土壤脲酶、蔗糖酶、磷酸酶活性的测定

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土壤酶活性测定方法【最新】

土壤酶活性测定方法土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。

它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。

土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。

根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。

人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。

土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。

本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。

二、试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。

3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。

将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。

4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。

将A、B溶液保存在冰箱中。

使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。

5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。

6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg 氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml）制成氮的工作液（0.01mg/ml）。

三、操作步骤称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯，振荡均匀，15min后加10ml10%尿素溶液和20ml PH 6.7柠檬酸盐缓冲溶液，摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。

培养结束后过滤，过滤后取1ml滤液加入50ml容量瓶中，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。

20min后显色，定容。

土壤五种酶的测定方法

参考文献：1、关松荫等，编著. 土壤酶及其研究法[M].农业出版社，1986.2、周礼凯，编著. 土壤酶学[M].科学出版社关松荫等，1986蔗糖酶：比色法(1) P274-276脲酶：比色法P294-297蛋白酶：比色法9(1) P302-304磷酸酶：磷酸苯二钠法(2) P312-313过氧化氢酶：容量法P323蔗糖酶比色法1、试剂(1) 苯甲酸溶液0.25%(2) 3,5-二硝基水杨酸(3) pH5.5磷酸缓冲液(4) 8%蔗糖溶液(5) 甲苯2、操作步骤5克风干土→50mL三角瓶→15mL 8%蔗糖溶液→5mL pH5.5磷酸缓冲液→5滴甲苯→摇匀放入恒温箱→37℃培养24h →取出迅速过滤→吸取滤液1mL →流水冷却3min →蒸馏水稀释至50mL →508nm比色3、结果计算蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。

葡糖糖（毫克）= a×4式中a——从标准曲线查得的葡萄糖毫克数4——换算成1g土的系数标准曲线：以光密度为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标。

Y=0.229×（－0.0209）R２=0.9961注意：Y值为吸光度值，相当于表中的A平均X值为根据上述公式计算的结果，相当于a值葡萄糖含量为a* 4 （毫克）蛋白酶比色法（1）1.试剂（1）1%酪素溶液（2）0.1N硫酸（3）20%硫酸钠（4）2%茚三酮液（5）甲苯（6）甘氨酸标准溶液2.操作步骤4g风干土→50ml三角瓶→20ml1%酪素液→1ml甲苯→30℃恒温箱24h→2ml0.1N硫酸→12ml20%硫酸钠液→15min(6000转/min)离心→上清液2ml 50ml容量瓶→1ml茚三酮→沸水浴10min→蒸馏水稀释至刻度→500nm比色3.结果计算蛋白酶活性，以24h后1g土壤中氨基氮的毫克数表示。

NH2-N(mg)=a*5式中 a——从标准曲线查得氨基氮毫克数b——换算成1g土的系数标准曲线：以光密度为纵坐标，以氨基氮浓度为横坐标。

土壤酶的测定方法

参考关松萌等编制的土壤酶及其研究法一、土壤蔗糖酶3，5- 二硝基水杨酸比色法：1、试剂的配制①3，5- 二硝基水杨酸溶液：称0.5g二硝基水杨酸，溶于20ml2N氢氧化钠和50ml水中，加30g的酒石酸钾钠，用水稀释至100ml.（不超过七天）②pH5.5磷酸缓冲溶液：1/15M磷酸氢二钠（11.867gNa2HPO4.2H2O溶于1L蒸馏水中）0.5ml加1/15M磷酸二氢钾（9.078g KH2PO4溶于1L蒸馏水中）9.5ml即成。

③8%蔗糖溶液。

④甲苯。

⑤标准葡萄糖溶液：将葡萄糖先在50—58℃条件下，真空干燥至恒重。

然后取500mg溶于100ml苯甲酸溶液中（5ml还原糖/ml）,即成标准葡萄糖溶液。

再用标准溶液制成1ml含0.01—0.05mg葡萄糖工作溶液。

标准曲线绘制：取1ml不同浓度的工作液，并按与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色，比色后以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。

2、操作步骤称5g风干土，置于50ml的三角瓶中，注入15ml8%蔗糖溶液，5ml pH5.5磷酸缓冲溶液和5滴甲苯。

摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。

到时取出，迅速过滤。

从中吸取滤液1ml，注入50ml容量瓶中，加3ml3，5- 二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。

溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50ml，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。

为了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个实验需做无土对照。

无土对照：不加土样，其他操作与样品实验相同。

无基质对照：以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同。

3、结果计算蔗糖酶活性以24小时后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。

葡萄糖（毫克）=a×4式中：a——从标准曲线查得的葡萄糖毫克数4——换算成1g土的系数二、土壤淀粉酶3，5- 二硝基水杨酸比色法:1、试剂配制①1%淀粉。

土壤蔗糖酶活性测定方法

土壤蔗糖酶活性测定1.原理采用3,5-二硝基水杨酸比色法。

该方法以蔗糖为基质, 基质在土壤蔗糖酶作用下生成葡萄糖, 葡萄糖和3,5-二硝基水杨酸反应生成橙黄色的3-氨基-5-硝基水杨酸, 并在508nm波长下有最大吸光值。

2.测定方法①称取壤土0.15g、砂土0.3g、粘土0.1g风干土于10mL离心管中, 加入0.06 mL甲苯和1mL ph5.5磷酸缓冲液, 再加3mL 8%蔗糖溶液, 摇匀后加盖, 放进36~37℃的培养箱中进行培养24个小时；②培养完成后取出, 摇匀, 并于4000r/min离心5min；③取上层清液0.2ml于20ml玻璃管中, 并加入0.5ml3,5-二硝基水杨酸, 再立即将玻璃管沸水浴中加热5min, 加热完毕后在自来水流下冷却3min；④将显色液体用蒸馏水稀释到5ml, 在508nm波长下比色, 记录吸光值。

3.蔗糖酶标准曲线的测定方法（1）葡萄糖标准溶液的配制a.饱和苯甲酸溶液的配制在洁净的烧杯中加入适量蒸馏水, 慢慢加入少量苯甲酸同时用玻璃棒搅拌, 直至苯甲酸溶解的同时出现析出的苯甲酸晶体为止。

b.标准葡萄糖溶液的配制称取500mg葡萄糖溶解于适量苯甲酸饱和溶液中, 并取100ml容量瓶用苯甲酸饱和溶液定容（5mg/ml）。

（2）.操作步骤a.取11支洁净20ml玻璃管编号0—10。

b.按下表加液编号: 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10葡萄糖母液（ml）0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07饱和苯甲酸（ml）0.2 0.195 0.19 0.185 0.18 0.175 0.17 0.16 0.15 0.14 0.13葡萄糖浓度（mg/ml）0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.04 0.05 0.060.07吸光值（A508nm）0 0.05 0.117 0.227 0.31 0.392 0.49 0.666 0.839 1.0061.176c.在玻璃管中各加入0.5ml3,5-二硝基水杨酸溶液, 并立刻放入沸水浴中加热5min.加热后, 立刻将玻璃管在流动自来水下冷却3min.冷却完毕后, 用蒸馏水定容至5ml.d.将显色液在508nm波长下比色。

土壤微生物量及土壤酶活性测定方法

2 土壤微生物量测定土壤微生物量（MB）是指土壤中体积小于5x103叩3的生物总量，但活的植物体如植物根系等不包括在内］。

它通过调控土壤中能量和养分循环以及有机物转化，来反映土壤同化和矿化能力。

土壤微生物生物量包括土壤微生物生物量碳、土壤微生物生物量氮、土壤微生物生物量磷和土壤微生物生物量硫，但一般情况下土壤微生物生物量的大小以土壤微生物生物量碳来表示。

2.1熏蒸浸提法2.1.1原理利用不同的浸提剂，通过氧化滴定法来测定土壤浸提液中有机C、N和P提取的可溶性有机碳含量和微生物量C之间存在较稳定的比例关系。

2.1.2则定步骤1.根据土壤样品含水量，调节土壤含水量为田间持水量的50%，25 ℃下密封培养10 d，以保持土壤均匀和不同地方所得结果的可比性。

2.氯仿熏蒸24 h后，用真空泵反复抽气，直到土壤闻不到氯仿气味为止。

根据所测对象不同选择不同的提取剂浸提，振荡浸提30 min后，立即分析浸提液中所测对象的含量或放入-15 ℃下保存。

表1指出氯仿熏蒸浸提法测定不同土壤微生物量所选用的浸提剂及其条件。

表1姓熏薪髓喉土就生帽条件Table I F'E fcrdieneasuirm aitcondiocnsof soilm riobialbmass土情即鄢Detemiia血cfhdicaMr Eitatnt土觥生醯K(=D,3S 或D.45土觥物1小K国加士躺蜘M恻般注®拓牖腌雄魂航觥刎楠融脑机装痴螭定雕耐帕帆小麒眼3 土壤酶活性测定土壤酶活性均用风干土壤。

