微生物的培养与分离一轮学案概诉
微生物的分离和培养学案
选修1 生物技术实践单元思维导图第1讲微生物的分离和培养活动一微生物菌落与培养基【自主先学】1．微生物含义：微生物是一切肉眼____________________的微小生物，个体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚的生物。
2．菌落的含义：菌落是指单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，形成肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体。
不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落一般都具有特殊的、稳定的特征，如菌落的大小、形状、边缘特征、隆起程度、颜色等。
__________是鉴定菌种的重要依据。
【合作探究】2．培养基的营养要素4．概述牛肉膏蛋白胨的斜面培养基和平板培养基的制备过程？斜面培养基：计算→称量→溶化→调H →分装→包扎→灭菌→搁置斜面平板培养基：计算→称量→溶化→调H →灭菌→倒平板【精讲点拨】1．基本营养要素： 碳源、氮源、无机盐、水、生长因子等。
①微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。
②对异养微生物来说，含C 、H 、O 、N 的有机化合物既是碳源，又是氮源、能源。
异养微生物只能利用有机碳源。
③有些培养基不需要添加特殊营养物质，生物自己能合成，如大肠杆菌能合成某些维生素，作为特殊营养物质。
2．牛肉膏比较黏稠，如何将称量好的牛肉膏倒入烧杯中？将牛肉膏和称量纸一同放入烧杯，加少量水后加热，待牛肉膏与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。
3．琼脂加入烧杯后，为何要不断搅拌？加入琼脂后，需不断用玻璃棒搅拌直至完全熔化，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。
4．如何搁置斜面培养基？灭菌后的试管培养基冷却至50℃左右，放在合适的物体上，使其自然倾斜，斜面长度不超过试管总长的二分之一。
5．倒平板时如何防止杂菌污染？全部操作需在酒精灯火焰旁，以防止杂菌污染；锥形瓶口迅速通过火焰；将锥形瓶中的培养基倒入培养皿时，培养皿盖打开一条刚能让锥形瓶口通过的缝隙；平板冷凝后，将平板倒置。
01-2微生物的分离和纯培养学案(2)
答案：
1——5 BDAB A 6——10 CCCB C
11 . ( 2 ）①将2 支琼脂培养基试管置于水浴锅中加热熔化；②待培养基冷却至凝固前，用无菌接种设备将某细菌接种于一试管培养基中，摇动试管，使细菌均匀混于培养基内，另一支试管不接种作对照；③将恒温箱内调至适宜的温度，等琼脂凝固后，将两试管置于恒温箱内培养，每天观察培养基的菌落并记录，连续观察几天，直至结果清晰为止。
( 3 ）①若某菌落只生长在培养基表面则其为好氧性细菌；②若某菌落只生长在培养基底部，则其为厌氧性细菌；③若试管培养基的内部和表面均有菌落生长，则其为兼性厌氧细菌；④对照试管若无菌落出现说明培养基灭菌和无菌操作合乎要求，若对照管有菌落出现，则说明培养基灭菌或无菌操作不合要求，整个实验应重做。
苏教版高中生物选修1-1.1 微生物的分离和培养-教案设计
微生物的分离和培养【教学目标】1.知识与技能了解微生物的分离和培养发展的历史。
2.过程与方法举例说明微生物的分离和培养的基本过程。
3.情感、态度与价值观：关注与微生物的分离和培养有关的社会问题，培养学生的社会责任感。
【教学重难点】重点：了解微生物的分离和培养的意义。
难点：了解微生物的分离和培养对于人类生活和社会生产的价值。
【教学过程】一、引入微生物种类繁多，在自然界分布广泛，为了深入地研究它们的特性，首先要对其进行分离与培养。
掌握无菌操作的技能（如使用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌）是进行微生物分离与培养的基础；掌握微生物培养基的配制技术（如配制细菌培养基），学习微生物接种和培养的方法等，是实现微生物分离和培养的必要条件。
二、讲授新课1.微生物的分离和培养的基本过程高压蒸汽灭菌锅实验室常利用高温处理达到灭菌效果，包括采用干热灭菌或湿热灭菌等方法。
干热灭菌方法是将准备灭菌的物品放在干热灭菌箱内，在160〜170℃下加热1〜2h以达到灭菌的目的。
湿热灭菌方法常采用高压蒸汽灭菌锅进行，如手提式高压蒸汽灭菌锅就是实验室常用的灭菌仪器之一。
高压蒸汽灭菌锅的使用包括加水、装锅、加热排气、保温保压、出锅等步骤。
加水是指使用前在锅内加入适量的水。
加水不可过少，以防将灭菌锅烧干。
装锅是指将待灭菌物品放在灭菌桶中（不要装得过满），盖好锅盖，按对称方法旋紧四周固定螺栓，打开排气阀。
加热排气是指加热后，锅内水沸腾并有大量蒸汽自排气阀冒出时，维持2〜3min以排出冷空气。
如待灭菌物品较大或不易透气，应适当延长排气时间，务必使空气充分排出，然后将排气阀关闭。
保温保压是指当气压升至100kPa、温度达到121℃时控制热源，保持压力，维持20-30min后，关闭电源。
出锅是指当压力表中指针降至“0”点，并待温度下降后，打开排气阀，旋开固定螺栓，开盖，取出灭菌物品。
若当压力表指针尚在“0”点以上、温度也在100丈以上时开启排气阀，会因压力骤然降低而造成培养基剧烈沸腾，并冲出管口或瓶口，污染棉塞，以致培养微生物时引起杂菌污染。
《微生物的分离和培养》 导学案
《微生物的分离和培养》导学案一、学习目标1、了解微生物分离和培养的基本原理和方法。
