环境微生物学-实验六 微生物大小测定和计数

实验六微生物计数和大小的测定

一、实验目的

1、了解目测微尺和物测微尺的结构和使用；

2、了解血球记数板的结构；

3、掌握血球记数板的使用和计算方法。

二、实验仪器和材料

显微镜，目测微尺，物测微尺、血球记数板

擦镜纸，香柏油，二甲苯，载玻片，盖玻片。

酵母悬液（或其他种微生物的悬液）。

三、实验方法和步骤

1、目测微尺和物测微尺

目测微尺外形与目镜相似，在中央刻有10毫米长的、等分100格的标尺，每格的长度随使用目镜和物镜的放大倍数而定。使用前用物测微尺标定，使用时放在目镜内。物测微尺是一厚玻片，中央有一圆形盖玻片，中央刻有1毫米长的标尺，等分为100格，每格为10微米，用以标定目测微尺在不同放大倍数下每格的实际长度。

2、用目测微尺和物测微尺测量酵母菌的大小

①目测微尺的标定

将目测微尺装入目镜筒后，把物测微尺放在载物台上使刻度朝上，用低倍镜找到物测微尺的刻度，移动物测微尺和目测微尺使两者的第一条线重合，顺着刻度找出另一条重合线。再分别求出高倍镜和油镜下目测微尺每格的长度。

实验记录表格1

目镜放大倍数____________。

②菌体大小的测量

将物测微尺取下，换上标本片，选择适当的物镜测量目的物的大小，分别求出菌体的长和宽，再按目测微尺一格的长度算出菌体的长度和宽度。

（1）目测微尺的标定：

（2）在高倍镜下测量酵母菌大小：

3、血球记数板

血球记数板是一块比普通载玻片厚的特制玻璃制成。玻片中央刻有四条纵向槽，中央两条槽之间的平面比其他平面略低，中间有一横槽，槽的上下各有9个大方格，中间的一个方格为计数室，它的长和宽各为1毫米，深度为0.1毫米，其体积为0.1立方毫米。每个大格分成16个中格，每个中格分成25个小格，共400个小格。计算方法如下：细胞数/毫升=1个小格内的细胞数×400×10×1000×稀释倍数。

实验记录表格2

4、微生物记数

（1）稀释菌液：为了便于记数，将样品适当稀释，使每格约有5~10个细胞。

（2）取干净的血球计数器，用厚盖玻片盖住中央的记数室，用移液管吸取少许充分摇匀的待测菌液于盖玻片的边缘，菌液则自动渗入计数室，静止5~10分钟即可记数。

（3）将血球记数板置于载物台上，用低倍镜找到小方格网后，换高倍镜观察记数。需不断旋动细螺旋，看到计数室内不同深度的菌体。每个样品重复记数3次，取平均值，再按公式计算每毫升菌液中所含的酵母菌数。

实验记录表格3

四、思考题

1、使用油镜为什么要先用低倍和高倍观察？

2、用油镜观察时，为什么要在载玻片上滴一滴香柏油？

3、当接目镜不变，目测微尺也不变，只改变物镜，目测微尺每格所量的镜台上物体的实际长度是否相同？为什么？

4、在微生物计数时为什么要不断旋动细螺旋？