土壤转化酶活性和过氧化氢酶活性、脲酶活性、磷酸酶活性依次用硫代硫酸钠滴定法、高锰酸钾滴定法、靛酚蓝比色法和磷酸苯二钠比色法测定（关松荫,1986）3.1脲酶一一靛酚蓝比色法脲酶的活性可以用来表示土壤供氮能力（一）方法原理土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。

土壤酶活性测定

土壤与环境微生物研究法／李振高，骆永明，滕应编著．一北京：科学出版社，2008过氧化氢酶（398-399）脲酶（404-405）磷酸酶（412-413）关松荫/土壤酶及其研究法农业出版社 1986年七月第一版蔗糖酶274-276土壤脲酶（urease）活性的测定方法：靛酚比色法（一）方法原理土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。

（二）试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，加蒸馏水90ml。

3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：取184g柠檬酸溶于300ml蒸馏水中，另取147.5g KOH 溶于蒸馏水，再将二种溶液合并，用1N NaOH将pH调节至6.7，用水稀释至1L。

4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5克苯酚溶于少量乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀释至100毫升（A 液），存于冰箱中；27克NaOH溶于100毫升水（B液）,存于冰箱中。

将A、B溶液保存在冰箱中。

使用前将两种溶液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。

5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。

6）氮的标准溶液：精确称取0.4717克硫酸铵溶于水并稀释至1000mL，得到1mL含有0.1mg 氮的标准液（100ppm）。

（三）测定步骤（1）标准曲线绘制吸取配置好的氮溶液10mL，定容至100mL，即为10ppm，吸取0、1、2、3、4、5、10、15、20 mL移至50mL容量瓶，加水至20mL，再加入4mL苯酚钠，仔细混合，加入3mL次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟,用水稀释至刻度。

即为0、0.2ppm、0.4ppm、0.6ppm、0.8ppm、1ppm、2ppm、3ppm、4ppm的标准曲线。

将着色液在紫外分光光度计上于578nm处进行比色测定，以标准溶液浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标绘制曲线图。

土壤酶活活性测定方法

土壤脲酶（urease）活性的测定方法：靛酚比色法（一）方法原理土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。

（二）试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100mL。

3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184克和147.5克氢氧化钾溶于蒸馏水。

将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释至1000毫升。

4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5克苯酚溶于少量乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀释至100毫升（A），存于冰箱中；27克NaOH溶于100毫升水（B）。

将A、B溶液保存在冰箱中。

使用前将2溶液各20毫升混合，用蒸馏水稀释至100毫升。

5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。

6）氮的标准溶液：精确称取0.4717克硫酸铵溶于水并稀释至1000mL，得到1mL含有0.1mg氮的标准液。

（三）测定步骤（1）标准曲线绘制吸取配置好的氮溶液10mL，定容至100mL，即稀释了10倍，吸取1，3，5，7，9，11，13mL移至50mL容量瓶，加水至20mL，再加入4mL苯酚钠，仔细混合，加入3mL次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟,用水稀释至刻度。

将着色液在紫外分光光度计上于578nm处进行比色测定，以标准溶液浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标绘制曲线图。