2、掌握无菌操作技术在微生物实验中的应用。
3、学会制备培养基和进行微生物的接种、培养与观察。
二、学习重点1、无菌操作技术的要点和规范。
2、培养基的制备方法和注意事项。
3、微生物分离和培养的实验流程。
三、学习难点1、如何确保无菌操作的有效性，避免杂菌污染。
2、选择合适的分离方法，从混杂的微生物群体中分离出目标微生物。
四、知识回顾1、微生物的定义和种类微生物是指个体微小、结构简单的生物，包括细菌、真菌、病毒、原生生物等。
2、微生物的特点（1）体积小，面积大。
（2）吸收多，转化快。
（3）生长旺，繁殖快。
（4）适应强，易变异。
五、新课导入在日常生活中，我们经常会接触到各种各样的微生物。
比如，制作酸奶需要乳酸菌，酿酒需要酵母菌。
那么，这些微生物是如何从复杂的环境中被分离出来，并进行培养和研究的呢？这就是我们今天要学习的内容——微生物的分离和培养。
六、微生物分离和培养的基本原理1、选择合适的培养基不同的微生物对营养物质的需求不同，因此需要根据目标微生物的特点选择合适的培养基。
例如，培养细菌通常使用牛肉膏蛋白胨培养基，培养真菌可以使用马铃薯葡萄糖培养基。
2、创造无菌环境微生物在自然环境中往往与其他微生物混杂在一起，为了获得单一的微生物种群，需要创造无菌环境，防止杂菌污染。
3、采用适当的分离方法常见的微生物分离方法有平板划线法、稀释涂布平板法等。
平板划线法通过多次划线，将微生物逐步稀释分散，最终在平板上形成单个菌落；稀释涂布平板法是将菌液进行一系列稀释，然后涂布在平板上，培养后也能得到单个菌落。
七、无菌操作技术1、消毒和灭菌的概念及方法消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。
常见的消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法等。
灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
高三新高考生物人教版一轮学案选修1第2讲微生物的培养与应用
第2讲微生物的培养与应用课标导航3.1.1阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提3.1.2阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术3.1.3举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物3.1.4概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法3.1.5概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法一、微生物的实验室培养1．培养基2．无菌技术3．大肠杆菌的纯化培养二、土壤中分解尿素的细菌的分离三、分解纤维素的微生物的分离1．实验原理2．实验流程[基础微点练清]1．判断正误(1)培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利[新人教版选择性必修3 P14“概念检测”T1(1)](×)(2)消毒和灭菌的杀菌程度存在差异(√)[新人教版选择性必修3 P14“概念检测”T1(2)](3)微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物[新人教版选择性必修3 P14“概念检测”T1(3)](×)(4)消毒的原则是既能杀死材料表面的微生物，又要减少消毒剂对细胞的伤害(√)(5)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌(×)(6)相对于未被污染的土壤，从被石油污染的土壤中更容易分离到石油降解菌(√)[新人教版选择性必修3 P20“概念检测”T1(3)](7)用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就可在培养基表面形成单个菌落(√)2．下列有关微生物培养的叙述，错误的是()A．测定土壤样品中的细菌数目，常用稀释涂布平板法进行菌落计数B．在对微生物进行培养前，需要对微生物和培养基进行灭菌C．酵母菌发酵过程产生的酒精，对其他微生物生长有一定的抑制作用D．分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源解析：选B在对微生物进行培养前，需要对培养基进行灭菌，不能对所培养的微生物进行灭菌。
高中生物 第一章 微生物培养技术 第一节 微生物的分离和纯培养学案 中图版选修1
第一节微生物的分离和纯培养1．运用微生物培养技术，完成微生物的分离和培养。
2．比较消毒与灭菌的区别及适用范围。
3．举例说明常用的消毒与灭菌的方法。
4．阐明接种的方法。
一、培养基在进行微生物的分离和纯培养时，可根据微生物生长繁殖和代谢的需要，将各种营养物质混合在一起，配制成适合微生物生存的营养基质——培养基.将溶化后的固体培养基基质倒入无菌培养皿,冷却凝固后制成的培养基称为平板培养基.二、纯培养将所需的微生物从混杂的微生物群体中分离出来，获得纯种微生物,这个过程称为纯培养。
这个过程中首先需要把相应的研究对象移入培养基中，这一过程称为接种.在平板培养基上接种的方法有平板划线法、稀释涂布平板法、稀释混合平板法等。
实验中要根据实验目的、培养基种类和实验器皿的差异,采用不同的接种方法。
划线的方法包括连续划线法和交叉划线法.连续划线法是从平板边缘的一点开始，连续作紧密的波浪式划线。
