病毒的鸡胚培养

7. 病毒的收获与鸡胚的观察
① 收集24h后死亡鸡胚，置4℃冰箱过夜，以免收获时流血; ② 取出冷却的鸡胚，消毒气室端卵壳表面； ③ 用镊子击破气室部卵壳并去除壳膜，撕破绒毛尿囊膜； ④ 以眼科镊镊住绒毛尿囊膜，用吸管吸取 尿囊液，置无菌容器中保存备用。 一般能尿囊液6-10mL。 ⑤ 取出鸡胚胎，于平皿内观察胚胎有无病 理变化，如出血、蜷缩、侏儒胚等。
四、实验内容
以尿囊腔接种为例，介绍新城疫病毒的接种方法： 1. 照胚：
取9~12日龄发育良好的鸡胚，观察气室及胚胎位置， 标出气室底边，在无大血管处标出尿囊腔注射部位。
2. 消毒
• 气室向上放置鸡胚于卵架上； • 先后用碘酊和酒精棉球消毒蛋壳所标记的位置。
距气室底边0.5cm
3. 打孔
• 在所标记注射部位用剪刀尖端打孔； • 注意用力要稳，恰好使蛋壳打通而不伤及壳膜。
④ 鸡胚接种的方法：
• 尿囊腔接种 • 绒毛尿囊膜接种： • 卵黄囊接种 • 羊膜腔接种 • 静脉接种
④ 鸡胚接种的方法：
• 尿囊腔接种 • 绒毛尿囊膜接种 • 卵黄囊接种： • 羊膜腔接种 • 静脉接种
④ 鸡胚接种的方法：
• 尿囊腔接种 • 绒毛尿囊膜接种 • 卵黄囊接种 • 羊膜腔接种： • 静脉接种
④ 血凝性：可凝集人、鸡、豚鼠和小白鼠的红细胞。 ⑤ 病毒分离培养：9~11日龄鸡胚尿囊腔接种。
三、实验材料
1. 2. 3. 4. 5. 常规接种工具：注射器、打孔器、酒精灯等； 待接种的新城疫病毒材料； 9~11日龄鸡胚（1个/人）； 灭菌生理盐水； 其他： • 镊子、照蛋器； • 酒精棉球、碘酊棉球； • 固体石蜡； • 灭菌瓶子、灭菌吸管 等。
④ 鸡胚接种的方法：
• 尿囊腔接种 • 绒毛尿囊膜接种 • 卵黄囊接种 • 羊膜腔接种 • 静脉接种 ：
2. 新城疫病毒
① 副粘病毒科/副粘病毒亚科/禽腮腺炎病毒属。 ② 新城疫的病原体。 ③ 形态： • • • • • 病毒子多呈球形； 单股负股RNA； 核衣壳螺旋形对称； 有囊膜； 囊膜表面有纤突。
实验九 新城疫病毒的鸡胚培养 与病毒滴度检测
扬州大学兽医学院 成大荣
2009年5月4日星期一
Байду номын сангаас
一、目的要求
1. 掌握鸡胚接种的常规方法； 2. 学习NDV的分离培养及其鉴定方法。
二、背景知识介绍
1. 病毒的鸡胚培养
① 鸡胚是正在发育的活体：
• 组织分化程度低； • 细胞代谢旺盛； • 适于许多病毒的生长增殖， 尤其是禽类病毒。
8. 新城疫病毒滴度的检测 血凝试验（HA）
• 凡能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数,称为该病毒的 血凝滴度。
六、思考题
1. 鸡胚接种过程中，应该注意的问题？ 2. 接种病毒后，24h内鸡胚死亡原因？ 3. 如何判断新城疫病毒的血凝滴度？ 4. 临床上还有哪些病毒具有血凝性？
4. 注入病毒材料
• 用1mL注射器抽取接种物； • 针头垂直刺入注射部位1-1.2cm即达尿囊腔内； • 注入待接种的新城疫病毒：接种量为0.1~0.2mL。
5. 封孔
• 用熔好的石蜡或消毒胶布封闭注射孔。
6. 孵育与观察
• 气室朝上于37℃温箱中孵育； • 以后每天检卵1~2次。 • 弃去24h内的死亡鸡胚： – 机械损伤、细菌或霉菌污染等引起。
② 鸡胚培养的优点： • 来源充足；
• • • • 价格低廉； 操作简单，无需特殊设备； 易感病毒谱较广； 对接种的病毒不产生抗体。
③ 鸡胚培养的缺点： • 非SPF鸡胚，可能含有某些家禽
病毒的母源抗体，甚至还可能带 有鸡白痢沙门氏菌、支原体、鸡 白血病病毒、鸡贫血病毒等。
④ 鸡胚接种的方法：
• 尿囊腔接种： • 绒毛尿囊膜接种 • 卵黄囊接种 • 羊膜腔接种 • 静脉接种