作。
2.掌握黄酮苷水解制取黄酮苷元的方法。
3.了解黄酮类化合物的一般性质。
4.了解TLC及紫外光谱在黄酮类化合物鉴别中的应用。
二、实验原理1.利用芸香苷对冷水和热水的溶解度相差大的特性进行提取和精制。
2.黄酮苷可通过酸水解得到苷元和糖，且槲皮素在碱性溶液中可降解，反应结果可通过薄层色谱进行检识。
3.利用黄酮类化合物在紫外光下具有特定的吸收光谱可进行结构检识。
三、实验步骤（1）提取:热水粗提称取槐花米粗粉10 g，加150 ml沸水回流1h，滤布趁热过滤，稍冷却后，放冷析晶。
待全部析出后，离心(3000转，10 min)，减压抽滤，水洗3次，得粗制芸香苷。
（2）纯化:碱溶酸沉法碱溶酸沉法原理:芸香苷结构中的酚羟基与碱成盐后溶于水；加酸后析出。
，即石灰乳或石灰水。
酸:盐酸，硫酸。
常用碱液：Ca(OH)2优点:一方面可使含酚羟基化合物成盐溶解，另一方面可使含-COOH杂质形成不溶的沉淀。
注意:碱性不宜过强，以免破坏黄酮母核;酸化时，酸性不宜过强，以免形成佯盐而溶解。
将上述所得的芸香苷粗品置于烧杯中，加约50-80 ml的去离子水，再用石灰水调pH至8。
加入沸石，回流2~3 min，使充分溶解。
趁热棉花过滤，滤液滴加3M HCl调pH至7，放置于冰箱析晶，即析出沉淀。
减压抽滤，用少量去离子水洗沉淀2~3次，然后用少量乙醇洗1次，即得精制芸香苷。
上述所得精制芸香苷，少量用离心管冻存做后续鉴定，其余量做水解。
（3）芸香苷的水解取上述所得的精制芸香苷，置于250 ml圆底烧瓶中，放入沸石，加入2% 硫酸30 ml，加热回流40 min，瓶中浑浊液逐渐变为澄清的棕黄色液，最后生成鲜黄色沉淀。
放冷后减压抽滤，保存首道滤液(澄清无色液体)，作为糖的检查，沉淀物为芸香苷苷元(槲皮素)，用蒸馏水洗至中性，抽干水分，得到粗制槲皮素。
中药化学实验指导—实验四 槐花米中芸香苷的提取及槲皮素的制备与检识
实验四槐花米中芸香苷的提取及槲皮素的制备与检识（一）目的要求学习黄酮类化合物的提取、分离和检识，通过实验要求：1．通过芸香苷提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理和操作。
2．掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的检识方法。
3．掌握由芸香苷水解制取槲皮素的方法。
（二）主要化学成分的结构及性质槐花米为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾，主要含芸香苷（芦丁），含量高达12％～20％，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖；槐花亦含芸香苷，但含量较槐米为少。
芸香苷(rutoside) 分子式C27H30O16，分子量610.51。
淡黄色针状结晶，mp.177～178℃，难溶于冷水（1∶8000），略溶于热水（1∶200），溶于热甲醇（1∶7）、冷甲醇（1∶100）、热乙醇（1∶30）、冷乙醇（1∶650），难溶于醋酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀碱液中。
槲皮素(quercetin) 又称槲皮黄素，分子式C15H10O7，分子量302.23。
黄色结晶，mp.314℃（分解）。
溶于热乙醇（1∶23）、冷乙醇（1∶300），可溶于甲醇、丙酮、醋酸乙酯、冰醋酸、吡啶等溶剂，不溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿中，几不溶于水。
O OHOHO ORHOOH芸香苷R=－葡萄糖－鼠李糖槲皮素R=H（三）实验原理由槐花米中提取芸香苷的方法很多，本实验是根据芸香苷在冷水和热水中的溶解度差异的特性进行提取和精制，或根据芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提取液加酸酸化后则芸香苷游离析出。