交叉划线法是从平板的一边作第一次平行划线若干条。
转动培养皿约70°角，将接种环在火上灼烧并冷却后，通过第一次划线部分，作第二次平行划线。
同法进行第三次、第四次划线。
通过平板划线,聚集的多种微生物被分散到培养基的表面.在数次划线后，可以分离得到由一个细菌繁殖而来的菌落.三、无菌技术在实验过程中,要对所用的器材、培养基进行严格的灭菌，对工作场所进行消毒。
灭菌是指用强烈的理化因素杀死环境或物体内外所有的微生物，常用的是高温灭菌法。
而消毒一般是用相对温和的理化方法杀死环境或物体上的病原微生物和有害微生物的营养细胞，常用的是射线消毒法和化学药剂消毒法.思考：日常生活中的牛奶在进入市场销售前要进行消毒，可能采用哪种消毒方法呢？提示：用巴氏消毒法牛奶进行消毒，可以杀死牛奶中的微生物,而牛奶的营养成分不会被破坏。
四、微生物培养条件微生物的生长繁殖还需要适宜的温度，一般是将接种后的培养基放入恒温培养箱中培养。
不同的微生物，使用的培养基、培养温度和时间有所不同.大多数微生物适宜生长的温度在25～40℃之间，实验室中常采用28～30℃培养微生物.一般的细菌适合于中性环境生长,放线菌适合于偏碱性环境，而酵母菌和霉菌适合于微酸性环境，配制培养基时需要根据微生物的类群调节pH。
01-1生物的分离和纯培养学案(1)
据图分析回答：( 1 )甲试管放置几个小时后，管内顶部出现气泡，其中的气体成分主要是体引人溶液中，可使该溶液变浑浊。
( 2 )甲试管中产生气泡的现象是造成的，写出表示议者以过程的反应式( 3 )乙试管在与甲试管同样的时间内，试管内部未出现气泡，原因是( 4 )乙试管继续放置几天，一些微生物开始繁殖，导致试管内顶部也出现少量气体，这是这些微生物从试管中的获得了所需要的营养物质进行新陈代谢的结果。
物所需的营养要素可归纳成、、、五大类。
（5）这些微生物可能的来源有哪些？（答出两个来源即可）第一节微生物的分离和纯培养答案课前预习：1 ．细菌放线菌酵母菌立克次氏体支原体2 ．分离纯培养微生物生长繁殖和代谢各种营养物质适合微生物生存的营养基质平板培养基3 ．把相应的研究对象移人培养基中平板划线法稀释涂布平板法稀释混合平板法4 ．将所需要的微生物从混杂的微生物群体中分离出来，获得纯种微生物接种技术5 ．外来的污染性杂菌无菌技术6 ．用强烈的理化因素杀死环境或物体内外所有的微生物高温灭菌法用相对温和的理化方法杀死环境或物体上的病原微生物和有害微生物的营养细胞射线消毒法化学药剂消毒法7 ．平板边缘的一点紧密的波浪从平板的一边作第一次平行划线若干条70 接种环第一次划线部分8 ．培养基37 ℃恒温培养箱24 进一步划线挑菌巩固提高：1 . D2 . C3 . C4 . A 5. C 6. D 7. D 8.B 9.D 10.A 11.B 12.A13 . ( l ）液体；选择( 2 ）异养型；酵母菌或霉菌( 3 ) CH2O14 . ( l ) C02 ; Ca ( OH ) 2 ( 2 ）无氧呼吸；能量( 3 ）被煮沸过的种子已经死亡，不能进行呼吸作用( 4 ）死亡种子中；碳源；氮源；生长因子；无机盐；水( 5 ）未灭菌的试管内壁的菌类、操作过程中带人的菌类、石蜡油中的菌类、铁丝网上的菌类、种子表面耐高温的没有被杀死的菌类。
《微生物的分离和培养》 导学案
《微生物的分离和培养》导学案一、学习目标1、理解微生物分离和培养的基本原理和方法。
2、掌握无菌操作技术，学会制备培养基。
3、能够运用微生物分离和培养的方法，从环境中分离特定的微生物。
二、学习重点1、无菌操作技术的要点和注意事项。
2、培养基的制备方法和成分。
3、微生物分离的方法和原理。
三、学习难点1、无菌操作技术的规范操作。
2、选择合适的培养基和分离方法，以获得目标微生物。
四、知识梳理（一）微生物的概念和特点微生物是指个体微小、结构简单、通常需要借助显微镜才能看清的生物。
它们包括细菌、真菌、病毒、原生生物等。
微生物具有以下特点：1、体积小，表面积大，有利于物质交换和代谢。
2、生长繁殖快，代谢能力强。
3、适应能力强，能在各种环境中生存。
（二）无菌操作技术1、消毒和灭菌的概念消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。
灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
2、常用的消毒和灭菌方法（1）消毒方法煮沸消毒法：在 100℃煮沸 5 6 分钟，可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢。
巴氏消毒法：在 62 65℃下处理 30 分钟或在 70 75℃下处理 15 30 秒，可以杀死牛奶中的微生物，但不会破坏牛奶的营养成分。
化学药剂消毒法：如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等。
（2）灭菌方法灼烧灭菌：常用于接种工具，如接种环、接种针等的灭菌。
干热灭菌：在 160 170℃下加热 1 2 小时，可用于玻璃器皿（如吸管、培养皿等）、金属用具等的灭菌。
高压蒸汽灭菌：在压力为 100kPa、温度为 121℃的条件下，维持15 30 分钟，可用于培养基、无菌水等的灭菌。
3、无菌操作的具体步骤（1）实验前，将需要使用的器具进行灭菌处理。
（2）在超净工作台中进行操作，操作前先打开紫外灯和过滤风 30分钟。
（3）操作时，双手要用酒精消毒，操作过程中要避免已灭菌的物品被污染。
1.1微生物的分离和培养教案苏教版生物选修1
1.1微生物的分离和培养教案苏教版生物选修1睢宁县菁华高级中学“四步教学法”课时教学设计一、培养基的配制与灭菌1、目的1.1 了解并掌握培养基的配制、分装方法1.2掌握各种实验室灭菌方法及技术。
