【高中生物】高中生物知识点：土壤中微生物的分离与计数
高中生物备课资料 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 新人教版选修1
落数在50个左右为最好。
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㈢.设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素 对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
设置对照的方法：
空白对照：不给对照组任何处理因素。
条件对照：给对照组施以部分实验因素，但不是所要研究的 处理因素。 自身对照：对照组和实验组都在同一研究对象上进行。
原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大 多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。
启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的
要求，到相应的环境中精去选版p寻pt 找。
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2、实验室中微生物的筛选原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营
养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生
物生长。
要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包
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注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30— —300的平板上进行计数。
②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三 个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出 菌落平均数。
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以
三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g
尿素
1.0g
琼脂
15.0g
①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属
于哪类培养基？
固体培养基 选择培养基
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
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4、培养基选择分解尿素的微生物的原理
培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物 才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微 生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发 育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选 择出分解尿素的微生物。
土壤微生物分离纯化及测数.
土壤微生物别离纯化及测数土壤微生物|别离纯化及测数来源：生物秀时间：2021-5-28一、实验目的要求了解土壤微生物的别离纯化及测数的根本原理。
学习并掌握微生物别离纯化技术方法。
学习并掌握微生物平板菌落计数的技术方法。
二、根本原理土壤是微生物生活的大本营，其中含有大量不同类型的微生物，可按照一定的方法将各类微生物通过别离进行纯培养，并能对特定类群进行数量测定。
根本原理是通过稀释使菌体细胞充分分散，单细胞得以生长发育形成菌落，可使用稀释法或平板划线法进一步纯化，还可通过平板菌落计数，推算单位重量土壤样品含有微生物的数量。
三、实验步骤〔一〕土壤样品采集在待测田块上，假设田块面积小于50平方米那么按对角线三点采样，假设田块面积大于50平方米按对角线五点采样。
采样一般定点于耕作层0--20cm，先除去表土 1--2cm，以无菌铲采土足量充分混匀后用无菌塑料袋分装。
〔二〕好气性细菌的别离纯化及测数1.制备土样稀释液吹吸三次混匀无菌操作另留一管不稀释留作对照〔C K〕2.培养基的准备融化牛肉膏蛋白胨培养基，融化后保温在48℃。
并取6个无菌培养皿，分别在皿底贴好标签，注明10-5、10-6、CK〔每个稀释度要两个平行皿，对照要两个平行皿〕。
3.倾注法接种先按10-6，10-5的顺序将不同稀释度菌悬液接入对应平皿中〔每个平皿接入1ml〕，再向每个平皿倾注约15ml的牛肉膏蛋白胨培养基〔48℃〕待冷凝，混合均匀。
4.保温培养将已经接种的平皿静置10min后，放入温箱倒置培养3--5日〔30℃〕，观察结果。
5.分区划线法纯化平板划线别离，其划线方法有以下两种：6.计数要求30~300之间计数。
CK除外。
