氨基酸的纸层析

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氨基酸的鉴定(纸层析法)

氨基酸的鉴定(纸层析法)1、掌握纸层析法的基本原理2、通过对氨基酸的分离，掌握纸层析的操作方法并学会分析未知样品中的氨基酸组分。

实验原理：1、层析法又称色谱法(Chromatography)，是一种物理的分离方法。

利用混合物中各组分物理化学性质的差异(如吸附办、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等)，使各组分以不同程度分布在固定相和流动相两相中，并使各组分以不同速度移动，从而得到有效的分离。

操作方式: 纸层析、薄层层析、柱层析等。

分离机理: 分配层析、吸附层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析等。

2、纸层析法是用滤纸作为情性支持物的分配层析法，展层溶剂由有机溶剂和水组成。

滤纸纤维上的羟基具有亲水性，在滤纸上水就被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相。

当有机溶剂(流动相)沿纸流动经过层析点时，层析点上溶质就在水相和有机相之间不断进行分配。

由于溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。

物质被分离后在纸层析图谱上的移动速率用Rf值来表示：3、在一定条件下，物质的Rf值是常数。

Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。

4、本实验利用纸层析法分离氨基酸，利用茚三酮反应将氨基酸层析点显色来鉴定氨基酸的种类。

试剂：1、酸性展层剂正丁醇：88%甲酸:水=15:3:2<V/V>2、显色储备液：0、4mol/L茚三酮-异丙醇:甲酸:水=20:1:5<V/V>3、标准氨基酸溶液(6mg/ml,苯丙氨酸Phe、甘氨酸Gly、脯氨酸Pro、组氨酸His)4、未知样品液：上述4种氨基酸中的一种或几种混合液(每组任选一个样品)实验器材：1、滤纸2、烧杯3、剪刀4、毛细管5、层析缸6、微量注射器7、电吹风8、保鲜膜操作方法：1、点样1、量取30ml层析溶剂、1ml显色贮备液于层析缸中，混匀密闭，静置。

（展层缸洗净后应除去多余的水，否则会影响展层溶剂的比例而影响展层）2、戴好手套，在桌上铺好一层保鲜膜。

氨基酸的分离鉴定纸层析法

氨基酸的分离鉴定纸层析法引言：氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于生物体的正常生理功能至关重要。

因此，准确地分离鉴定氨基酸成分对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。

纸层析法是一种简单而有效的分离和鉴定氨基酸的方法。

本文将介绍氨基酸的分离鉴定纸层析法并探讨其应用。

一、纸层析法的原理纸层析法是利用气相平衡原理进行物质分离的一种方法，其原理是根据物质在纸上各组分的相对亲疏性，通过运动距离的差异来分离物质。

在氨基酸的分离鉴定中，纸层析法通过将待测氨基酸溶液滴于纸上，然后将纸立起来，将纸的下端浸入相应的溶剂中，使得溶剂上升，通过毛细作用将氨基酸上提，最终实现氨基酸的分离和鉴定。

