小鼠肝脏取材步骤
小鼠肝脏取材固定方法
小鼠肝脏取材固定方法
试剂：
小鼠麻醉剂：4%水合氯醛，
肝脏固定液：4% PFA
器材：手术器械（剪刀，镊子），1 mL注射器
称取小鼠体重，记录体重值。
腹腔注射4%水合氯醛麻醉小鼠（20 μL/10 g 体重），2-3 min 后，用镊子捏小鼠四肢失去反应时，大头针固定解剖盘(塑料泡沫盒)中。
剪断下腔静脉，充分放出血液，用吸水纸吸干流出的血液。
用镊子捏住边缘膜系结构完整剪下整个肝脏，不要破坏组织结构，放入10cm 培养皿中，称量记录肝脏重量值。
取肝脏中叶分成50 mg左右的小块，放入冻存管中，立即放入液氮中速冻30 分钟，每个肝脏冻存多份，转移至-80℃冻存用于提取蛋白质和RNA。
取中叶的同时，取小鼠肝脏左右两叶肝片，放入盛有4% PFA 的50 mL离心管中固定。
摇床上固定8-12小时（过夜）。
固定液体积至少是组织块的体积的10倍，室温固定。
固定结束，用1x PBS摇床上洗3次，每次10 min，除去组织残留的固定液。
然后保存于70% 乙醇，4℃，可保存2周。
取材中小鼠编号，冻存管编号，50 mL离心管编号要完全一致，不可混淆。
小鼠细胞原代培养取材方法
小鼠细胞原代培养取材方法原代培养是指直接从体内取下的细胞、组织和器官，经过清洗、剪切、分散等步骤后，立即进行培养的过程。
小鼠细胞原代培养取材方法主要包括以下步骤：1. 实验前准备：在超净工作台或生物安全柜中进行，确保无菌环境。
2. 取材：选择健康的成年小鼠，使用颈椎脱臼法处死小鼠。
用70-75%酒精对烧杯进行消毒，将整个小鼠浸入盛有纯酒精的烧杯中浸泡1分钟进行消毒。
3. 打开腹腔：取出小鼠，将其放在不锈钢手术盘中，用无菌手术剪打开腹腔。
4. 取出组织：小心将所需组织从体内取出，放入无菌培养皿中。
5. 清洗组织：用70-75%酒精擦拭培养皿外周后，将培养皿移至超净工作台或生物安全柜中，用含双抗的Hanks液洗涤组织数遍以去除血污。
6. 剪切组织：在体视显微镜下操作，用无菌手术器械去除多余组织，用解剖镊子或眼科剪将组织剪碎至1立方毫米的肉糜状。
7. 消化组织：将剪碎的组织放入含解离液或培养基的50ml离心管中，用10ml弯头滴管对组织进行吹打5-10次，然后用1ml枪头的吹打组织，最后用200μl的尖端进行吹打。
8. 过滤分散：将上述组织悬液通过70μm过滤器过滤，切碎和分散的组织悬浮液。
9. 离心收集细胞：在1200rpm、4℃下离心10分钟，弃掉上清液，加入配置好的细胞培养基重悬细胞。
10. 接种细胞：将细胞接种于经多聚赖氨酸预处理的培养瓶或培养板中，置于37℃、5%CO2的培养箱中进行培养。
注意事项：取材过程应在无菌环境中进行，确保整个过程不受到污染。
操作时要小心，避免损伤组织。
使用的仪器和器皿均应进行消毒处理。
培养基和试剂应选择适宜的种类和浓度。
培养条件要保持恒定，包括温度、湿度、CO2浓度等。
在实验过程中要密切观察细胞生长情况，及时发现和处理异常情况。
以上是小鼠细胞原代培养取材方法的简要步骤，具体操作可能因实验需求和条件而有所不同。
建议在进行实验前仔细阅读相关文献和资料，并咨询专业人士的建议和指导。
动物肝脏提取实验报告
动物肝脏提取实验报告动物肝脏提取实验报告引言：动物实验在科学研究领域中扮演着重要的角色。
其中，动物肝脏提取实验是一项常见的研究方法。
本报告旨在介绍动物肝脏提取实验的背景、目的、方法、结果和讨论。
背景：肝脏是人和动物体内最重要的器官之一。
它具有多种功能，包括代谢物质、解毒、合成蛋白质等。
通过对动物肝脏的提取实验，我们可以更好地了解肝脏的结构、功能以及与其他器官的相互作用。
目的：本实验的目的是通过提取动物肝脏，研究其组织结构、代谢功能以及与其他器官的联系。
通过实验结果，我们可以进一步了解肝脏在机体中的重要性，并为相关疾病的研究提供参考。
方法：1. 实验动物选择：在本实验中，我们选择了小鼠作为实验动物。
小鼠是一种常见的实验动物，其肝脏与人类肝脏在结构和功能上有很多相似之处。
