植物组织培养第三章植物器官和组织培养

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3第三章植物组织培养简介

dedifferentiation〕 2.脱分化〔dedifferentiation〕:已分化好
的细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，的细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，回复到分生组织状态的过程。回复到分生组织状态的过程。
3.再分化 redifferentiation〕 3.再分化〔redifferentiation〕:
Folke Skoog(1908- )
1955年，Miller从DNA降解物中分离出6－呋喃 1955年 Miller从DNA降解物中分离出6 降解物中分离出氨基嘌呤（激动素），），发现它诱导芽分化的效率比氨基嘌呤（激动素），发现它诱导芽分化的效率比腺嘌呤高3万倍。控制器官分化的激素模式变为激动腺嘌呤高3万倍。控制器官分化的激素模式变为激动生长素的比例关系促进组培的发展。的比例关系。素／生长素的比例关系。促进组培的发展。
Gottlieb Haberlandt(1854-1946). He was the first to formulate clearly the principles of plant cell culture.
细胞全能性学说：细胞全能性学说：植物体中任何生活细胞都具有该物种的全部遗传信息，物种的全部遗传信息，具有相同的形态结构和一定的生理功能。只要条件合适，功能。只要条件合适，由一个单细胞就可以发育成为一个新的个体。新的个体。该文还报道了几种植物的细胞和组织的培养实验，由该文还报道了几种植物的细胞和组织的培养实验，于当时的条件所限，都没有成功. 于当时的条件所限，都没有成功
第三章植物组织培养 (tissue culture) 概述
第一节
植物组织培养的意义
植物组织培养概念(重点重点) 一、植物组织培养概念重点植物组织培养理论基础(难点难点) 二、植物组织培养理论基础难点植物组织培养类型(难点难点) 三、植物组织培养类型难点植物组织培养特点(重点重点) 四、植物组织培养特点重点

组织培养第三章愈伤组织培养资料

2、操作程序
获取外植体材料－消毒处理－修整除去坏死组织－切成5mm的圆柱形或方形小块－直放或倒放到培养基上－每9cm培养基接种5 －6块外植体－培养。选用较大组织做材料时，可用打孔器从块茎和块根中钻取一批圆柱型组织，切成相同厚度的小圆片进行培养。
采用圆形的原因：
能得到外形简单结构相同的材料
第一节愈伤组织的培养
愈伤组织培养是指将母体植株上的各个部分切下，形成外植体，接种到无菌的培养基上，进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。一般情况下，植物组织均能诱发形成愈伤组织，由外植体形成愈伤组织，标志着植物离体培养的开始。
一、愈伤组织的诱导（一）诱导原理 1、细胞全能性植物每一细胞具有全套遗传信息，在特定环境下能进行表达，而产生一个独立完整的个体。
（二）在园艺植物育种中的应用： 1、加快园艺植物新品种和良种繁育速度，迅速高效低成本 2、培养无病毒苗木 3、获得倍性不同植株，易染色体核内加倍育种有利用价值 4、克服远缘杂交困难 5、利于种质资源长期保存 6、提供育种中间材料 7、诱发和离体筛选突变体 8、制造人工种子
植物离体培养中的器官发生类型：不定芽型—诱导顶端分生组织产生不定芽，再生成植株的方式。顶芽、腋芽培养。多数植物培养采用。
圆形的表面积大
圆柱形的外植体有利于组织块与外界进行物质和气体交换；也使外植体表面促进愈伤组织形成的分泌物较多，诱导率增高。
培养基
MS培养基激素 IAA、NAA、2,4-D、BA 椰子汁、番茄汁、酵母提取物。
二、愈伤组织细胞的分化
单个细胞或一块外植体形成典型的愈伤组织，大致经历三个时期，这三个时期中细胞代谢、细胞数目、细胞形态均有明显差别。
细胞分化——持续细胞分裂增殖——原胚期— —球形胚——心形胚——鱼雷形胚——子叶期