2、原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
由于微生物具有不冋的营养类型，对营养物质的要求也各不相冋，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。
另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。
琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。
加琼脂制成的培养基在98〜100 C下融化，于45C以下凝固。
但多次反复融化，其凝固性降低。
任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。
一般培养基的火菌米用咼压烝汽火菌。
3、材料3.1器皿及材料天平、称里纸、牛角匙、精密pH试纸、里筒、刻度搪瓷杯、试官、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。
3.2药品试剂蛋白胨、牛肉膏、NaCI、K2HPO4 琼脂、NaN03 KCI、MgS04 FeS04 蔗糖、麦芽糖、木糖、匍萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaO溶液、5%HC溶液。
4、流程称药品T溶解T调pH值T融化琼脂T过滤分装T包扎标记T灭菌T 摆斜面或倒平板。
5、步骤5.1 培养基的制备5.1.1称量药品根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。
蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。
5.1.2溶解用量筒取一定量（约占总量的1/2）蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。
待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。
2020年高考 一轮复习 人教版 微生物的培养和分离 学案.doc
2020届 一轮复习 人教版 微生物的培养和分离 学案见《自学听讲》P248微生物的培养和分离1.培养基(1)概念:人们按照微生物对 营养物质 的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。
(2)营养组成:一般都含有水、碳源、 氮源 和无机盐。
此外,还需要满足微生物生长对pH 、氧气以及特殊营养物质的要求。
(3)种类①按照物理性质可分为液体培养基、固体培养基、半固体培养基。
②按照成分的来源可分为天然培养基和合成培养基。
③按照功能用途可分为选择培养基、鉴别培养基等。
2.无菌技术常用方法3.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基:计算→称量→溶化→灭菌→ 倒平板 。
4.纯化大肠杆菌的方法(1)平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
(2)稀释涂布平板法:将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。
5.菌种的保存方法(1)对于频繁使用的菌种,可以采用临时保藏的方法。
(2)对于需要长期保存的菌种,可以采用甘油管藏的方法。
某种微生物数量的测定1.统计原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌,通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。
2.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)统计菌落数目一般用稀释涂布平板法。
(2)统计菌落数目时,培养基表面生长的1个菌落,来源于样品稀释液中的1个活菌。
为了保证结果准确,一般选择菌落数在30~300 的平板进行计数。
(3)从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算公式:每克样品中的菌落数= (平均菌落数÷涂布的稀释液体积)×稀释倍数。
(4)设置重复组,增强实验的说服力与准确性。
培养基对微生物的选择作用1.筛选菌株(1)原则:人为提供有利于目的菌株生长的条件,同时抑制或阻止其他微生物的生长。
(2)目的:在培养基上形成的由单个菌种繁殖而来的子细胞群体——菌落。
2020年高考一轮复习人教版微生物的培养和分离学案.doc
5. 菌种的保存方法
(1) 对于频繁使用的菌种 ,可以采用临时保藏的方法。
(2) 对于需要长期保存的菌种 ,可以采用甘油管藏的方法。
某种微生物数量的测定
1.统计原理 :当样品的稀释度足够高时 ,培养基表面生长的一个菌落 ,来源于样品稀释液 中的一个活菌 , 通过统计平板上的菌落数 ,就能推测出样品中大约含有多少活菌。
2020 届 一轮复习 人教版 微生物的培养和分离 学案
见《自学听讲》 P248
学科素养 1.生命观念 :能从细胞水平认识生物体的结构 与功能是相适应的 ,生物的适应性是长期进化 的结果。 2.科学思维 :通过研究培养基对微生物的选择 作用 , 从不同的生命现象中 , 基于事实和证据 , 运用归纳的方法概括出生物学规律。 3.科学探究 :设计分离微生物的实验 ,针对日常 生活的真实情境提出清晰的、 有价值的、 可探 究的生命科学问题或可达成的工程学需求。 4.社会责任 :关注微生物在生产生活中的应用 ; 能通过科学实践 ,尝试解决现实生活中的生物 学问题。
