酵母双杂交培养基
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10×DO(-His,-Leu,-Trp,-Ura)溶液:
不含-His,-Leu,-Trp,-Ura等成分的10×Dropout溶液:
氨基酸10×浓度(mg/L)称重(g)(1 L)称重(g)(500 mL)L-Isoleucine 异亮氨酸300 0.3 0.15
L-Valine 缬氨酸1500 1.5 0.75
L-Arginine HCl 精氨酸200 0.2 0.1
L-Lysine HCl 赖氨酸300 0.3 0.15
L-Methionine 蛋氨酸200 0.2 0.1
L-Phenylalanine 苯丙氨酸500 0.5 0.25
L-Threonine 色氨酸2000 2.0 1.0
L-Tyrosine 酪氨酸300 0.3 0.15
加ddH2O定容后4℃保存
100×氨基酸储备液:
每100ml溶液中分别含有下列成分,配制后保存于4℃氨基酸储备液100 mL中含量
100×His L-histidine HCl monohydrade 200 mg
100×Trp L-Trytohan 200 mg
100×Leu L-eucine 1 g
100×Uracil 200 mg
100×Adenine 400 mg
SD 培养基:
Yeast Nitrogen Base
0.17 g
(without amino acid and Ammonium Sulfate)
Ammonium sulfate 0.5 g
葡萄糖 2 g
10×DO(-His –Leu –Trp –Ura)10 ml
加ddH2O定容至100ml。如果配固体培养基加入2%的琼脂粉。
SD相应的缺失培养基:加上除了缺失的氨基酸之外的其他的氨基酸储备液,100 ml S D+1 ml 100×氨基酸储备液。
例如:SD/-Leu:SD+100×His 、100×Trp、100×Uracil、100×Adenine各1 ml。
酵母双杂交所用试剂和培养基
试验中所需试剂包括50% PEG、1 M LiAc (10×)、10×TE Buffer、YPD Plus Liquid Medium、YPDA、SD-Leu 、SD-Trp 、X-a-Gal 、Aureobasidin A(AbA)、DMSO、NaCl、DMF等,培养基类型包括YPD、YPDA、2×YPDA、SD培养基、SD相应的缺失培养基等。具体配制如下:
10×TE(100 mL):Tris 1.21g,EDTA Na2 0.37g,用盐酸调pH=7.5,ddH2O定容。
10×LiAc(100 mL):LiAc·2H2O 10.20g,冰醋酸调pH 7.5,ddH2O定容。
50% PEG(100 mL):PEG3350 50g,ddH2O定容。
1.1×TE/LiAc(10 mL):1.1 mL 1M LiAc,1.1 mL 10×TE Buffer,8.8 mL无菌H2O。
1×PEG/ LiAc(10 mL):8 mL 50% PEG3350,1 mL 10×TE Buffer,1 mL 1M LiAc。
10×DO(-His,-Leu,-Trp,-Ura)溶液:L-Isoleucine 300mg,L-Valine 1500mg,L-Arginine HCl 200mg,L-Lysine HCl 300mg,L-Methionine 200mg,L-Phenylalanine 500mg,L-Threonine 2000mg,L-Tyrosine 300mg,加ddH2O定容至1000 mL, 高压灭菌20 min,4℃保存。
100×氨基酸储备液(每100 mL溶液中分别含有下列成分):100×His L-histidine HCl monohydrade 200mg,100×Trp L-Trytohan 200mg,100×Leu Leucine 1g,100×Uracil 200mg,100×Adenine 400mg。
YPD培养基:蛋白胨20g,酵母提取物10g,葡萄糖20g,琼脂粉20g (固体平板用),加1 L dd H2O,高压灭菌20min。
YPDA:YPD+1 mL 100×Adenine(腺嘌呤)
2×YPDA:YPDA 培养基成分加倍。