二、纸层析法的步骤1. 准备工作：制备纸层析板和显色剂。

2. 样品处理：将待测氨基酸溶解于适量的溶剂中，使其浓度适宜，然后滴于纸层析板上。

3. 运行纸层析：将纸层析板立起，纸的下端浸入相应的溶剂中，待溶剂上升到一定高度后，取出纸层析板。

4. 显色：将纸层析板放置于显色剂中，通过氨基酸与显色剂的反应，使得氨基酸在纸上显色。

5. 结果鉴定：根据显色的位置、颜色和强度等特征，对氨基酸进行鉴定和定量分析。

三、纸层析法的应用1. 氨基酸组成分析：纸层析法可用于分析蛋白质中氨基酸的组成，从而揭示蛋白质的结构和功能。

2. 质量控制：纸层析法可用于对食品、药品等中氨基酸含量的快速检测，保证产品质量和安全性。

3. 生物体内氨基酸代谢研究：纸层析法可用于研究生物体内氨基酸的代谢途径和代谢产物。

四、纸层析法的优缺点纸层析法作为一种常用的分离和鉴定氨基酸的方法，具有以下优点：1. 简单易行：操作简单，不需要复杂的仪器设备，成本低廉。

2. 分离效果好：对于氨基酸的分离效果较好，可以得到较为准确的结果。

3. 易于观察：通过显色剂的反应，可以直观地观察到氨基酸在纸上的分离和鉴定结果。

然而，纸层析法也存在一些缺点：1. 分离效果有限：对于某些结构相似的氨基酸，纸层析法的分离效果不佳，难以实现准确鉴定。

氨基酸的分离鉴定—纸层析法

（6）显色：用喷雾器在通风厨中向滤纸上均匀喷上0.1%茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。
（7）计算各种氨基酸的Rf值，并判断混合样品中都有哪些氨基酸，各人将自己的实验结果贴在实验报告上，见表2。
（8）以层析时间为横坐标，扩展剂上升高度为纵坐标画图，求出扩展剂上升到15cm时所需要的时间。
（3）规划：带上手套，取宽约10cm、高约15cm的层析滤纸一张。在纸的下端距边缘2～3 cm处轻轻用铅笔划一条平行于底边的直线A，在直线上做4个记号，记号之间间隔2cm，这就是原点的位置。另在距左边缘1cm处画一条平行于左边缘的直线B，在B线上以A、B两线的交点为原点标明刻度（以厘米为单位），参见下图。
【实验原理】
纸层析法（paper chromatography）通常用于蛋白质的氨基酸成分的定性和定量。1944年A．J．P．马丁第一次用纸层析分析氨基酸，得到很好的分离效果。到现在为止，纸层析法已经成为定性或定量测定多肽，核酸碱基，糖，有机酸，维生素，抗生素等物质的一种最简单易行的分离分析工具。
层析用于分析简单的混合物时可做单向层析。对于复杂的混合物，可做双向层析。其原理是以滤纸为惰性支持物的分配层析，层析溶剂由有机溶剂和水组成。滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。当有机相流经固定相时，由于分配系数不同，结果物质在两相间不断分配而得到分离。
【注意事项】
⑴.点样时要避免手指或唾液等污染滤纸有效面(即展层时样品可能达到的部分)。
⑵.点样斑点不能太大，防止层析后氨基酸斑点过度扩散和重叠，且点样后吹风温度不宜过高，以免样品变性(斑点发黄)。
⑶.展层开始时切勿使样品点浸入溶剂中。
⑷.展层剂要临用前配制，以免发生酯化，影响层析结果。

实验六----氨基酸纸层析法

氨基酸的纸层析法一．目的了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。

二、原理以滤纸为支持物的层析法，称为纸层析法。

纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。

展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。

有机溶剂在滤纸上又下向上移动的，称为上行法；有上向下移动的，称为下行法。

将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。

在一定条件下（室温、展层剂的组成、滤纸的质量、PH值等不变），不同的氨基酸有固定的移动速率（Rf值）Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离。

用混合氨基酸做样品时，如果只用一种溶剂展层，由于某些氨基酸的移动速率相同或相近，就不能将它们分开，为此，当用一种溶剂展层后，可将滤纸旋转90度，以第一次所的层析点为原点，在用另一溶剂展层，从而达到分离的目的。

这种方法称为双向层析法。

本试验主要介绍的是单向层析法。

其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成。

三、实验仪器1、新华滤纸2、层析缸3、细线4、点样管5、橡皮筋6、电吹风7、喷雾器四、实验试剂1、混合氨基酸（精氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸）2、展层剂：正丁醇：12%氨水：95%乙醇：蒸馏水=13：3：3：1（v:v）3、0.5%茚三酮—无水丙酮溶液：0.5g茚三酮溶于100ml无水丙酮，贮于棕色瓶中五、实验步骤1、取滤纸剪成20×10厘米的滤纸条一张，在一端打孔，系一根细线，在另一端2~3cm处用铅笔画一横线，中间画一圆点（原点）。

