药敏试验方法及细菌耐药性(药剂科2016.4.20)

2015年分离的肠杆菌属细菌对抗菌药物的耐药率
31.1 33.3
抗菌药物
盛京医院2015年统计数据
2015年铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药率
100 耐 药 率 ％ 80 60 40 20 0
西 林 / 西 林 舒巴 /他 坦 唑 巴 头 坦 孢 他 啶 头 孢 曲 松 头 孢 吡 肟 氨 曲 南 亚 胺 培 南 美 洛 培 南 阿 米 卡 星 庆 大 霉 素 环 丙 左 沙 旋 星 氧 氟 沙 复 星 方 新 诺 明 呋 喃 妥 因 拉 林 西 林
药敏判定折点(BREAKPOINT)
eg.（头孢哌酮 vs 大肠杆菌）
纸片法获得的 抑菌圈直径 23MM 稀释法或E-test法 获得的MIC值为 4mg/L
CLSI上查得头孢哌酮对大 肠杆菌的折点为： R<=15mm,S>=21mm
S
S
CLSI上查得头孢哌酮 对大肠杆菌的折点为： R>=64mg/L,S<=16mg/L
29.3 21.9 26.6 20.6 8.3 35.3 35.5 36 11.7 98.3 97.9 98.4 93.4 97.4
15.8
14.5
苄 氨 氨
哌 苄
西
拉
哌
抗菌药物
盛京医院2015年统计数据
2015年嗜麦芽窄食单胞对抗菌药物的耐药率
30 耐 药 20 率 10 ％ 0
啶 星 明 他 沙 诺 霉 氯 . 素
一、细菌的药敏试验
纸片扩散法 稀释法
肉汤稀释法（常量、微量） 琼脂稀释法 E-test法
1.纸片扩散法
接种物的准备：纯菌落，2ml无菌生理盐水，
0.5麦氏浊度
纸片扩散法

接种平板：MH平板，菌悬液在15分钟内划平板，用 无菌棉签，3个60度，1圈，15分钟内贴纸片。
纸片扩散法
Baidu Nhomakorabea
氨
苄
阿
莫
抗菌药物
盛京医院2015年统计数据
2015 年 分 离 金 黄 色 葡 萄 球 菌 对 抗 菌 药 物 的 耐 药 率
100 80 耐 药 率 ％ 60 40 20 0
19.5 15.9 5.2 19 18.6 15.9 25 0 0 0 0.3 24 0 90.9 75
G
林
素
星
星
因
胺
素
平
34.1
22.6 17 16.5 0 1 0 0
0
平
素
林
星
星
因
胺
素
素 环 四 替 加
G
素
素
星
素
福
西
沙
沙
霉
妥
唑
霉
汀
霉
霉
沙
霉
利
苄
丙
西
红
喃
奈
链
大
氟
古
青
氨
环
莫
呋
利
度
庆
氧
万
浓
度
旋
高
浓
左
高
普
丁
/
达
福
普
2015年分离的屎肠球菌 对抗菌药物的耐药率
100 80 耐 药 率 ％ 60
44.3 95.6 91.5 95 66.1 65.7 43.9 90.9 85.8 91.7 93.3
2015年盛京医院培养标本类型分布
盛京医院2015年统计数据
脑脊液, 4.94% 便, 5.91% 分泌物, 6.89% 尿, 14.94%
其他, 11.17% 血, 34.39%
痰, 20.75%
2015年盛京医院涂片标本类型分布
引流液, 3.68% 胸水, 其他, 3.44% 5.19% 便 , 36.81%
菌液的准备：0.5麦氏浊度=108CFU/ml
稀释100倍成106，取10μl= 104CFU
接种:
特点：工作量大，
适用于菌量少，药物种类少的情况
结果
宏量肉汤稀释法（每 管含药肉汤含量为 2～5ml）
MIC：最小抑菌浓度，抑制细菌生长的最小浓度 单位：μg/ml 0.06 0.125 0.25 64 128 256 0.5 1 2 4 8 16 32
4.E-TEST



以纸片扩散法的操作方法获得MIC值的一种药敏试验。 操作上有纸片扩散法的优点，结果准确性可与稀释法媲美。 缺点：昂贵
结果
五、药敏结果的判读
MIC值或抑菌环直径 药物的临界浓度（CLSI、EUCAST、FDA) 比较
临界浓度:又叫折点（breakpoint）。即根据抗菌药物 抑制细菌生长所需要的MIC结合常用剂量时在人体内 所能达到的血药浓度划分细菌对各种抗菌药物敏感 和耐药的界限。
微量肉汤稀释法（每 孔含药肉汤含量为 0.1ml）
3.琼脂稀释法