每克湿土样细菌数量＝平均菌落数×稀释倍数土壤样品水分系数1∕〔1—样品水分百分数〕土壤样品细菌数量〔个∕克干土〕＝每克湿土样细菌数量×样品水分系数四实验报告及思考题记录计数结果并计算土壤样品含菌数。
高二生物人教版选修一讲义专题二课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、研究思路1．筛选菌株(1)原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
(2)选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
2．统计菌落数目(1)常用方法：稀释涂布平板法。
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
(2)测定微生物数量的常用方法还有显微镜直接计数法。
3．设置对照：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
二、实验设计土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察1．土壤取样一般要铲去表层土，因为绝大多数细菌分布于距地表约3～8_cm的土壤层。
2．样品的稀释：不同的微生物需要稀释的倍数不同。
(填表)3.(1)培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。
(2)观察：每隔24_h统计一次菌落数目，最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
三、操作提示1．无菌操作：取土样用的小铁铲和盛土样的信封都要进行灭菌；称取土样要在火焰旁进行，稀释样品要在火焰旁操作。
2．做标记：对平板和试管进行标记，尤其进行系列稀释时要按照稀释度递增的顺序将试管排列成行。
3．制定计划：对于耗时较长的生物实验，要事先规划时间，以便提高工作效率。
四、菌种鉴定1．原理：分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，使培养基的碱性增强。
2．方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
1．筛选菌株分析下表所示培养基的配方，回答下列问题：为微生物提供碳源的物质是葡萄糖，提供氮源的物质是尿素。
(2)该培养基是否具有选择作用，为什么？提示：是。
绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，本培养基以尿素为唯一氮源，可以分离得到产生脲酶的微生物(即分解尿素的微生物)。
高中生物人教版土壤中分解尿素的细菌分离与计数实验教案
高中生物人教版土壤中分解尿素的细菌分离与计数实验教案一、实验目的本实验旨在通过分离与计数实验的方法，了解土壤中分解尿素的细菌数量，并掌握相关实验操作和分析技巧。
二、实验原理土壤是生物多样性最大的生态系统之一，其中存在着丰富的微生物群落，包括分解尿素的细菌。
土壤中的细菌首先被分离出来，然后通过计数方法估算其数量。
三、实验仪器与试剂1. 实验仪器：平板计数器、显微镜、培养皿、离心机等。
2. 实验试剂：含有尿素的培养基、无菌蒸馏水等。
四、实验步骤1. 样品收集：在实验地点随机选取不同位置的土壤样品，用清洁铲子或者均匀切割的方法，收集土壤样品。
2. 细菌分离：将采集到的土壤样品稀释至一定倍数，如稀释至10^-4。
3. 细菌培养：将稀释后的土壤样品取1 mL加入含有尿素的培养基中，混匀后均匀涂布在培养皿上。
重复操作至少3次。
4. 培养：将培养皿置于恒温培养箱中，温度设定为适合细菌生长的温度（一般为25-37摄氏度），培养时间至少为24小时。
5. 细菌计数：取培养好的培养皿，将每一块区域上的菌落用平板计数器计数。
6. 数据分析：根据计数结果，计算出每个培养皿上的细菌数量，并求平均值。
五、实验注意事项1. 取样时要随机选取不同位置的土壤样品，以保证样品的代表性。
2. 实验操作要严格无菌，避免其他微生物的污染。
3. 培养皿在涂布培养基时要注意均匀涂布，避免菌落重叠。
4. 培养箱的温度要适合细菌生长，同时要确保培养箱的密封性。
5. 实验结束后，要正确消毒实验器材和废弃物。
六、实验结果与讨论根据计数结果，可以得到每个培养皿上细菌的数量。
通过统计多个培养皿的平均值，可以估计土壤中分解尿素的细菌总数量。
进一步分析不同样品之间的差异，可以研究土壤中细菌群落的分布情况以及环境因素对细菌数量的影响。
七、实验拓展1. 可以进一步研究土壤中其他种类微生物的数量和群落结构，比如真菌、放线菌等。
2. 可以收集不同类型土壤样品，比如草地土壤、农田土壤等，比较它们中细菌数量的差异。
高考生物复习_2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
练一练 测定土壤中细菌数量一般选 10 10 10 倍的稀释液进行平板培养；而真菌的 10 倍稀释， 数量，一般选用100、1000、 其原因是（ ） A 细菌个体小，真菌个体大 B 细菌易稀释真菌不易稀释 C 细菌在土壤中含量比真菌高 D 随机的，没有原因