2、取毛细管一支(回收)，吸取氨基酸混合液，在原点处点样，样点直径不宜超过5mm,每点一次用吹风机吹干，点2~3次为佳。

3、点样后将滤纸放入层析缸中展层，注意点样线要高于层析液面，滤纸不要贴在层析缸璧上，当展层至另一端1~2cm处时，停止展层（大约2~3小时）。

实验六氨基酸的纸层析法

实验六氨基酸的纸层析法氨基酸是构成蛋白质的最基本的组成成分。

在生物化学和分子生物学实验中，常常需要对氨基酸进行分离和纯化。

纸层析法是一种常用的氨基酸分离和鉴定的方法，它采用纸张作为介质，利用氨基酸的性质在多次不同极性溶剂中的间歇性抽提来完成氨基酸的分离。

下面将介绍具体操作步骤。

一、实验原理氨基酸纸层析法是一种简单而有用的分离和鉴定氨基酸的方法。

其原理是根据氨基酸在不同相对极性的溶剂中的溶解度和色谱行为而进行分离。

实验中用的纸张是具有适当极性特性的滤纸，涂上0.001~0.002mol/L氯乙酸钠作为移动相。

固定相是纸张本身，通常取5×5 cm大小。

标记物一般是用19种常见氨基酸中的一种或混合某些氨基酸，它们分别在不同移动相中有不同的颜色分离性质。

标记物的溶液可以直接在纸上点斑或者先把样品在滤纸上打成碎粒，再加入稍许水均匀混合后点斑。

二、实验步骤1. 实验器材和试剂（1）氯乙酸钠；（2）19种氨基酸标准品；（3）滤纸。

2. 制备移动相将0.001~0.002mol/L氯乙酸钠溶液制备好，备用。

3. 准备试样将要分离的氨基酸标准品用适量的氯乙酸钠溶液稀释，制备出1~2mg/mL的样品，备用。

4. 载纸处理在纸片中央绘制一条垂直线，以绘制者的名字为记。

距离中央线约1cm处，打上精细的刻度线，用微孔钳取少量标样液，在对侧依次在距中央线约1.5cm处打上纸层印。

纸层印就是取少量液体滴到滤纸上产生的斑点。

约300ug/sample。

5. 开始层析在棉花球上，涂上一层氯仿，并立即用焊接器将其挥发掉，然后再涂一遍。

整个过程保持外壳密封状态。

涂的氯仿量要足够，可以完全覆盖整个纸层印，但不能过多。

否则，纸层印上的标样就会扩散到大范围，分辨率就失去了。

将试纸浸泡在移动相中。

移动相上升时，会将固定相上的氨基酸迅速带动并在移动相中逐级输送。

随着移动相液面逐渐提高，固定相的氨基酸成分逐渐被分离开来。

注意事项：（1）加样时，操作应小心、细致，尽可能用毫、微、纳级的物体。

氨基酸纸层析法

氨基酸纸层析法氨基酸纸层析法（paper chromatography of amino acids）是一种常用的分离和鉴定氨基酸的方法。

本文将详细介绍氨基酸纸层析法的原理、步骤、实验条件和数据处理方法等内容，以帮助读者更好地了解并应用这一实验技术。

一、氨基酸纸层析法的原理氨基酸纸层析法是利用氨基酸在纸上的分布系数和溶剂的渗透速度差异进行分离的方法。

其原理是在一根滤纸条上画上水平的线，将待测的氨基酸溶液直接点于纸条上，待溶液中的氨基酸离子在滤纸上沿渗透液前进，不同氨基酸在滤纸上的迁移速度不同，从而实现氨基酸的分离和测定。

二、氨基酸纸层析法的步骤1. 实验前准备（1）准备氨基酸样品，将其溶解在适当的溶剂中，并使用pH 计调节至适当的酸碱度。

（2）准备滤纸条，按照实验需要确定滤纸的宽度和长度。

（3）准备层析槽，将槽中的溶剂预先与上盖采光纸取代，避免有光照射到。

2. 进行层析实验（1）在滤纸条上绘制水平基线，并将标记的点分开，便于后续氨基酸的测定。

（2）将氨基酸溶液直接点于滤纸条上，点的位置要尽量靠近基线，以避免扩散的影响。

（3）将纸条的一端浸入含有适当溶剂的层析槽中，保持溶剂的面平稳。

（4）待溶液中的氨基酸在滤纸上渗透，不同氨基酸迁移的距离不同，最终在纸条上形成清晰的色斑。

（5）将纸条取出，用热风干燥，然后在紫外灯下进行观察和记录。

3. 数据处理将滤纸上的色斑分别用铅笔勾画出来，并测量它们与基线之间的距离。

然后，根据距离之间的比例关系来计算氨基酸在纸上的迁移速度，并与标准曲线进行比较，从而得出待测氨基酸的浓度。

三、氨基酸纸层析法的实验条件1. 溶剂体系常用的溶剂体系有正丙醇/ 乙酸/水 = 4:1:5、正丙醇/氨水/水 = 70:2:25等，需要根据实验需要确定溶剂的组成和比例。