2. 动物麻醉：在进行肝脏提取实验前，我们需要对实验动物进行麻醉。
麻醉可以减轻动物的痛苦，并确保实验的顺利进行。
3. 肝脏提取：通过手术切口，在麻醉状态下，我们小心地将小鼠的肝脏取出。
在提取过程中，需要注意保持肝脏的完整性，以保证后续实验的准确性。
结果：通过对提取的小鼠肝脏进行观察和分析，我们得到了以下结果：1. 肝脏组织结构：在显微镜下观察，我们可以清晰地看到肝脏的细胞结构和排列方式。
肝脏由许多小叶组成，每个小叶由许多肝细胞组成，这些肝细胞紧密排列，形成了肝脏的基本结构。
2. 代谢功能：通过实验，我们可以检测肝脏中的代谢酶活性。
结果显示，肝脏在葡萄糖代谢、脂肪合成和解毒等方面具有重要的功能。
讨论：通过本实验，我们深入了解了动物肝脏的结构和功能。
肝脏作为人和动物体内最重要的器官之一，其在机体代谢、解毒等方面的作用不可忽视。
通过进一步的研究，我们可以探索肝脏与其他器官之间的相互作用，以及与相关疾病的关联。
然而，动物实验也存在一些伦理和道德问题。
在进行实验前，我们需要严格遵守伦理规范，确保动物的权益和福利得到保护。
同时，我们也应该积极探索替代动物实验的方法，以减少对动物的使用。
小鼠肝脏提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 熟悉小鼠肝脏解剖方法。
2. 掌握小鼠肝脏提取和保存方法。
3. 学习组织样品的制备和储存技术。
二、实验原理肝脏是人体重要的代谢器官，具有合成、储存、解毒等多种功能。
本实验通过解剖小鼠，提取肝脏组织，旨在为后续的实验研究提供材料。
三、实验材料与仪器1. 实验动物：健康成年小鼠一只。
2. 仪器：解剖剪、解剖针、手术刀、剪刀、镊子、培养皿、酒精棉球、生理盐水、福尔马林固定液、冰盒、解剖显微镜等。
四、实验步骤1. 实验动物处死：用酒精棉球擦拭小鼠，使其昏迷，然后迅速用剪刀剪断小鼠颈部，使小鼠死亡。
2. 解剖：将小鼠放入解剖盘中，用剪刀剪开腹部皮肤，暴露腹腔。
3. 提取肝脏：用解剖剪剪开肝脏周围的结缔组织，用镊子将肝脏轻轻夹出，放入培养皿中。
4. 清洗：用生理盐水冲洗肝脏表面，去除杂质。
5. 固定：将肝脏放入装有福尔马林固定液的培养皿中，浸泡固定。
6. 保存：将固定好的肝脏取出，放入装有酒精的容器中，密封保存。
五、实验结果与分析1. 成功解剖小鼠并提取肝脏组织。
2. 肝脏表面有明显的红褐色，质地柔软，易于夹取。
3. 肝脏表面无明显杂质，清洗过程中保持肝脏组织完整。
六、实验讨论1. 实验过程中，解剖操作要轻柔，避免损伤肝脏组织。
2. 肝脏固定过程中，福尔马林固定液浓度不宜过高，以免影响后续实验结果。
3. 实验动物处死过程中，要确保小鼠死亡，避免实验过程中出现意外。
七、实验结论本实验成功解剖小鼠并提取肝脏组织，为后续实验研究提供了可靠的组织样品。
在实验过程中，掌握了组织样品的制备和储存技术，为今后相关实验奠定了基础。
八、实验改进1. 在解剖过程中，可使用解剖显微镜观察肝脏结构，提高解剖效率。
2. 在肝脏固定过程中，可选用其他固定液，如4%多聚甲醛，以提高固定效果。
3. 在实验动物选择上，可根据实验需求，选用不同品种、年龄的小鼠。
第2篇一、实验目的1. 学习小鼠肝脏的解剖方法。
2. 掌握肝脏细胞的提取方法。
小鼠肝细胞原代培养实验
小鼠肝细胞原代培养实验一、实验材料准备1. 动物：小鼠。
2. 试剂：DMEM(含血清)、无血清DMEM 培养基、胰酶、PBS 。
3. 器械：饭盒、纱布、小剪子、小镊子、大镊子、大烧杯、平皿、研磨玻片、滤网、离心管(15/50 ml)、6孔培养板、吸管、移液管、手套、微量加样器。
4. 准备：酒精擦拭台面后把物品摆放好，开紫外线灯照30分钟后开鼓风机吹至实验结束。
二、方法1. 将小鼠断颈致死，置75%酒精泡2-3秒钟，取肝脏，置于盛有PBS 的平皿中。
2. 剔除脂肪、结缔组织、血液等杂物，转移到另一个盛有PBS 液的平皿中。
