综合实验_槐花米中芦丁的提取与鉴定(给学生)

综合实验槐花米中芦丁的提取与鉴定

（一）实验目的

(1)通过芦丁的提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理和操作。

(2)掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷的检识方法。

(3)掌握薄层层析法的操作。

(4)掌握由芦丁水解制取槲皮素的方法。

（二）实验原理

芦丁((rutin)亦称芸香苷（rutinoside），为黄酮苷，广泛存在于植物中，其中以槐花米(为槐树Sophora japnica，的花蕾)和乔麦叶中含量较高。芦丁的主要药理作用有抗炎作用、维P样作用及抗病毒作用，具有维持血管抵抗力，释低其通透性，减少脆性的作用；对脂肪肝有去脂的作用，与谷胱甘肽合去脂作用更明显；对于放射性伤害所引起的出血症也有一定治疗作用；临床上只要作防治高血压的辅助药物，毛细血管性止血药。芦丁水解后可生成槲皮素，槲皮素有一定的平喘作用；此外还有降低血压，增强毛细血管抵抗力，减少毛细血管脆性，降血脂，扩张冠动脉，增加冠状动脉血流量的作用。

槐花米中含芦丁8%~28%，槐花米甲素sophorin A 14% ，槐花米乙素sophorin B 1. 25%，槐花米丙素sophorin C 0. 35%，也含槲皮素quercetin、白桦脂醇betulin，槐二醇sophoradiol等。

本实验以常用中药槐花米为原料，对其主要成分芦丁进行提取分离及鉴定。根据芦丁分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提液加酸后加酸酸化则芦丁游离析出(碱溶酸沉法)，然后也可通过快速柱层析法对粗品进行纯化。

(三)实验步骤

1.芦丁的提取

（1）于250mL烧杯中加入120 mL石灰水溶液，0. 5 g硼砂，置于石棉网上加热至微沸后，加入10g槐花米粗粉，保持微沸60 min(不断搅拌)后，趁热用纱布包裹挤压过滤。滤渣再用100mL石灰水溶液同法操作一次。合并滤液，然后在60∽70℃保温情况下，以15%盐酸液调节pH为3∽4。静置过夜，使沉淀完全。

（2）将静置过夜的滤液的上层清液小心倾倒到烧杯中，剩下的少量液体和沉淀混合物用离心分离法得到沉淀，小心倒出离心管上层清液，再加入蒸馏水，用玻棒搅拌洗涤沉淀，离心，倒出上层清液，重复上述操作，直至倒出的蒸馏水洗液为中性，将离心管和沉淀一起放入烘箱中干燥，称量。

2.薄层层析法分离纯化芦丁

将少粗产品、芦丁标样、槲皮素标样用乙醇溶解，作点样用。用乙酸乙醋一丁酮一冰醋酸一水（5：3：1：1）混合溶剂为展开液，对上述样品进行薄层板对照展开，确定芦丁粗产品中的成分。

3.芦丁粗品的重结晶

将剩余粗品按在热水中1:200的溶解度加蒸馏水进行重结晶。将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15min，趁热抽滤。滤液充分静置析出晶体，抽滤，60~70℃干燥，称量。测定熔点。

4.芦丁的水解

称取1g得到的芦丁纯品溶于95%乙醇中(每1g芦丁需加约35 mL乙醇)，加入1mol/LH2 S04溶液(每1g芦丁需加约80 mL)，在250mL圆底烧瓶中水浴回流30min(薄层层析检查水解时候完全)。待全部水解后，改成蒸馏装置，蒸去乙醇(乙醇回收)，冷却、离心、水洗、干燥称量，计算得率。

5.性质试验

（1）盐酸-镁粉反应：取少量芦丁，加数滴乙醇溶解，加5滴浓盐酸，再加

少量镁粉，观察颜色变化。

（2）醋酸铅沉淀反应：取芦丁少许溶于热水，加乙酸铅试剂数滴，观察结果。（3）莫里斯克氏反应:分别取芦丁和槲皮素少量，置2支试管中加乙醇数滴，加a-萘酚几滴震摇使其溶解，倾斜试管，沿管壁滴加浓硫酸5滴，静置，观察两层溶液界面处颜色变化，并比较芦丁和槲皮素的区别。

思考题

1.加入石灰水的目的是什么?用15%盐酸溶液调酸度时为何控制pH大小?

2.加入硼砂的目的是什么?

3.黄酮类化合物还有那些提取方法？本实验中芦丁还可用何种方法提取？