实验二蛋白质的两性反应与等电点测定演示文稿

结论 2：
4号试管沉淀量最多
说明4号管溶液的pH值为酪蛋
白的等电点，即pI=4.7
思考题
什么是蛋白质的等电点？
在等电点时，蛋白质溶液为什 么容易发生沉淀？
1.00M醋酸溶液
实验步骤
蛋白质的两性反应（1）
取一干净试管
酪蛋白液10滴
观察溶液颜色 并解释现象
溴甲酚绿指示剂3滴
蛋白质的两性反应（2）
滴加0.02M HCL溶液
边滴加边混匀
有最大沉淀产生，观察溶液颜色变化
继续滴加0.02M HCL溶液
边滴加边混匀
至沉淀消失，观察溶液颜色并解释现象
蛋白质的两性反应（3）
在等电点时蛋白质颗粒上的净电
荷为零，缺乏同电相斥的因素，蛋 白质溶解度最小，最容易析出沉淀
本实验配制了各种不同pH值的
缓冲液，沉淀出现最多的缓冲液 pH值即为酪蛋白的等电点
实验器材与试剂
➢ 大试管、滴管、刻度吸量管 ➢ 0.5％酪蛋白醋酸钠溶液 ➢ 0.01％溴甲酚绿指示剂(指示范围: pH3.8-5.4) ➢ 0.02M HCL溶液、 0.02M NaOH溶液 ➢ 0.01M醋酸溶液、0.10M醋酸溶液、
➢ 出现最大量沉淀时,说 明到达了酪蛋白的等电点
➢ 溶液由蓝色变成浅绿色 （3.8﹤pH﹤5.4）
➢ 继续加酸，[H+]继续增 大，pH＜pI。酪蛋白所 带正电荷不断增加，同电 相斥，沉淀溶解
➢ 沉淀完全溶解时，溶 液显黄色(pH﹤3.8)
蛋白质的两性反应(3)
➢ [OH-] ，沉淀
➢ 出现最大量沉淀时,说 明到达了酪蛋白的等电点
酪蛋白等电点的测定
➢ 取7支同样规格的干燥试管，精确加入各试剂
试管号码 1 2 3 4 5 6 7
蒸馏水 2.4 3.2 — 3.0 1.5 2.7 3.3 58
1.00M醋 1.6 0.8 — — — — — 酸
0.1M醋酸 — — 4.0 1.0 — — —
0.01M醋 — — — — 2.5 1.2 0.6
➢ 溶液由黄色变成浅绿色 （3.8﹤pH﹤5.4）
➢ 继续加碱，[OH-]继续 增大，pH﹥pI。酪蛋白 所带负电荷不断增加，同 电相斥，沉淀溶解
➢ 沉淀完全溶解时，溶 液显蓝色(pH﹥5.4)
结论 1：
蛋白质是两性电解质 pH= pI时，蛋白质溶解度最小 酪蛋白的等电点在pH3.8-5.4之间
实验二蛋白质的两性反应与等电点测定演示文稿
实验目的
了解蛋白质的两性解离性质 掌握测定蛋白质等电点的方法
实验原理
COOH P NH2
COOH +OH-
COO-
P NH3+ +H+ P NH3+
+OH-
P
+H+
COONH2
pH<pI
阳离子
pH=pI
兼性离子
pH>pI
阴离子
维持蛋白质胶体稳定的因素： 表面电荷、水化膜
注酸：单位均为mL
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➢ 向每个试管中各加0.5%酪蛋白溶液20滴， 加一管，立即混匀一管
➢ 静置30分钟后，以0、+、++、+++、 ++++表示各管的混浊度，并指出哪一种 pH是酪蛋白的等电点
实验结果
酪蛋白等电点的测定
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沉淀量 0 + +++ ++++ ++ 0 0
继续滴加0.02M NaOH溶液
边滴加边混匀
有最大沉淀产生，观察溶液颜色变化
继续滴加0.02M NaOH溶液
边滴加边混匀
至沉淀消失，观察溶液颜色并解释现象
实验结果
蛋白质的两性反应(1)
➢ 溶液呈蓝色
➢ 酪蛋白溶液呈碱性 (pH﹥5.4)，使溴甲酚 绿指示剂显蓝色
蛋白质的两性反应(2)
➢ [H+] ，沉淀