2. 滤纸条的准备常用的滤纸有菱形滤纸和圆形滤纸，需要根据所需分离的氨基酸种类和数量决定滤纸的大小。

3. 实验条件实验应在干燥、通风的环境中进行，避免光照和温度过高。

氨基酸的分离鉴定——纸层析

氨基酸的分离鉴定——纸层析氨基酸是构成蛋白质的基本单元，其在生物体内的作用极为重要。

因此对氨基酸的分离和鉴定具有重要的研究意义。

纸层析是一种常用于分离和鉴定氨基酸的方法。

其原理是利用氨基酸在纸层析板上的运动速度不同，根据氨基酸之间的相互作用，分离出各种氨基酸。

实验步骤：1. 纸层析板的制备将一张高分子量纸，如Whatman No.1滤纸，剪成所需要的大小，并用铅笔在纸上画出氨基酸移行的标线。

2. 氨基酸样品的制备将所需的氨基酸样品溶解在适量的水中，浓度应为0.2-2%。

3. 样品的上样将氨基酸溶液利用微量注射器沿着标线往上移行。

在上样后，将纸层析板放在带有盖子的玻璃罩中，罩中放置一些饱和度为70%的异丙醇-水溶液，保持相对湿度为70%，使其充分展开。

5. 鉴定氨基酸将经过分离的氨基酸溶液阴性反应的氨基酸用二乙酰胺-丙酮混合溶液鉴定。

将0.2ml 二乙酰胺-丙酮混合溶液加入几滴氨基酸样品中，加热60℃-80℃，5分钟。

加入0.1ml氯仿，振荡混合，分离出上清液，上清液加入干燥瓶中，用喷雾器喷洒Ninhydrin试剂，加热于热水中1分钟，在冷水中快速降温附着氨基酸的部位呈现紫色。

注：二乙酰胺-丙酮混合溶液的组成为45%二乙酰胺，45％丙酮和10%水。

6. 结果的解释根据氨基酸在纸层析板上的运动速度和比色反应的颜色，确定样品中的氨基酸种类及含量。

优点：纸层析方法简便易行，无需昂贵的仪器设备，适用于小样品分析，能分离不同种类的氨基酸，并且结果清晰，操作简单。

限制：纸层析分离结果受到氢键作用和酸碱度等因素的影响，需要控制好上样的数量和浓度。

此外，纸层析无法分离胶原氨基酸和类似结构的氨基酸，且鉴定结果在颜色和色谱图谱方面有些模糊。

纸层析法分离鉴定氨基酸

纸层析法分离鉴定氨基酸纸层析法是一种常用的分离和纯化化学物质的实验方法，被广泛应用于有机合成、生物化学和食品科学等领域。

本文将介绍纸层析法在氨基酸分析中的应用。

一、实验原理氨基酸的分离和鉴定是生物化学实验中常用的手段。

氨基酸分子中含有羧基和氨基，可以通过纸层析法实现其分离。

纸层析法是一种基于物质分子间不同的吸附性能而进行分离的方法。

在纸层析实验中，将试样涂在纸层析片（通常为滤纸）的一侧，并将其放入溶剂（通常为水、丙酮、甲醇等）中，溶剂会沿纸层析片向上移动，分离出不同物质组分。

氨基酸分子的羧基和氨基分别具有不同的亲水性和疏水性，因此在纸层析分离中会表现出不同的吸附行为。

例如，疏水性较强的疏水基团会被生物样品或溶剂吸附，从而较慢地从纸层析片上移动，这些氨基酸通常出现在较高位置；而亲水性较强的羧基团则会被水吸附，因此移动速度较快，这些氨基酸通常出现在较低位置。

二、实验步骤1、制备样品：取大约1mg的氨基酸标准品或被测样品，加入1mL的去离子水中，并轻轻搅拌，制成1mmol/L的溶液。

2、制备纸层析片：取一张长约50cm的滤纸，将其叠成4层，然后将中间部分剪成30cm的长条，每条的宽度为1cm左右，用铅笔在底部标记出位置，离开1cm到1.5cm的距离。

