真菌的培养及形态观察

题目：真菌的培养及形态观察

动物科学1204班聂孝明 20121546 指导教师：邹玲

摘要：了解酵母菌和霉菌的菌落特征及在培养基中的生长表现，还有真菌的分离培养方法和载片培养，学习真菌水浸片的制备及形态观察。本实验通过真菌的固体培养，酵母菌水浸片旳制备观察及划线分离培养的方法进行形态观察。在固体培养基上，观察到A菌落成绿色比较光滑、有分生孢子、菌丝有横隔为青霉。D菌落有大量直立菌丝并且顶部发黑、有孢子囊、菌丝无横隔为根霉。B菌落大而光滑、显微镜下菌体较大、有假菌丝并且出芽生殖的为酵母菌。

关键词：酵母菌霉菌形态观察分离培养

引言：真菌在自然界中分布广、数量大、种类多。酵母菌是单细胞微生物，细胞核和细胞质有明显的分化，个体直径比细菌大10倍左右，多为圆形或卵圆形，无性繁殖为出芽生殖，可以形成假菌丝，有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。用美蓝染色液制成水浸片可以观察期外形和区分细菌的死活。霉菌的营养体是分支的丝状体，较大，分为基内菌丝和气生菌丝，不同的霉菌的繁殖菌丝可以形成不同的孢子，细胞易收缩变形，孢子容易分散。利用培养在玻璃纸上的霉菌作为观察材料，可以得到清晰，完整，保持自然状态的霉菌形态。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1菌种：酵母菌，青霉，根霉的斜面培养菌种

1.1.2试剂：沙堡培养基、美蓝染色液、70%酒精、无菌水等

1.1.3其他：解剖针、玻片、盖玻片、接种环、显微镜等

1.2方法

1.2..1真菌的划线分离培养

培养基：将沙堡琼脂培养基融化后，冷却至45摄氏度，注入无菌平皿中，每皿15~20ml，做成平板备用。

接种：取待分离的材料少许，投入无菌水试管中，振荡，使分离菌悬浮于水中，将接种环火焰灭菌后冷却，取上述悬液，进行平板划线分离。

培养与观察：划线完毕后，置于28摄氏度温箱培养2~5天，待形成子实器官后，取单个菌落部分，制片镜检。若只有一种菌，既得纯培养物。如有杂菌可取培养物少许制成悬液，用作划线分离，有时反复多次可获得纯种。也可在放大镜下观察，用无菌镊子夹取一段分离的真菌菌丝，在平板上分离培养，即可得到真菌的纯培养物。

1.2.2真菌在固体培养基上的生长表现：

酵母菌在固体培养基上菌落呈油脂状或蜡质状，表面光滑、湿润、粘稠，有的表面呈现粉粒状，粗糙或褶皱，菌落边缘整齐、缺损或带丝状。菌落颜色有乳白色、黄色、红色等。将不同的霉菌在固体培养基上培养2~5d，可见霉菌有绒毛状、絮状、绳索状等。大小依霉菌种类而异，很多霉菌的孢子和菌丝能产生色素，致使菌落表面、背面甚至培养基呈现不同的颜色，如黄色、绿色、黑色、橙色等。

1.2.3真菌的形态观察

1.2.3.1酵母菌水浸片的制备：将美蓝染色液或蒸馏水滴于干净的载玻片中央，用接种环以无菌及操作取培养48h的酵母菌少许，均匀涂于液滴中，染色2~3min后加盖玻片。注意切勿产生气泡，然后低倍镜和高倍镜观察其细胞形态、芽殖方式，注意酵母菌的形态、大小和芽体，同时可以根据是否染上颜色来区别死活细胞。

1.2.3.2挑取真菌孢子接入盛有灭菌水的试管中，震荡试管制成孢子悬液，用灭菌滴管吸取

灭菌后融化的固体培养基少许，滴于载玻片中央用接种环将孢子悬液接种在培养基四周将玻片加在培养基上，轻轻压一下，在适宜温度下培养，定期取出，低倍镜下观察孢子的着生状态，菌丝的生长状况等。

2结果分析

2.1真菌在固体培养基上的生长状况如图

2.2酵母菌水浸片的观察如图

2.3真菌的载片直接观察和显微镜下观察如图

3讨论

3.1制片时染色液不宜过多或过少，加盖玻片时勿产生气泡和移位

3.2制备湿室载玻片培养过程中，注意无菌操作

3.3载片培养时，将分散的孢子接在琼脂边缘，量要少，以免菌丝过于稠密影响观察。 4结论

菌A 观察到其菌落光滑并且为绿色、有分生孢子、菌丝有横隔。菌B 观察到菌落较大并且黄色的光滑菌落，细胞较大呈圆形，在美蓝浸片中观察到酵母菌无性繁殖主要是出芽生殖，活的细胞呈无色，死的细胞染成蓝色。D 可以观察到其有大量的直立菌丝并且顶部有黑色、有孢子囊、菌丝无横隔，因此，A 菌为青霉，B 菌为酵母菌，D 菌为根霉。

参考文献：

1.胡桂学.兽医微生物实验教程，中国农业大学出版社，2006（2）71-73

2.兽医微生物学实验教程【M 】北京：中国农业出版社，2006