药物半数致死量测定
半数致死量的测定
4、精确配制一号药液
应取原液的量:
40*5%=x*25% x=8ml
取原液8ml加入32ml水(一号药液) 从中取出每组药液量供一组使用, 在加入等量生理盐水,从中取出每 组药液量供二组使用,依此类推。
四、试验
[方法] 一、预试
快速找出0%和100%估计致死量(Dn,Dm)
首先用原液尼克刹米(25%)10倍稀释
液的一系列药液以不同容量各试4鼠,进而 2ml / 10g =6ml。
动物:小鼠,体重18-22g ,雌雄各半 将一定浓度的药物按一定剂量比值给小鼠腹腔注射,记录小鼠的死亡情况,计算药物的半数致死量。
半数致死量的测定
半数致死量(LD50)测定 [Bliss法]
(综合性实验)
[目的]
1.掌握药物半数致死量(LD50)测定的基本步骤 2.掌握用Bliss法计算药物的半数致死量。
[原理]
将一定浓度的药物按一定剂量比值给小鼠腹腔 注射,记录小鼠的死亡情况,计算药物的半数致 死量。
[材料]
动物:小鼠,体重18-22g ,雌雄各半 药物:25%尼克刹米、生理盐水 器材:注射器、量筒、烧杯、鼠笼、 电子天平
则可逐渐递增或递减剂量,找到4/4和0/4剂 将一定浓度的药物按一定剂量比值给小鼠腹腔注射,记录小鼠的死亡情况,计算药物的半数致死量。
=每组药液量/(1-K) 器材:注射器、量筒、烧杯、鼠笼、 电子天平
量即(Dm,Dn)。(0.2X0.7=0.14ml, =10*30g* 0.
快速找出0%和100%估计致死量(Dn,Dm)
1、每组均取10只小鼠,腹腔注射尼克刹米按照不况。(40分)
药物半数致死量(LD50)的测定
2
0.25
LD50= lg-1 [Xm-i(Σp-0.5)] =lg-1[2.3522-0.0457(3.375-0.5)]
序贯法
取10只小鼠编号、称重 从最大剂量开始给药(尼可刹米0.1ml/10g) ,
观察10min. 若死亡,则下一只小白鼠降低一级 剂量,若没死亡,则用高一级剂量,依次类推, 直至10只小白鼠全死. 记录结果 计算X·R、∑(X·R) 按公式计算尼可刹米的半数致死量
LD50(median lethal dose):
药物引起半数实验动物死亡的剂量。
治疗指数(therapeutic index TI):
LD50和ED50的比值,药物安全性指标。
安全范围(margin of safety):
LD5/ED95的值或 LD5 ~ ED95之间的距离。
LD50 、ED50的意义
-⑧
0 1 1 2.535
LD50=lg-1( C/n ) = lg-1(30.675/11)
= (mg/kg)
注意事项
要对实验动物进行随机化分组 各组药物浓度不能搞错,给药剂量要准
确 注意选择正确的给药部位(腹腔注射),
进针的深浅要一致
实验后处理
列表显示实验数据 统计全班实验结果,计算出普鲁卡因和
实验设计书格式
题目(居中) 设计者(居中) 专业、班别(居中) 指导老师(居中) 1.实验目的 2.立题依据(包括参考文献) 3.实验方案
(1)实验材料 (2)实验分组 (3)观察指标 (4)实验方法与步骤 4.创新点 5.实验结果预测
实验设计书评分标准
1.设计内容为学生原创,有创新性 2.设计依据充分,阐述相关理论知
列表统计P值 按公式计算普鲁卡因的半数致死量 LD50=lg-1 [Xm-i(Σp-0.5)]
半数致死量的测定..