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下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是( ) A. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、 葡萄糖、尿素、琼脂、水 B. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、 葡萄糖、琼脂、水 C. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、 尿素、琼脂、水 D. KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、 点此播放教学视频 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水
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练一练
用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的 数目，其结果际值一致 D.比实际值可能高也可能低
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2.土壤中分解尿素细菌的计数
有些细菌含有尿素分解酶，能将尿素琼脂培养基中的尿素分 解生成氨，氨溶于水变成氢氧化铵，导致培养基变成碱性， 使酚红指示剂呈现红色。
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2、间接计数法：最常用稀释平板计数法。 含菌数较少的情形下，也可以完成计数。
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实践案例
土壤中好气性细菌的计数
测定土壤中的含菌量可以作为判定土壤肥力的一个 重要指标。 活动程序： 1、制备土壤稀释液 ①取土壤表层土样 ②称取1g土样，放入99ml无菌水锥形瓶中，振荡 20min，即成100倍稀释液。 ③移液、稀释 用同样方法可制成 104 105倍的系列稀释菌液。
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高中生物专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学案含解析新人教版选修1
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、研究思路1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
(2)选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
2．统计菌落数目(1)活菌计数法：常用稀释涂布平板法。
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②计算公式：每克样品中的菌株数＝(C ÷V )×M 。
C ：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。
V ：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)。
M ：代表稀释倍数。
③统计方法：为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取其平均值。
(2)显微镜直接计数法：在显微镜下直接观察和计数微生物的数量。
3．设置对照(1)对照实验：指除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验。
1.实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)同时抑制或阻止其他微生物的生长。
2．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
3．测定微生物数量的常用方法有活菌计数法和显微镜直接计数法。
稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目，但统计结果往往比活菌的实际数目低。
4．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作为唯一氮源的选择培养基分离能分解尿素的细菌。
5．鉴定分解尿素细菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，依据是否变红进行判断。
(2)主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
二、实验设计1．土壤取样从富含有机质、酸碱度接近中性且潮湿的土壤取样。
高中生物二 微生物的培养与用 课题2 土壤中分
角顿市安康阳光实验学校课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、选择题1．关于土壤取样的叙述错误的是( C )A．土壤取样，应选取肥沃湿润的土壤B．先铲去表层土3 cm左右，再取样C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D．应在火焰旁称取土壤[解析] 取样用的小铁铲和信封在使用前需要进行灭菌处理，C错误。