植物组织培养技术第三章第四章植物器官的培养

及取材消毒材料化处理栽种养移接培驯
营养器官的培养——茎尖的培养营养器官的培养——茎尖的培养
1、取材、
取1-2㎝顶梢 ①直接取材：在生长旺盛、枝直接取材：在生长旺盛、条健壮、条健壮、无病的母株上选生长不久、杂菌污染少的顶梢长不久、（1－2cm）（取前可喷杀菌 cm）（取前可喷杀菌）（药，可顶芽或侧芽）。可顶芽或侧芽）。 ②从试管苗获取。从试管苗获取。
第一节一、离体根的培养意义：（一）意义： ①生理代谢研究的优良实验体系 ②研究器官分化形态建成的良好体系 ③建立快速生长的根无性系 ④进行诱变育种营养器官的培养
营养器官的培养——根的培养营养器官的培养——根的培养
（二）培养方法 1. 培养基选择 White培养基；2/3或1/2 MS 和 B5培养基培养基；或培养基培养基注：离体根生长要求提供全部必需元素，蔗糖、硝态氮效果好，提供全部必需元素，蔗糖、硝态氮效果好，加入 B1、B6最重要生长素对离体根影响不一致。最重要， B1、B6最重要，生长素对离体根影响不一致。培养温度25 27℃，暗光培养。 25－温度25－27℃，暗光培养。
离体根
脱分化培养基
愈伤组织
再分化培养基
分化芽
再生植株
植物器官的培养
二、茎尖的培养
•1.茎尖培养概念及类型 1.茎尖培养概念及类型 1. •2.茎尖培养方法及步骤 2.茎尖培养方法及步骤 2.
营养器官的培养——茎尖的培养营养器官的培养——茎尖的培养
（一）茎尖培养概念及类型
茎尖培养：茎尖培养：切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分，进行无菌培养。茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为：茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为：微茎尖培养: 微茎尖培养带有1-2个叶原基的生长锥, 其长度不超过0.5mm 普通茎尖培养：普通茎尖培养：较大的茎尖(如几mm到几十mm)、芽尖及侧芽这里主要讲普通茎尖培养。这种培养技术简单，操作方便，茎尖容易成活，成苗所需时间短

植物组织培养植物器官以及组织培养

植物组织培养植物器官以及组织培养
（5）生根培养刚形成的芽苗往往比较弱小，多数无根，此时可降
低或不加细胞分裂素浓度，提高生长素浓度，促进芽苗生根，提高其健壮度。（6）炼苗移栽
选择生长健壮，有3～5条根的生根苗进行炼苗，移栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫。当苗完全成活后，再移向大田。
（四）果实和种子的灭菌
表皮有茸毛或蜡质，需在灭菌剂中加入几滴土温-80。果实70%酒精浸泡数秒—0.1-0.2%氯化汞浸泡3-10min，（或1%次氯酸钠浸泡10-20min）—灭菌水冲洗3-5次—无菌滤纸吸干—分割—接种。
植物组织培养植物器官以及组织培养
初代培养物的建立
（一）无菌环境
培养基、接种器械、超净工作台、接种室环境、抗生素物质（去除侵入组织内部的病菌。见表）
器官发生体细胞胚胎发生
植物组织培养植物器官以及组织培养
形态发生和植株再生
器官发生：芽或芽原基起源于培养组织中比较表层的细胞，即外起源。根原基发生在组织较深处，即内起源。两者之间一般没有什么联系，呈现单向极性。
胚状体发生：极大多数体细胞胚起源于单细胞，形成的胚状体具有双极性，在其发育的早期阶段，在方向相反的两端分化出茎端和根端，其维管组织与母体植物或外植体的维管组织通常没有联系。胚状体维管组织呈独立的Y形。
植物组织培养植物器官以及组织培养
拟定培养方案
外植体预处理
外植体无菌接种
启动培养
分化出芽、胚状体或原球茎
继代增殖培养
生根培养
炼苗移栽
成活供生产使用
培养基配制灭菌
植物组织培养的一般程序
植物组织培养植物器官以及组织培养
第一节植物器官和组织培养的基本程序