3、涂样：在每个标记位置上滴加不同氨基酸溶液，每次加约5µL。

所有样品均按照氨基酸的相对极性从小到大进行涂样，从左到右编号，以便于鉴定。

4、溶剂选择：选择一种适宜的溶剂，通常为水、丙酮、甲醇等。

将滤纸上端放入溶剂中，约1cm左右的位置即可。

5、开始实验：用三角架和夹子将滤纸张贴在玻璃板上，使其呈现较小的倾斜面。

在滤纸的底部悬挂一张白纸，以便于观察样品在纸层析上的位置变化。

待溶剂无法再升高时，实验结束。

6、结果读取：按照行（从上到下）顺序，观察样品的移动距离。

三、实验结果及分析纸层析法可以分离并识别出存在于试样中的氨基酸分子，在实验中，通过观察样品从纸层析片底部开始向上移动的情况，可以确认每个氨基酸的相对位置和含量。

氨基酸的分离纸层析法

增加实验次数
综合多种方法
通过增加实验次数，可以降低实验误差，提高分离效果的可靠性。
可以结合其他分离方法如电泳、高效液相色谱等，以提高氨基酸的分离效果。
05 结论
纸层析法在氨基酸分离中的应用价值
高效分离
纸层析法能够将氨基酸进行高效分离，具有操作简便、分离效果好的
优点。
成本低廉
纸层析法所需材料成本较低，适合大规模分离操作，降低了生产成本。
定型方法
选择适当的定型方法，如自然晾干、加热或使用定型剂等，以固定氨基酸的位置并保持其稳定性。
04 实验结果分析
分离效果的评价
分离度
通过比较不同氨基酸的迁移距离，可以评估分离效果。分离度越大，说明氨基酸之间的分离越完全。
分辨率
分辨率是评价纸层析分离效果的重要参数，它反映了氨基酸在层析图谱中的清晰程度。分辨率越高，层析图谱越清晰。
02 纸层析法的基本原理
纸层析法的分离原理
纸层析法是一种基于不同物质在固定相和流动相之间分配系数差异的分离技术。在纸层析法中，固定相是纸上的纤维素，流动相是展开剂。当流动相携带待分离物质通过固定相时，由于分配系数不同，不同物质在固定相和流动相之间发生分离。
氨基酸在纸层析法中的分离是基于它们的极性、相对分子质量和其它物理化学性质的差异。极性较弱的氨基酸在流动相中的溶解度较大，移动较快；极性较强的氨基酸在固定相中的溶解度较大，移动较慢。
疾病诊断和治疗
某些氨基酸的缺乏或过量与某些疾病有关，检测氨基酸水平有助于疾病的诊断和治疗。
纸层析法的简介
定义
应用
纸层析法是一种基于滤纸的层析技术，用于分离和鉴定混合物中的组分。
纸层析法广泛应用于生物、化学和医学领域，用于分离和鉴定各种化合物，如氨基酸、糖类、脂类等。

氨基酸纸层析法

氨基酸纸层析法
氨基酸纸层析法是一种常用的氨基酸分析方法，它基于氨基酸在纸上迁移的速度差异实现氨基酸的分离和定量。

操作步骤如下：
1. 准备纸层析纸和适量的标准氨基酸溶液。

2. 在纸层析纸上绘制起始线，并标记出各个氨基酸的迁移距离标准曲线。

3. 取一定量的样品溶液，通过滴管或毛细管将其点于起始线上，并尽量避免超出纸张边缘。

4. 将纸张悬挂于合适的溶剂中，使溶剂迅速上升到纸张的边缘，不要让样品接触溶剂。

5. 当溶剂前进到一定高度时，取出纸张，晾干并用紫外灯照射。

6. 观察纸上的条带，根据标准曲线确定各个氨基酸的浓度。

氨基酸在纸层析纸上迁移的速度差异主要由以下因素影响：
1. 氨基酸的物理性质，如分子大小、极性和电荷等。

2. 纸层析纸的性质，如吸附性能和孔径大小等。

3. 溶剂体系的选择，如氨基酸与溶剂之间的亲疏性。

氨基酸纸层析法具有操作简便、成本低廉和分离效果好等优点，但由于纸张吸附作用的限制，对于极性和电荷相似的氨基酸分离效果较差。

在实际应用中，常结合其他分析方法使用，以提高分析的准确性和可靠性。

氨基酸的纸层析实验报告

氨基酸的纸层析实验报告实验目的：掌握氨基酸纸层析技术，通过纸层析分离和定性鉴定氨基酸。

实验原理：氨基酸的纸层析是利用氨基酸对不同的升华剂的选择性吸附而实现分离的一种分析方法。

纸层析方法较简便、快速，并能够同时分离、定量、定性分子。

这使它在生物化学、蛋白质化学、微量分析等领域中得到了广泛应用。

实验过程：1.准备氨基酸标准溶液：取苯丙氨酸、天门冬酰胺酸、色氨酸、赖氨酸、小麦谷氨酸和组氨酸各10毫克，加入10毫升0.02mol/L HCl和1滴10%酚酞指示剂，用水定容至100毫升。

