基因工程试卷

华中农业大学本科课程考试评分标准

考试课程与试卷类型：基因操作原理姓名：

学年学期：学号：

考试时间：班级：

一、填空题（每小题2分，共30分）

1.PCR技术应用广泛，以下不属于PCR应用的为 ___D_____：(A) 随机扩增多态性

DNA(RAPD)； (B) 扩增片段长度多态性(AFLP)； (C) RACE； (D) S1 酶作图。

2.λ噬菌体线性 DNA 分子的两端各有一个____12_____个碱基组成的天然黏性末端。

3.PCR扩增有时会出现弥散的条带，以下原因阐述不正确的是___B______：(A) 退火温度

过低； (B) 退火温度过高； (C) dNTP 浓度过高； (D) 循环次数过多。

4.下列哪一种酶作用时需要引物____B_____：(A) 末端转移酶； (B) 反转录酶；(C) DNA

连接酶； (D) 限制酶。

5.Cosmid 实际上是由_λ噬菌体__和__质粒_____构成的杂合载体，也可以说是带有__cos__

序列的质粒。

6.限制性内切酶的命名主要根据__来源菌株属名第一个字母，种名头两个字母以及菌株号、

序号_____来确定，以下各种书写方式中哪种或哪几种是正确的____AC____：(A) Pst I;

(B) KpnI； (C) Hin dIII; (D) Hind III; (E) T th111I; (F) Bsp1286I； (G) XbaI

7.在分子克隆常用的E.coli菌株中Dam 和Dcm 甲基化酶都是有活性的，它们可在DNA

的特定位点作甲基化修饰。而许多限制性内切酶对甲基化是敏感的，一旦所识别的酶切位点被甲基化就不能切割该位点，如Cla I (AT/CGAT)。请问Cla I不能切割以下哪个或哪些来自dam+ dcm+ E.coli菌株的DNA序列____C_____。 (A) ATCGATA； (B) ATCGATG；

(C) ATCGATC； (D) ATCGATT。

8.限制性内切酶有其特定的识别位点，如Eco RI 的识别位点为 ___GAATTC___；有些限制

性内切酶切割DNA后可产生带有相同末端的DNA产物，这些酶称为同尾酶，例如__Bam HI__限制性内切酶与___Sau3AI_________限制性内切酶切割DNA形成的末端相同。（任举一例都可以）

9.在基因操作过程中会使用一些多对人体有害的物质, 操作时应小心谨慎, 常用的有害物

质有UV light、DEPC、____EB___和____苯酚____等。（任举一例都可以）

10.根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、cDNA文库等。在下列文库中_C_是

cDNA文库。(A) YAC文库； (B) PAC文库； (C) 扣减文库； (D) BAC文库。

11.M13KO7是一种辅助噬菌体，可用它帮助噬菌粒制备单链DNA，这是因为以下原因_B_：

(A) M13KO7能够进行滚环复制，得到大量的单链噬菌体DNA； (B) M13KO7能够提供

成熟包装的蛋白； (C) M13KO7提供了成熟包装所需的信号； (D) M13KO7的10个基因都是正常的。

12.在制作DNA嵌套缺失突变体时主要有3种方法，其核心技术都使用了一种核酸酶，它们

分别是__外切核酸酶III__、__BAL31__和___DNaseI___。

13.在核酸杂交过程中，一般都要先做预杂交，这是为了__B__：(A) 做预备试验，寻找最佳

反应条件； (B) 封闭背景； (C) 使杂交信号更强； (D) 减少非特异性杂交信号。

14.在许多克隆载体中都使用了 -互补机制来做筛选标记，也就是俗称的“蓝白菌落”筛选，在

应用过程中使用了两种引起颜色变化的试剂，它们是___x-gal__和____IPTG__。

15.在基因操作中有些不同的名称具有相同的缩写，例如RT-PCR, 可以是___实时定量PCR__

或___反转录PCR___的缩写。

二、名词解释（每小题3分，共21分）

1．Star Activity (in restriction enzymes)

星星活性，（1’）

极端非标准条件下，限制性内切酶切割与识别序列相似的序列，这个改变的俄特殊性称星星活性。（2’）

2．Northern blotting

Northern 杂交，（1’）

即DNA与RNA的杂交，与Northern杂交的不同之处在于转移的是RNA而不是DNA。

（1’）

Northern 杂交是转录水平的检测，用于检测样品中是否有与探针同源的mRNA分子。（1’）3．Shuttle vector

穿梭载体，（1’）

能够在两类不同的宿主中复制、选择和增殖的载体。（2’）

4．Chromosome Walking

染色体步查，（1’）

采用一段分离自某一重组体一端的非重复DNA片段作为探针，以鉴定含有相邻序列的重组克隆的方法称染色体步查。（2’）

5．Klenow fragment

Klenow片段，（1’）

大肠杆菌DNA聚合酶经枯草杆菌蛋白酶水解的大片段。（1’）

具有5’—3’聚合和3’—5’外切活性。（1’）

6．Universal primer

通用引物，（1’）

参照载体上多克隆位点两侧的一段固定DNA序列设计的引物，（1’）

用于分析插入片段的序列。（1’）

7．Competent cells

感受态细胞，（1’）

能够吸收外源DNA的细胞称作感受态细胞。（2’）

三、分析简答题（每小题5分，共25分）

1. 人类基因组的大小约为3000Mb，测序方法有两种，即图谱测序法和全基因组鸟枪法。这

两种测序结果和分析于2001年分别发表在《Nature》和《Science》杂志上。在第一种方法中，首先将靶基因组部分酶切产生大分子DNA片段，经电泳分离纯化克隆到BAC载体中。根据分子标记和指纹图谱构建BAC克隆重叠群，挑选单个克隆采取鸟枪法测序。

在每个BAC克隆内根据测序结果进行顺序拼接，并与BAC克隆重叠群物理图谱对比，完成全部主体顺序的组装(The International Human Genome Sequencing Consortium. Initial sequencing and analysis of the human genome. Nature, 2001, 409: 860~921)。假如你是测序工作组中的一员，由你负责某个BAC克隆子中约100kb的序列测定，该如何实施？

①分离纯化该质粒，构建外源DNA片段大小2-5kb的亚文库。（1’）

②用构建亚文库的载体上的通用引物作大规模末端测序。（1’）

③测序的各reads 拼接，得到contig。（1’）

④借助PCR等手段，填补contig中的gap。（1’）

⑤通过酶切图谱验证测序结果。（1’）