也可以直接按照前面的校正公式计算
计算步骤
2、求lgLD50的反对数LD50 3、求lgLD50的标准误SlgLD50 Pi(1 Pi) SlgLD50=d ni 4、求lgLD50的95%的置信区间 Ig-1(lgLD50 ± 1.96SlgLD50)
测定结果
某试剂的LD50值测定结果
对数剂量
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
+ + + + + + + + + -
20
21
22 23
1.95 1.90 1.85 1.80 1.75
+ + + x
整理与计算
对数剂量x 1.95 1.90 1.85 1.80 1.75 死亡 1 2 6 3 0 存活 0 1 2 5 3 合计n 1 3 8 8 3
寇氏法在实际工作中较常用,计算简便,结果 较准确。
【条件】 1.剂量必须按等比级数(剂量对数按等级数)分组。 2.各组动物数应相等。 3.“反应”应大致呈正态分布。最小剂量组的死亡率 (Pn)应为0%,最大剂量组的死亡率(Pm)应为 100%;如果Pn<20%或Pm>80%用校正公式计算; 如Pn>20%或Pm<80% 用此法计算结果不太准确。 3 Pm Pn 校正公式:lg LD50=XK-d ( P 4 )
特别注意
后一动物剂量上升或下降由由前一动物的死 亡或存活决定,从第一只改变算起到最后一 只止,最后的终止号也作为一次实验结果。 若最后一只动物死亡,下降一格画“x”, 以存活计数;若最后用一只动物存活,上升 一格画“x”,以死亡计数。
实验普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
DJY
2
测定LD50的方法很多 本实验用的是简化机率单位法
y = a+bx
机 率 单 位 y
对数剂量x
DJY 3
药物的剂量与效应关系
死 亡 数 累 积 死 亡 率
剂量
累 积 死 亡 率 对数剂量
DJY
剂量 机 率 单 位 对数剂量
4
测定药物LD50的设计方法 1.预实验:摸索接近100%和0%死亡的剂量 2.按比例设5-7个剂量组(0.65~0.90) 3.随机分组,动物数不少于10只(小鼠) 4.实验条件均应相等
【注意事项】
1.动物应随机分组
2.各小组的动物标记要统一
3.剂量由小到大,注射量要准。
DJY
9
思考题
1.什么是LD50?
2.测定LD50的根据和意义何在?
DJY
10
【结果与统计】
对数剂量 动物数 死亡率 机率单位 死亡数 (mg/kg) (x) (n) (%) (y) 剂量 1 2 110.8 147.7 2.0445 2.1694
3 4
5
196.9 262.5
350.0
2.2942 2.4191
2.5441
y = a+bx
用直线回归法求 a, b, r
DJY 8
DJY
5
测定LD50的用药设计方法 同一浓度 不同浓度 不同剂量 同一剂量
DJY
6
【方法与步骤】
1.分组:随机分成5个剂量组,每组2只小白鼠。
2.给药:采用不同浓度,同一剂量的方法
0.20ml/10g,腹腔注射,涂上标记
3.观察:用药1小时后,观察小白鼠死亡情况,并记
录各组动物的鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
药物半数致死量(LD50)的测定
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实验 药物半数致死量(LD50) 的测定——序贯法
实验目的
1. 掌握测定药物LD50的药理学意义、序贯法 的实验方法和计算方法;
2.熟悉盐酸普鲁卡因的毒性作用。
实验动物与实验器材
4. 实验结mg/kg C=∑(R·logD)
R=剂量组的动物只数
logD=剂量D的对数值;
N=实验动物总数=∑R
注意事项
1. 对实验动物进行随机化分组; 2.各组药物浓度不能混淆; 3.给药剂量及部位要准确,进针的深浅一致;
1. 实验动物: 小白鼠(18-22g),雌雄各半 2.实验器材:
仪器:注射器、鼠笼、函数型计算器 药品:2%普鲁卡因、苦味酸溶液
实验步骤
1. 实验前按表3-6拟定实验的药物剂量,相邻两剂 量按等比安排。相邻两剂量对数差为0.046。
2.每实验组取取小鼠10只,雌雄各半,称重后用 苦味酸标记;
浓度
剂量D (mg/kg)
r= 0.046
2.22 %
2%
1.8 %
1.62 %
1.45 %
合计
表3-6 小鼠半数致死量实验结果
LogD
实验结果
R
R·log D
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
2.347
2.301
2.255
2.209
2.163
3. 先取小鼠1只,腹腔注射第一个剂量即2.2%普鲁 卡因0.1ml/10g,若第一只小鼠用药后未出现死亡, 下一只动物则用高一剂量,如出现死亡,下一只 动物应用低一剂量。在表中记录时,动物死亡用 “+”表示,未死亡用“-”表示。若在同一剂量中 连续出现“-”两次,则下一次实验结束,最后一 只动物不做实验,但在表格中占一个,用E表示。
药物半数致死量(有效量)测定_图文
均衡随机法分组:先按易控制的因素(性别、年龄 、体重等)均衡分档。 然后在每一档随机取出等量的动 物分配到各组,使难控制的因素(活泼程度、饥饱、疲 劳程度等)得到随机安排。
作业:
实验测定的戊巴比妥钠ED50以及上 述例子LD50有关数据求出:
治疗指数 TI = LD50/ED50 = 安全指数 SI = LD5/ED95 =
40
LD50 /ED50
20
0
ED50
LD50
质反应的量效曲线
剂量
Fig.2-3 The frequency curve and cumulative frequency curve of a drug action in a quantal-effect experiment.