2.制备氨基酸样品：取10毫升氢氧化钠溶液和0.3克氨基酸溶液混合，使其溶解并加热至沸腾，将样品冷却到室温，并加入1毫升0.02mol/L盐酸。

3.准备纸层析板：将富马酸纸(6cm*0.8cm)沿宽度中心折叠，使其成为4cm*0.8cm的大小；将纸上端用20毫升1-丙醇-甲醛-草酸钾(6:0.4:4)振荡2次，再用烘箱烘干，使其完全干燥。

4.纸层析：将样品以细滴的形式滴在纸层析板下端处，将纸放入深度为2-3厘米的玻璃瓶中，瓶底加入1毫升0.2mol/L HCl溶液，并将其密封。

板上的液相在升华过程中被移动，当溶剂距离顶端紫色标记线1厘米时把纸层析取出，用乙醇-水(1:1)固定，并在水龙头下冲洗。

5.涂上氨基酸显色剂：将纸层析用10%磷酸液浸泡5-10分钟，使显色剂透彻纸层析板。

6.观察分析：根据分离的结果和标准溶液进行比较，以鉴定和定量分析被检测的氨基酸。

实验结果：在纸层析板上，分离了7种氨基酸。

在试验中，我们发现沿着纸层析板距离最短的氨基酸为小麦谷氨酸，距离最远的是组氨酸。

结果与标准溶液分析结果相符，可以证明该方法可以用于氨基酸的分离和定性鉴定。

实验结论：该实验使用氨基酸纸层析技术，成功地将氨基酸分离并鉴定。

该方法应用广泛，简便易行，能够分离、定性、定量不同的化合物。

种类繁多、方法不断丰富，成为分析化学领域中重要的分析手段。

氨基酸的纸层析

氨基酸的纸层析引言：纸层析是一种简单而有效的分离和检测化合物的方法，它通过利用化合物在固定相（通常是纸张）上的迁移速度差异来实现分离。

氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，对于研究蛋白质的组成和性质具有重要意义。

因此，氨基酸的纸层析成为了研究氨基酸的常用方法之一。

一、纸层析的原理纸层析是一种液相分离技术，其原理基于化合物在固定相和流动相之间的分配行为。

固定相通常是由纸张组成的，而流动相则是溶液。

当试样溶液被加到纸上时，流动相开始向上渗透，溶解试样中的化合物。

然后，随着流动相继续上升，化合物会在纸上产生不同的迁移速度，从而实现分离。

二、氨基酸的纸层析方法氨基酸的纸层析方法通常涉及以下几个步骤：1. 准备纸层析纸：选择适合的纸张作为固定相，常用的有滤纸和纸胶片。

纸张应具有较好的吸水性和化学稳定性。

2. 制备流动相：根据需要选择合适的溶剂和缓冲液，以便溶解样品和调节pH值。

3. 样品制备：将待测氨基酸样品溶解在适当的溶剂中，并进行必要的稀释和调节pH值。

4. 上样：用毛细管或吸管将样品涂抹在纸上，通常在距离纸底端2-3厘米处。

5. 纸层析：将纸张立起放入含有流动相的容器中，使纸底端浸入溶液中，然后盖上盖子避免溶剂挥发。

让溶剂上升至合适的高度，以保证分离的有效性。

6. 可视化：取出纸张，干燥后，利用适当的显色剂或检测剂将化合物可视化。

常用的显色剂有尼尼醛试剂和二硝基苯胺。

7. 定量分析：通过比较样品斑点的Rf值（迁移率）和标准氨基酸的Rf值，可以对氨基酸进行定性和定量分析。

三、氨基酸纸层析的应用氨基酸的纸层析在生物化学和生物医学领域中得到了广泛的应用。

以下是一些常见的应用：1. 氨基酸分析：通过纸层析可以快速、简便地对复杂的氨基酸混合物进行分析，包括氨基酸的组成和相对含量。

2. 蛋白质组成分析：蛋白质是由氨基酸组成的，通过纸层析可以分析蛋白质中各种氨基酸的相对含量，进而了解蛋白质的组成和结构。

3. 蛋白质纯化：纸层析可以用于蛋白质的初步纯化，通过分离出目标氨基酸，从而减少后续纯化步骤的复杂性。

氨基酸的测定--纸层析法