（四）实验内容1．芸香苷的提取方法Ⅰ：水提取法见书方法Ⅱ：碱溶酸沉法见书2．芸香苷的精制见书4．芸香苷、槲皮素及糖的检识取芸香苷、槲皮素少许，分别用8ml乙醇溶解，制成试样溶液，按下列方法进行实验，比较苷元和苷的反应情况。
（1）Molish反应：取试样溶液各2ml，分置于两支试管中，加10％α-萘酚乙醇溶液1ml，振摇后倾斜试管45°，沿管壁滴加1ml浓硫酸，静置，观察并记录两液面交界处颜色变化。
槐花米中芦丁和懈皮素的制备
槐花米中芸香苷和懈皮素的提取姓名：邱斌学号：10151802241.实验原理1.1背景介绍芸香苷是一种广泛存在于植物体内的黄酮类的化合物，在自然界的花、叶、果实等有广泛的存在，在槐米、罗布麻等植物中的含量比较高。
槲皮素可以用来作为中药制剂，能够有效的降低毛细血管的通透性，抗病毒、清除氧自由基等功能。
具有防止动脉硬化和增强人体毛细血管的重要功能，在临床上常常被用来作为治疗心血管疾病的辅助药物。
同时由于它是一种植物提取物，它对于人体没有毒性，因此在食品工业中还被用来作为抗氧化剂和天然黄色素。
[1]。
槐花米中芸香苷的含量较高，达12％一20％，可作为大量提取芸香苷的原料。
[2] 懈皮素作为一种黄酮类的物质，在草本植物和食物中有广泛的分布。
同时槲皮素作为一种比较强的植物性抗氧化剂，能够防止动脉硬化等功能，在治疗冠心病等心脑血管疾病中具有重要的作用。
同时还能够清除自由基，保护心肌、降血压、降血脂以及抗菌消炎等作用，对于肿瘤细胞等均有良好的抑制效果。
[2]懈皮素可以直接从芸香苷中提取出来。
1.2 提取方法介绍在槲皮素和芸香苷的提取中已经出现了多种提取方法，而且其方法也越来越先进，对槲皮素的普及具有重要的作用。
(热)碱提取酸沉淀法[4]、热水提冷析出的方法[4]、超声辐射法[5-6]、微波辅助提取法拉[7-8]等。
这次实验我们使用醇提取法。
醇提取法利用芸香苷在已醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大.以及在热水中溶解度大.在冷水中溶解度小的性质分高。
芸香苷用溶剂加熟溶解后，趁熟抽滤，滤液放冷后能析出而达到分高的目的(如不纯可再重夏操作进行分高)。
也可采用醇溶水纯法进行精制。
1.3芸香苷和懈皮素的理化性质芸香苷为浅黄色针状结晶(水)熔点: 176。
C-178。
C, [a]23D+13.87。
(乙醇)，[a]23D-39.43。
(吡啶)。
1g芦丁溶于7ml甲醇，8000ml水，200ml沸水。
在空气中逐渐变深，把芦J加热至185-192。
槐米中芦丁的提取分离和检识及槲皮素的制备
槐米中芦丁的提取分离和检识及槲皮素的制备杨翊涵（2013级中药学一班）【摘要】本文整理总结了两次实验的操作过程与实验结果。
包括从槐米中提取芦丁、芦丁的分离和检识，以及槲皮素的制备和检识。
通过碱溶酸沉的方法提取芦丁，再利用稀酸水解生成槲皮素。
通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。
熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用。
通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法熟悉重结晶技巧。
了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。
【关键词】芦丁、槲皮素、提取分离、检识鉴定、结构、性质。
1. 1 芦丁的提取原理利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。
也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。
1.2. 芦丁的分离原理利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。
芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。
也可采用醇溶水沉法进行精制。
1.3. 芦丁的鉴定原理（1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。
（2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。
1.4 实验原理芦丁浅黄色针状结晶，难溶于冷水，可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。
槲皮素黄色结晶，能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。
槐花米中芸香苷的提取实验方案
槐花米中芸香苷的提取实验方案以槐花米为原料提取芸香苷，有多种提取工艺，如水提法、碱提酸沉法、醇提法、超声与微波交替提取法。
考虑到实验器材和成本。
碱提酸沉法是较为理想方法。
它有操作简单，经济、安全、技术成熟的特点。
但提取率没有超声与微波交替提取法高，其产率受诸多因素的影响( 药材的粉碎度、水溶液的pH、水溶液的用量、提取次数、提取时间、酸沉pH 值、结晶时间)。
我们小组通过查找文献，对影响芸香苷提取收得率的诸因素进行了优选。
即: 药材为细粉、提取3 次、提取水溶液的pH9、酸沉pH 值4、结晶时间12 小时、提取时间30 分钟、水溶液的用量1: 30 倍。
1.称取槐花米5g与250ml圆底烧瓶，加0. 4%的硼砂水溶液150ml，加入饱和石灰水调剂PH为9，微沸30min，趁热抽滤，残渣同时在加150ml水煮沸，趁热抽滤，重复三次，合并三次提取液，水浴至90℃，加15％盐酸调PH为4，搅匀，放置12小时，沉淀完全。
抽滤，用10ml水洗涤2~3次，得到粗产品，干燥称重。
2.粗产品放置400ml烧杯中加200 倍量蒸馏水加热煮沸溶解，趁热抽滤，滤液放置12小时结晶，析出淡黄色沉淀，减压抽滤。
将晶体干燥，称重，计算收率。
收率大概11％文献来源：正交试验法优选槐花米中芸香苷水提取工艺（楚雄医药高等专科学校药学系）槲皮素的制备取1g精制芦丁，在250ml圆底烧杯中加入80mL 0.5%稀硫酸（大于该浓度会造成较多酸液浪费），加热回流水解1h，冷却，过滤，沉淀用蒸馏水冲洗至中性。
把沉淀加入到95%乙醇中，加热使完全溶解，趁热抽滤。
滤液加入等量蒸馏水重结晶，抽滤，干燥，得槲皮素精品。
（收率为79.4%）文献来源：芦丁水解制备槲皮素的实验条件比较研究，郑州大学。
芸香苷属黄酮类化合物，有较高的药用价值，是治疗高血压、心血管疾病、胃病、皮肤病、糖尿病等多种疾病的良药，此外它还有抗菌和抗放射作用。
槲皮素的抗肿瘤, 抗炎, 抗血小板聚集, 抗氧自由基, 抗多种病毒。
槐香米中芸香苷和槲皮素的提取
槐花米中芸香苷和槲皮素的提取The Extracting of Rutin and Quercetin inSophora japonica姓名：实验小组成员：班级：学号：1指导老师：实验室编号：实验时间：2015. 6.23-2015.6.26槐花米中芸香苷和槲皮素的提取（江南大学食品学院，江苏，无锡214000）摘要：芸香苷槲皮素是一种具有生理活性的黄酮类化合物。
槐花米自古用做止血药物，可作为提取芸香苷的原料，而通过对芸香苷的水解和重结晶可以得到槲皮素。
本实验通过醇提取法从槐花米中提取芸香苷，收率为3.13 % 。
进一步水解芸香苷制得槲皮素，得由槐花米提取槲皮素的收率为0.66%。
关键词：槐花米；黄酮类化合物；芸香苷；槲皮素；提取随着人们生活水平的提高，人们对天然化合物的保健功能与临床治疗功能愈发重视，黄酮类化合物（flavonoids）具有显著的抗氧化性能，可应用于食品、化妆品中，提高人体抗氧化能力；其在临床上是治疗心血管疾病以及预防癌症的良药，具有很大的应用价值。
1 芸香苷和槲皮素芸香苷（rutin）又名芦丁，主要存在于槐花米中，含量约为15 %的，是一种具有生理活性的黄酮类化合物，有调节毛细管壁渗透性的作用，临床上用作毛细管止血药，也用作高血压症的辅助治疗药物。