（2）土壤中脲酶活性的测定称取10 g土壤置于100mL容量瓶中。

用2mL甲苯处理15分钟。

往瓶中加入10mL 10%尿素溶液和20mL柠檬酸缓冲液（pH6.7）。

仔细混合后，将瓶放在37℃恒温箱中，放置3 h。

与此同时，进行以水代替基质，及无土壤的基质对照测定。

培养结束后，用热至38℃的水稀释至刻度。

摇匀，将悬液过滤。

吸取1mL 滤液于50mL容量瓶中，用蒸馏水加至10mL。

然后按标准曲线绘制的操作加入苯酚钠等试剂，显色，比色，最后根据标准曲线求出氨态氮含量。

土壤酶活性测定方法综合

土壤酶活性测定方法综合引言：土壤酶活性是指土壤中特定酶在一定时间内分解特定底物的能力，是评估土壤生态系统功能和土壤肥力状况的重要指标。

土壤酶活性测定方法是研究土壤酶活性的关键手段之一、本文将综合介绍常用的土壤酶活性测定方法，包括蔗糖酶活性测定方法、过氧化氢酶活性测定方法和脲酶活性测定方法。

一、蔗糖酶活性测定方法：蔗糖酶是一种重要的有机磷酸酶，广泛存在于土壤中，能够水解蔗糖为葡萄糖和果糖。

测定土壤蔗糖酶活性可以反映土壤中酶的数量和活性。

1.提取土壤酶液：将土壤与玻璃棒研磨均匀，用0.5mol/L甘油缓冲液（pH6.8）溶解土壤，离心沉淀，得到土壤酶液。

2.酶活性测定：取一定量的土壤酶液加入蔗糖底物和缓冲液，在37℃恒温振荡下反应30分钟，用酒精停止反应，加入硫酸，取样测定比色液的吸光度。

3.统计分析：根据比色液吸光度与标准曲线对照，计算出土壤蔗糖酶活性。

二、过氧化氢酶活性测定方法：过氧化氢酶是一种氧化还原酶，能够催化过氧化氢分解为氧气和水。

测定土壤过氧化氢酶活性可以反映土壤中氧化还原反应的发生情况。

1.提取土壤酶液：将土壤与甘油缓冲液混合，加入液氮使其冷冻破碎，离心沉淀得到土壤酶液。

2.酶活性测定：取一定量的土壤酶液加入过氧化氢底物和缓冲液，在25℃恒温振荡下反应一定时间，停止反应后加入酒精，用紫外分光光度计测定吸光度。

3.统计分析：根据吸光度与过氧化氢递减曲线对照，计算出土壤过氧化氢酶活性。

三、脲酶活性测定方法：脲酶是一种解脲酸酯的酶，能够水解尿素为氨和二氧化碳。

测定土壤脲酶活性可以反映土壤中氮循环的情况。

1.提取土壤酶液：将土壤与脲酸酯缓冲液混合，用玻璃棒研磨均匀，离心沉淀得到土壤酶液。

2.酶活性测定：将一定量的土壤酶液加入脲酶底物和缓冲液，在37℃恒温振荡下反应一定时间，反应停止后加入酒精，用比色法测定吸光度。

3.统计分析：根据吸光度与标准曲线对照，计算出土壤脲酶活性。

结论：以上就是蔗糖酶活性测定方法、过氧化氢酶活性测定方法和脲酶活性测定方法的综合介绍。

土壤酶的测定方法.

一、脲酶测定(苯酚钠-次氯酸钠比色法)脲酶是对尿素转化起关键作用的酶，它的酶促反应产物是可供植物利用的氮源，它的活性可以用来表示土壤供氮能力。

1、试剂配制：（1）pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。

（2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。

称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。

使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。

（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，溶液稳定。

（4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。

（5）N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL含0.1mgN 的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。

标准曲线绘制：分别取0、0.5、1.5、2.5、3.5、4.5、5.5、6.5mL氮工作液置于25mL刻度试管中，加蒸馏水至10mL，再加2mL苯酚钠溶液和1.5mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀，20min 后显色，定容25mL。

1h内再分光光度计上于578nm处比色。

1020304050607000.20.40.62、操作步骤（1）称取2.5ｇ土置于25mL 刻度试管中, 加0.5mL 甲苯处理,加塞塞紧轻摇15min;往瓶中加入2.5mL10%尿素液和5mL 的柠檬酸盐缓冲液(ｐＨ6.7),仔细混匀。