【实验目的】1. 学习氨基酸纸层析法的基本原理2. 掌握氨基酸纸层析的操作技术【实验原理】层析分离技术是利用被分离的混合物中各组分物理化学的性质（分子的形状和大小、分子极性、吸附力、分子亲和力、分配系数等）的不同，使各组分以不同程度分布在两相（流动相和固定相）中，当流动相流过固定相时，各组分以不同的速度移动，从而达到分离。

纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。

纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。

在层析时，将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数（Kd）不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。

物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值（rat e of flow, Rf）来表示。

所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值：物质的移动速率以 R f 值表示： Rf=原点至层析点中心的距离/原点至溶剂前沿的距离=X/ Y在一定条件下某种物质的Rf值是常数。

Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。

【器材与试剂】（一）器材 1. 层析缸 2. 点样毛细管 3. 小烧杯 4. 培养皿 5. 量筒 6. 喷雾器 7. 吹风机（或烘箱）8. 层析滤纸（新华一号）9. 直尺及铅笔(二) 试剂1. 扩展剂(水饱和的正丁醇和乙酸混合液)2. 氨基酸溶液3. 显色剂:茚三酮溶液【实验步骤】1.准备滤纸:在纸的一端距边缘2～3㎝处用铅笔划一条直线，间隔2㎝作一记号。

2.点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在标记的位置上，点样时，毛细管口应与滤纸轻轻接触，样点直径一般控制在 0.3cm 之内。

实验十九氨基酸的纸层析

层析
酸层析液放入培养皿中，将滤纸垂直放置在培养皿中，盖紧缸盖。层析纸2/3ห้องสมุดไป่ตู้3/4处取出滤纸，电吹风吹干，划前沿线。
显色
喷雾器均匀喷上茚三酮溶液，电吹风热风吹干至看到AA彩色斑点。用铅笔将图谱上的斑点圈出，测Rf相关值。
五、本卷须知 1. 为了防止滤纸被手上的汗液污染，应
尽量在操作时带手套。 2. 重复点样时可用吹风机的冷风吹干样
Rf ＝
三、试剂和器材
1. 试剂 0.5%茚三酮溶液、标准氨基酸溶液溶剂系统：正丁醇－88％甲酸－水(15：3：2， V/V) 2. 器材层析缸、毛细管、电吹风
四、操作步骤
如下页所示。
操作流程：
点样
滤纸一边1.5厘米处划线，在线上等距离划6个点毛细管吸样品（约2cm高）点样，直径小于0.5cm，电吹风吹干，重复一次。干燥后将滤纸卷成圆形，缝合滤纸，注意两边缘不能接触。
品，喷了茚三酮后的显色那么要用热风吹干滤纸。
六、思考题 1、如何用纸层析法对氨基酸进展定性和
定量的测定？ 2、纸层析和柱层析、薄层层析、高效液
实验十二氨基酸的纸层析
一、实验目的掌握氨基酸纸上层析的方法和原理，学
会分析未知样品的氨基酸成分。二、原理
滤纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。有机相流经固定相支原持点到物层析时斑点，中与心的固距离定相之间连续抽提，使物质在原两点到相溶剂间前不沿的断距离分配而得到别离。溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示：

