粗多糖含量测定方法学验证
(完整版)粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1)1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
粗多糖的测定方法(2)5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
丹参粗多糖的制备及含量测定
丹参粗多糖的制备及含量测定（吕培银）一、实验目的1、掌握水提醇沉法提取植物多糖的原理及操作方法;2、了解水提醇沉法制备植物粗多糖的影响因素。
二、实验原理多糖是多羟基的醛或酮类聚合物，可溶于水，但是在多糖水溶液中加入乙醇会破坏多糖水溶液中的氢键，从而降低多糖在水中的溶解度，使多糖以沉淀的形式析出。
水提醇沉法是利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质来提取粗多糖，此法成本低、安全，目前在多糖提取中广泛应用。
不同浓度的醇沉淀的多糖组分会有所差异不一样，一般可采用分级醇沉进行纯化以获得不同级数的多糖组分。
本实验采用水提醇沉法提取丹参粗多糖，干燥后计算多糖得率，并采用苯酚-硫酸法测定多糖中总糖含量。
三、实验用品1、仪器电子天平、恒温水浴锅、250 mL平底烧瓶、1000 mL烧杯、玻璃棒、量筒、抽滤瓶、布氏漏斗、胶头滴管、试管、热风干燥箱、真空泵等。
2、材料脱脂丹参粉末。
3、试剂葡萄糖标准溶液、80%苯酚、浓硫酸、无水乙醇、蒸馏水等。
四、实验内容1、提取准确称取脱脂丹参粉末约5 g于250 mL烧瓶中，按料液比1:10加入蒸馏水，85℃水浴提取1 h，冷却，用四层纱布过滤，滤液减压过滤后转至250 mL烧杯中。
2、醇沉向上述滤液中加入四倍体积无水乙醇烧杯中进行醇沉，边加边搅拌，慢加快搅，室温静置30 min，减压过滤，将烧杯用少量无水乙醇润洗3次，收集沉淀。
过滤之前称滤纸重量，记为M1。
(回收乙醇)3、干燥将过滤后的滤纸置于表面皿上，置于干燥箱中，50℃干燥24 h后取出称重,质量记为M2。
4、含量测定称取干燥至恒重的丹参粗多糖约2.5 mg，少量蒸馏水溶解后定容至50 mL，得到丹参多糖样品溶液，采用苯酚-硫酸法测定多糖含量。
5、标准曲线的制作分别精密吸取葡萄糖标准溶液4.00 mL、5.00 mL、6.00mL、7.00 mL、8.00mL、9.00mL、10.00mL至10mL容量瓶中，蒸馏水定容后分别得到浓度为40μg/mL、50 μg/mL、60 μgmL、70 μg/mL、80 μg/mL、90 μg/mL和100 ug/mL的葡萄糖系列浓度梯度溶液。
多糖含量测定方法
多糖含量的测定粗多糖中的总糖含量使用苯酚-硫酸法进行测定，还原糖用3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测定，多糖含量 = 总糖 - 还原糖。
1、总糖含量测定实验原理：多糖在硫酸作用下，先水解成单糖，并脱水生成糖醛衍生物，与苯酚生成橙黄色溶液，在490nm处有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。
试剂：浓硫酸（分析纯）、5%苯酚溶液（分析纯）、标准葡萄糖。
操作步骤：①制作标准曲线：准确称取105 ℃烘干至恒重的葡萄糖50mg于500ml容量瓶中配成0.1 mg/ml 的标准溶液，用蒸馏水分别配成0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/ml。
1 ml标准液分别加入 5% 苯酚溶液1 ml，并迅速加入浓硫酸5 ml，静置10 min。
摇匀，30℃放置30 min后于490nm测定OD值，以葡萄糖含量为横坐标，OD值为纵坐标，制作得到标准曲线。
②样品含量测定：吸取1.0ml样品液，按照上述步骤操作测定OD490，并代入标准曲线计算样品的总糖含量。
2、还原糖含量实验原理碱性条件下，DNS可与还原糖反应生成3-氨基-5-硝基水杨酸。
此物质在煮沸条件下成棕红色，且颜色深浅在一定范围内与还原糖含量成线性关系。
据此可通过测定OD值确定还原糖含量。
试剂及配制：浓度为1mg/ml的葡萄糖标准溶液。
DNS显色液：称取3.25g DNS溶于少量蒸馏水中并转移至500ml容量瓶中，加入2mol/L的NaOH溶液162.5ml，再加入7.5ml的丙三醇，摇匀，加蒸馏水定容至500ml，摇匀。
操作步骤①标准曲线制作：在6支试管中分别加入1mg/ml葡萄糖标准溶液0.00ml，0.10ml，0.20ml，0.30ml，0.40ml，0.50ml，补蒸馏水至0.5ml，然后加入1 / 2DNS试剂1.5ml，充分混匀。
置于沸水浴中煮沸5min，然后迅速流水冷却，并分别向试管中加入4ml蒸馏水，混匀。
在540nm处读OD值。
粗多糖的检验方法(卫生部内统法)
粗多糖的检验方法（卫生部内统法）1.方法原理食品中高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性的从其它高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与水溶性粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中水溶性粗多糖含量。