在37℃恒温箱中培养3ｈ。

（当脲酶活性为3~80微克NH3-N 时，本法能获得可靠的结果。

若脲酶活性小于3微克，培养时间需增至24h ）。

（2）然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上),摇荡,将悬液过滤。

对每一土样，设置用水代替基质的对照。

对整个实验，进行无土壤基质的对照，以检验实验的纯度。

土壤过氧化氢酶过氧化物酶磷酸酶蔗糖酶脲酶测定方法

土壤过氧化氢酶过氧化物酶磷酸酶蔗糖酶脲酶测定方法土壤中的过氧化氢酶、过氧化物酶、磷酸酶、蔗糖酶和脲酶是土壤中重要的酶类，对于土壤质量的评价和土壤生态系统的健康状况具有重要意义。

以下将介绍测定这些酶类的方法。

1.土壤过氧化氢酶检测方法：过氧化氢酶（Catalase, CAT）是土壤中一种重要的氧化酶，参与有机物的降解和土壤氧化还原过程。

测定土壤过氧化氢酶的常用方法为测定土壤样品的过氧化氢气体释放量。

实验步骤：（1）取一定量的土壤样品加入适量的过氧化氢底物（如双酚酸），在室温下反应一段时间。

（2）反应结束后，用紫外光度计测定反应液中过氧化氢的吸光度。

（3）根据吸光度的变化，计算出土壤样品中的过氧化氢酶活性。

2.土壤过氧化物酶检测方法：过氧化物酶（Peroxidase, POD）是土壤中一类重要的酶类，参与土壤的有机物降解和氧化还原过程，是土壤抗氧化系统的重要组成部分。

测定土壤过氧化物酶的常用方法为测定土壤样品中过氧化物酶的催化能力。

实验步骤：（1）取一定量的土壤样品加入适量的过氧化氢底物（如过氧化氢），在适宜的温度和pH条件下反应一段时间。

（2）反应结束后，用显色试剂（如双对苯偶氮、间苯二胺等）与反应液中的过氧化氢发生反应，形成有色物质。

（3）用分光光度计测定反应液中有色物质的吸光度，并根据吸光度的变化计算出土壤样品中过氧化物酶的活性。

3.土壤磷酸酶检测方法：磷酸酶（Phosphatase, AP）是土壤中一种重要的酶类，参与有机磷的矿化和土壤磷循环过程。

测定土壤磷酸酶的常用方法为测定土壤样品中磷酸酶对底物（如对硝基酚磷酸酯）的水解能力。

实验步骤：（1）取一定量的土壤样品加入适量的磷酸酶底物，在适宜的温度和pH条件下反应一段时间。

（2）反应结束后，用显色试剂（如酚氨反应液）与反应液中的产物发生反应，形成有色物质。

（3）用分光光度计测定反应液中有色物质的吸光度，并根据吸光度的变化计算出土壤样品中磷酸酶的活性。

土壤酶的测定方法

③8%蔗糖溶液。

④甲苯。

⑤标准葡萄糖溶液：将葡萄糖先在50—58℃条件下，真空干燥至恒重。

然后取500mg溶于100ml苯甲酸溶液中（5ml还原糖/ml）,即成标准葡萄糖溶液。

再用标准溶液制成1ml含0.01—0.05mg葡萄糖工作溶液。

2、操作步骤称5g风干土，置于50ml的三角瓶中，注入15ml8%蔗糖溶液，5ml pH5.5磷酸缓冲溶液和5滴甲苯。

摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。

到时取出，迅速过滤。

从中吸取滤液1ml，注入50ml容量瓶中，加3ml3，5- 二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。

溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50ml，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。