植物的器官和组织培养

二、植物根段培养
植物根段培养是指以植物的根切段为外植体进行离体培养，再生完整植株的过程。是研究根系生理代谢、器官分化及形态建成的良好实验体系。培养方法与叶片培养相似。
培养过程包括愈伤组织诱导、不定芽分化、无菌苗的增殖与生根等。
大蒜根尖培养及植株再生
三、植物茎段培养
植物茎段培养是指对植物的带有定芽或不定芽的外植体进行离体培养，再生完整植株的过程。
利用灭菌剂对外植体灭菌
无菌水冲洗 3-5次
1、茎尖、茎段、叶片的灭菌 2、根、块茎、鳞茎的灭菌 3、花蕾的灭菌 4、果实、种子的灭菌
二、初代培养物的建立
（一）无菌环境（二）规范操作（三）条件合适
三、形态发生和植株再生
外植体愈伤组织
体胚途径
植株
具根茎的两极器官
器官化途径
先茎后根
单极器官
先根后茎
对培养的要求：成熟种子萌发培养所用培养基成分简单，不需生长调节剂；未成熟种子萌发培养则需要添加一定的营养成分和生长调节剂。若需要其形成愈伤组织，需要相应的生长调节剂及营养物质。
第四节植物组织培养和脱毒苗的生产
一、植物分生组织(meristem culture)培养：
定义：是指对植物的分生组织进行离体培养的技术，包括植物根尖、茎尖等顶端分生组织和形成层组织的培养。其中茎尖培养广泛应用于植物再生和脱病毒研究。
植物茎尖培养过程
➢茎尖离体培养可能出现的培养反应：
生长太慢生长过旺，愈伤增多生长正常
三、利用茎尖培养生产脱毒苗
脱毒苗生产的意义茎尖脱毒机理基本技术规程影响脱毒效果的因素
1、脱毒苗生产的意义：
目前受病毒危害严重影响生产的有：

植物组织培养

Vc具有很强的还原能力，常用于防止组织褐变。
（3）肌醇又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用。使用浓度：一般为lOOmg／L。作用：适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。
（4）氨基酸 (almino acide）作用：蛋白质的组成部分，也是一种有机氮化合物。是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。种类：最常用的是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等半胱氨酸及多种氨基酸的混合物（水解酪蛋白、水解乳蛋白）等。
（11）再分化经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可又转变为各种不同细胞类型的能力。（12）分化培养经过脱分化阶段的外植体（形成愈伤组织），转移到另一培养基上分化出芽（或小球茎）或胚时，则称为分化培养，所用的培养基为分化培养基。
（13）增殖培养已分化芽、小球茎或无性幼胚再继续进行增殖，即
1. 培养条件可人为控制，周年生产
植物组织培养中的植物材料完全是在人为提供的培养基及小气候环境下生长的，摆脱了大自然中四季、昼夜气温频繁变化及灾害性气候等外界不利因素的影响，且条件均一、对植物生长极为有利。因此植物组织培养不受气候和季节的限制，可周年进行生产。
2. 生长周期短，繁殖速度快
植物组织培养可根据不同植物、不同器官、不同组织的不同要求而提供不同的培养条件，满足其快速生长的要求，缩短培养周期。一般20~30d就完成一个繁殖周期.每一繁殖周期可增殖几倍到几十倍,甚至上百倍,植物材料以几何级数增加。
3. 管理方便，可实现工厂化生产
植物组织培养是在人为的提供一定温度、光照、湿度、营养和植物生长调节剂等条件下进行的，不受自然界中病、虫、杂草等有害生物危害，生产微型化、精细化、高度集约化，重复性强，便于标准化管理和自动化控制，真正实现了种苗的工厂化生产。与田间栽培、盆栽等相比，省去了中耕除草、浇水施肥、病虫防治等一系列繁杂劳动，可大大节省人力、物力及田间种植所需要的土地。

植物组织培养复习笔记【最新】

植物组织培养复习资料第一章绪论一、概念：植物组织培养：在无菌条件下，将离体的植物器官.组织，细胞以及原生质体. 培养在人1:培养基上和人工控制的环境中，使其生长，分化，增殖，甚至长出新的植株的过程和技术。

外植体：在无菌条件下，离体培养于人工培养基上的，用于达到某种培养目的的原始植物材料C培养基：根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求而人匚配制的营养基质即为培养基。

细胞全能性：植物体每一个细胞都含有该植物全部的遗传信息，在合适的条件下，具有形成完整植株的能力。

脱分化：一个成熟细胞恢复到分生状态或胚性细胞状态的现象。

再分化：是脱分化细胞重新恢复细胞分化能力，沿若正常的发育途径，形成具有特定结构和功能的细胞C二、组织培养的类型，不同分类依据（根据培养材料不同）可分为植株培养，胚胎培养，器官培养，组织或愈伤组织培养.细胞或原生质休培养5类：（根据培养目的）可分为试管嫁接，试管受精，试管加倍，试管育种等：（根据培养方法）可分为平板培养，微室培养，悬浮培养，单细胞培养等：（根据培养过程）可分为初代培养和继代培养：（根据培养基类型）可分为固体培养和液体培养。