2.检测设备和材料本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
2.1.乙醇溶液（80%）：20ml水中加入无水乙醇80ml，混匀。
2.2.氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L,加入固体硫酸钠至饱和，备用。
2.3.铜储备液：称取3.0gCuSO4 5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解稀释至1L，混匀，备用。
2.4.铜试剂溶液：取铜储备液50ml，加水50ml，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
2.5.洗涤剂：取水50ml，加入10ml铜试剂溶液：10ml氢氧化钠溶液，混匀。
临用新配。
2.6.硫酸溶液（10%）：取100ml浓硫酸加入到800ml左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
2.7.苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100ml，混匀。
溶液置冰箱中可保存一月。
2.8.葡聚糖标准储备溶液：精密称取相对分子质量5X10²干燥至恒重的葡聚糖标准0.5000g，加水溶解，并定容至50ml，混匀，置冰箱中保存。
此溶液每1ml含10.0mg葡聚糖。
2.9.葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0ml，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
此溶液每1ml含葡聚糖0.10mg。
2.10.分光光度计2.11.离心机（3000r/min)2.12.旋转混匀器3.样品收集和准备3.1.试样提取:称取混合均匀的固体试样2.0g,置于100ml容量瓶中,加水80ml左右,于沸水浴上加热2h,冷却至室温后补加水至刻度,混匀后,过滤,弃去初滤液,收集余下滤液供沉淀多糖。
(完整版)粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1)1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
粗多糖的测定方法(2)5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
粗多糖的测定
粗多糖的测定：按王光亚主编，《保健食品功效成分检测方法》P19（分光光度法测定粗多糖的含量）1、适用范围本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量1×104的水溶液性粗多糖的测定。
本方法最低检测浓度为5.0mg/L。
2、原理食品中相对分子质量＞1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。
3、主要仪器（1）分光光度计（2）离心机（3000r/min）（3）旋转混匀器4、试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20ml水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）NaOH溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4·5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱保存。
此溶液1mL 含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
粗多糖的检验方法(卫生部内统法)
粗多糖的检验方法（卫生部内统法）1.方法原理食品中高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性的从其它高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与水溶性粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中水溶性粗多糖含量。
2.检测设备和材料本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
2.1.乙醇溶液（80%）：20ml水中加入无水乙醇80ml，混匀。
2.2.氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L,加入固体硫酸钠至饱和，备用。
2.3.铜储备液：称取3.0gCuSO4 5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解稀释至1L，混匀，备用。
