食品分析——食品中铁的测定及维生素C的测定

哈尔滨商业大学食品工程学院
实验报告
课程名称：食品分析
实验名称：奶粉中铁的测定及
水溶C100中Vc的测定专业、班级：食品科学与工程
姓名：王孜
学号：200840610824
同组人：齐霁、畅乐、司淼菲
实验操作日期：2010-12-15
前言：食品中的铁元素和维生素均为食品中的微量成分。

本实验首先需要认真掌握分析检验的基础理论、仪器分析的原理，以及相关的物理、化学、生物化学等基础知识，根据食品分析的特殊性，通过实验正确掌握微量组分的检验操作技能和方法。

1 实验目的
1.1 掌握样品的预处理方法即有机物破坏法，了解样品灰化的原理、操作及注意事项。

1.2掌握邻菲罗啉比色法测铁的原理、操作及注意事项。

1.3 掌握2，6——二氯酚靛酚法测定还原型抗坏血酸的原理、操作及注意事项。

1.4掌握固蓝盐B法测定还原型抗坏血酸的原理、操作及注意事项。

2 实验原理
2.1灰化：样品在高温下灼烧，使有机物氧化分解。

2.2样品经灰化（或消化），用抗坏血酸将3价铁还原为2价铁，2价铁与林菲罗啉反应生成红色物质，在520nm下测其光吸收强度A，根据A值在标准曲线上查对应2价铁浓度得C样，再计算样品中铁的含量。

2.3样品经前处理提取维生素C还原型抗坏血酸，可以定量2，6——二氯酚靛酚（定量反应过程稳定），终点为微红色，根据2，6——二氯酚靛酚消耗量计算Vc的量。

2.4在乙酸溶液中，抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄色的草酰肼—2—羟基丁酰内酯衍生物。

在最大吸收波长420nm处测定吸光度
3 实验材料与仪器
3.1试剂：显色剂，铁标准溶液
仪器：灰化炉，水浴，可见光分光光度计，25ml比色管。

试样：奶粉
3.2试剂：Vc标准溶液，草酸溶液，2，6——二氯酚靛酚标准溶液，
；仪器：三角瓶，天平，烧杯，玻璃棒，漏斗，滤纸，容量瓶，容量吸管，移液管；试样：水溶C100。

3.3试剂：Vc标准溶液，草酸溶液，乙二胺四乙酸二钠，乙酸溶液，固蓝盐B溶液；仪器：三角瓶，天平，烧杯，玻璃棒，漏斗，滤纸，容量瓶，容量吸管，移液管；试样：水溶C100。

4 实验内容
4.1 灰化
操作：
坩埚恒重处理：取大小适宜的瓷坩埚置于高温炉中，600℃下灼烧0.5h，冷却至200℃以下后，取出，放入干燥器中冷却至室温，精密称量，并重复灼烧至恒重。

样品预灰化
准确称取坩埚质量m1=91.8425g，称取样品于坩埚中，称量样品与坩埚总重m总=96.8716g，在电炉上先以小火加热使样品充分炭化至无烟。

样品正式灰化
将炭化后的样品置于灰化炉中，在600℃灼烧至无碳粒，由于灰化时间较长，在炭化后的样品中加入一定量的浓硝酸，灼烧至无碳粒白灰色即灰化完全。

冷却至200℃以下，取出放入干燥器中冷却至室温，称量。

重复灼烧至前后两次称量之差不超过0.5mg为恒重，称其重量m灰化。

4.2样品测定：
称取样品5g，经灰化，并定容至100ml，制成灰化液，吸取三个10.00ml 灰化液于比色管中，加入1ml抗坏血酸和2ml显色剂并定容至25ml,混匀，60℃水浴下加热15分钟后冷却。

将各比色管中的有色溶液依次注入比色皿中，以“0”管溶液为参比溶液，在520nm下，测其吸光度值。

4.3二氯酚靛酚操作
4.3.1二氯酚靛酚浓度的标定
吸取5.00mlVc标准溶液→三角瓶+5ml10g/L草酸溶液→以2，6——二氯酚靛酚→终点微红色，记V（n=3）
4.3.2样品中Vc的测定：吸取5ml样液于三角瓶+5ml10g/L草酸溶液→以2，6——二氯酚靛酚→终点微红记V
4.4固蓝盐B操作
4.4.1标准曲线绘制：吸取0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0抗坏血酸标准溶液（100µg/mol）分别置于25ml比色管中，各加2ml乙二胺四乙酸二钠溶液（35g/l）0.5ml乙酸溶液（2%）0.2ml固蓝盐B溶液（2g/l），加水稀释至刻度，混匀，室温（20--25℃）放置20分钟后，移入1cm比色皿内，以“0”管为参比于波长420nm处测定吸光度，以标定各点吸光度，绘制标准曲线。