三、三个发展阶段的关键人物1,haberlandt-一于1902年提出植物细胞全能性理论，被称为“组织培养之父”。

2,white—于1943年出版《植物组织培养手册》。

3,murashine和skoog -- 在1962年筛选出MS培养基。

四、植物全能性表达的过程培养一►脱分彳~再分化一培养五、组织培养的特点：1、植物基础学科研究的良好系统。

2、生物技术的基础。

3、经济高效.管理方便，利于自动化。

4、技术含量高，实验误差小，人工控制能力强。

5、生长周期短，生长速度快，实验重复性好。

6、实验材料经济，来源单一。

六、缺点：需要设备负复柴，投入资金多，电能消耗大：对人员技术水平要求高，对实验场所要求也高，不能代替田间试验。

第二章植物组织培养设备与培养条件一、实验室的组成及主要仪器和设备准备室：干燥箱，高压灭菌锅，电子天平，酸度计，水浴锅，冰箱。

3.植物细胞培养（植物组织培养）

3.植物细胞培养（植物组织培养）第三章植物细胞培养植物细胞培养：指对从植物器官或由愈伤组织上分离的单细胞（或⼩细胞团）进⾏培养，形成单细胞⽆性系或再⽣植株的技术。

Haberlandt（1902）⾸次尝试分离和培养植物叶⽚单细胞。

细胞培养的意义有利于进⾏细胞⽣理代谢以及各种不同物质对细胞代谢影响的研究。

进⾏细胞培养，通过单细胞的克隆化，即称为“细胞株”（cell line），可以把微⽣物遗传技术⽤于⾼等植物以进⾏农作物的改良。

细胞培养的增殖速度快，适合⼤规模悬浮培养，⽣产⼀些特有的产物，如许多种植物的次⽣代谢产物，包括各种药材的有效成分等，⽤于医药业、酶⼯业及天然⾊素⼯业，这是植物产品⼯业化⽣产的新途径。

由于植物组织培养中细胞之间在遗传和⽣理⽣化上会出现种种变异，这些细胞形成的植株也都表现出⼀定的差异。

这种差异反映在它们的植株的形态、产量、品质、抗病⾍和抗逆性等⽅⾯。

所以由单细胞培养获得的单细胞⽆性繁殖系，并对不同的细胞进⾏研究，在理论上和实践上都有很重要的意义。

细胞培养就是从⾼等植物的某个特定的器官或组织中取得单个细胞进⾏培养，并诱导其分裂增殖，由细胞分裂形成细胞团，再通过细胞分化形成芽根等器官或胚状体，长成完整植株。

第⼀节植物细胞培养⼀. 单细胞培养(⼀)单细胞分离1.机械法2.酶解法3.从愈伤组织中分离(⼆)单细胞的培养⽅法1、平板培养（细胞的⽣长周期）2、看护培养3、微室培养 4. 条件化培养⼆. 细胞悬浮培养（⼀）悬浮培养的⽅法1、分批培养（细胞的⽣长周期）2、半连续培养3、连续培养——封闭型、开放型（化学、浊度恒定式）4、固定化培养（⼆）培养细胞的同步化1. 化学⽅法(饥饿法、抑制法、有丝分裂抑制法）2. 物理⽅法（分选、低温）（三）培养基振荡⼀、单细胞培养（⼀）单细胞的分离1.机械法: Ball(1965)⾸次由花⽣成熟叶⽚利⽤机械的⽅法使叶⾁细胞得到分离的技术。

⑴⼑⽚刮: 取下叶⽚→叶⽚消毒(75%酒精或7%次氯酸钠)→撕去下表⽪(露出叶⾁细胞) →⽤解剖⼑刮下细胞→单细胞悬浮培养⑵研磨离⼼法: 取下叶⽚→叶⽚消毒(75%酒精或7%次氯酸钠) →研磨匀浆(10g叶⽚+40ml研磨介质)→匀浆过滤(细纱布) →离⼼(先低速去碎屑) →游离细胞沉降到底部(净化细胞) →植株培养或悬浮培养研磨介质: 20µmol蔗糖+ 10µmol MgCl2 + 20µmol Tris-HCl (pH7.8)机械法的特点：⑴细胞不受酶的伤害；⑵不发⽣质壁分离。

植物组织培养技术

植物组织培养技术第一章绪论第二章植物组织培养实验室组成、仪器设备及无菌操作技术第三章植物组织培养基本原理第四章器官培养技术第五章植物胚胎培养第六章花粉及花药培养第七章细胞及原生质体培养第八章组培培养技术在中药学上的应用第一章绪论一、植物组织培养的概念1. 概念植物组织培养（Plant tissue culture）广义上是指无菌条件下，在特定的培养基上对离体的植物器官、组织、细胞和原生质体甚至包括完整植株进行培养的技术。