2．在分解尿素菌的分离和鉴定中，对先后用到的两种培养基，叙述正确的是( B )A．加入酚红指示剂作为选择培养基，再加入唯一碳源作为鉴别培养基B．加入唯一氮源作为选择培养基，再加入酚红指示剂作为鉴别培养基C．加入唯一氮源作为鉴别培养基，再加入酚红指示剂作为选择培养基D．加入唯一碳源作为选择培养基，再加入酚酞指示剂作为鉴别培养基[解析] 在分解尿素菌的分离和鉴定中，应该先加入尿素作为分解尿素菌的唯一氮源，分解尿素菌合成的脲酶，能分解尿素，产生氨，氨呈碱性；然后加入酚红指示剂培养细菌，指示剂将变为红色。
3．需要在火焰旁操作的有( D )①土壤取样②称取土壤③稀释土壤④涂布平板⑤微生物的培养A．①②③④⑤B．②③④⑤C．③④⑤D．②③④[解析] 土壤中尿素分解菌的分离和计数中除土壤取样外，其余均需要无菌操作。
4．分离土壤中分解尿素菌的实验操作中，对于获得纯化的尿素分解菌的单菌落影响最大的是( C )A．制备浸出液的土壤取自土壤的表层B．涂布前涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌C．牛肉膏蛋白胨培养基中添加尿素作为氮源D．接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒[解析] 制备浸出液的土壤取自土壤的表层与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大，A错误；涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌可能会造成污染，与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大，B错误；该培养基必须以尿素为唯一的氮源，不能使用牛肉膏蛋白胨培养基或在其中添加尿素作为氮源，该操作对实验影响最大，C正确；接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒，可能会造成污染，但与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大，D错误。
【精品】实验四 土壤微生物的分离和计数
【精品】实验四土壤微生物的分离和计数实验目的：1.掌握土壤微生物的分离方法。
2.利用平板计数法和涂布法等方法进行土壤微生物的计数。
实验原理：1.微生物分离法微生物分离法是将微生物从混合物或样品中分离出来的方法，是微生物学中最常用的一种基本方法。
常用的方法有稀释平板法、涂布法等。
2.平板计数法平板计数法又称菌落计数法，是通过数目测定评估微生物数量的方法。
通常在固体培养基上用微生物悬液接种，培养出菌落，以评估菌群密度。
计算微生物数量时应选择符合菌落特征的一个菌落，如颜色、密度、大小等，并使用总体积、稀释因子及加样体积计算。
3.涂布法涂布法又称涂布分离法，是一种快速、容易、简单、实用的微生物分离和计数方法。
方法是取少量样品加入到无菌的琼脂培养基中，将琼脂培养基均匀地涂布在培养皿中，然后在恰当的温度下和时间内使菌落正常增殖及显像，最后计算菌落单位体积的数量。
实验材料和设备：1.土壤样品；化学试剂：蒸馏水、1%碳酸氢钠溶液、1%双氧水溶液、1.5%琼脂等。
2.培养皿；吸管；移液管；吸胶头；灭菌器；微量注射器等。
实验步骤：1.准备样品：取土壤样品，干燥，粉碎，筛选出粒径较小的部分备用。
2.制备0.1g/ml的悬液：取粉碎好的土壤样品0.1克，加入到10ml的蒸馏水中，用吸管吸取混合后的液体，摇匀后待沉淀，取稠泥状上清液，稀释成0.1g/ml的土壤悬液。
3.平板法计数：取一定体积的土壤悬液接种在称量好的琼脂平板上，进行涂布，涂布均匀后，放置在恰当的温度下，培养约24小时，以单个菌落的数量（单位：cfu/ml）计数，并使用公式计算微生物数量。
4.涂布法计数：用吸管吸取一定体积的土壤悬浊液，加入到10ml的液体琼脂培养基中，均匀地涂布在培养皿中，在适当的温度下和时间内使菌落正常增殖及显像，然后计算菌落单位体积的数量。
实验记录和数据处理：1.记录实验过程、结果和分析。
2.计算平板菌落数量和涂布法菌落数量。
3.对实验结果进行分析比较，得出结论。
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数生物选修一高考考点总结
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数生物选修一高考考点总结高中同学现代意识的培育，对于当前新课改下的高中生物教学来说，是一个特别有效的途径。
下面是小偏整理的土壤中分解尿素的细菌的分别和计数生物选修一高考考点总结，感谢您的每一次阅读。
土壤中分解尿素的细菌的分别和计数生物选修一高考考点总结(1)土壤取样：①土壤取样缘由：土壤有“微生物的自然培育基”之称。
同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。
②要求：富含有机质(富含有机质的土壤层中微生物数量大、种类多)，酸碱度接近中性且潮湿(土壤中的微生物大约有70%~80%是细菌，此环境相宜细菌的生长)的土壤。
③取样部位：先铲去表层土3cm左右，再取距地表3~8cm的土壤层，将样品装入事先预备好的信封中。
(取样用的小铁铲和盛土样的信封都要经过灭菌)(2)制备培育基：以牛肉膏蛋白胨培育基作为对比组，以尿素为唯一氮源的培育基作为试验组，用来推断选择培育基是否具有选择的作用。
(3)样品的稀释与涂布平板：①取样稀释：在火焰旁称取土壤10g，放入盛有90mL无菌水的三角瓶中，振荡使土样与水充分混合。