2.4.铜试剂溶液：取铜储备液50ml，加水50ml，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
2.5.洗涤剂：取水50ml，加入10ml铜试剂溶液：10ml氢氧化钠溶液，混匀。
临用新配。
2.6.硫酸溶液（10%）：取100ml浓硫酸加入到800ml左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
2.7.苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100ml，混匀。
溶液置冰箱中可保存一月。
2.8.葡聚糖标准储备溶液：精密称取相对分子质量5X10²干燥至恒重的葡聚糖标准0.5000g，加水溶解，并定容至50ml，混匀，置冰箱中保存。
此溶液每1ml含10.0mg葡聚糖。
2.9.葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0ml，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
此溶液每1ml含葡聚糖0.10mg。
2.10.分光光度计2.11.离心机（3000r/min)2.12.旋转混匀器3.样品收集和准备3.1.试样提取:称取混合均匀的固体试样2.0g,置于100ml容量瓶中,加水80ml左右,于沸水浴上加热2h,冷却至室温后补加水至刻度,混匀后,过滤,弃去初滤液,收集余下滤液供沉淀多糖。
粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1)1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
粗多糖的测定方法(2)5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
粗多糖检测方法
粗多糖的测定方法（分光光度法）本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量1×104以上的水溶性粗多糖的测定。
本方法最低检测浓度为5.0mg/L。
1. 方法提要食品中相对分子质量＞1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。
2. 主要仪器（1）分光光度计。
（2）离心机（3000r/min）。
（3）旋转混匀器。
3. 试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20mL水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4·5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱保存。
此溶液1mL 含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
多糖检测方法_乌药精颗粒中粗多糖的检测方法探讨
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容量瓶中,加水 80ml 左右,在沸水浴中加热 2 小时,冷却至室温,过滤。加 取样品测定液的体积(ml)。
1.0ml 10%的糖化酶溶液(含 1 万 U/ml,现配现用,在离心机中以 3000rpm
②取 5ml 溶液至 50ml 的离心管中,加 20ml 无水乙醇,在离心机中以
3000rpm 离心 20min,并当心弃去上清液,再用 10ml 80%乙醇洗沉淀物,在
3 试验结果
离心机中以 3000rpm 离心 20min,反复操作 3 次。残渣(沉淀物)用蒸馏水
溶解并定容至 50ml。此溶液为样品测定液。③取 2.0ml 样品测定液于 25ml
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多糖检测方法_乌药精颗粒中粗多糖的检测方法探讨
关键词 乌药精颗粒 粗多糖 检测方法
多糖在调整血
脂、免疫功能及抗疲惫、抗肿瘤、抗放射等方面具有显著的作用[1-3]。
目前国内尚无标准方法测定多糖的含量[4],本法接受糖化酶消化,80%乙
醇沉淀,用苯酚-硫酸反应法测定含量。测定结果稳定、精确,适用于模糊
④同时做糊精对比(样品由糊精、葡萄糖各 1g 组成),假如糊精对比测定结
果,粗多糖含量不在 0.2%以下,说明酶活性不够,应增加用量重新检测。
3.2 不同方法对不同样品的粗多糖含量检测结果:详见表 2。
2.3 结果计算:X(%)=m1×v1×v3×100/(m2×v2×v4×1000)。X 为指
样品中粗多糖的含量(以葡萄糖计)(g/100g);m1 为(标准曲线查)样品测定
粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1） 80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2） 2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6） 1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7） 20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