槲皮素（quercetin）是一种以游离态形式存在的黄酮类化合物，可通过对芸香苷进行水解和重结晶得到槲皮素。
槲皮素及其衍生物有抗癌作用，对一些致突剂致癌物有拮抗作用。
近年来，心脑血管疾病和癌症的发病率逐渐上升[1]，因此对治疗和预防心脑血管疾病以及癌症的药品与保健品的开发研究就显得尤为重要，使得芸香苷与槲皮素的需求量进一步扩大，因此，对槐花米中芸香苷和槲皮素的提取具有重大意义。
2 芸香苷和槲皮素的物理性质及提取原理2.1芸香苷的物理性质及提取原理芸香苷（rutoin），分子式C27 H30 O16，分子量610.51，淡黄色针状结晶，熔点177~178℃。
槐米中芸香苷提取分离及检识
与在含水溶剂中，化合物分子结构对氢键缔合的影响有关， 大致如下：
化合物分子中能形成氢键的基团数目越多，被聚酰胺吸 附越强。 形成氢键的基团所处位置不同，被吸附的强度也不同。 分子中芳香核、共轭双键越多，被吸附强度越大。 化合物若能形成分子内氢键，则被吸附强度减小。
槲皮素
OH
鼠李糖
1.盐酸-镁粉反应：黄酮 2.三氯化铝反应 ：黄酮
3.三氯化铁反应：酚羟基
4. Molisch反应：糖、苷类
HO O
OH OH
OH OH O
芸香苷和槲皮素的色谱检识
样品： 自制1%芸香苷乙醇溶液
自制1%槲皮素乙醇溶液
对照品：1%芸香苷对照品乙醇溶液 1%槲皮素对照品乙醇溶液现方式做保护处理对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑并不能对任何下载内容负责
槐米中芸香苷提取分离及检识
OH HO O OH H 2C OH O O O OH OH 槲皮素 OH 葡萄糖 芸香糖 芸香苷 鼠李糖 O OH O OH CH 3
实验原理： 1.芸香苷分子中含具有酚羟基，能与 碱成盐而溶于碱液中，加酸酸化后又 可沉淀析出，可用碱溶酸沉法提取芸 香苷。
薄层色谱
play
OH
2.在热水中溶解度大, 冷水中溶解度
小，采用沸水提取法。芸香苷的精制
OH OH
可根据其在冷、热水（或冷、热乙醇）
中溶解度相差悬殊的性质进行。
3.芸香苷可被稀酸水解生成槲皮素及 葡萄糖、鼠李糖，并可通过色谱及化
HO
O OH OH O
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实验四槐花米中芸香苷的提取及槲皮素的制备与检识（一）目的要求
学习黄酮类化合物的提取、分离和检识，通过实验要求：
1．通过芸香苷提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理和操作。
2．掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的检识方法。
3．掌握由芸香苷水解制取槲皮素的方法。
（二）主要化学成分的结构及性质
槐花米为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾，主要含芸香苷（芦丁），含量高达12％～20％，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖；槐花亦含芸香苷，但含量较槐米为少。
芸香苷(rutoside) 分子式C27H30O16，分子量610.51。
淡黄色针状结晶，mp.177～178℃，难溶于冷水（1∶8000），略溶于热水（1∶200），溶于热甲醇（1∶7）、冷甲醇（1∶100）、热乙醇（1∶30）、冷乙醇（1∶650），难溶于醋酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀碱液中。
槲皮素(quercetin) 又称槲皮黄素，分子式C15H10O7，分子量302.23。
黄色结晶，mp.314℃（分解）。