(1)统计菌落数目一般用 稀释涂布平板 法。
(2)统计菌落数目时 ,培养基表面生长的 1 个菌落 , 来源于样品稀释液中的 1 个活菌。为了保证结果准确 ,
一般选择菌落数在 30~300 的平板进行计数。
(3) 从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算公式
:每克样品中的菌落数 = (平均菌落数÷涂
课程标准
1. 进行微生物的培养和分离。 2. 测定某种微生物的数量。 3. 研究培养基对微生物的选 择作用。 4. 探讨微生物的利用。 5. 尝试利用微生物进行发酵 来生产特定的产物。
学习指导 备考中要加强微生物的实 验室培养技术、 特定微生物 数量的测定方法、 培养基对 微生物的选择作用等的记 忆和理解 ,特别是关于微生 物的培养和分离、 计数及鉴 定方面的应用 ,注意微生物 培养过程中无菌操作的方 法和原理 ,掌握微生物培养 与计数的方法 ,记住尿素分 解菌和纤维素分解菌的鉴 定方法等。
《微生物的分离和培养第1课时》教学设计
《微生物的分离和培养第1课时》微课教学设计
微生物的图片
【学习任务一】
微生物的概念、类群及营养物质
(一)概念和类群
1.概念:形体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜
才能看清楚的生物，统称为微生物。
2.类群:主要包括病毒原生生物真菌原核生物
【深化探究】
(二)微生物需要的营养物质及功能
易混辨析培养基中成分的含义、作用和主要来源
营养要素含义作用主要来源
碳源凡能提供所需
碳元素的物质
构成生物体细
胞的物质和一
些代谢产物，有
些是异养生物
的能源物质
无机碳源：NaHCO
3
、
CO
2
等；
有机碳源：糖类、
脂肪酸、花生饼粉、
石油、牛肉膏和蛋
白胨等
氮源凡能提供所需
氮元素的物质
合成蛋白质、核
酸以及含氮的
代谢产物
无机氮源：NH
3
、铵
盐、硝酸盐等；
有机氮源：尿素、
牛肉膏、蛋白胨等
生长因子(特殊营养物质) 生长必不可少
的微量有机物
酶和核酸的组
成成分
酵母膏、蛋白胨、
动植物组织提取液
等
水在高等生物体
内含量很高，
在低等生物体
内含量更高
不仅是优良的
溶剂，而且可维
持生物大分子
结构的稳定
培养基、大气、代
谢产物等
无机盐为微生物提供
除碳、氮元素
以外的各种重
细胞内的组成
成分；生理调节
物质；某些化能
培养基、大气等环
境。
高考生物一轮总复习 第12单元 生物技术实践 第1讲 微生物的分离与培养学案
第1讲微生物的分离与培养考查内容等级要求考查详情微生物的分离和培养 B17年—非选—T31考查微生物的分离与培养选择相关知识16年—多选—T25考查微生物的选择的相关知识15年—单选—T19以文字叙述的形式考查单选微生物分离与培养实验15年—非选—T31微生物的分离与培养某种微生物数量的测定,C,15年—单选—T13考查血细胞计数板的使用微生物的应用,B,14年—非选—T30结合β－胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验考查微生物的分离和培养的操作过程及注意事项13年—单选—T18 结合废水处理问题考查微生物的分离和培养的操作过程及注意事项13年—多选—T24探究微生物对秸秆的分解作用知识整合一、微生物的培养1．培养基(1)概念：人们按照微生物对________的不同需求，配制出供其________的营养基质。
(2)营养组成：一般都含有________________和无机盐。
此外，还需要满足微生物生长对________、氧气以及________________的要求。
(3)种类①按照物理状态可分为：________培养基、半固体培养基和________培养基。
②按化学成分可分为：________、合成培养基和________培养基。
③按功能可分为：基础培养基、________、鉴别培养基等。
2．微生物培养的基本技术(1)无菌操作技术含义：指在培养微生物的操作中，所有防止________________的方法。
关键：防止________________的入侵。
具体措施①消毒a．特点：使用较为________的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体________(不包括芽孢和________)。
b．常用方法：煮沸消毒法、________、化学药剂消毒法。
②灭菌a．特点：指使用强烈的理化因素杀死物体内外________________________，包括芽孢和孢子。
b．常用方法：________灭菌、干热灭菌、________灭菌、紫外线消毒。
46 微生物的分离和培养 导学案
高三一轮复习案四十六微生物的分离和培养班级姓名【自学质疑】④紫外线消毒等100Kpa、121℃）三、微生物培养技术（以大肠杆菌为例）1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：（1）制备过程：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板平板制作的方法及注意事项a.请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：___________________。
b.甲、乙、丙中的灭菌方法是__________。
c.丁中的操作需要等待________后才能进行。