粗多糖的测定
粗多糖的测定：1、方法提要食品中相对分子质量1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖含量。
2、主要仪器（1）分光光度计（2）离心机（3000r/min）（3）旋转混匀器3、试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20ml水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）NaOH溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4•5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g 并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱保存。
此溶液1mL含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
此溶液1mL含葡聚糖0.10mg。
4、测定步骤（1）样品处理a、样品提取：取胶囊内容物2.0g混匀，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于沸水浴上加热2h，冷却至室温后补加水至刻度，混匀后，过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖。
粗多糖提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解粗多糖的基本性质和提取方法。
2. 掌握水提醇沉法提取粗多糖的原理和操作流程。
3. 通过实验验证粗多糖提取效果，并对其含量进行测定。
二、实验原理粗多糖是一类高分子碳水化合物，广泛存在于植物、动物和微生物中。
水提醇沉法是一种常用的粗多糖提取方法，其原理是利用多糖在水中的溶解度较高，而在乙醇中的溶解度较低的特点，通过加水提取多糖，然后用乙醇沉淀多糖，从而实现多糖的分离纯化。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：植物材料（如大麦、玉米等），乙醇，蒸馏水，硫酸铵，苯酚，浓硫酸等。
2. 实验试剂：95%乙醇，NaOH，FeCl3，浓盐酸，氯仿，乙酸乙酯等。
四、实验仪器1. 实验室常用仪器：电子天平，恒温加热器，水浴锅，旋转蒸发仪，离心机，移液器等。
2. 特殊仪器：分光光度计，真空干燥箱等。
五、实验步骤1. 植物材料预处理：将植物材料洗净、晾干，然后研磨成粉末。
2. 水提：将研磨好的植物粉末加入适量蒸馏水，加热煮沸，提取多糖。
3. 醇沉：将提取液冷却至室温，加入95%乙醇，使多糖沉淀。
4. 沉淀分离：将沉淀物用离心分离，弃去上清液。
5. 沉淀干燥：将沉淀物用无水乙醇洗涤，然后在真空干燥箱中干燥至恒重。
6. 粗多糖含量测定：采用苯酚-硫酸法测定粗多糖含量。
六、实验结果与分析1. 粗多糖提取率：根据实验数据计算粗多糖提取率，并与文献报道进行比较。
2. 粗多糖含量测定：根据苯酚-硫酸法测定粗多糖含量，并与理论值进行比较。
3. 结果分析：分析实验结果，探讨影响粗多糖提取率的因素，如提取时间、提取温度、乙醇浓度等。
七、实验讨论1. 粗多糖提取率的影响因素：实验结果表明，提取时间、提取温度、乙醇浓度等因素对粗多糖提取率有显著影响。
在实验条件下，最佳提取时间为2小时，提取温度为80℃，乙醇浓度为95%。
2. 粗多糖提取方法的优化：通过实验，对水提醇沉法进行了优化，提高了粗多糖提取率。
3. 粗多糖的应用前景：粗多糖具有多种生物活性，如抗炎、抗氧化、降血糖等，具有广泛的应用前景。
粗多糖含量测定方法
粗多糖含量测量：1、称量0.2克的短序落葵薯的根粉末，加水4ml，100摄氏度水浴4小时。
2、4000转每分离心10min，将上清液全部转入另一个新管中（约3ml），加入7ml无水乙醇进行醇降，5000转每分离心10min，倒掉上清液，向每管中加入5ml无水乙醇，震荡起沉淀，然后5000转每分离心10min，倒掉上清，放入烘箱烘干。
3、向每个试管中加入6ml的蒸馏水，放入水浴锅中溶解，用sevag法除蛋白，加入氯仿和正丁醇混合液2ml（氯仿：正丁醇=4:1），5000转每分离心10min，通过几次预试实验后，确定所用多糖溶液的量为10ul，进行测量，具体方法如下：硫酸酚法：1）葡萄糖标准液的配制2）准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，用蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。
3）2）苯酚液的配制4）准确移取苯酚6 mL，蒸馏水定容至100 mL，即得6％苯酚液，棕色瓶中避光保存。