溶于热乙醇（1∶23）、冷乙醇（1∶300），可溶于甲醇、丙酮、醋酸乙酯、冰醋酸、吡啶等溶剂，不溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿中，几不溶于水。
O OH
OH
O OR
HO
OH
芸香苷R=－葡萄糖－鼠李糖
槲皮素R=H
（三）实验原理
由槐花米中提取芸香苷的方法很多，本实验是根据芸香苷在冷水和热水中的溶解度差异的特性进行提取和精制，或根据芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提取液加酸酸化后则芸香苷游离析出。
（四）实验内容
1．芸香苷的提取
方法Ⅰ：水提取法
见书
方法Ⅱ：碱溶酸沉法
见书
2．芸香苷的精制
见书
4．芸香苷、槲皮素及糖的检识
取芸香苷、槲皮素少许，分别用8ml乙醇溶解，制成试样溶液，按下列方法进行实验，比较苷元和苷的反应情况。
（1）Molish反应：取试样溶液各2ml，分置于两支试管中，加10％α-萘酚乙醇溶液1ml，振摇后倾斜试管45°，沿管壁滴加1ml浓硫酸，静置，观察并记录两液面交界处颜色变化。
（2）盐酸-镁粉反应：取试样溶液各2ml，分别置于两支试管中，各加入镁粉少许，再加入盐酸数滴，观察并记录颜色变化。
（3）醋酸镁反应：取两张滤纸条，分别滴加试样溶液后，加1％醋酸镁甲醇溶液2滴，于紫外灯下观察荧光变化，并记录现象。
（4）三氯化铝反应：取两张滤纸条，分别滴加试样溶液后，加1％三氯化铝乙醇溶液2滴，于紫外灯下观察荧光变化，并记录现象。
（5）锆-柠檬酸反应：取试样溶液各2ml，分别置于两支试管中，各加2％二氯氧锆甲醇溶液3～4滴，观察颜色，然后加入2％柠檬酸甲醇溶液3～4滴，观察并记录颜色变化。
（6）纸色谱检识
支持剂：新华层析滤纸(中速,20CM×7CM)
试样：自制芸香苷乙醇溶液
自制槲皮素乙醇溶液
对照品：芸香苷对照品乙醇溶液
槲皮素对照品乙醇溶液
展开剂：正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5上层）或15％醋酸溶液
显色剂：1）在可见光下观察斑点颜色，再在紫外灯下观察斑点颜色
2）喷雾三氯化铝试剂，置日光下及紫外灯下观察并记录斑点的颜色变化。
（7）薄层色谱检识
薄层板：硅胶G-CMC-Na
试样：自制1％芸香苷乙醇溶液
自制1％槲皮素乙醇溶液
对照品：1％芸香苷对照品乙醇溶液
1％槲皮素对照品乙醇溶液
展开剂：氯仿-甲醇-甲酸（15∶5∶1）
显色剂：喷雾1％三氯化铁和1％铁氰化钾水溶液，临用时等体积混合
（8）糖的纸色谱检识
取糖的供试液做径向纸色谱，和已知糖液作对照，可得到与葡萄糖、鼠李糖相同R f值的斑点。
支持剂：新华层析滤纸（圆形）
试样：糖的供试液
对照品：1％葡萄糖对照品水溶液
1％鼠李糖对照品水溶液
展开剂：正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5上层）
显色剂：喷雾苯胺-邻苯二甲酸试剂，于105℃加热10分钟或红外灯下加热10～15分钟，显棕色或棕红色斑点。
（五）实验说明及注意事项
1．在提取前应将槐花米略捣碎，使芸香苷易于被热水溶出。
2．本实验直接用沸水由槐花米中提取芸香苷，收得率稳定，且操作简便。
如用碱溶酸沉法提取，加入石灰乳可以达到碱性溶解的目的，又可除去槐花7米中所含的大量粘液质，但应严格控制其碱性pH8～9，不可超过pH10。
如pH值过高，加热提取过程中芸香苷可被水解破坏，降低收得率。
加酸沉淀时，控制pH3～4,不宜过低，否则芸香苷可生成yang盐而溶于水，也降低收得率。
3．在提取过程中，加入硼砂的目的是使其与芸香苷分子中的邻二酚羟基发生络合，既保护了邻二酚羟基不被氧化破坏，又避免了邻二酚羟基与钙离子络合（芸香苷的钙络合物不溶于水），使芸香苷不受损失，提高收得率。
（六）思考题
1．黄酮类化合物还有哪些提取方法？芸香苷的提取还可用什么方法？
2．酸水解常用什么酸？为什么用硫酸比用盐酸水解后处理更方便？
3．本试验中各种色谱的原理是什么？解释化合物结构与R f值的关系。
4．试讨论苷类成分的检识程序。