药物在琼脂中，做成平板。 菌量：每点接种10μl = 104CFU
特点：菌株多时做MIC较方便 结果：平板上是否出现肉眼可见的菌落
8μg/ml
4μg/ml
2μg/ml
MIC法的总体特点
较繁琐，但更准确，主要用于科研 ，测量的是 MIC(μg/ml ) 旧:纸片扩散法 新:微量肉汤稀释法 (商品化)
平
奎
抗菌药物
奴
素
环
素
林
素
星
星
因
胺
素
素 环 四 替 加
G
星
明
素
福
西
霉
沙
沙
霉
妥
唑
霉
汀
沙
诺
霉
利
唑
大
丙
西
红
喃
奈
氟
新
古
青
苯
庆
环
莫
呋
利
氧
方
万
旋
复
左
普
丁
/
达
福
普
奎
奴
环
抗菌药物
素
盛京医院2015年统计数据
2015年分离的粪肠球菌对抗菌药物的耐药率
100 80 耐 药 率 ％ 60 40 20
2.7 0.5 47.7 88.6 94.8 85 70.9
贴纸片：手工，纸片分配器 孵育：(35±2）℃，空气或CO2

纸片扩散法
结果
纸片扩散法的特点
简便，便宜，不同层 次实验室均可正规操 作，是目前推荐的临 床试验室使用方法。 检测的是抑菌环直径 （mm)
2.肉汤稀释法
药液的准备：
256μg/ml 128 64 32 …… 0.25 0.125 0.06 13个梯度
81.7
77.5 71.2
75.2 8 1 . 87 6 . 18 0 . 5 76.6
4.7
哌 西林 林 氨 / 拉西 哌 苄西 克拉 林 拉 林 维 西 / 酸 林 舒 /他 巴 唑 坦 头 巴坦 孢 头 他啶 孢 头 曲松 孢 头 噻肟 孢 吡 氨 肟 曲 亚 南 胺 美 培南 洛 阿 培南 米 庆 卡星 大 霉 左 环 素 丙 旋 氧 沙 星 复 氟沙 方 星 新 呋 诺明 喃 妥 四 因 替 环素 加 环 素 西
26.5 20.8 9.3 6.5
..
孢
林
头
氟
西
氧
卡
左
旋
复
方
新
抗菌药物
替
盛京医院2015年统计数据
2015年鲍曼不动杆菌对抗菌药物的耐药率
90.3 99.3 80.9 7 6 . 47 5 . 9 78.7 75.9 57.2 46.8 31.5
100 80 耐 药 率 ％ 60 40 20 0
89.1
苄 西 哌 氨 林 拉 林 哌 苄 /克 西 拉 西 拉 林 西 林 维 林 /舒 酸 /他 巴 唑 坦 头 巴 孢 坦 头 他 孢 啶 头 曲 孢 松 头 噻 孢 肟 吡 氨 肟 厄 曲 他 南 亚 培 胺 南 美 培 洛 南 阿 培 米 南 庆 卡 大 星 左 环 霉 旋 丙 素 氧 沙 复 氟 星 方 沙 新 星 呋 诺 喃 明 妥 氯 因 霉 四 素 环 素
肺灌洗液, 5.89%
脑脊液, 14.07% 痰 , 30.92%
盛京医院2015年统计数据
耐 药 率 ％
阿 莫
100 20 40 60 80 0
68.8
氨
西
37.5 95.9 58.3
盛京医院2015年统计数据
11.8 38.6 55 39.6 23.7 8.7 7.1 0 3 18.9 13 8.3 34.9 18.9 40.8
40 20 0
0.2 0.9 0 0
平
奎
奴
素
环
抗菌药物
素
林
星
星
因
胺
素
素 环 四 替 加
G
素
素
星
素
福
西
沙
沙
霉
妥
唑
霉
汀
霉
霉
沙
霉
利
苄
丙
西
红
喃
奈
链
大
氟
古
青
氨
环
莫
呋
利
度
庆
氧
万
浓
度
旋
高
浓
左
高
普
丁
/
达
福
普
奎
奴
环
抗菌药物
素
盛京医院2015年统计数据
结果解释
敏感（susceptible）：表示测试菌能被测定药物常规剂 量给药后在感染部位达到的药物浓度所抑制或杀灭，感染 被治愈。 中介 (intermediate) : 指药物在体内生理浓集的部位或 允许加大药物剂量治疗时有效；该范围还作为一缓冲区， 避免由于微小技术误差导致的结果错误解释。 耐药（resistant）：表示测试菌不能被在体内感染部位 所能达到的抗菌药物浓度所抑制，治疗无效。
明
素
星
素
西
霉
沙
沙
妥
唑
霉
汀
素 环 四 替 加
福
诺
沙
霉
霉
唑
大
丙
西
喃
奈
利
新
氟
红
古
青
苯
庆
环
莫
呋
利
氧
方
万
旋
复
左
普
丁
/达
福
普
100 80 耐 药 率 ％ 60 40 20 0
91.7
2015年分离的凝固酶阴性葡萄球对抗菌药物的耐药率
87.1 72.9 47 44.2 17.7 7.2 21.6 0.3 0 0 0.9 24.3 0.2 58.8