表1 标准曲线的制作步骤取8支干净的具塞试管按表2方法操作,摇匀后放置5 min,置沸水浴中加热15min,取出迅速冷却至室温,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处测定吸光度。
以葡萄糖浓度Y 为纵坐标（ug/mL），吸光度X为横坐标，从而来绘制标准曲线。
用exceL软件求得回归方程。
计算百分含量：百分含量=L*600*10^（-6）/0.2蒽酮法：1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡萄糖含量为纵坐标，光密度值为横坐标，作出标准曲线。
样品含量测定：百分含量= L*600*10^（-6）/0.2。
8.6芦荟粗多糖的提取和含量测定
生化工程实验一、二：芦荟粗多糖的提取和含量测定说明：本实验分两个小实验进行，实验一：芦荟粗多糖的提取，学时3，验证；实验二：芦荟粗多糖中总糖测定，学时3，验证；8.6.1实验目的掌握水提醇沉法提取多糖的原理和方法；掌握分光光度法测定多糖含量的原理和方法。
8.6.2实验原理(一)芦荟为百合科多年生长绿色草本植物。
原产地主要是非洲，属温带植物，目前多为种植。
芦荟中含有20多种蒽醌类化合物如芦荟大黄素苷（ALoin）、芦荟大黄酚、芦荟大黄素等、多糖（水解后产生甘露糖、葡萄糖）、有机酸(琥珀酸、柠檬酸、异柠檬酸、乳酸等)、蛋白质、多肽、游离的氨基酸、多种微量元素（硼、铜、铁、钙、锰、钼、锌、镁、镍、钛、锶等）、维生素（V A、VB、VC、VE、胡萝卜素及有机金属离子与维生素的化合物）、叶绿素、树脂、多种活性酶及甾类化合物等具有特定功能的高活性成分。
芦荟作为中药已被应用近千年，已发现的药理作用有止泻、抗菌、抗炎、保肝、抗肿瘤、抗组织损伤等。
近年来被广泛应用与保健食品、化妆品和药品领域。
芦荟为百合科芦荟属植物,其成份和应用已有大量报道,但对其中的多糖成份则报道不多.芦荟多糖具有抗肿瘤、抗辐射、抗病毒等多种药理作用,对宿主免疫系统的调节作用。
（二）本实验采用水提醇沉法提取芦荟多糖，用苯酚－硫酸比色法测定多糖粗提物中的总糖含量。
植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100Mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nM波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定时间在160Min以上。
8.6.3试剂与仪器试剂：盐酸，水乙醇，丙酮，葡萄糖对照品，苯酚，浓硫酸。
仪器：烧杯，移液管，量筒，量瓶，烘箱，玻璃棒，旋转蒸发仪，电子天平，真空泵，电热恒温水浴锅，紫外－可见分光光度计，高速离心机，真空冷冻干燥机。
苯酚-硫酸法测定保健酒中的粗多糖含量
１ ． １ ． ２ 试 剂
葡 萄糖 标 准 品（ 购 自中国药 品生 物制 品检 定 所 ） ； 保健 酒 ； 其 它化学试剂 均为分析纯 ； 所 用 水 为 去 离 子 水 或 同 等 纯 度 蒸 馏
水。
１ 本 文 采用 醇 沉 醇 提 水 溶 法 ＿ ３ 】 提取粗多糖 ， 通 过经 典 的 苯
用分 光 光 度 法 测 定 其含 量 。 结 果： 方 法 线 性 范 围 为粗 多糖 含 量０ — ０ ． １ ５ ｍｇ ／ ｍＬ ， 回 归方 程 为Ｙ＝ Ｏ ． ０ ０ ３ ４ Ｘ＋ ０ ． ０ ０ ２ １ ， 线 性 系数 Ｏ ． ９ ９ ９ ５ ， 加
标 回收 率 为９ ６ ． ２ ％一１ Ｏ ０ ９ ％。 结论： 此 方 法 操 作 简便 ， 回收 率 高， 可 用 于测 定 保 健 酒 中粗 多 糖 的含 量 。 关键 词 ： 苯酚一 硫 酸 法 保 健 酒 粗 多糖 中 图分 类 号 ： ＴＳ ２ ６ １ ． ７ 文 献标 识 码 ： Ａ 文章编号： １ ６ ７ ２ — ５ ３ ３ ６ （ ２ ０ １ ５） ０ ８ — ０ ０ ３ ４ — ０ ２
分 析 检 测
． ＿ １ 十 ＿ 中 ＿ ＿ 外 五 食 ■ 品
苯酚 一 硫酸法测定保健酒 中的粗多糖含量
张 利锋 张欣 烨 张洁 马青 青
（ 河 南省疾 病预 防控制 中心 河 南郑 州 ４ ５ ０ ０ １ ６ ）
摘要： 目的： 建立保健 酒中粗 多糖含量 的测定 方法 。 方法： 采 用醇提醇沉水溶法从保健酒 中提取粗 多糖， 经苯 酚一 硫 酸显色后
ｃ ｏｅ 伍ｃ ｉ ｅ ｎｔ ｗａ ｓ ｙ＝０． ０ ０ ３４ ｘ＋０． ００ ２１ ａ ｎｄ ０． ９９ ９ ５． ｔ ｈｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｖｅ ｒ ｉ ｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ９ ６． ２ ％ 一１ ００ ． ９ ％， Ｃｏｎｃ ｌ ｕｔ ｉ ｏｎ： Ｔｈ ｉ ｓ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ ｉ Ｓ ｓ ｕｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｏｒ ｆ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｎｇ ｐｏ １ ｖｓ ａ ｃ ｃ ｈａ ｒ ｉ ｄ ｅ ｓ ｉ ｎ ｈ ｅ ａ ｌ ｔ ｈ ｗｉ ｎｅ ｉ ｔ ｗ ｈ ｔ ｈｅ ａ ｄ ｖａ ｎｔ ａ ｇ ｅ ｓ ｏ ｆ ｈｉ ｇ ｈ ｒ ｅ ｃ ｏ ｖｅ ｒ ｙ ｒ ａ ｔ ｅ ａ ｎ ｄ ｅ ａ ｓ ｙ ｏｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ．