将细菌分散，制成101倍土样稀释液。
用1支1mL无菌吸管从中吸取1mL 土壤悬液注入盛有9mL无菌水的试管中，吹吸三次，充分混匀，制成102倍土壤稀释液。
依次类推，制成103、104、105、106、107倍土壤稀释液。
(稀释缘由：样品的稀释程度直接影响平板上生长的菌落数目)②取样涂布：根据由107～103稀释度的挨次分别吸取0.1mL进行平板涂布操作。
根据浓度从107~103的挨次涂布平板，不必更换移液管(涂布时稀释倍数的选择：选用肯定稀释范围的样品液进行培育，保证获得菌落数在30~300之间，便于计数;如测定土壤中细菌的数量时，一般选用104、105、106倍的稀释液进行平板涂布培育;测定土壤中放线菌的数量时，一般选用103、104、105倍的稀释液进行平板涂布培育;测定土壤中真菌的数量时，一般选用102、103、104倍的稀释液进行平板涂布培育)。
实验五土壤中微生物的分离计数
第6页，共13页。
（六）培养：
将平板用报纸包好（每个平板方向一致）， 写上班级和姓名，皿底朝上，置于培养箱培 养(温度37℃) 。
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（七）细菌计数结果
稀释度
平板
菌落数
各浓度平 均菌落数 土壤中含 细菌数量
10-5 12
10-6 12
10-7 12
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四、平皿划线 分离法
第9页，共13页。
特点：快速、方便。
分区划线（适用于浓度较大的样品） 连续划线（适用于浓度较小的样品）
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第11页，共13页。
五、试管斜面接种
1.两支试管呈“V”字形 3.火焰上微烧一周 5.接种、划线
2.拔下试管塞
4.接种环灼烧、冷却 6.塞上塞子，灼烧接种环
实验五土壤中微生物的分离计 数
第1页，共13页。
一、实验目的： 学习微生物稀释平板计数及划线分离技术 二、实验原理: ➢采用适宜（选择）培养基和培养条件，或加入某种抑制剂 有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标微生物的纯培 养：常用稀释平板分离法和划线分离法 在固体培养基上形成单个菌落。 ➢依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一菌落 从而推算样品中含有多少细菌的活菌数目。
第3页，共13页。
（四）悬液稀释
无菌操作采用－4，－5，－6 稀释液涂布牛肉膏蛋白胨平板; 每个稀释度2个重复。每人用剩下的1个平板做划线分离，从三
角瓶中取土壤悬液作划线分离。
10克
土样
10-1
90毫升 无菌水
10-2
10-3
第4页，共13页。
10-4
10-5
土壤微生物的分离和计数
一,实 验 设 计 请你根据实验流程图和提供的三个资料以及" 请你根据实验流程图和提供的三个资料以及"操作 提示" 在思考有关问题的基础上, 提示",在思考有关问题的基础上,设计出一个详细的 实验方案. 实验方案. 土壤取样 选择培养 梯度稀释
将样品涂布在鉴别纤 维素分解菌的培养基上
筛选产生透 明圈的菌落
�
2.样品的稀释操作是否成功 2.样品的稀释操作是否成功 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～ 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300 30 的平板,则说明稀释操作比较成功, 的平板,则说明稀释操作比较成功,并能够进行 菌落的计数. 菌落的计数. 3.重复组的结果是否一致 3.重复组的结果是否一致 如果各位同学选取的是同一种土样, 如果各位同学选取的是同一种土样,统计的 结果应该接近.如果结果相差太远, 结果应该接近.如果结果相差太远,则需要从各 项操作过程中去分析,寻找可能的原因. 项操作过程中去分析,寻找可能的原因.
二,结果分析与评价 1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是 1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是 否筛选出菌落 对照的培养皿在培养过程中没有菌落生 长,说明培养基没有被杂菌污染.牛肉膏培养基 说明培养基没有被杂菌污染. 的菌落数目明显大于选择培养基的数目, 的菌落数目明显大于选择培养基的数目,说明选 择培养基已筛选出一些菌落. 择培养基已筛选出一些菌落.
挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养 基的斜面中,观察能否产生如课本中图2 10的颜色反应. 基的斜面中,观察能否产生如课本中图2-10的颜色反应. 的颜色反应
(5)细菌的计数
选取菌落数在30～300的平板进行计数.在同一稀释度 的平板进行计数. 选取菌落数在30～300的平板进行计数 30 下,至少对3个平板进行重复计数,然后求出平均值,并 至少对3个平板进行重复计数,然后求出平均值, 根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目. 根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目.