【思考】平板冷凝后为什么要将平板倒置？2．纯化接种纯化接种：是指在______条件下将微生物接入培养基的操作过程，最常用的是___________和_________________。
主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。
（1）平板划线法：是通过接种环在_______________表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步____________到培养基的表面,得到__________。
操作步骤：准备接种→_________→试管口灭菌→挑取少许菌种，塞上棉塞→划线接种（如下图）→在37 ℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。
培养基表面平行或分区划线注意事项：①取菌种前第一次灼烧接种环的目的：消灭接种环上的微生物，避免接种环上可能存在的微生物污染培养物②除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环目的：使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落③取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行目的：防止高温杀死菌种④最后灼烧接种环的目的：杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者(1)获得图A效果和图B效果的接种方法分别是什么？(2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？(3)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？【迁移应用】1．做“微生物的分离与培养”实验时,下列叙述正确的是（）A. 高压灭菌加热结束时,打开放气阀使压力表指针回到零后,开启锅盖B. 倒平板时,应将打开的皿盖放到一边,以免培养基溅到皿盖上C. 为了防止污染,接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D. 用记号笔标记培养皿中菌落时,应标记在皿底上2.培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌和消毒方法依次是（）①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线灭菌⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法A．⑤③②①④⑥ B．①②③④⑤⑥ C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤3.关于平板划线操作正确的是（）A．使用已灭菌的接种针、培养皿，在操作过程中不再灭菌B．打开含菌种的试管，需通过火焰灭菌，取出菌种后，需马上塞上棉塞C．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可D．最后将平板倒置，放在培养箱中4.高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。
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微生物的分离和培养【考纲要求】微生物的分离和培养 B【复习要求】1.理解培养基对微生物的选择利用并能利用选择培养基分离微生物2.掌握培养微生物的过程、条件和方法3.掌握测量微生物数量的方法、统计菌落数量的方法4.能利用选择培养基分离微生物的方法【基础知识】一、微生物的实验室培养1．培养基（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
（2）成分：一般都含有碳源、氮源、水和无机盐，还需满足不同微生物生长对pH、特3．实验操作(1)牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备计算→称量→熔化→灭菌→倒平板。
(2)微生物的分离方法：①划线法②平板法微生物的计数方法：二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1．分离原理：土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们体内能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。
2．菌种筛选：使用_______是唯一氮源的_______培养基培养。
3．统计菌落数目：常用方法有、显微镜直接计数法。
①直接计数法：这种方法是利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
此法的缺点是不能区分死菌与活菌。
（但用亚甲基蓝染色后，死细胞是蓝色，活的是无色的）②间接计数法(活菌计数法)：稀释涂布平板法，常用来统计样品中的活菌数。
此法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的。
4．实验流程：土壤取样→制备培养基→微生物的培养与观察→细菌的计数。
5．观察记录结果：每克土壤样品菌数＝某稀释倍数的菌落平均数×稀释倍数。
思考：①如何进行系列稀释？②某稀释倍数指哪一个倍数？③计算值和真实值之间的关系？为什么？6.鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，若pH升高，指示剂变，说明细菌能分解尿素。