4.4.2 试样测定：吸取试样
5.0ml置于25ml比色管中，按标准曲线绘制中自“2ml乙二胺四乙酸二钠溶液”起依次操作，试样吸光度从标准曲线上查出抗坏
血酸含量.
5 数据处理与计算
5.1原始数据：
铁的测定：n=3，0.386 0.356 0.360
铁的标准曲线
00.20.40.60.8
10
1
234
5
铁的浓度/ug(mL)-1吸光度
标准曲线方程为：
Vc 的测定：
2，6——二氯酚靛酚法
2,6—二氯酚靛酚浓度的标定体积消耗量
V 2,6—靛酚精1 V 2,6—靛酚精2 V 2,6—靛酚精3 体积(mL)
4.96 4.32 4.80
测定样液是时消耗2,6—二氯酚靛酚体积
V 2,6—靛酚样精1 V 2,6—靛酚样精2 V 2,6—靛酚样精3 体积(mL) 12.64
12.68
12.58
y=0.2132x+0.0118
R 2=0.9993
固蓝盐B 法 体积（ml ） 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 吸光值 0.676
0.708
0.855
0.873
1.018
1.063
固蓝盐B标准曲线
y = 0.2059x - 0.0164
R 2
= 0.9642
-0.0500.05
0.10.150.20.250.30.350.40.45
0.5
1 1.52
2.5毫升（ml）
吸光值（A ）
标准曲线方程 5.2计算 5.2.1铁的测定
3
10100
X m g /100g;
——ug /m l;——g 4.9717g ——m l;100——m l 10m l
C X m V V m l -⨯=
⨯⨯===C m V V 样样测
定
样样定测——样品中铁的含量，测定用液中铁的浓度（由标准曲线查出），样品的质量，；样品定容的体积，测定用液的体积，
y=0.2132x+0.0118
1y =0.386 ，1C 样=1x =1.26
2y =0.356，C 样2=2x =1.61 3y =0.360，C 样3=3x =1.63
13
C C C C ++=
样样2样3
样=1.5
-3
1.510X =
100
×10
100
⨯⨯4.9717 X=3%
5.2.2 2，6——二氯酚靛酚法测定Vc 含量
T=10×5×10-3/ (4.69-0.56)=0.01211mg/mL ： X 1=58.52mg/100mL X2=58.71mg/100mL X3=58.22mg/100mL
X =58.48mg/100mL
T=
6,23
10V
V C Vc -⨯⨯-靛酚—标标液
式中：T —1mL2,6—二氯酚靛酚相当于Vc mg ，mg/mL ； V c 标液—吸取标准抗坏血酸的体积，mL ： C 标—标准抗坏血酸的质量浓度，10ug/mL ：
V 2,6—靛酚—滴定标准抗坏血酸2,6—二氯酚靛酚的消耗量，mL ； V 空—空白实验消耗2,6—二氯酚靛酚的体积， mL 。

X=
100/V 62⨯⨯⨯-样液
定测靛酚样V V V T
式中：X —样品中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量，mg/100mL ；
V 2,6—靛酚样—滴定样液时消耗2,6—二氯酚靛酚的体积体积，mL 。

， V 样液—样品的体积，mL ；
5.2.3 固蓝盐B 法测定Vc 含量
12
12100
1000
C ————C X V V V V V =
⨯⨯
⨯样——试样测定液中抗坏血酸含量试样处理液总体积测定时所取体积
1X =35.31g/100mL ； 2X =32.54g/100mL ；3X =35.29mg/100mL ；X =34.38g/100mL
6结果与讨论
6.1 t 检验法比较测定Vc 两种方法的差异是否显著
()
12
1212
2
2
1122
1212123
2
1
(1)(1)2
1
i n x x n n t s
n n s n s n s s n n s s n n x x s n =-⨯=
⨯
+-+-=
+--=
-∑其中为合并标准差式中：——第一个样本方差；——第二个样本方差；——第一个样本的测定次数；——第一个样本的测定次数
2
1s =0.02；2
2s =0.84⇒s =0.65⇒t =45.4
查表可得：当自由度为2时，t=4.303，t 测>t ，两种方法差异性显著。

6.2 误差分析：
奶粉中铁的含量基本符合市售奶粉中铁的平均含量。

测定水溶C100中Vc 的含量两种方法存在显著性差异的原因为：在用2，6——二氯酚靛酚法时，标定溶液时出现误差，导致误差一直遗留在之后测定时的数据中；在用固蓝盐B 法测定
时，标准曲线测定时出现误差，导致数据的不准确。

两种方法的出的结果与市售的平均结果进行比较发现固蓝盐B测定的最后结果较为准确。

6.3 结论：奶粉中铁的质量分数为3%。

水溶C100中Vc的含量为34.38g/100mL。