微生物学 实验7 土壤中细菌的分离纯化及计数
交叉划线法
连续划线法
正置培养过程中，培养基中水分蒸发后，会在培养皿
计算公式：
平均菌落数(个) 相应释倍数 CFU/g 100mL 0.2mL 10 g
平均菌落数——某一稀释度下三个平皿上的菌落平均数； CFU——菌落形成单位（colony-forming units，CFU）； 0.2mL——每个平皿加入的菌悬液体积； 100mL——10-1菌悬液的体积； 10g——称取的土壤重量。
平板菌落计数法根据微生物在固体培养基上所形成的 菌落一般由一个细胞繁殖而成的原理进行。即一长成的菌 落代表一个活的细胞。计数时先将待测样品作一系列稀释， 使其中的微生物充分分散成单个细胞，再吸取一定量的稀 释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基 内，经培养单个细胞繁殖形成菌落，统计菌落数目即可计 换算出样品的含菌数。
菌落计数原则（六条）
1、先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个 平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应 以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌 落数。若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其 余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的 菌落数乘2以代表全平板的菌落数，然后再计算该 稀释度的平均菌落数。
计算菌落总数方法举例（加样量为1mL）
例次 １ 不同稀释度的平均菌落数 10-1 1365 10-2 164 10-3 20 两个稀释 度菌落数 之比 － 菌落总数 （个／mL） 1.64×104 备注
２ ３
４ ５
2760 2890
无法计数 27
295 271
1650 11
46 60
513 5
1.6 2.2
4、若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应 按稀释度(倍数)最高的平均菌落数乘以稀释倍数 （见下表，例4）。
高三生物一轮复习 2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
【目标导航】 1.能利用选择培养基分离细菌。
2.能运用稀释涂布平板法测定土壤中分解尿素细菌的数量。
一、研究思路1．课题背景尿素是一种重要的农业氮肥，但农作物不能(能、不能)直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素在脲酶的催化下分解为氨之后，才能被植物吸收。
2．筛选菌株微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长，如可从热泉中将Taq细菌筛选出来。
3．统计菌落数目(1)测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数法。
(2)稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目①为了保证结果准确，一般设置多于3个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取平均数。
②统计的菌落数往往比活菌的实际数目少，因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
4．设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
二、实验设计1．操作步骤：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察。
2．土壤取样一般要铲去表层土，因为绝大多数细菌分布于距地表约3～8__cm的土壤层。
3．样品的稀释：不同的微生物需要稀释的倍数不同，请填写下表：4.微生物的培养与观察微生物的生长受温度的影响，菌落的数目和特征是观察的主要内容。
三、操作提示1．无菌操作：取土样用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要灭菌。
称取土样要在火焰旁进行。
稀释样品要在火焰旁操作。
2．做好标记：要对平板和试管进行标记，尤其进行系列稀释时要按稀释度递增顺序将试管排列成行。
四、课题延伸分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，使培养基的碱性增强。
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可以初步鉴定该种细菌能够分解尿素。
判断正误：(1)选择培养基只允许特定的微生物生长，而抑制或阻止其他微生物的生长()(2)对活菌进行计数时，所做的平板越大越好()(3)设置对照实验可以排除一些非测试因素对实验结果的影响()(4)从土壤中取样时，土层越浅越好()(5)来自土壤的微生物稀释倍数越大越好()答案(1)√(2)×(3)√(4)×(5)×一、选择培养基相关问题分析1．概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
【高中生物】高中生物知识点：土壤中微生物的分离与计数
【高中生物】高中生物知识点：土壤中微生物的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：1．分离菌株的思路(1)自然界中目的菌株的甄选①依据：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
②实例：pcr技术过程中使用的耐高温的taqdna聚合酶，就从热泉中甄选出的taq细菌中抽取出的。