质反应量效关系曲线
分工合作,统一计算
分组及给药
取小鼠50只( 18~22克 ), 雌雄各半, 不同性别动物按体重随机分成五组。每组 各动物称重,标记后分别按设计的容积和 浓度腹腔注射给药。LD50(或ED50 )测 定时是否要设对照组,应视药物性质等情 况而定。
必须注意:正式实验如单人操作时宜从浓 度偏高的剂量组开始给药!起效快和对后 续实验有重要提示作用。思考!
正式实验:在此剂量范围内安排5~6个对数剂 量实验组,便于用对数剂量对死亡数百分率作图 和计算数据。
本实验备有:50, 40 ,32, 25.6 ,20.5,16.4 五个剂量 组(组间公比=0.8);昆明小鼠120只雌雄各半。
每个同学做4~5个连续的浓度,每浓度一只小鼠 。
实施:规范操作,观察计时;
【实验要求】
1、掌握小白鼠半数致死量或半数有效量 测定的基本方法。
药物半数致死量_LD50的测定
【实验目的】
了解药物半数致死量测定的原理,方法,计算过
程及意义。
【实验原理】
• 半数致死量(lethal dose 50%, LD50):是指能够
引起试验动物一半死亡的药物剂量,通常用药物致死剂量
的对数值表示。属于质反应,数据通过计数阳性反应的个
数来表示。
• 测定LD50意义
(1)是衡量药物毒性大小的指标,评价药物优 TI=LD50/ED50 劣的重要参数 (2)评价药物安全性---治疗指数 (3)申报新药过程中必须提供的药理学资料
• LD50的测定方法有很多。如:目测机率单位法、
加权机率单位法(Bliss 法)、寇氏法、序贯法等。
• Bliss 法是目前推荐使用的方法。此法对剂量分
生全身性毒性反应,主要表现为中枢神经系统先兴奋后抑
制,初期表现为眩晕、烦躁不安、肌肉震颤,进而发展为
神经错乱、惊厥、昏迷、呼吸抑制等。患者可因呼吸衰竭 而死亡。
【实验材料】 • 实验动物:小白鼠,体重18~22g,实验 前禁食12h,不禁水。 • 实验器材:电子秤、注射器。 • 实验药品:盐酸普鲁卡因
(Procaine hydrochloride)
【实验步骤】
• 预实验 1.探索剂量范围:根据经验或文献,通过实验找出100%死亡
的最小剂量及0%死亡的最大剂量。此即上下限剂量(Dm,
Dn)。 2.确定组数、计算各组剂量:
r=1.17
• 组数(n):4组
• 按公式求公比r:
Dm r n 1 Dn
• 按公比求各组剂量: D1=Dn=124 mg/ml, D2=D1×r=145 mg/ml D3=D2×r=171 mg/ml, D4=D3×r=Dm=200 mg/ml
常见的药物半数致死量(LD50)的测定
常见的药物半数致死量(LD50)的测定1. 阿司匹林阿司匹林作为一种常见的解热镇痛药,其LD50值为每千克体重250500毫克。
在大鼠体内进行的实验表明,口服阿司匹林的LD50值约为每千克体重200400毫克。
2. 青霉素青霉素是一种广泛应用的抗生素,但其对某些动物(如小鼠、大鼠)的LD50值较高,约为每千克体重500010000单位。
需要注意的是,青霉素的毒性因物种而异,对人类的毒性较低。
3. 地高辛地高辛是一种用于治疗心脏病的药物,其LD50值为每千克体重13毫克。
在犬体内的实验显示,地高辛的LD50值约为每千克体重0.52毫克。
4. 吗啡吗啡是一种强效镇痛药,其LD50值为每千克体重300500毫克。
在大鼠体内进行的实验表明,口服吗啡的LD50值约为每千克体重400600毫克。
5. 苯巴比妥苯巴比妥是一种镇静催眠药,其LD50值为每千克体重200500毫克。
在小鼠体内进行的实验显示,苯巴比妥的LD50值约为每千克体重300400毫克。
需要注意的是,LD50值并非绝对固定,它受实验条件、给药途径、动物种类等多种因素影响。
因此,在评估药物安全性时,应以实际实验结果为准,并结合其他毒性指标进行综合分析。
同时,我们还需关注药物在人体内的实际毒性,以确保用药安全。
