酵母双杂交培养基

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10×DO(-His,-Leu,-Trp,-Ura)溶液:

不含-His,-Leu,-Trp,-Ura等成分的10×Dropout溶液:

氨基酸10×浓度(mg/L)称重(g)(1 L)称重(g)(500 mL)L-Isoleucine 异亮氨酸300 0.3 0.15

L-Valine 缬氨酸1500 1.5 0.75

L-Arginine HCl 精氨酸200 0.2 0.1

L-Lysine HCl 赖氨酸300 0.3 0.15

L-Methionine 蛋氨酸200 0.2 0.1

L-Phenylalanine 苯丙氨酸500 0.5 0.25

L-Threonine 色氨酸2000 2.0 1.0

L-Tyrosine 酪氨酸300 0.3 0.15

加ddH2O定容后4℃保存

100×氨基酸储备液:

每100ml溶液中分别含有下列成分,配制后保存于4℃氨基酸储备液100 mL中含量

100×His L-histidine HCl monohydrade 200 mg

100×Trp L-Trytohan 200 mg

100×Leu L-eucine 1 g

100×Uracil 200 mg

100×Adenine 400 mg

SD 培养基:

Yeast Nitrogen Base

0.17 g

(without amino acid and Ammonium Sulfate)

Ammonium sulfate 0.5 g

葡萄糖 2 g

10×DO(-His –Leu –Trp –Ura)10 ml

加ddH2O定容至100ml。如果配固体培养基加入2%的琼脂粉。

SD相应的缺失培养基:加上除了缺失的氨基酸之外的其他的氨基酸储备液,100 ml S D+1 ml 100×氨基酸储备液。

例如:SD/-Leu:SD+100×His 、100×Trp、100×Uracil、100×Adenine各1 ml。

酵母双杂交所用试剂和培养基

试验中所需试剂包括50% PEG、1 M LiAc (10×)、10×TE Buffer、YPD Plus Liquid Medium、YPDA、SD-Leu 、SD-Trp 、X-a-Gal 、Aureobasidin A(AbA)、DMSO、NaCl、DMF等,培养基类型包括YPD、YPDA、2×YPDA、SD培养基、SD相应的缺失培养基等。具体配制如下:

10×TE(100 mL):Tris 1.21g,EDTA Na2 0.37g,用盐酸调pH=7.5,ddH2O定容。

10×LiAc(100 mL):LiAc·2H2O 10.20g,冰醋酸调pH 7.5,ddH2O定容。

50% PEG(100 mL):PEG3350 50g,ddH2O定容。

1.1×TE/LiAc(10 mL):1.1 mL 1M LiAc,1.1 mL 10×TE Buffer,8.8 mL无菌H2O。

1×PEG/ LiAc(10 mL):8 mL 50% PEG3350,1 mL 10×TE Buffer,1 mL 1M LiAc。

10×DO(-His,-Leu,-Trp,-Ura)溶液:L-Isoleucine 300mg,L-Valine 1500mg,L-Arginine HCl 200mg,L-Lysine HCl 300mg,L-Methionine 200mg,L-Phenylalanine 500mg,L-Threonine 2000mg,L-Tyrosine 300mg,加ddH2O定容至1000 mL, 高压灭菌20 min,4℃保存。

100×氨基酸储备液(每100 mL溶液中分别含有下列成分):100×His L-histidine HCl monohydrade 200mg,100×Trp L-Trytohan 200mg,100×Leu Leucine 1g,100×Uracil 200mg,100×Adenine 400mg。

YPD培养基:蛋白胨20g,酵母提取物10g,葡萄糖20g,琼脂粉20g (固体平板用),加1 L dd H2O,高压灭菌20min。

YPDA:YPD+1 mL 100×Adenine(腺嘌呤)

2×YPDA:YPDA 培养基成分加倍。

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