为了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个实验需做无土对照。

无土对照：不加土样，其他操作与样品实验相同。

无基质对照：以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同。

3、结果计算蔗糖酶活性以24小时后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。

葡萄糖（毫克）=a×4式中：a——从标准曲线查得的葡萄糖毫克数4——换算成1g土的系数二、土壤淀粉酶3，5- 二硝基水杨酸比色法:1、试剂配制①1%淀粉。

土壤微生物量及土壤酶活性测定方法

土壤微生物量及土壤酶活性测定方法土壤中的微生物是维持土壤生态系统健康的重要组成部分，土壤酶活性则可以作为评价土壤肥力和生物活性的重要指标。

因此，在土壤微生物量和土壤酶活性测定方面的研究非常重要。

本文将介绍几种常用的土壤微生物量和土壤酶活性的测定方法。

一、土壤微生物量测定方法1.铺平法：将土壤样品铺平在玻璃板上，使用显微镜对土壤中的微生物进行直接观察和计数。

这种方法的优点是简单易行，但需要大量的时间和人力。

2.累积碳法：通过测定土壤中的有机碳含量来间接估算土壤微生物量。

有机碳水平与微生物量密切相关，所以可以通过测定土壤中的有机碳来推测微生物的数量和活性。

3.培养法：将土壤样品接种到适当的培养基上进行培养，然后通过菌落计数或直接计数来估算微生物的数量。

这种方法适用于数量较多的微生物，如细菌和真菌。

4.傅里叶变换红外光谱法（FTIR）：通过测量土壤样品的傅里叶变换红外光谱，分析土壤中的微生物量。

该方法具有快速、准确、非破坏性等优点。

1.浊液法：通过观察测定液中的混浊度来测定土壤中的脲酶、过氧化氢酶等氧化酶的活性。

这种方法简单易行，但对于不同种类的土壤酶效果不一样。

2.比色法：采用酶底物与酶催化产物之间的化学反应，通过测定反应产物的颜色来估算土壤酶活性。

比色法可以用于测定脱氢酶、脱氢酶、脱氧核苷酸酶等酶的活性。

3.荧光法：将有机物和荧光试剂一起加入土壤样品中，经过反应后，在荧光分析仪中测定产生的荧光强度来测定土壤酶的活性。

荧光法适用于测定蔗糖酶、酚氧化酶和脱氢酶等酶的活性。

4.比浊法：通过加入酶底物后，观察土壤样品的混浊度来测定土壤中酶的活性。

比浊法适用于黄酶、脱氢酶等酶的活性测定。

5.电导法：通过测定土壤样品溶液中的电导率变化来估算土壤中酶的活性。

电导法适用于磷酸酶和脱氢酶等酶的活性测定。

总结起来，土壤微生物量和土壤酶活性的测定方法多种多样，选择合适的方法需要考虑样品特性和实验条件等因素。

每种方法都有其优点和局限性，研究者应根据需要选取合适的方法进行测定。

土壤酶活活性测定方法

土壤酶活活性测定方法酶活性是指酶在一定时间内单位体积或质量产生的酶催化反应产物的数量。

酶活性在土壤中起着关键作用，因为它们能够将无机和有机物质转化为可供植物吸收的形式。

常用的土壤酶活性指标包括脲酶、过氧化氢酶、蔗糖酶、碱性磷酸酶等。

下面将介绍常见的土壤酶活活性测定方法：1.脲酶活性测定：脲酶能够催化尿素的水解，生成氨和二氧化碳。

用于测定土壤脲酶活性的方法是通过在土壤样品中加入一定浓度的尿素，经过一定时间后，测量生成的氨量来评估脲酶活性水平。

2.过氧化氢酶活性测定：过氧化氢酶是一种重要的抗氧化酶，能够将过氧化氢分解为氧气和水。

测定土壤中过氧化氢酶活性的方法是在土壤样品中加入过氧化氢底物，经过一定时间后，通过测量反应体系中氧气释放速率来评估过氧化氢酶活性水平。

3.蔗糖酶活性测定：蔗糖酶是一种能够催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖的酶。

测定土壤中蔗糖酶活性的方法是在土壤样品中加入一定浓度的蔗糖，经过一定时间后，测量生成的葡萄糖和果糖的量来评估蔗糖酶活性水平。

4.碱性磷酸酶活性测定：碱性磷酸酶是一种能够催化有机磷酸盐水解为无机磷酸盐的酶。

测定土壤中碱性磷酸酶活性的方法是在土壤样品中加入一定浓度的磷酸酯底物，经过一定时间后，通过测量反应体系中无机磷酸盐生成的速率来评估碱性磷酸酶活性水平。

除了以上几种常见的土壤酶活性指标外，还有其他一些指标可以用于评估土壤酶活性，如脱氢酶、葡萄糖氧化酶等。

具体选择测定方法应根据实际需求和研究目的来确定。

总结起来，土壤酶活活性测定方法是通过测定土壤中特定酶活性水平来评估土壤质量和生态系统功能的一种手段。

常见的土壤酶活性指标包括脲酶、过氧化氢酶、蔗糖酶、碱性磷酸酶等。

选择适当的测定方法需要考虑实际需求和研究目的。

土壤脲酶、蔗糖酶、磷酸酶活性的测定

土壤酶活性的测定方法及部分样品配制详细请参考《土壤微生物分析方法手册》，《土壤酶及其研究法》土壤样品采集与制备土壤样品取样后混匀，用于土壤酶活性测定的土壤磨细过2mm筛后，置于4℃冰箱内保存备测。