当然,让我们继续探讨药物半数致死量(LD50)的测定,并补充一些额外的信息。
6. 氯霉素氯霉素是一种广谱抗生素,其对小鼠的LD50值为每千克体重250300毫克。
然而,氯霉素的毒性在不同物种间存在差异,例如在猫体内的LD50值较低,约为每千克体重50毫克,这表明猫对氯霉素更为敏感。
7. 哌甲酯(利他林)哌甲酯是一种用于治疗注意力缺陷多动障碍(ADHD)的药物,其LD50值为每千克体重190毫克(大鼠口服)。
需要注意的是,哌甲酯的毒性作用可能与其药理作用相似,因此在用药时需严格控制剂量。
8. 硫酸亚铁硫酸亚铁是一种常用的补铁药物,其对大鼠的LD50值为每千克体重250300毫克。
半数致死量_实验报告
一、实验目的1. 了解药物半数致死量(LD50)的定义及其在药理学中的意义。
2. 掌握LD50的测定方法及计算过程。
3. 通过实验,了解药物剂量与毒性反应之间的关系。
二、实验原理半数致死量(LD50)是指在特定条件下,能够引起实验动物一半死亡的药物剂量。
LD50是衡量药物毒性的重要指标,对于新药筛选、临床安全用药及药物不良反应的监测具有重要意义。
本实验采用寇氏法(Karber法)测定药物LD50。
三、实验材料1. 实验动物:小白鼠100只,体重18-22g,雌雄各半。
2. 实验药品:待测药物(如普鲁卡因)。
3. 实验器材:电子秤、注射器、灌胃针(16号)、注射器(0.25、1、2、5ml)、吸管(0.1、0.2、0.5、1、2、10ml)、容量瓶(10、25、50ml)、烧杯(10、25、50ml)、滴管、外科剪、镊子等。
四、实验方法与步骤1. 实验动物的选择:选用初成年的小白鼠,体重18-22g,雌雄各半。
实验前对动物进行检疫,确保健康。
2. 剂量设计:根据预实验结果,将待测药物配制成不同浓度的溶液,设定4-5个剂量组,相邻两组剂量高剂量与低剂量之比的对数(相邻两组对数剂量的差值)为1:0.6~0.9。
3. 实验分组:将小白鼠随机分为5组,每组10只,雌雄各半。
4. 灌胃给药:按照预定剂量,用灌胃针将药物溶液灌胃给予小鼠,观察7天,记录不同剂量组小鼠的死亡情况。
5. 数据处理:计算每组小鼠的死亡率,根据寇氏法计算LD50。
五、实验结果1. 各剂量组小鼠的死亡率如下:剂量组 | 剂量(mg/kg) | 死亡率(%)-------|--------------|-----------1 | 0.06 | 202 | 0.12 | 403 | 0.24 | 604 | 0.48 | 805 | 0.96 | 1002. 根据寇氏法计算LD50:LD50 = 0.48 × 2 × (1 - 0.2) / (0.8 - 0.2) = 0.32 mg/kg六、实验讨论1. 本实验采用寇氏法测定药物LD50,结果表明待测药物的LD50为0.32 mg/kg,说明该药物具有一定的毒性。
半数致死量测定
测定半数致死量:实验器材:鼠笼,天平,砝码,1ml注射器,伤寒杆菌(细菌浓度1%、1.18%、1.14%、1.68%、2%;苦味酸。
实验方法:第一步:试验动物选择原则:1.种属:昆明鼠2.年龄、体重3.性别:雌鼠对药物的敏感性稍大于雄鼠。
雌雄各半。
实验前禁食12小时。
第二步:探索剂量范围。
已知MLD为100mg/kg,LD100为200mg/kg第三步:均衡随机分组。
每小组取50只小鼠,称重,标号,随机分为5组,为了避免各组的实验误差,应先将雌雄鼠分开,然后分别随机分到各组,保证每组动物中雌雄小鼠数量相同,体重相近。
第四步:各组剂量计算。
用寇氏法计算LD50,各剂量组要求按等比级数排列。
经过预实验,得知最大剂量也就是死亡率为100%的剂量为200mg/kg,最小剂量也就是死亡率为0%得剂量为100mg/kg,然后按照下列公式求出各组剂量间的比值,计算出各组剂量。
第五步:给药观察和记录。
在各实验组剂量确定以后,即可给药,给药后观察动物的一般情况,并记录动物死亡时的症状和死亡时间,按新药报批要求,一般需观察7天,因为学生实验时间有限,所以我们今天只观察2个小时。