2.主要特征（1）在培养容器中进行；（2）无菌培养环境，排除了微生物如真菌、细菌以及害虫等的侵入；（3）各种环境因子如营养因子、激素因子以及光照、温度等物理因子处于人工控制之下，并可达到最适条件。

（4）通常打破了正常的植物发育过程和格局；（5）随着单细胞和原生质体培养技术的发展，对植物显微结构进行操作成为可能。

二、植物组织培养类型：根据不同分类的依据可以分为不同类型。

1、根据培养材料不同分为：（1）完整植株培养（Plant Culture）：对幼苗和较大植株等的培养。

（2）胚胎培养（Embryo Culture）：包括成熟胚、幼胚、子房、胚珠等的培养。

（3）器官培养（Organ Culture）：包括离体根、茎、叶、果实、种子、花器官的培养。

（4）组织培养（Tissue Culture）：如分生组织、薄壁组织、输导组织培养。

（5）细胞培养（Cell Culture）：指对单细胞或较小的细胞团进行培养。

（6）原生质体培养（Protoplast Culture）：指对去掉细胞壁后所获得的原生质体进行培养。

2、根据再生途径分为：（1）器官发生途径（Organogenesis）：直接器官发生途径：植物器官可以直接由外植体上诱导。

如茎尖培养。

间接器官发生途径：成熟细胞经过脱分化（dedifferentiation）及再分化（redifferentiation）过程而形成新的组织和器官的过程。

植物器官和组织培养的基本程序

植物器官和组织培养的基本程序离体的植物器官和组织在人工培养条件下，通过不同的器官发生途径，形成体细胞胚或茎芽，进一步再生成完整植株。

因此，植物器官和组织培养的基本程序包括：无菌外植体的获得、初代培养物的建立、形态发生、植株再生以及培养产物的观察记载。

一、无菌外植体的获得从自然界和室内采集的植物器官和组织材料携带有各种微生物，这些污染源一旦进入培养容器中，造成培养基和培养材料污染，实验无法进行。

所以，污染是组织培养的一大障碍。

利用各种灭菌剂可以进行外植体的灭菌，但不同植物或同一植物不同器官和组织的带菌程度不同，所用灭菌剂的种类、浓度及灭菌方法也不尽相同。

(一)茎尖、茎段、叶片的灭菌灭菌前外植体用清水冲洗，茸毛较多的外植体用皂液洗涤后再用清水冲洗、用吸水纸吸干表面水分；将外植体浸泡在0.1%～0.2%的氯化汞溶液中2～10min，或先在70%～75%酒精中浸数秒，然后在10%次氯酸钙溶液中浸泡10～20min。

或先在70%～75%酒精中浸泡数秒，再在2%次氯酸钠溶液中浸泡15～30min进行灭菌；灭菌后倒掉灭菌液，无菌水冲洗外植体3～5次，置外植体于无菌滤纸上吸干表面水分，适当分割后接种。

(二)根、块茎、鳞茎的灭菌这类材料生长在土中，灭菌较困难，且挖取时易受损伤。

所以灭菌前应仔细清洗，对凹凸不平及鳞片缝隙处，需用软刷清洗，并切除损伤部位。

灭菌时应增加灭菌时间或增大灭菌剂浓度，如将外植体浸泡在0.1%～0.2%氯化汞溶液中5～12min，或在70%～75%酒精中浸数秒，然后用6%～10%次氯酸钠溶液浸5～20min进行灭菌。

灭菌后的操作步骤同上。

(三)花蕾的灭菌未开放花蕾中的花药为花被包裹，处于无菌状态，所以采摘后可直接灭菌。

灭菌时先在70%～75%酒精中浸蘸10～30s，然后在0.1%氯化汞溶液中浸泡3～10min或在1%次氯酸钠溶液中浸泡10～20min。

灭菌后的处理同上。

(四)果实、种子的灭菌这类材料有的表皮具有茸毛或蜡质。

植物组织培养(全)