(2)实验室中目的菌株的筛选①原理：人为提供更多有助于目的菌株生长的条件（包含营养、温度.ph等），同时遏制或制止其他微生物生长。
培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。
缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物②方法：能够制备脲酶的细菌就可以水解尿素。
酿制以尿素为唯一氮源的培养基，能生长的细菌就是能够水解尿素的细菌。
2．统计菌落数目的方法(1)吸收涂敷平板法（间接）①当样品的稀释庋足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
②通过统计数据平板上的菌落数去推断样品中大约所含的活菌数。
(2)利用显微镜直接计数3．水解尿素的细菌的鉴别细菌制备的脲酶将尿素分解成氨，氨会并使培养基的碱性进一步增强。
在以尿素为唯一氮源的培养基中重新加入酚红指示剂培育细菌，若指示剂变白，可以确认该种细菌能水解尿素。
4．实验流程土壤采样→样品的吸收→将稀释液涂敷至以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选出能够生长的菌落→鉴别知识拓展：1、taq细菌就是耐高温的微生物。
2、培养基对微生物具有选择作用。
配置培养基时根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求，加入某些物质或出去某些营养物质，一直其他微生物的生长，也可以根据某些微生物对一些物理、化学因素的抗性，在培养基中加入某种化学物质，从而筛选出待定的微生物。
这种培养基叫做选择培养基。
3、测量微生物数量的方法：①直接计数法：常用显微镜直接技术法，一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
人教版高中生物选修1-2.2《土壤中分离尿素的细菌的分离与计数》学习要点
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数【知识结构】【学习目标】1．通过学习选择培养基的应用原理，能够根据各种微生物的代谢特征，配制选择培养基；2．通过进行土壤中分解尿素的细菌的分离与计数过程，能够列举其中涉及的相关技术并会用这些技术解决生产生活中的相关问题。
3．通过实际实验操作，能够运用无菌技术完成微生物的分离、培养和技术各个环节。
【学习重点难点】课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制课题难点：对分解尿素的细菌的计数【学习要点总结】学习目标一：研究培养基对微生物的选择作用（1）实验室中微生物的筛选应用的原理人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
（2）选择性培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
（3）配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。
例如，培养基中不加入有机物可以选择培养自养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养能固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。
学习目标二：进行微生物数量的测定（1）测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。
（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。
为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取平均值。
统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。
学习目标三：本节课的实验设计实验设计包括实验方案，所需仪器、材料、用具和药品，具体的实施步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。
（1）土壤取样从富含有机物、潮湿、pH≈7的土壤中取样。
铲去表层土，在距地表约3～8cm的土壤层取样。
【高中生物】高二生物下册第二单元知识点：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
【高中生物】高二生物下册第二单元知识点：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数社会的发展，人类文明的进步，个人生活质量的提高，都要靠生物学的发展和应用。
以下是生物网为大家整理的高二生物下册第二单元知识点，希望可以解决您所遇到的相关问题，加油，生物网一直陪伴您。
本实验的目的是利用选择性培养基分离土壤中的尿素分解细菌，并学会计算每克土壤样品中的尿素分解细菌数量。
这个实验比主题1更复杂。
学生不仅要了解更多关于微生物培养的知识，而且要有许多实验工具和复杂的操作步骤。
如果老师直接告诉学生实验方法和步骤，学生不易记忆操作步骤，没有独立思考，导致实验中出现问题。
很难让学生自己设计实验。
在这里，我们应该充分发挥教师的引导作用，运用提问的教学策略。
在对教师提出的问题进行思考和讨论的过程中，学生应逐步明确实验方法，尝试设计实验方案，并在实验课后通过讨论和交流课对自己和他人的实验进行评价。
1，引导学生理解相关知识通过阅读教学材料，学生可以了解土壤中尿素分解菌的代谢特性。
它们可以分解尿素，因为这些细菌可以分泌脲酶，在脲酶的催化下可以产生二氧化碳和氨。
教师举例帮助学生了解不同的环境条件，选择不同种类的微生物生存。
例如，耐热细菌生活在温泉中，耐热细菌将被消灭；制作泡菜时，泡菜罐中的厌氧环境会选择乳酸菌等厌氧菌，而需氧菌则无法存活。
如果你想分离土壤中分解尿素的细菌，你可以使用什么方法？指导学生分析尿素培养基的组成，以及该培养基配方是否对微生物有选择性影响？通过对以上问题的分析和讨论，帮助学生树立选择性媒体的概念。