2小时后,统计各组死亡率(用小数表示)。
第六步计算方法。
经上述实验得出各组死亡率之后,按下列公式计算LD50及其标准误和可信限。
LD50=log-1[Xm–i(∑P–0.5)]Xm ;I ;∑P;LD50的可信限=LD50(P+0.95)=LD50±2.68LD50(P=0.99)由于整个半数致死量实验比较繁琐,所需时间比较长,所以今天同学们作实验只需从第三步做起,也就是在已知MLD和LD100的情况下,求LD50。
做完实验后请同学们思考两道题。
在做实验之前,介绍一下小鼠的捉拿、标记及腹腔注射的方法。
小鼠牙长而尖锐,如果激怒它则容易被咬伤。
所以捉拿时动作要轻缓,现用右手拎住小鼠尾巴放于粗糙面上,轻轻向后拉扯,再用左手的拇指及食指抓住其两耳之间及关颈部皮肤,然后将小鼠腹部上翻,用左手无名指和小指夹住尾巴使其固定。
药物半数致死量的测定实验报告
药物半数致死量的测定实验报告摘要:
本实验通过对小白鼠进行药物半数致死量的测定,得出该药物
的LD50值为Xmg/kg,进而评估该药物的毒性和安全使用范围。
实验结果表明,本药物可达到治疗效果且安全使用。
引言:
药物毒性评价是新药开发的重要环节。
药物的毒性评价能够帮
助我们了解药物的毒性情况并确定安全使用范围,为药物的进一
步发展提供支持和保证。
LD50值是表明药物毒性的重要指标之一,是用来测量半数小白鼠死亡剂量的药物浓度,本实验旨在通过测
定药物的LD50值来评估药物的毒性。
材料与方法:
本实验使用小白鼠进行实验。
将小白鼠随机分成多次实验的不
同浓度组(mg/kg),每组分别注射药物。
注射完药物后,每组实
验小白鼠的死亡数和存活数记入实验记录表格中。
根据实验结果
绘制药物剂量-死亡率图,并计算出药物的LD50值。
结果:
在本实验中,我们测定出该药物的LD50值为Xmg/kg。
根据药物剂量-死亡率图可得出,当药物浓度为Xmg/kg时,小白鼠的死亡率达到50%。
讨论:
本实验结果表明,该药物的LD50值为Xmg/kg,表明该药物的毒性较低且安全使用范围在其LD50值以下。
这也为该药物的临床应用提供了科学依据。
同时,我们也需要意识到药物的毒性评价是一项复杂的工作,在实际应用中还需要综合考虑其他因素,以确保药物的安全有效使用。
结论:
通过本次实验测定,我们得出该药物的LD50值为Xmg/kg,表明该药物的毒性较低且安全使用范围在其LD50值以下。
该药物可达到治疗效果且安全使用。
机能学实验-药物半数致死量测定要点
2.82
7.18
6
2.76
7.24
7
2.71
7.29
8
2.67
7.33
9
2.63
7.37
10
2.60
7.40
12
2.54
7.46
15
2.47
7.53
18
2.41
7.59
20
2.38
7.62
24
2.32
7.68
25
2.31
7.69
30
2.26
7.74
40
2.17
7.83
50
2.10
7.90
LD50计算
1. 以对数剂量为x,相应的机率单位为y, 建立直线回归方程,求得a、b、r;
2. 根据50%动物死亡时机率单位为5 ( y ),FORECAST对数剂量x (logLic index, TI): LD50 / ED50. 两者平行时 用。
测定原理
量效反应线
机率单位 (Probit unit)
Y 5 x μ σ
死亡率在10%~90%之间的机率单位 简化公式:
Y 5 1.5 log( 0.029 P ) 1.029 P
P为死亡率。
【解】 0.025 kg × 110.8 mg/kg = 2.77 mg 1%溶度是指 1g/100ml = 10mg /ml 2.77 mg需药液0.277ml。
结果汇总
组别 剂量 对数剂量 动物数 死亡数 死亡率 机率单位
(mg/kg)
X
Y
1 110.8 2.0445 10
2 147.7 2.1694 10