实验方法原理将小鼠的肝细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA ）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。
实验材料小鼠试剂、试剂盒 DMEM 无血清DMEM 培养基胰酶PBS仪器、耗材饭盒纱布剪子镊子烧杯平皿研磨玻片滤网离心管6孔培养板吸管移液管手套微量加样器2.3 用手术剪将脏器剪成小块(大小约1mm2)，玻片研磨，转到离心管，离心(1 000 rpm，5 min)。
4. 视组织或细胞量加入5-6倍(3-5 ml)胰酶，37℃中消化20分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。
5. 加入3-5 ml含血清的培养液以中止胰酶消化作用。
6. 用100目孔径滤网滤过，除去未消化的大组织块。
7. 再次离心5 min，弃上清液。
8. 加入无血清培养液5 ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。
9. 加入含血清的培养液1-2 ml(视细胞量)，血球计数板计数。
10. 将细胞调整到5×105/ml左右，转移至6孔培养板中，37℃下培养。
肝DNA提取(LB)
DNA纯品: A260/A280 = 1.8
RNA纯品: A260/A280 = 2.0
操作步骤
（二）DNA的含量测定
DNA样品加3ml的TE缓冲液后 混匀，测定A260值和A280值。
（三）计算0的应用
1. DNA或RNA的定量
A260=1.0相当于
50μg/ml双链DNA
40μg/ml单链DNA（或RNA）
20μg/ml寡核苷酸
2.判断核酸样品的纯度
操作步骤
3．在上述溶液中加入饱和酚0.25ml， 氯仿:异戊醇(24:1) 0.25ml，，充分混 匀，室温放5min，12000rpm离心 10min; 4．取上清液，加入0. 5ml氯仿:异戊 醇(24:1)，混匀，室温放5min， 12000rpm离心5min。
5．取上清液，加入0.3V的NH4Ac， 2.5 V的无水乙醇充分混匀， 12000rpm离心5min，小心倒去溶 液，吸干。DNA沉淀加入1.0ml的 TE缓冲液溶解。
授课教师：兰柳波 办公大楼806房
小鼠肝组织DNA的提取 及其含量测定
原
理
SDS： 破坏细胞膜、核膜，使组织蛋白与
DNA分子分离；
EDTA：抑制DNase，减少 DNA分子降解; 酚/氯仿：除去蛋白质，氯仿可除去微量酚;
无水乙醇：沉淀DNA。
操作步骤
（一）提取DNA 1. 断颈法处死小鼠后取出肝脏，稍洗 净，剪碎放入匀浆器中，加入10ml的TE 缓冲液研磨成匀浆液； 2．取0.5ml匀浆液加入1.5ml离心管中， 加入10％SDS溶液0.2ml，颠倒混匀后， 置室温5min；
小鼠肝脏取材固定方法
小鼠肝脏取材固定方法1.实验准备首先，准备所需的实验器材和试剂。
这些试剂包括：-PBS缓冲液-10％中性缓冲福尔马林溶液（pH7.4）-石蜡切片-乙醇溶液此外，需要一台显微镜、刀片和组织取样相关的实验耗材等。
2.动物处理在实验开始之前，应该获得相关道德和法律的批准。
选择适当的小鼠品系和个体，确保它们处于适当的健康状况，并根据实验要求确定处理小鼠的方法。
3.取材流程开始取材之前，需要准备好取材台和必要的消毒工具。
下面是小鼠肝脏取材的主要步骤：1)用PBS缓冲液冲洗小鼠腹腔，使其保持湿润。
2)小鼠放置在取材台上，腹面朝上。
3)用消毒的剪刀和镊子将小鼠腹壁切开，在小鼠胸骨上下切口，通过这个切口观察到小鼠肝脏。
4)使用镊子和剪刀缓慢地将小鼠肝脏从胆囊和附近组织中分离出来。
5)使用显微镜检查并确保取下的肝脏没有受到其他组织或器官的污染。
6)将小鼠肝脏放入一个含有冷冻福尔马林溶液的容器中，确保完全覆盖肝脏。
然后，形成的固定液混合物应放置在冰上，保持冷却，避免固定液被分解。
7)固定时间根据研究需要确定，在大多数实验中，6-24小时是常见的选择。
4.后续处理经过一定时间的固定后，可以开始进行后续处理。
