第一溶血反应

第一、溶血反应

1、溶血反应：免疫血清与其相应的抗原细胞（血球、细菌及其组织细胞）相遇，并在补体的参与下可出现溶细胞反应。依抗原、抗体的种类不同可有溶血反应、溶菌反应等。

溶菌反应只在某些细菌中出现（如霍乱弧菌）。应用溶血反应是补体结合反应中不可少的因素。溶血反应是由于抗原（红血球）和抗体（溶血素）进行特异性的结合，并吸着了补体，而使红血球在补体的作用下被溶解，于是产生了溶血现象。

2、自身免疫性溶血，如果有补体参与时，补体通过一系列的激活，最后形成膜攻击复合物、它可以直接攻击红细胞膜，导致红细胞破裂，这就是所谓“血管内溶血”。而没有补体参与的免疫性溶血，抗体与红细胞膜上抗原结合后，没有直接把红细胞破坏，而是把红细胞“致敏”，致敏RBC在通过脾脏等网状内皮系统时，被吞噬细胞“吃掉”，这就是所谓“血管外溶血”。

3材料

（1）抗原：2%绵羊红血球；

（2）抗体：溶血素；

（3）补体：取健康豚鼠血清作为补体；

（4）小试管、生理盐水、水浴箱。

说明：两种免疫抗原—绵羊红细胞（SRBC）和鸡红细胞（CRBC）（老师使用），比较之下鸡血红细胞比较方便、经济，适合实验室使用。

4、方法

（1）取小试管3只，按下表加入各物（容量单位为毫升）；

（2）将上述3试管放在37℃水浴箱内15—30分钟观察有无凝血现象。

第二．补体结合反应

1、补体结合反应：当抗原与其对应的抗体结合时，所生成的抗原抗体复合物能从溶液中将补体吸着此即谓补体结合。参与补体结合反应的抗原是透明的溶液，故补体结合现象不能被肉眼看出来，因此必须借助溶血系统（溶血素及相对应的羊血球）作为指示剂，来判定媒质中有无游离的补体，近而推定媒质中未知抗原（或抗体）和已知抗体（或抗原）是否进行了特异性的结合。本反应具有很高的敏感性及特异性，因之常应用于传染病的诊断，特别诊断病毒疾病和梅毒

2材料：

（1）抗原：伤寒的抽出液；

（2）抗体：伤寒杆菌的免疫血清；

（3）补体：豚鼠血清；

（4）溶血素：抗绵羊血细胞的兔血清；

（5）2%绵羊红血球；

（6）小试管、试管架、水浴锅。

3、方法：

预备试验，预备试验包括溶血素效价的滴定，补体效价的滴定，抗原效价的滴定及被检血清的处理。

（1）溶血素效价的滴定按照下表加入各物

凡最高稀释度的溶血素可呈现完全溶血者为一个单位。依上表结果第10管（即1：4000倍稀释）0.5毫升溶血素为一个单位，在溶血反应中常用0.5毫升中含有2个溶血素单位的溶液，所以试验时应取1：2000倍稀释的溶液。

（2）补体单位滴定

能引起完全溶血的最小补体量称为准确单位，上表中第3管（即0.3毫升），但因补体的部分损失，故普通稍高的一管为实用单位，实际试验时用两个实用单位。

上表结果为：补体标准单位：0.3毫升；补体实用单位：0.35毫升；补体两个实用单位：0.70毫升。因试验时时两个实用单位的补体0.5毫升，可依下列比例关系换算：20：0.7=x：0.5，得x=14.3，即需将补体稀释14.3倍，用0.5毫升则含有两个实用单位。

（3）抗原的滴定

在用已知抗原测定未知抗体时，必须先滴定抗原效价以决定本试验时所需抗原的最适浓度（反之用已知抗体测定未知抗原时，则需滴定抗体效价）

如血清对照管呈完全或部分不溶血是为抗补体现象。血清严重污染细菌，混有淋巴液或显著溶血时，常产生很强抗外体作用。又如试管、吸管不清洁，也可出现抗补体。若有抗补体发生，应抽血重试验。