然后每个区内动物随机分组。这样就能保证 每个剂量药物组内动物体重均衡。 • 23,23,23,23,24,24,24,24,24,25, 25,25,25,25,25,25,26,26,27,27, 28,28,29,30,30,31,32,32,33,33
药物的半数致死量
组别
死亡 剂量 对数剂量 率 P D(mg/kg) (logD) (F/n)
P2
1 2
3 4 5
145 163
184 208 235 2.37
0.3 0.7
0.3 0.3 0.7 ΣP=
0.09 0.49
0.09 0.09 0.49 ΣP2=
(1)计算LD50:
式中:Xm为最大剂量Dm的对数值;i为相邻两 组高低剂量比值的对数;P为各组死亡率; ∑P为各组死亡率总和。
A B
ED50 (mg/kg) 0.01
5
TI
0.1
10
(2)计算LD50的95%平均可信限的公式:
式中∑P2为各组死亡率平方和,n为各组动物数。
例:广西成人男子95%平均可信限:165±10cm
Let’s
Go
结果(mg/kg)
LD50 改良寇氏 95%可信限 197 183
~
210
LD50
Bliss 95%可信限
198
183
~
219
LD50 (mg/kg)
药物半数致死量(LD50)的测定
药理学教研室
一、目的
1、主要目的是学习测定药物LD50的方 法和计算过程。 2、通过学习,知道测定LD50的意义。
LD50 (mg/kg)
A B
ED50 (mg/kg) 0.01
5
TI
0.1
10
改良寇氏法— 四条件
剂量组≥4 相邻剂量组等比(r)
%
=2.35
10
6
2.动物的分组、给药、观察
(1)、分组 (2)、给药
半数致死量的测定
半数致死量的测定实验一半数致死量的测定半数致死量( LD 50 )是药物、毒物及病原微生物等毒力水平的一个标志。
它表示能使全部实验对象死亡半数的剂量或浓度。
由于生物间存在个体差异性,因此 LD 50 需用一批相当数量的实验对象进行实验方能测得,并且每种药物不同实验对象的 LD 50 值不相同。
测定 LD 50 的方法很多,如目测机率单位法、直线回归法、累计法及序贯法等。
由于寇氏法较常用,并有计算简便,结果较准确等特点,故专门介绍之。
[ 目的 ] 用寇氏法测定敌百虫对小白鼠的经腹腔注射的 LD 50 和 95 %可信限。
[ 方法 ] 寇氏法( K ?rbar氏法)[ 条件 ]1 剂量必须按等比级数(剂量对数按等级数)分组。
2 各组动物数应相等。
3 “反应”应大致呈正态分布。
最小剂量组的死亡率( P n )应为 0% ,最大剂量组的死亡率( P m )应为 100% ;如果 P n <20% 或 P m >80% 需用校正公式计算;如 P n >20% 或 P m <80% 则不能用此法计算。
[ 步骤 ]1 预备实验( 1 )摸索上下限:即用少量动物逐步摸索出使全部动物死亡的最小剂量( D m )和一个动物也不死亡的最大剂量( D n )。
方法是据经验或文献定出一个估计量,观察 2~3 只动物的死亡情况。
如全死,则降低剂量;如全不死,则加大剂量再行摸索,直到找出 P m =100% 和 P n =0% 的剂量,此两量分别为上下限。
( 2 )确定组数,组距及各组剂量①组数:一般 5 ~ 8 组,可根据适宜的组距确定组数,如先确定 5 组,若组距过大,可再增加组数以缩小组距。
有时也可根据动物死亡情况来决定增减组数。
②组距:指相邻两组剂量对数之差,常用“ d ”来表示。
D 不宜过大,因过大可使标准误增大;也不宜过小,因过小则组数增多,各组间死亡率重叠造成实验动物的浪费。
组距大小主要取决于实验动物对被试因素的敏感性。
药物急性毒性实验
药物急性毒性实验实验⼀药物急性半数致死量(LD50)的测定【⽬的】了解药物半数致死量(LD50)测定的意义、原理,掌握半数致死量的测定⽅法和计算过程。
【原理】LD50是指在⼀群动物中能使半数动物死亡的剂量。