(3)胚培养
胚培养是器官培养的一种。选用的外植体是成熟或未成熟的胚进行离体无菌培养。其具体方法是将取出放在液体或固体培养基上培养，由于胚包含在胚珠和子房里，因而进行胚胎培养时，常常是将胚珠和子房放在培养基上培养。
胚培养用途：1.拯救胚2.研究胚的发育营养研究3.一些特殊的领域的研究。
(4)细胞和原生质体培养
二是要给予它们适当的刺激，即给予它们一定的营养物质，并使它们受到一定的激素的作用。
全能性体现的两个过程
一个已分化的细胞要表现它的全能性，必须经历两个过程，即首先要经历脱分化过程，然后再经历再分化过程。
再分化的过程有两种方式：
一是器官发生方式二是胚胎发生方式
2.激素（植物生长调节剂）调控
后来证明，激素可调控器官发生的概念对于多数物种都可适用，只是由于在不同组织中这些激素的内生水平不同，因而对于某一具体的形态发生过程来说，它们所要求的外源激素的水平也会有所不同。
⑤1958年，Wickson和Thimann指出，应用外源细胞分裂素可促成在顶芽存在的情况下处于休眠状态的腋芽的生长。
当把茎尖接种在含有细胞分裂素的培养基上以后，将可使侧芽解除休眠状态，而且，能够从顶端优势下解脱出来的不只是那些既存于原来茎尖上的腋芽，此外，还有由原来的茎尖在培养中长成的侧枝上的腋芽，结果就会形成一个郁郁葱葱的结构，里面包含了数目很多的小枝条，其中每个小枝条又可取出来重复上述过程，于是在相当短的时间内，就可以得到成千上万的小枝条。当把这些小枝条转够到另外一种培养基上诱导生根以后，即可移植于土壤中。
奠基阶段（从20世纪30年代中至20世纪50年代末）
30年代中期，植物组织培养领域两个重要的发现，其一是认识了B族维生素对植物生长的重要意义；二是发现了生长素--一种天然的生长调节物质。

园艺植物组织培养ppt课件

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15
植物组织培养的应用原理
▪ 细胞的分化和形态建立：由脱分化的细胞再分化出完整植株有两种途径：一种叫做不定器官形成(adventitious organ formation)或叫做器官形成 (organogenesis)，即在愈伤组织的不同部位分别形成独立形成不定根和不定芽，另一种叫做体细胞胚胎发生 (somatic embryogenesis) ，即在愈伤组织的表面形成类似于合子胚的结构，我们称其为为体细胞胚，不定胚 (adventitious embryo)或胚状体 (embryo )，体细胞胚胎所经历的发育阶段与合子胚相似，一般经历球形胚、心型胚、鱼雷形胚和子叶胚4个发育阶段。
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21
奠基阶段
▪ 20世纪50年代开始以后
1952年Morel和Martin
1953-1954年Muir 1955年Miller 1957年skoog和Miller
1958年Steward
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22
迅速发展阶段
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1
绪论第一章、实验室设备和基本操作技术第二章、植物组织器官培养第三章、茎尖分生组织第四章、单倍体细胞培养第五章、细胞培养第六章、种质保存第七章、组培苗工厂化生产的经营与管理
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2
参考书
✓ 植物细胞组织培养，刘庆昌、吴国良，中国农业大学出版社，2003.1
11
组织培养类型
➢ 根据培养方法
1 平板培养 2 微室培养 3 悬浮培养 4 单细胞培养
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12
组织培养类型
➢ 根据培养基的作用 :1 诱导培养; 2 增殖培养; 3 生根培养 ➢ 根据培养目的: 1 脱毒繁殖; 2 微体快繁; 3 试管育种;试管嫁接 ➢ 根据培养条件:1 光培养; 2 暗培养 ➢ 根据培养过程:1 初代培养;2 继代培养

植物组织培养复习资料

第一章绪论植物组织培养类型根据培养材料不同分为：（1）完整植株培养：对幼苗和较大植株等的培养。

（2）胚胎培养：包括成熟胚、幼胚、子房、胚珠等的培养。

（3）器官培养：包括离体根、茎、叶、果实、种子、花器官的培养。

（4）组织培养：如分生组织、薄壁组织、输导组织培养。

（5）细胞培养：指对单细胞或较小的细胞团进行培养。

（6）原生质体培养：指对去掉细胞壁后所获得的原生质体进行培养。

根据再生途径分为：（1）器官发生途径（2）体细胞胚胎发生人工种子：是指植物离体培养产生的胚状体或不定芽被包裹在含有营养和保护功能的人工胚乳和人工种皮中，从而形成能发芽出苗的颗粒体。