1)从冷冻福尔马林溶液中取出固定的小鼠肝脏并放入含有70%乙醇的容器中。
2)使用组织取样的技术将小鼠肝脏切成合适的大小，以便进一步的处理，例如石蜡包埋或切片制备。
3)根据需要，执行进一步的实验步骤，例如染色、免疫组化和显微镜检查。
需要注意的是，整个取材和固定的过程应该在冰上进行，以确保取材组织的完整性和防止组织的分解。
此外，操作过程中要保持整洁，避免交叉污染。
在实验过程中，小鼠的确切解剖方法和肝脏取材固定流程可能会有一些变化，具体根据实验目的和要求来进行调整。
最后，应按照相关实验和道德准则进行实验，确保实验的准确性和可重复性。
小鼠原代肝细胞提取步骤
小鼠原代肝细胞提取步骤1. 引言1.1 背景介绍小鼠原代肝细胞是一种非常重要的细胞类型，可以用于研究肝脏相关的生物学问题。
肝脏是人体最大的内脏器官，具有重要的生理功能，如代谢、解毒、合成蛋白等。
研究小鼠原代肝细胞提取方法对于深入了解肝脏生理功能具有重要意义。
在过去的研究中，科学家们通过提取小鼠原代肝细胞，成功地模拟了肝脏在体内的功能，为肝脏疾病的研究提供了重要工具。
小鼠原代肝细胞也被广泛应用于肝脏细胞培养、药物代谢与毒性研究等领域。
小鼠原代肝细胞的提取方法的改进和优化对于促进相关领域的发展具有积极作用。
通过对小鼠原代肝细胞提取方法进行研究，可以更好地理解肝脏生理功能、疾病发生机制以及药物代谢途径。
优化提取方法，提高细胞纯度和活力，将有助于更精确地进行实验研究，为临床治疗提供更有效的参考依据。
在这一背景下，研究小鼠原代肝细胞提取方法具有重要的意义和应用前景。
1.2 研究意义小鼠是常用的实验动物之一，其肝脏细胞具有一定的再生能力，并且与人类的肝脏细胞在生物学特性上有很多相似之处。
小鼠原代肝细胞提取具有重要的研究意义。
通过对小鼠原代肝细胞的提取和培养，可以更好地研究肝脏细胞的生长、增殖和功能。
这对于深入了解肝脏生理功能、疾病发生机制以及药物代谢具有重要意义。
小鼠原代肝细胞的提取可以为基因编辑技术、药物筛选等研究提供重要的工具和平台。
通过对小鼠原代肝细胞的提取和培养，可以更好地模拟体内情况，从而加深对相关疾病的认识、寻找新的治疗方法。
小鼠原代肝细胞的提取对于肝脏生物学研究和药物研发具有重要的意义，有助于推动相关领域的进步和发展。
2. 正文2.1 小鼠原代肝细胞提取前准备工作小鼠原代肝细胞提取前准备工作是成功提取肝细胞的关键步骤之一，其主要目的是为了确保提取到的肝细胞具有较高的活力和纯度。
在进行肝细胞提取前，需要进行以下准备工作：1. 选择合适的小鼠模型：选择健康、年龄相仿的小鼠作为实验材料，确保实验结果的可靠性。
小鼠肝脏DNA提取与鉴定
小鼠肝脏DNA提取与鉴定发布日期：2008-07-17 来源：生技网信息中心浏览次数：652实验原理： DNA 以核蛋白形式存在于细胞核中。
蛋白酶K 或链霉蛋白酶 E &nbs实验原理：DNA 以核蛋白形式存在于细胞核中。
蛋白酶K 或链霉蛋白酶 E 均为广谱蛋白酶，其重要特性是能在 SDS 和 EDTA 存在下保持很高的活性。
在匀浆后提取 DNA 的反应体系中， SDS 可破坏细咆膜、核膜，并使组织蛋白与 DNA 分子分离， EDTA 抑制细胞中 DNase 活性，蛋白酶 K 或链霉蛋白酶 E 将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使 DNA 分子完整地分离出来。
再用酚、酚/氯仿抽提除去蛋白质，接着用氯仿抽提以除去 DNA 溶液中微量酚的污染。
最后用无水乙醇沉淀 DNA 。
为获得高纯度 DNA ，操作过程中常加入 RNase 除去 RNA 。
获得高分子量 DNA 的关键是防止 DNase 降解 DNA 。
故标本必须新鲜，在提取前细胞就保持完整，核、溶酶体等细胞器应没有明显破坏，提取 DNA 用的离心管等器皿及试剂应消毒。
操作在4 ℃以下进行。
试剂及器材1 ．试剂蛋白酶 K ：称取 20mg 蛋白酶 K 溶于 lml 消毒双蒸水中，－20 ℃备用。