粗多糖检测方法(蒽酮比色法)
粗多糖检测方法（蒽酮比色法）：1 主要仪器（1）离心机（ 4000r/min ）。
（2）离心瓶容量 100ml 或具盖 10ml 离心管。
（3）分光光度计。
（4）水浴锅。
2 试剂实验用水为双蒸水；所用试剂为分析纯级。
（1）葡萄糖标准液：准确称取I.OOOOg经过98〜100 C干燥至恒重的分析纯葡萄糖，加水溶解后以水稀释至 1000ml ，此溶液 1ml 含 1mg 葡萄糖，用前稀释10倍（0.1mg/ml ），现用现配。
（2） 0.2%蒽酮硫酸溶液：称取0.2g蒽酮置于烧杯中，缓慢加入100ml浓硫酸（分析纯），溶解后呈黄色透明溶液，现用现配。
3 测定步骤（1）样品处理：准确称取样品 1〜2g 按上法用乙醇沉淀多糖，然后用热水分次溶解沉淀并稀释定容至 100〜250ml （使样液含糖量在 0.02〜 0.05mg/ml间）。
过滤，弃去初滤液即为待测液。
（2）标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准液（ 0.1mg/ml ） 0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml 于 10ml 具塞比色管中，加水至 1.0ml ，加入蒽酮试剂 5ml 充分混匀，在沸水浴中加热 10min ，取出在流水中冷却 20min后，在 620nm 波长下，以试剂空白调零，测定各管的吸收值绘制标准曲(3) 样品测定：准确吸取样品待测液10ml (含糖20〜80⑷)按标准曲线绘制步骤于 620nm 波长下测定吸光度值并求出样品含糖量。
4 结果计算：m1X= --------------- x F x n x 100%m x 1000式中X—样品中粗多糖含量(以葡萄糖计)(%)；m1 —由标准曲线查得样品液含糖质量( mg )；m —样品质量( g )；n —稀释倍数；F—换算因子。
换算因子的测定：准确称取被测物质的纯品 20mg 置 100ml 容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，吸取 0.2 〜0.4ml 于 10ml 具塞比色管中，加水至 1.0ml 按上法测定。
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粗多糖含量测定方法学研究资料
一、仪器与试药 (1)
二、方法的研究 (2)
1.检测波长的测定 (2)
2.样品及对照制备方法 (2)
三、方法学验证 (3)
1.线性 (3)
2.精密度实验 (4)
3.稳定性实验 (4)
4.重复性试验 (5)
5.中间精密度实验 (5)
6.准确度试验 (6)
芪参颗粒粗多糖含量测定方法起草说明
标志性成分粗多糖含量测定的方法来源于《保健食品功效成分检测方法》白鸿主编（中国中医药出版社)的第二法，该方法的原理是：多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，糖与硫酸在沸水浴中加热脱水生成羟甲基呋喃甲醛（羟甲基呋喃糠醛），再与蒽酮缩合成蓝绿色化合物，其显色强度与溶液中糖的浓度成正比，在625nm波长下比色测定。
主要研究资料如下：
一、仪器与试药
1、仪器
(1) 离心机（湘南湘仪实验室仪器开发有限公司，型号TD25-WS）；
(2) 离心管：50ml；
(3) 水浴锅（上海精宏实验设备有限公司，型号 DK-S26）；
(4) 旋涡混合器（DioCote，SA8）；
(5) SHIMADZU UV-1800 紫外可见光分光光度计；
(6) JB760-68 石英比色皿（宜兴市伟鑫仪器有限公司）；
(7) TU-1901 双光束紫外可见光分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；
2、试药
(1) 葡萄糖：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1；
(2) 无水乙醇：西陇化学股份有限公司，分析纯，批号为160802 1；
(3) 蒽酮：国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号为；
(4) 硫酸：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1；
(5) 葡萄糖标准液：标准称取干燥恒重的分析纯级葡萄糖，加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（ml）。
(6) %蒽酮硫酸溶液（W/V）：准确称取蒽酮置于烧杯中，缓缓加入100ml 80%硫酸溶解，溶解后呈黄色透明溶液。
现用现配。
3、试样
v1.0 可编辑可修改