三、分解纤维素的微生物的分离1．纤维素酶：一种复合酶，它包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。
2．纤维素分解菌的筛选原理①刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不和二糖和葡萄糖发生这种反应。
②纤维素分解菌能产生纤维素酶分解纤维素，从而使菌落周围形成透明圈。
3. 筛选方法：(1) 鉴定方法：染色法，即通过是否产生________来筛选纤维素分解菌。
(2) 筛选：以为唯一碳源的选择培养基。
4．土壤中纤维素分解菌的筛选实验流程土壤取样（富含的环境）→选择培养（用______培养基培养，目的是增加纤维素分解菌的数量）→梯度稀释→涂布平板（将样品涂布到______纤维素分解菌的培养基上）→挑选产生的菌落（产生纤维素酶的菌落周围出现）。
【习题巩固】1.不同的微生物对营养物质的需要各不相同。
下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是( )。
A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素B．碳源物质也是该微生物的能源物质C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D．水是该微生物的营养要素之一2.如右图是微生物平板划线示意图。
划线的顺序为1、2、3、4、5。
下列操作方法正确的是( )。
A．操作前要将接种环放在火焰旁灭菌B．划线操作须在火焰上进行C．在5区域中才可以得到所需菌落D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌3.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是( )。
A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值2334.可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是( )。
A．以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂5.通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。
在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌。
利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出( )。
①大肠杆菌②霉菌③放线菌④固氮细菌A．④②③ B．①②③ C．①③④ D．③④6.培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是 ( )①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线消毒⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法A．⑤③②①④⑥ B．①②③④⑤⑥ C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤7.下列关于微生物分离和培养的有关叙述，错误的是（）A. 微生物培养前，需对培养基进行消毒B. 测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法C. 分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度D. 分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源8.用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时（）①可以用相同的培养基②都需要使用接种针进行接种③都需要在火焰旁进行接种④都可以用来计数活菌A．①② B．③④ C．①③ D．②④9. “筛选”是分离和培养生物新类型常用的手段，下列有关技术中不能筛选成功的是A．在全营养的LB培养基(普通培养基)中，筛选大肠杆菌B．在尿素固体培养基中，筛选能够分解尿素的微生物C．用纤维素为唯一碳源的培养基，筛选能分解纤维素的微生物D．在培养基中加入不同浓度的氯化钠，筛选抗盐突变体植物10.可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是( )A．以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂11.（2013江苏卷,18）某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。
下列叙述正确的是（）A. 培养基分装到培养皿后进行灭菌B. 转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C. 接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D. 培养过程中每隔一周观察一次12.（2014江苏30）为了获得ß-胡萝卜素产品,某小组开展了产ß-胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。