RNase( 牛胰 ) ：称取 10mgRNase 溶于 lml 下列混合液中： 10mmol/l Tris-HCl ，pH8.0 ； lmmol/L EDTANa2 pH8.0 ； 50 %甘油。
10 %SDS 溶液：称取 10gSDS 溶于 100ml 消毒双蒸水中，于65 ℃保温 2 小时，贮存室温备用。
1 × TE 缓冲液 (pH8.0) ： 10mmol/L Tris-HClpH8.0 ； lmmol/LEDTANa2 pH8.0 。
配制后高压灭菌， 4 ℃贮存。
1 × TE 饱和重蒸酚 (pH8.0)氯仿/异戊醇 (24:1V/V) 10mol/LNH4 AC ，配制后高压灭菌，4 ℃贮存无水乙醇 (AR)70 %乙醇2 ．器材玻璃匀浆器；离心机；电泳仪；电泳槽；紫外透射反射分析仪。
组织切片的观察实验报告
一、实验目的1. 掌握组织切片的制作方法。
2. 学会使用显微镜观察组织切片。
3. 识别正常和异常组织结构。
二、实验原理组织切片是将生物组织切成薄片，经过染色、脱水、透明等处理，制成可供显微镜观察的样品。
通过观察组织切片，可以了解组织结构的正常和异常情况。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠肝脏、肾脏、心脏、肺脏、脾脏等器官。
2. 仪器：显微镜、切片机、染色盒、载玻片、盖玻片、吸水纸、酒精、盐酸、蒸馏水等。
四、实验步骤1. 取材：取小鼠肝脏、肾脏、心脏、肺脏、脾脏等器官，用刀片切成小块。
2. 切片：将组织块放入切片机，切成5-10微米的薄片。
3. 染色：将切片放入染色盒，用苏木精-伊红（HE）染色。
4. 脱水：将染色后的切片用酒精逐级脱水。
5. 透明：将脱水后的切片放入透明剂中，使切片透明。
6. 制片：将透明后的切片放在载玻片上，滴一滴封片剂，盖上盖玻片。
7. 观察：将制片放入显微镜下，先用低倍镜观察，再用高倍镜观察。
五、实验结果与分析1. 肝脏切片（1）低倍镜观察：可见肝小叶结构，中央静脉位于肝小叶中央，周围为肝细胞索。
（2）高倍镜观察：肝细胞呈多边形，胞浆丰富，细胞核位于细胞中央。
2. 肾脏切片（1）低倍镜观察：可见肾小球、肾小管和肾间质。
（2）高倍镜观察：肾小球由肾小球囊壁和肾小球毛细血管构成，肾小管上皮细胞呈立方形或柱状。
3. 心脏切片（1）低倍镜观察：可见心肌层、心内膜和心外膜。
（2）高倍镜观察：心肌细胞呈长梭形，肌纤维排列整齐，细胞核位于细胞中央。
4. 肺脏切片（1）低倍镜观察：可见肺泡、肺泡壁和肺间质。
（2）高倍镜观察：肺泡壁由肺泡上皮和肺泡毛细血管构成，肺泡上皮细胞呈扁平状。
5. 脾脏切片（1）低倍镜观察：可见脾窦、脾小体和脾索。
（2）高倍镜观察：脾小体由生发中心、白髓和红髓构成，脾索主要由淋巴细胞和浆细胞构成。
六、实验总结通过本次实验，我们学会了组织切片的制作方法，掌握了使用显微镜观察组织切片的技巧，并识别了正常和异常组织结构。
小鼠肝取材实验报告
一、实验目的1. 掌握小鼠肝脏的解剖位置。
2. 学习小鼠肝脏的取材方法。
3. 了解肝脏在生物研究中的应用。
二、实验原理肝脏是人体最大的实质性器官，具有代谢、解毒、储存等功能。
在生物研究中，肝脏常作为研究对象，用于观察药物、毒素等对肝脏的影响。
本实验通过解剖小鼠，取出肝脏，为后续实验提供材料。
三、实验材料与仪器1. 实验动物：健康小鼠2只2. 仪器：解剖剪、镊子、解剖盘、解剖针、解剖剪、解剖刀、解剖镜、解剖生理盐水、生理盐水、75%酒精、10%福尔马林固定液四、实验步骤1. 将小鼠置于解剖盘上，用解剖剪剪开小鼠的颈部皮肤，暴露出气管和血管。
2. 用解剖针挑破气管，用镊子轻轻拉出气管，使小鼠呼吸停止。
3. 用解剖剪剪断气管，使小鼠血液流出。
4. 用解剖剪剪开小鼠的腹腔，暴露出肝脏。
5. 用解剖剪剪断肝脏周围的血管，取出肝脏。
6. 将肝脏放入生理盐水中清洗，去除血污。
7. 将肝脏放入75%酒精中浸泡，防止细菌感染。
8. 将肝脏放入10%福尔马林固定液中固定，待后续实验使用。
五、实验结果与分析1. 通过解剖操作，成功取出小鼠肝脏。