作为繁殖材料。

植物组织培养技术的应用：1、优质种苗的快速无性繁殖1）无性繁殖作物及不易繁殖作物的快速繁殖2）通过茎尖培养生产脱毒健康种苗2、用于植物遗传育种包括种质资源离体保存；花粉花药培养产生单倍体；胚乳培养产生三倍体；胚培养拯救杂种胚克服远缘杂交障碍；原生质体培养进行体细胞杂交；植物体细胞无性系变异诱导和筛选；用于植物基因转移操作等。

3、大规模植物细胞、组织和器官培养生产次生代谢物质4、用于植物生长发育理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等第二章植物组织培养的基本技术组培实验室：包括化学实验室或准备室、接种室以及培养室三部分，并且按顺序排列。

在化学实验室与接种室之间应留有缓冲空间。

（1）准备室：用于培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整理等工作。

冰箱、天平、高压灭菌锅、pH计、干燥箱、实验台、水槽、凉干架、药品柜、离心机、水浴锅、微波炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、移液器、各种玻璃器皿（烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等）及培养基分装用品等。

（2）接种室：植物材料的灭菌、接种以及培养物的继代转接等。

超净工作台、紫外灯、小推车、搁架、磁盘、接种工具（各种镊子、解剖刀、手术剪、普通剪刀接种针、酒精灯、手持喷雾器、细菌过滤器等）等。

植物组织培养知识点归纳

植物组织培养知识点归纳1第1章植物组织培养:指植物器官、组织、细胞、原生质体等的培养。

体内使用人工培养基使它们生长成完整的植物2，外植体:在植物组织培养中，为无菌细胞、组织、器官等。

从活植物中提取并接种在培养基上的称为外植体。

3，愈伤组织:指在人工培养基上无序地从外植体中生长出来的大量薄壁细胞。

4.1的应用。

1农业应用。

幼苗的快速繁殖。

无病毒培养3。

(1)倍性育种，缩短育种年限，具有明显的杂种优势；(2)克服远缘杂交(胚胎培养)的不亲和性和不育性；(3)种质保存(4)变异2的创造，在遗传学、分子生物学、细胞生物学、组织学、胚胎学、基因工程、生物工程等方面的应用。

用于基因工程创造植物新种质用于植物生长发育的理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学、细胞和分子生物学等。

3。

使用组织培养材料作为植物生物反应器第2章1，全能性:任何具有完整细胞核的植物细胞都具有形成完整植物所必需的所有遗传信息以及发育成完整植物的能力。

2，细胞分化:指导致细胞形成不同结构和功能变化或潜在发育模式的过程3，去分化:指在体外生长的细胞、组织或器官逐渐失去原来的结构，恢复分生组织状态，形成无组织结构的细胞团或愈伤组织的过程4，再分化:指去分化细胞恢复其分化能力并形成具有特定结构和功能的细胞、组织、器官甚至植物的过程5，植物组织培养中经常遇到的问题及解决方法1，污染与预防:1，真菌污染后，如果孢子已经形成，必须在高压灭菌后丢弃然而，在细菌污染的情况下，只要及时发现，材料仍然可以使用，并且材料上部不易受细菌影响的部分被切割和转移。

2.用抗生素等抗菌剂处理会影响植物材料的正常生长第二，的褐变和防止(1)选择合适的外植体(2)适宜的培养条件(3)用抗氧化剂连续转移(4)，玻璃化和防止(1)提高培养基中的溶质水平和降低培养基中的水势；(2)减少培养基中氮化合物的量；(3)增加光照；(4)增加容器通气量和施用CO2肥料对降低试管苗玻璃化有明显效果。

第三章植物组织培养的基本原理2011.3.9

（二）再分化
1.定义定义再分化（redifferentiaton）：离体培养的）：离体培养的再分化（）：植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成另一种或几种类型的细胞、组织、分化，形成另一种或几种类型的细胞、组织、器官、甚至形成完整的植株的现象。器官、甚至形成完整的植株的现象。
兰花的原球茎生命力强，遗传性状稳定，兰花的原球茎生命力强，遗传性状稳定，对快原球茎生命力强速繁殖及种质资源保存极为有利。速繁殖及种质资源保存极为有利。外植体接种后放置在23一25度的黑暗条件下培外植体接种后放置在23一25度的黑暗条件下培 23 个月后可分比出1 养，1～2个月后可分比出1至数个乳白色的原球在解剖镜下观察类似桑果形状的园球突起，茎，在解剖镜下观察类似桑果形状的园球突起，以后转绿，再经培养易呈根状茎（以后转绿，再经培养易呈根状茎（或呈树枝状的丛生形）。的丛生形）。
1新陈代谢方面：培养基新陈代谢方面：新陈代谢方面 2.调控能力方面：异养调控能力方面：调控能力方面 3.生长发育和繁殖方面：细胞脱分化，体细胞胚生长发育和繁殖方面：细胞脱分化，生长发育和繁殖方面发生。发生。 4.在遗传进化方面 4.在遗传进化方面：变异性增加
二、植物细胞分化
分化：指植物体各个部分出现异质性的现象，分化：指植物体各个部分出现异质性的现象，包括细胞分化、组织分化或器官分化等。细胞分化、组织分化或器官分化等。细胞分化：指在个体发育过程中，不同部位的细胞细胞分化：指在个体发育过程中，的形态结构和生理功能发生改变，的形态结构和生理功能发生改变，形成不同的组织和器官。和器官。细胞分化是发育生物学的核心问题，细胞分化是发育生物学的核心问题，是基因选择性活化或阻遏的结果。5%-10% 活化或阻遏的结果。