请回答下列问题:(1)实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是 ;为了减少灭菌后器皿被污染,灭菌前应该。
(2)为了筛选出酵母菌,培养基中添加了青霉素,其目的是。
(3)右图是灭菌锅及其局部剖面示意图,图中甲、乙、丙指示的依次是。
(填序号)①安全阀、放气阀、压力表②放气阀、安全阀、压力表③安全阀、放气阀、温度表④放气阀、安全阀、温度表(4)为了将分离到的菌株纯化,挑取了菌落在3 块相同平板上划线,结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长,最可能的原因是。
(5)为增加ß-胡萝卜素提取量,在研磨酵母细胞时,添加石英砂的目的是 ;研磨时 (填“需要”或“不需要”)添加CaCO3,理由是。
13.（2015江苏31）人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃,可用来发酵处理秸秆,提高秸秆的营养价值。
为了增强发酵效果,研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株,并对其降解纤维素能力进行了研究。
请回答下列问题:(1)在样品稀释和涂布平板步骤中,下列选项不需要的是 _________ (填序号)。
①酒精灯于培养皿③显微镜④无菌水(2)在涂布平板时,滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是。
(3)向试管内分装含琼脂的培养基时,若试管口粘附有培养基,需要用酒精棉球擦净的原因是。
(4)刚果红可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。
研究人员在刚果红培养基平板上,筛到了几株有透明降解圈的菌落(见右图)。
图中降解圈大小与纤维素酶的有关。
图中降解纤维素能力最强的菌株是 (填图中序号)。
(5)研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4,在不同温度和pH条件下进行发酵, 测得发酵液中酶活性的结果见下图,推测菌株 _________ 更适合用于人工瘤胃发酵,理由是。
14.尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。
生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。
培养基成分如下(1)此培养基能否用于植物组织培养？________，理由是________________________。
(2)培养基中加入尿素的目的是筛选________，这种培养基属于________培养基。
(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的________和________，实验需要振荡培养，原因是________________。
(4)转为固体培养时，常采用________的方法接种，获得单菌落后继续筛选。
(5)下列材料或用具中：①培养细菌用的培养基与培养皿；②玻棒、试管、锥形瓶和吸管；③实验操作者的双手。
需要灭菌的是：________；需要消毒的是：________(填序号)。
(6)在进行分离分解尿素的细菌的实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。
A同学的实验结果产生的原因可能有_____(填序号)。
①由于土样不同②由于培养基污染③由于操作失误④没有设置对照(7)简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理：____________________________微生物的培养与应用【基础知识】一、微生物的培养1.固体天然合成选择青霉素食盐鉴别伊红—美蓝2.①干热湿热（高压蒸汽）②160 170 100 1213.平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法上次冷却第一划破倒置二、2.尿素选择3.稀释涂布平板法5.①配置5ml溶液，取0.5ml溶液注入含4.5ml无菌水的试管中，以此类推，最后试管吸取走0.5ml.（或者1:9）②一般选取菌落数为30~300的一组③计算值比真实值小，因为可能多个个体形成一个菌落6.红三、3.刚果红透明圈纤维素4.维生素选择鉴别透明圈透明圈【习题巩固】1. 【答案】 B 【解析】以CO2为唯一碳源可知该微生物为自养型微生物，可以利用CO2合成有机物，该无机碳源不能为微生物提供能量，其能源来自于光能或分解有机物释放出的化学能。
2. 【答案】D【解析】在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法是在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰旁进行。
在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。
3. 【答案】D【解析】在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不正确。
C项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，此时，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。