1.土壤酶活性的测定方法1.1.脲酶采用靛酚蓝比色法方法原理：本法基于以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，用于尿酶活性的测定。

操作步骤：取10g风干土，置于100ml三角瓶中，加2ml甲苯，15min后加10ml 10%尿素液和20ml pH6.7柠檬酸盐缓冲液。

摇匀后在37℃恒温箱中培养3h。

按此操作，进行以水代替基质，及无土壤的基质对照测定，过滤后取0.5ml滤液于50ml比色管中，然后按绘制标准曲线显色方法进行比色测定。

氮的标液：精确称取0.4717g硫酸按溶于水并稀释至1000ml，则得1ml含0.1mg氮的标准液。

绘制标准曲线时，可将此液稀释10倍供用。

pH6.7柠檬酸盐缓冲液：用368g柠檬酸溶于600ml水，另取295g氢氧化钾溶于水，再将二种溶液混合，然后用1M的氢氧化钠调节pH到6.7，定容到2L。

苯酚溶液：称取苯酚（C6H5OH）10g和硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO2H2O]100mg稀释至1L。

此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

次氯酸钠碱性溶液：称取氢氧化钠（化学纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O, 化学纯）7.06g、磷酸钠（Na3PO4·12H2O, 化学纯）31.8g 和52.5g·L-1次氯酸钠(NaOCl，化学纯，即含5%有效氯的漂白粉溶液)10mL 溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

标线绘制：取稀释的标准液0、l、2、4、6、8、10ml，移于50rnl容量瓶中，然后加入蒸馏水至20mL。

再加4mL苯酸钠溶液和4mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀。

土壤酶的测定方法.

（2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。

称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。

使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。

（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，溶液稳定。

（4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。

（5）N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL含0.1mgN 的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。

1h内再分光光度计上于578nm处比色。

在37℃恒温箱中培养3ｈ。

（当脲酶活性为3~80微克NH3-N 时，本法能获得可靠的结果。

若脲酶活性小于3微克，培养时间需增至24h ）。

（2）然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上),摇荡,将悬液过滤。

对每一土样，设置用水代替基质的对照。

对整个实验，进行无土壤基质的对照，以检验实验的纯度。

几种常用的土壤酶活性意义及测定

几种常用的土壤酶活性意义及测定!a 氧化还原酶类：酶促氧化还原反应。

主要包括脱氢酶、过氧化氢酶、过氧化物酶、硝酸还原酶、亚硝酸还原酶等。

b 水解酶类：酶促各种化合物中分子键的水解和裂解反应。

主要包括蔗糖酶、淀粉酶、脲酶、蛋白酶、磷酸酶等。

c 转移酶类：酶促化学基团的分子间或分子内的转移同时产生化学键的能量传递的反应。

主要包括转氨酶、果聚糖酶、蔗糖酶、转糖苷酶等。

d 裂合酶类：酶促有机化合物的各种化学基在双键处的非水解裂解或加成反应。

包括天门冬氨酸脱羧酶、谷氨酸脱羧酶、色氨酸脱羧酶。

e 合成酶类：酶促伴随有ATP或其它类似三磷酸盐中的焦磷酸键断裂的两分子的化合反应。

f 异构酶类：酶促有机化合物转化成它的异构体的反应。

2.1 土壤脱氢酶活性土壤脱氢酶属于氧化还原酶系，它自一定的基质中析出氢或氢的供体而进行氧化作用，反映土壤微生物新陈代谢的整体活性，可以作为微生物氧化还原能力的指标，在研究生物动力学中极受人们的重视[10]。

2.2 土壤转化酶活性转化酶又名蔗糖酶，是广泛存在于土壤中的一个重要的酶，它对增加土壤中易溶性营养物质起着重要作用[6]。

2.4 土壤磷酸酶活性土壤磷酸酶是催化土壤中磷酸单酯和磷酸二酯水解的酶，它能将有机磷酯水解为无机磷酸[17]，土壤中有机磷是在它的作用下才能转化成可供植物吸收的无机磷[18]。