植物组织培养与器官培养

• 这几种常见的培养基为是：MS、ER、 B5、N6、NT、White等，其配方如下：
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培养基分类
• 根据培养基无机盐含量的差异将其分为以下4类：
①高无机盐含量培养基（植物器官、花药、细胞及原生质体培养）；-MS
②较高硝酸盐含量培养基（木本、十字花科和单子叶植物的组织和花药培养）；-B5
材料灭菌培养基筛选
器
官发
增殖、分化
培养基中激素配比
生
型
激素种类及浓度
基本
植株再生及鉴定基本培养基组成
程
渗透压
序
炼苗和移植
逐步过渡
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胚状体发生型(embryogenesis type)：
• 指植物器官、组织和细胞外植体经培养脱分化形成胚状体再成苗的方式。
• 技术关键：提高不同外植体胚状体发生及萌发率和提高胚状体同步化率。
FLash
• 技术关键：打破顶端优势，促使腋芽增殖并促其生根。
• 特点：繁殖率高、保持物种的遗传稳定性，多用于林木
的繁殖。
器官型(organ type)
• 指直接从茎、叶、鳞片等外植体上诱导不定芽或带芽的休眠器官（如小鳞茎、小球茎、小块茎）产生再生成植株的方式。
• 技术关键：对培养基要求高，控制好激素浓度，避免愈伤组织发生。
来自茎尖或茎段
培养物的不定芽。
• 通常玻璃化苗
恢复正常的比例很低，
在继代培养中仍然
形成玻201璃9/10化/6 苗。
32
玻璃化的解决方法
1. 增加培养基中的溶质水平，以降低培养基的水势；

植物组织培养基本原理园艺

● 植物的发育年龄 ● 培养器官或组织类型 ● 培养时间和细胞倍性
三．培养基
○ 植物营养 ○ 植物生长调节剂 ○ 培养基的物理性质
四．培养条件
#2022
第三章作业：
愈伤组织外植体
细胞水平再分化
薄壁细胞分生细胞管胞细胞色素细胞
再生植株
各种器官
器官水平再分化
(器官发生-----形成器官原基)
离体培养中器官发生的两种类型：
1. 器官型
2. 器官发生型
组织水平再分化
分生组织
维管组
结织
节
3.2.3 植株再生
离体培养中再生植株的主要途径：器官发生途径和胚胎发生途径
外植体细胞
胚胎发生愈伤组织
萌发
脱分化（器官发生型）器官发生
不定根
器官发生（器官型）
胚胎发生
不定芽萌发
再生植株
三．愈伤组织培养
四．愈伤组织形成过程的三个阶段
○ 诱导期：外植体细胞准备进行分裂的时期； ○ 分裂期：外植体外层细胞迅速分裂并逐渐恢复到分生组织状态，细胞进行脱分化的时
期； ○ 分化期：分裂期的愈伤组织中由于一些停止分裂的细胞内发生一系列形态和生理变化，
丛生芽：指由顶芽或侧芽在适宜的培养基和培养条件下，诱导腋芽原基不断萌发而形成的丛生状芽。
原球茎：兰科植物组织培养中形成的一种特殊的中间繁殖体，是呈珠粒状、由胚性细胞组成、基部生假根、类似嫩茎的器官。圆球茎可以增殖形成原球茎丛。
3.2.2 再分化
外植体经离体培养形成完整再生植株所经历的再分化过程:
脱分化和再分化
脱分化概念：
再分化概念：
不定芽：植物组织培养中，外植体在适宜的培养基和培