2. 肝脏呈红褐色，质地较软，具有弹性。
3. 肝脏位于腹腔右侧，上方与膈肌相连，下方与胃、小肠相邻。
六、实验讨论1. 在解剖过程中，应尽量减少对小鼠的损伤，以免影响实验结果。
2. 肝脏在生物研究中具有重要意义，可用于观察药物、毒素等对肝脏的影响，以及研究肝脏的代谢、解毒等功能。
3. 本实验成功取出小鼠肝脏，为后续实验提供了材料。
七、实验总结通过本次实验，我们掌握了小鼠肝脏的解剖位置和取材方法。
在实验过程中，应注意操作规范，减少对小鼠的损伤。
肝脏在生物研究中具有重要意义，本实验为后续实验提供了基础材料。
小鼠肝脏淋巴细胞分离
肝脏淋巴细胞分离protocol
1. 腹腔注射100uL/只小鼠麻醉;
2. 用约20mL PBS从下腔静脉处灌洗(肾,肺,肝均变白,肝脏灌注也可);
3. 取10cm细胞培养皿,加入10mL 10% FBS+DMEM,将滤网浸于其中,取出的肝组织置于滤网中;
4. 用1mL注射器的内芯研磨,制备细胞悬液;
5. 从皿中吸取细胞悬液到50mL离心管,补加PBS至30mL;
6. 50g离心3min,上清转移至新管;
7. 1500rpm X 5min离心,2.5mL DMEM重悬细胞。
8. 准备percoll:
6mL 100% percoll + 660uL 10X PBS配成90% percoll
4mL 90% percol + 1.12mL DMEM配成70% percoll
2.5mL细胞重悬液+ 2mL 90% percoll配成40% percoll;
9. 将40% percoll细胞悬液沿管壁缓缓加入70% percoll中;
10. 2000rpm离心20min,brake和accelerate都设为level 1;
11. 吸取中间层细胞,PBS补加到10mL,400g离心10分钟;
12. 弃上清,加1mL红细胞裂解液,裂解2min
13. 补加PBS到10mL,终止裂解,400g离心10分钟
14. 将细胞重悬到合适体积,计数,用于下游分析。
生化实验课件 小鼠肝组织rna提取及rtpcr实验1讲学课件
TLS记录协议 TLS Record Protocol
操作过程示意图
TLS记录协议中的操作
第一步，fragmentation
生化实验课件 小鼠肝组织rna提 取及rtpcr实验1
一、试剂及材料
1、小鼠肝脏 2、DEPC（焦碳酸二乙酯）处理过的EP管、
PCR管 3、 Trizol 、氯仿、异丙醇、DEPC水
RT-PCR：RNA的反转录 + cDNA的PCR
RT-PCR操作步骤
5x Prime Script Buffer
协议的使用
SSL/TLS概况
协议分为两层
➢ 底层：TLS记录协议 ➢ 上层：TLS握手协议、TLS密码变化协议、TLS警告协议
TLS记录协议
➢ 建立在可靠的传输协议(如TCP)之上 ➢ 它提供连接安全性，有两个特点
➢ 保密性，使用了对称加密算法 ➢ 完整性，使用HMAC算法
➢ 用来封装高层的协议
版本和历史
➢ 1.0，不成熟 ➢ 2.0，基本上解决了Web通讯的安全问题
➢ Microsoft公司发布了PCT(Private Communication Technology)，并在IE中支持
➢ 3.0，1996年发布，增加了一些算法，修改了一些缺陷 ➢ TLS 1.0(Transport Layer Security, 也被称为SSL 3.1)
34.5 l
50 l
94℃ 5 min 94℃° 30 sec 54℃° 30 sec 72℃ 30 sec 72℃ 7 min
25 cycle
1%琼脂糖凝胶电泳观察结果
小鼠肝脏取材实验报告
一、实验目的本实验旨在掌握小鼠肝脏取材的方法，了解肝脏在动物体内的解剖位置，并熟悉实验操作步骤，为后续的肝脏相关研究奠定基础。
二、实验原理肝脏是动物体内重要的代谢和解毒器官，其功能复杂，涉及多种生物化学反应。
通过取材实验，可以获取肝脏组织，用于后续的病理学、生物化学和分子生物学研究。