2.3 土壤脲酶活性脲酶在土壤酶系研究中是比较深入的，其酶促反应产物氨是植物氮源之一，其活性反映土壤有机态氮向有效态氮的转化能力和土壤无机氮的供应能力[16]。

3 结论在长期不同施肥处理之后，土壤脱氢酶、转化酶、脲酶及磷酸酶的活性均产生较大的差异，总体上是施肥高于不施肥，施肥处理间从高到低依次是OM（有机肥）、1/2 OM + 1/2 NPK、NPK、NP、PK、NK。

同时，脱氢酶活性随着年限的增加逐渐下降，转化酶与磷酸酶的活性趋于增高，而脲酶活性的年际变化规律在不同施肥处理间互不相同。

其中，夏季收获小麦后采集的土样的磷酸酶活性明显高于秋季收获玉米后采集的土样的测定结果，说明磷酸酶活性对因环境或管理因素引起的变化较敏感，具有很强的时效性。

土壤过氧化氢酶、过氧化物酶、磷酸酶、蔗糖酶、脲酶测定方法。

土壤酶活性测定方法土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。

它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。

土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。

根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。

人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。

土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。

本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚-次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。

二、试剂1）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。

3）PH6.7柠檬酸盐缓冲液：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。

将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。

4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml 丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。

将A、B溶液保存在冰箱中。

使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。

5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。

6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的标准液。

绘制标准曲线时，再将此溶液稀释10倍供用。

三、操作步骤标准曲线制作：分别吸取稀释后的标准液0、1、3、5、7、9、11、13ml，移于50ml容量瓶中，然后补加蒸馏水至20ml。

再加入4ml苯酚钠溶液和3ml 次氯酸钠溶液，随加随摇匀。

20min后显色，定容。

1h内在分光光度计上于578nm波长处比色。

然后以氮工作液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

土壤五种酶的测定方法

土壤五种酶的测定方法参考文献：1、关松荫等，编著. 土壤酶及其研究法[M].农业出版社，1986.2、周礼凯，编著. 土壤酶学[M].科学出版社关松荫等，1986蔗糖酶：比色法(1) P274-276脲酶：比色法P294-297蛋白酶：比色法9(1) P302-304磷酸酶：磷酸苯二钠法(2) P312-313过氧化氢酶：容量法P323比色法1、试剂(1) 苯甲酸溶液0.25%(2) 3,5-二硝基水杨酸(3) pH5.5磷酸缓冲液(4) 8%蔗糖溶液(5) 甲苯2、操作步骤5克风干土→50mL三角瓶→15mL 8%蔗糖溶液→5mL pH5.5磷酸缓冲液→5滴甲苯→摇匀放入恒温箱→37℃培养24h →取出迅速过滤→吸取滤液1mL →流水冷却3min →蒸馏水稀释至50mL →508nm比色3、结果计算蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。

葡糖糖（毫克）= a×4式中a——从标准曲线查得的葡萄糖毫克数4——换算成1g土的系数标准曲线：以光密度为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标。

Y=0.229×（－0.0209）R２=0.9961注意：Y值为吸光度值，相当于表中的A平均X值为根据上述公式计算的结果，相当于a值葡萄糖含量为a* 4 （毫克）比色法（1）1.试剂（1）1%酪素溶液（2）0.1N硫酸（3）20%硫酸钠（4）2%茚三酮液（5）甲苯（6）甘氨酸标准溶液2.操作步骤4g风干土→50ml三角瓶→20ml1%酪素液→1ml甲苯→30℃恒温箱24h→2ml0.1N硫酸→12ml20%硫酸钠液→15min(6000转/min)离心→上清液2ml 50ml容量瓶→1ml茚三酮→沸水浴10min→蒸馏水稀释至刻度→500nm比色3.结果计算蛋白酶活性，以24h后1g土壤中氨基氮的毫克数表示。

NH2-N(mg)=a*5式中 a——从标准曲线查得氨基氮毫克数b——换算成1g土的系数标准曲线：以光密度为纵坐标，以氨基氮浓度为横坐标。