由于实验动物的抽样误差,药物的致死量对数值⼤多在50%质反应的上下呈正态分布。
在这样的质反应中药物剂量和质反应间呈S型曲线,S型曲线的两端处较平,⽽在50%质反应处曲线斜率最⼤,因此这⾥的药物剂量稍有变动,则动物的死或活的反应出现明显差异,所以测定半数致死量能⽐较准确地反映药物毒性的⼤⼩。
【实验材料】1、动物:⼩⽩⿏,体重18-24g,雌、雄各半,实验前禁⾷12⼩时,不禁⽔。
2、药品:盐酸普鲁卡因,苦味酸。
3、器械:⼩⿏笼,天平,注射器(1mL),电⼦计算器。
【⽅法和步骤】(⼀)预备实验1、探索剂量范围:先找出100%及0%死亡的剂量,此即上下限剂量(D m及D n)。
⽅法是先取出⼩⿏9-12只,每组3只,按估计量(根据经验或⽂献资料定出)给药,如3只⼩⿏全死则降低剂量⼀半,如全不死则增加剂量⼀倍,如部分死亡,则按2:1的⽐例向上、向下调整剂量,由此找出上下限剂量。
2、确定组数,计算各组剂量:确定组数(G):可根据适宜的组距确定组数,⼀般分5-8个剂量组。
计算各组剂量:要求各组剂量按等⽐级数排列,在找出D m及D n和确定组数后,可按下列公式求出公⽐r:r再按公⽐计算各组剂量D1,D2,D3,D4,D5……D m,其中D1=D n=最⼩剂量,D2=D1?r; D3=D2?r; D4=D3?r; D5=D4?r; ……D G=D G-1?r。
r值⼀般以1.7~1.15之间为宜。
计算举例:已知某药在致死毒性实验中,Dm=187.5 mg/kg; Dn=76.8 mg/kg, 确定组数G=5,求r及各组剂量。
先代⼊公式求r=1.25,再计算各组剂量D1=Dn=76.8 mg/kg,D2=76.8?1.25=96 mg/kg, 依次计算D3,D4,及D G(D5)分别为120,150,187.5 mg/kg。
普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定和计算
3.观察试验结果:给药后即观察小鼠活动改变情况和死亡数,存活者一般都在15~20分 钟内恢复常态,故观察30分钟内的死亡率。
4.计算LD50及其95%可信限:
LD50计算方法有多种,这里介绍最常用的加权直线回归法(Bliss法)。此法虽计算步骤稍 繁,但结果较精确,实际应用时可借助于计算机。
首先,用较大的剂量间距确定致死剂量的范围,进而在此范围内设定若干剂量组,剂量按 等比方式设计,相邻两个剂量间距比例在0.65~0.85之间,给药后观察7~14天内动物一般情况 和死亡数,根据死亡率计算LD50。请注意:若死亡率为100%和0%的数据,其机率单位为+∞ 和-∞,数据可列于表格中,但不能用于计算。现用下述例子具体说明计算方法。
(4)LD50及其95%可信限:6.1532g/kg(5.4373-6.9634g/kg)
结果 1.报告实验日期,药品批号,生产厂名,小鼠的性别和体重范围,给药途径,给药后的中毒 症状;并将剂量(单位体重所用药量,mg/kg),死亡率等LD50的计算数据归纳简明的表格(参照 表11-6),报告LD50及其95%可信限主要计算过程和计算结果。 2.如实验失败或结果不理想,可按同样要求对下述练习题中的一个进行计算和报告。 练习题 1.将某种中药制剂给小白鼠灌胃后,48小时内各剂量组的死亡数如下,求该药的LD50及 其95%可信限。 灌胃剂量(g/kg): 5.12 6.40 8.00 10.0 12.5 死亡数/实验动物数: 1/10 2/10 4/10 7/10 9/10 2.小鼠皮下注射有机磷制剂对硫磷(1605) 1.8mg/kg,立即腹腔注射不同剂量的氯磷定进行抢救,观察生存率(即氯磷定的有效率)如下: 氯磷定剂量(mg/kg): 12.8 16.0 20.0 生存数/实验动物数: 1/10 6/10 9/10 求氯磷定的ED50及其95%可信限;如果氯磷定的LD50为173.6mg/kg,那么它的治疗指数 (TI)为多少?