三、实验材料与仪器1. 实验动物：健康成年小鼠（体重约20-25g）2. 实验器材：解剖显微镜、手术器械、注射器、针头、剪刀、镊子、生理盐水、戊巴比妥钠、记号笔3. 实验试剂：10%福尔马林固定液、酒精、蒸馏水四、实验步骤1. 准备实验动物- 将小鼠放入代谢笼中，禁食不禁水12小时，以减少肠道内容物对肝脏的影响。
- 称量小鼠体重，记录数据。
2. 麻醉小鼠- 按照体重计算戊巴比妥钠用量，用注射器抽取戊巴比妥钠备用。
- 将小鼠固定在手术台上，用注射器从小鼠的颈部肌肉注射戊巴比妥钠，使其麻醉。
3. 解剖小鼠- 剪开小鼠腹部皮肤，暴露腹壁肌肉和内脏器官。
- 找到肝脏，观察其大小、颜色和形状。
- 用镊子轻轻提起肝脏，用剪刀剪断肝脏与腹壁的连接，取出肝脏。
4. 标记肝脏- 用记号笔在肝脏表面标记，以便后续观察和记录。
5. 固定肝脏- 将取出的肝脏放入10%福尔马林固定液中固定，以便后续的病理学观察。
6. 保存肝脏- 将固定好的肝脏放入容器中，加入适量的酒精，保存备用。
五、实验结果与分析1. 肝脏的解剖位置- 肝脏位于小鼠腹腔的右上侧，呈红褐色，质地柔软，表面光滑。
2. 肝脏的形态学特征- 肝脏呈楔形，左右径约2.5cm，前后径约1.5cm。
- 肝脏表面有明显的叶间裂，将肝脏分为左叶、右叶和尾叶。
3. 肝脏的重量- 小鼠肝脏重量约为体重的1/100-1/50。
六、实验结论本实验成功获取了小鼠肝脏组织，掌握了肝脏的解剖位置和取材方法。
实验结果表明，肝脏是动物体内重要的代谢和解毒器官，其形态学特征和重量具有明显的个体差异。
七、实验讨论1. 实验过程中，应注意操作规范，避免对小鼠造成伤害。
小鼠取肝脏组织流程
小鼠取肝脏组织流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. l hope that after you downloadthem,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified afterdownloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!小鼠取肝脏组织流程：①麻醉准备：选用适当麻醉剂对小鼠进行麻醉，确保其无痛无意识。
②消毒操作：用75%酒精对小鼠腹部进行消毒，准备无菌手术器械。
③开腹取肝：在腹部正中做小切口，暴露腹腔，辨认并小心分离肝脏，避免损伤其他器官。
④肝脏游离：切断连接肝脏的血管和胆管，细心将肝脏完整游离出腹腔。
⑤组织处理：根据实验需求，可直接取整个肝脏或切取部分组织。
⑥清洗肝脏：用PBS（磷酸盐缓冲溶液）轻轻冲洗肝脏，去除血液和残留组织。
⑦组织处理选择：若需细胞培养，迅速将肝脏浸入含有消化液的培养皿中；若为DNA/RNA提取或病理分析，可将肝脏组织剪切成小块，置于裂解缓冲液或Trizol中。
⑧后续保存或处理：根据实验目的，将处理好的肝脏组织用于研磨、匀浆、离心分离细胞或直接保存于液氮或特定保存液中，备用。
⑨废弃物处理：依照实验室生物安全规定，妥善处理手术废弃物和动物尸体。
此流程需遵守实验动物伦理原则，尽量减少动物的痛苦和应激反应。
小鼠病理切片的制备
小鼠病理切片的制备小鼠病理切片的制备，说起来可能有点复杂，但其实一想到小小的一块切片，能帮咱们了解小鼠体内发生的种种变化，感觉这事儿就变得有趣多了。
病理切片嘛，就是通过把小鼠的组织做成超薄的片状，方便显微镜下观察，看看它们是不是有什么问题。
你可能会想，这个过程一定是高深莫测、科学家专利的技术。
其实呢，做病理切片也没那么可怕，只要掌握了几个基本步骤，动手起来倒是挺有意思的。
得从取材说起。
别看小鼠那么小，里面的东西可不少。
想要做切片，得把小鼠的某个组织或者器官取出来，像什么肝脏、心脏、脑组织啊，大家可以根据研究需要来选择。
其实取材这一步，技术要求也不算太高，关键就是要把小鼠的尸体处理好，避免影响切片的质量。
哦，对了，很多时候我们会用麻醉药物让小鼠“睡着”，不然它们可不太愿意配合。
这个时候，如果你动手快一点，它就不会感觉到什么痛苦，大家放心。