2，引导学生理解稀释涂布平板法计数细菌数目的原理问这个问题：如果你想知道每克土壤中有多少细菌能分解尿素？我们该怎么办？此问题的目的是要引出计数细菌数目的方法。
问题本身比较开放，学生会有多种设想，不妨让学生谈谈。
在多种设想中，引出本实验要训练学生的细菌计数方法稀释涂布法。
引导学生回忆课题1是如何通过稀释涂布平板法获得单个菌落的，培养基上的单个菌落就代表稀释液中的一个活菌，因此计数平板上的菌落数就能推知样品中的细菌数目。
高中生物土壤中分解尿素的细菌的分离和计数(第一课时)
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题目标（一）知识与技能利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数（二）过程与方法分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性（三）情感、态度与价值观形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯课题重点对土样的选取和选择培养基的配制课题难点对分解尿素的细菌的计数教学方法启发式教学教学工具多媒体课件教学过程（一）引入新课上节课我们学习了培养基的配置以及接种技术。
下面我们来学习如何进行细菌的分离，获得所需要的目的微生物。
（二）进行新课1．基础知识1．1 尿素是一种重要的氮肥，农作物不能（能，不能）直接吸收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为氨和CO2，这是因为细菌能合成脲酶。
1．2 科学家能从热泉中把耐热细菌筛选出来是因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，这样也适用于实验室中微生物的筛选，原理是人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
点评：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用。
所以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。
〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是葡萄糖，提供氮源的的是尿素，琼脂的作用是凝固剂。
〖思考2〗该培养基对微生物具有（具有，不具有）选择作用。
如果具有，其选择机制是只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长。
1．3在统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法。
除此之外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。
【补充】显微镜直接计数是测定微生物的方法。
公式：观察到的红细胞平均数∶观察到的细菌平均数＝红细胞含量∶细菌含量1．4 采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300 的平板进行计数。
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【高中生物】高中生物知识点：土壤中微生物的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：
1.分离菌株的想法
(1)自然界中目的菌株的筛选
① 依据：根据其对生活环境的要求，在相应的环境中寻找。
②实例：pcr技术过程中用到的耐高温的taqdna聚合酶，就是从热泉中筛选出来的taq细菌中提取出来的。
（2）实验室筛选目标菌株
①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度.ph等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
培养基中分解尿素微生物的选择原则：培养基的氮源为尿素。
只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，尿素被用作氮源。
缺乏脲酶的微生物不能分解尿素，并且由于缺乏氮源而不能生长、发育和繁殖。
因此，可以用这种培养基选择分解尿素的微生物
②方法：能合成脲酶的细菌才能分解尿素。
配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌。
2.菌落数的计算方法
(1)稀释涂布平板法（间接）
① 当样品稀释度足够高时，培养基表面生长的菌落来自样品稀释液中的活细菌。
②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。
（2）显微镜直接计数
3．分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
4.实验过程
土壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定
知识发展：
1、taq细菌是耐高温的微生物。
2.培养基对微生物有选择性作用。
在配置培养基时，根据某一种或某一种微生物的特
殊营养要求，添加一些物质或排出一些营养物质，以保持其他微生物的生长，或根据某些
微生物对某些物理和化学因素的抗性，向培养基中添加化学物质，以筛选未确定的微生物。
这种培养基称为选择性培养基。
3、测定微生物数量的方法：
① 直接计数法：常用显微镜直接技术，一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞细菌
的计数。
②间接计数法：常用稀释平板计数法，平板培养基上长出一个菌落就代表原待测样品
中一个微生物个体。
4、通常用来作为菌种鉴定的重要依据的是菌落。