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士的宁半数致死量(LD50)测定
操作版
【目的】
1.掌握药物半数致死量(LD50)测定的基本步骤;
2.掌握按改良寇氏法计算LD50的方法。
【原理】
LD50表示能使全部实验动物半数死亡的剂量,是以动
物死亡或存活作为质反应指标。
LD50与毒性呈负相
关。
当剂量取对数值时,曲线呈近似两端对称的S型,
对称点位于LD50。
LD50处斜率最大,灵敏度最高;曲
线两端平坦,在1%或100% 附近灵敏度最差,剂量
不易确定。
对称点附近量效关系呈直线关系,即该段
范围内效应百分率/比与对数剂量呈正比关系。
(见右
图)
测定LD50的方法有多种,但以改良的寇氏法计算
简便,结果较准确,比较常用。
对于毒性低的药物测不到LD50,则按最高可用的
浓缩浓度、以最大给药容积给药,即最大给药量,如
能导致实验动物死亡,可检测其最小致死量和最大耐
图质反应量效关系曲线
受量,否则即以最大给药量反映其安全性。
【材料】
动物:小鼠,雌雄兼用,18~22g。
药品:士的宁溶液(0.125mg/mL)。
器材:鼠笼,JY4001电子秤,1.0mL注射器,试管,试管架。
【方法】
1.预实验:取小鼠8~12只,分成4~5组,腹腔注射不同浓度的士的宁,摸索出可致小鼠大多数死亡的最小剂量(D m)及大多数小鼠不致死亡的剂量(D n)。
即找出引起0%到100%死亡率剂量的所在范围。
(参考剂量:D m为0.125mg/mL,0.1mL/10g)
2.正式实验:以预实验所获得的D m和D n确定正式实验组数及组间剂量比(分5个剂量组,按1:0.8组间等比)。
每组取10只小鼠,雌雄各半,随机分为5组。
药液按等比稀释,腹腔注射,给药容量都为0.1mL /10g。
给药后观察30分钟。
(正式实验观察7~14天,并设阴性对照组)
3.汇总实验结果,计算士的宁LD50及其95%可信限。
【结果】
表士的宁小鼠半数致死量测定实验结果
组别剂量(mg/kg)动物数(n)死亡数(n)死亡率
1
2
3
4
5
LD50=log-1[X m-i×(Σp-0.5)]
LD50的95%可信限=log-1(X50±1.96S X50)
LD50的平均可信限=LD50±(LD50的95%可信限的高限-低限)/2
S X50=i×[(Σp-Σp2)/(n-1)]1/2
注:【计算中通常以“10”为底】
X m为最大剂量组的对数值,i为相邻两剂量比值的对数(高剂量组作分子);
p为各组死亡率,Σp为各组死亡率总和;
X50为lgLD50,S X50为X50(lgLD50)的标准误差。
【讨论】——相关要点
1)概括实验结果;
2)判断结果是否符合改良寇氏法计算LD50的要求;若不符合,则选用例题操练计算过程。
3)列出LD50计算公式及演算过程;(具体计算过程可利用EXCEL完成,应学会相关的函数运算)4)列出计算公式演算LD50 95%可信限和LD50平均可信限;
5)说明测定LD50的意义;
6)毒性程度不同的药物,各有哪些指标反映其安全性;
7)检测中药安全性,首先以最大给药量作测试是否合理,为什么?
8)预试中如何用尽少的实验动物尽快获得D m和D n;如何依据D m和D n确定正式实验(组数、组间剂量比、各组剂量);
9)LD50的正式实验需不需要设立阴性对照?为什么?
10)……。
例题计算
某中药复方的急性毒性反应如下,请计算其LD50及其95%可信限。
组别给药量(mg/kg)动物数(n)死亡数(n)
1 3750 10 9
2 2810 10 7
3 2110 10 3
4 1590 10 2
5 1190 10 0
【结论】
(士的宁LD50是mg/kg。
)。