好了，接下来就是取样了。
把小鼠的内脏取出来后，第一件事就是要把组织切成适当的块。
这个“适当”啊，不是你想切多大就多大，而是根据切片的厚度来决定的。
切块太大了，后面做切片时可能会出现问题，太小了，又难以处理。
真是让人操碎了心。
不过，没关系，大家慢慢摸索，熟能生巧。
这时候，许多人都会用到“手术刀”这一神器，刀片锋利，切起来又快又干净。
切块好后，要做个固定处理，一般是用福尔马林，保持组织的原样，让它不容易变质，确保后面观察时能看到真实的状态。
然后，得进入脱水环节。
这一步听起来不难，但其实是个技术活。
组织块在固定之后，得把它里面的水分去除，毕竟水分太多，切片的时候容易断裂。
脱水的过程就是通过一系列不同浓度的酒精来慢慢吸走组织里的水分，大家可得小心，不是每个步骤都能随便跳过或者省略的。
得按照一定的规律，一点点往更浓的酒精溶液里泡，时间不能短，浓度不能低。
好像人在游泳池里泡久了，皮肤都会皱巴巴的道理。
脱水完成后，就到了浸蜡阶段。
这个过程嘛，说白了就是把组织泡进液态石蜡里。
想象一下，你在做糕点，做那种巧克力外壳，差不多是一样的道理。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
小鼠肝脏组织取材步骤
小鼠肝脏组织取材步骤，并列出完成此次实验所需要的试剂、仪器、材料等相关物品及实验人员安排情况。
材料：小鼠
试剂：DMEM 戊巴比妥钠 75%酒精 PBS 器械消毒液戊二醛
仪器：解剖台备皮刀弯盘组织剪眼科剪手术刀柄刀片血管钳眼科镊
培养皿无菌手套
实验人员安排：小鼠养殖管理组准备工作组实验操作组
实验步骤:
1. 取材前夜禁食，自由饮水。
2. 小鼠称重，按照50mg/kg的比例用5ml的注射器配合针头抽取戊巴比妥钠备用。
3. 正左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴，另外三个手指抓住大鼠的颈部，使大鼠头部向向下。
这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。
右手持注射器，从腹部近腿根处刺入后再腹部皮下穿行深入，动作轻柔，缓慢注射。
注射完药物后，缓缓拔出针头，手指按住针口对小鼠腹部轻柔按摩，促进麻醉药物的吸收，掐小鼠尾部检测小鼠麻醉程度。
4.将小鼠四肢固定于解剖台上，暴露小鼠整个胸部和腹部，修剪去腹部毛发，75%酒精消毒。
5.沿腹侧正中线自阴茎上源由下而上剪开腹部皮肤直至剑突，向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织，暴露腹壁浅肌层。
沿白线钝性分离腹壁肌肉，剪开腹膜，暴露腹腔，将肝脏向上翻起，显露肝门，眼科剪剪除肝脏周围结缔组织和血管。
6.结扎剪断肝门管道系统，钝锐结合完整取出大鼠肝脏，放置于无菌培养皿，生理盐水冲洗，称重并记录。
①切取肝左叶约1mm×1mm×1mm组织3块，3-戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH
7.4)或4-戊二醛固定；②左叶肝组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；③右叶肝组织称重记录分装后全部放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
7.切取肝左叶约1mm×1mm×1mm组织3块，3-戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4-戊二醛固定；左叶肝组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定；右叶肝组织称重记录分装后全部放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
8.各取样标本细致编号登记
9.大鼠废弃尸体处理。
实验器具清洗消毒。