(1) 样品颗粒：XXXXX 有限公司提供。
二、方法的研究
粗多糖含量测定的方法来源于《保健食品功效成分检测方法》白鸿主编（中国中医药出版社)的第二法，本研究针对葡萄糖对照以及样品的的吸光度进行检测波长测定，如下所示： 1.检测波长的测定
取葡萄糖对照品溶液、样品溶液进行紫外光谱扫描，结果显示对照品和样品均在625nm 波长附近有最大吸收。
序号 波长 吸光度 1 2
2.样品及对照制备方法
（1）样品提取：称取混合均匀的固体样品，置于100ml 容量瓶中，加水80ml 左右，于沸水浴中加热1小时，冷却至室温后补加水至刻度（V1），混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀粗多糖。
葡萄糖对照品紫外波长吸收图
芪参颗粒样品溶液紫外波长吸收图
序号 波长 吸光度 1 2
（2）沉淀粗多糖：准确吸取上滤液（或液体样品）（V2），置于50ml离心管中（或于15ml具塞离心管中），加入无水乙醇20ml（或8ml），混匀，于4℃冰箱静置4小时以上，以4000r/min离心5min，弃去上清液，残渣用80%（V/V）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次。
残渣用水溶解并定容至10ml（V3）。
（3）标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准使用液0ml、、、、、、（相当于葡萄糖0mg、、、、、、）置于10ml比色管中，补加水，加入%蒽酮硫酸溶液6ml，在旋涡混合器上混匀，置沸水浴中加热10min，取出，在流水中冷却20min后，用分光光度计在625nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。
以葡萄糖质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
（4）样品测定：准确吸取样品待测液（含糖量20—100μg），按标准曲线绘制步骤于625nm波长下测定吸光度值并求出样品含量。
三、方法学验证
1.线性
取适量葡萄糖对照品，精密称定，加水制成ml的葡萄糖对照品储备溶液，分别精密吸取葡萄糖对照品储备溶液0ml、、、、、、，置于10ml比色管中，补加水，依法测定。
得标准曲线储备液。
依法测定，分别制成含葡萄糖为0、μg、μg、μg、μg、μg、μg的溶液，以吸光度（Y）为纵坐标，葡糖糖对照品的含量（X）为横坐标，绘制标准曲线，见下图，其回归方程为： y=+（r=），试验表明葡萄糖对照品在0～μg范围内呈良好线性关系。
见表1。
表1 线性考察结果
含量
（μg）
吸光度（Y）
回归方程 y=+ r=
粗多糖标准曲线如下：
v1.0 可编辑可修改
粗多糖对照在0～μg内成良好的线性关系。
2.精密度实验
取一供试品溶液，连续测定6次，记录吸光度，结果见表2。
试验结果RSD＜％（RSD ＝％，n＝6），说明仪器精密度良好。
表2 仪器精密度试验测定结果
序号吸光度平均吸光度RSD％
1
2
3
4
5
6
3.稳定性实验
取同一样品，按以下时间测定，记录吸光度，结果见表3。
表3 粗多糖稳定性试验结果
时间0min30min1h2h3h4h
吸光度03313
1hRSD(%)
2hRSD(%)
4hRSD(%)
结果表明供试品溶液在显色反应完成后4小时内稳定。
4.重复性试验
取同一供试品，按供试品制备方法制备6份供试品溶液，并按样品及对照制备方法测定粗多糖含量，结果见表4。
表4 粗多糖重复性试验测定结果（单位：mg/100g）
样品编号123456
含量(mg/100ml)348343335330335338平均含量338
RSD（%）
结果表明6份供试品溶液按照粗多糖的检测方法测定重复性好。
5.中间精密度实验
取同一供试品(批号：150401)，由另一操作者于不同时间、不同仪器操作，按供试品制备方法制备6份供试品溶液，并按样品及对照制备方法测定粗多糖含量，结果见表5。
表5 粗多糖中间精密度试验测定结果（单位：mg/100g）
标准曲线结果：
含量
（μg）
吸光度（Y） 0
回归方程 y=+ r=
样品测定结果：
样品编号123456
含量(mg/100ml) 294 285 297
273 297 287
平均含量 289 RSD （%）
结果表明6份供试品溶液按照粗多糖的检测方法测定进行的中间精密度实验精密度良好。
6.准确度试验
采用加样回收法，精密称取本品（批号：150401，平均含量：338mg/100g ，平均吸光度：）各6份，按照样品及对照制备方法中制备得样品待测液6份，分别从6份待测液中吸取1ml 置于10ml 比色皿中，再分别精密加入1ml 100%浓度的对照品溶液（浓度：ml ），依法进行测定，记录吸光度，以吸光度计算回收率，结果见表6。
6份样品回收率均在95%~105%之间，平均回收率为103%，RSD=%，该方法准确度符合要求。
表6 粗多糖回收率试验结果
编号
取样量 (g) 样品吸光度 对照品加入量
对照 加入对照后 回收率 平均值 （%）
RSD （mg ）
测得吸光度
总吸光度
（%）
（%）
1 10
2 103
2 10
3 3 102
4 104
5 104 6
103。