氨基酸的分离鉴定——纸层析法

原点到溶剂前沿的距离原点到层析斑点中心的距离
实验原理
• 茚三酮的显色原理氨基酸与茚三酮水合物在弱酸条件下共加热时，氨基酸被氧化脱氨、脱羧，而茚三酮水合物被还原，其还原物可与氨基酸加热分解产生的氨结合，再与另一分子茚三酮缩合成为蓝紫色化合物，称为罗曼紫（Ruhemann's purple）。
实验试剂与仪器
• 试剂纯净的赖氨酸、亮氨酸、丙氨酸、天冬氨酸 8×10E-3mol/L溶液；四种氨基酸混合溶液（每种浓度与对应纯净溶液一致）；2.5%茚三酮丙酮溶液；酸性展层剂（正丁醇：88%甲酸：水 =60：17：8）。 • 仪器钟罩×1、培养皿×1、小烧杯10ml×1、层析柱×1、小漏斗×1、新华一号滤纸（14cm×17cm）×1、电吹风、烘箱、毛细管、订书机，及其他常用仪器。
实验结果及分析
——图像实例
实验结果及分析
——各氨基酸比移值Rf
氨基酸
Rf
赖氨酸
0.2294
天冬氨酸
0.3814
丙氨酸
0.5771
亮（白）氨酸
0.8609
在同一实验条件下，比移值Rf主要取决于分配系数，不同的物质分配系数不同，也就有不同的Rf 。此外，溶剂的溶质的性质、滤纸的性质、展层的温度和p H值均会影响比移值Rf。实验中，Rf值与个人操作及具体实验条件息息相关，存在一定波动，但总体趋势相同。
• 纸层析纸层析法属于分配层析，层析滤纸为载体，流动相是指层析液，在毛细拉力作用下，层析液能不断由下向上流动。固定相是指被吸附在滤纸纤维之间的水分。由于纤维素上的羟基具亲水性使这部分水束缚在纤维素周围，不易扩散而成为固定相。
实验原理
• 在层析过程中，当层析液在毛细拉力作用下，上升流经滤液滴点时，滴点上的氨基酸就相继融入层析液，随着层析液上升，并发生在分配，即有一部分色素从层析液分配溶解到固定相中，直到平衡。由于分配系数的不同，那些分配系数大的氨基酸分子，随层析液向上移动得快，形成的斑点集中在滤纸的上部；而分配系数小的氨基酸分子，随层析向上移动得慢，形成的斑点集中在滤纸的下面。

03-氨基酸的纸层析

二、实验原理
1．层析法
2. 层析系统的基本组成
3. 比移值（Rf）的计算
Rf＝b/a
ab
a：原点到溶剂前沿的距离；
b：原点到层析点中心的距离。
三、实验器材
1. 常规的玻璃器皿 2. 毛细管、吹风机、针线 3. 层析杠、分液漏斗分液漏斗的检漏方法，装入少量水，观察旋塞处是否漏水；倒置后观察瓶塞处是否漏水；瓶塞旋转180度后再次倒置检漏。 4. 喷、实验器材
氨基酸的纸层析
四、材料与试剂
五、操作方法
六、注意事项
一、实验目的
1．掌握纸层析法的基本原理。根据混合物各组分的极性和分子量的差别，在固定相上随流动相运动的速率不同，从而得到分离。平行条件下，比移值为一确定值，与标准物对比可用于未知成分鉴定 2．掌握纸层析法的基本操作方法。
溶剂前沿
a 层析距离12-15cm b
点样间距2cm 底部2cm
赖氨酸，甘氨酸，脯氨酸，缬氨酸，亮氨酸
六、注意事项
1．用移液管准确吸取所需试剂。 2. 禁止徒手操作滤纸，禁止铅笔以外的笔来标记。标记时候注意纸纹。顺着纸纹扩展。 3. 毛细管顶端要圆滑，点样品要均衡。
4. 每次点样吹干后再点样。
四、材料与试剂
1．原始实验材料：
氨基酸溶液（混合的和单个氨基酸）
2. 其它试剂
（1）扩展剂：
20mL正丁醇和5mL冰醋酸加入分液漏，再加入15mL蒸馏水混匀，静置分层（15min左右），放出下层水层，留下上层有机相。把有机相倒入培养皿中，置于层析缸内。
四、材料与试剂
2. 其它试剂
（2）氨基酸溶液：
五、操作方法
5. 扩展。用针线封成筒状，放入层析杠里的扩展剂中，垂直站立。扩展距离约12-15cm时（约2h），用铅笔标记溶剂前沿。戴手套缝合，滤纸边缘不能接触，不能用胶带纸粘贴。 6. 显色。吹干后均匀喷上显色剂，再吹干（5min）。 7. 铅笔描出层析点，拓写到实验报告上，标注相关参数，并计算每个氨基酸的Rf值。 8. 完成实验报告，讨论混合样品的组分鉴定。

实验5 氨基酸纸层析

实验五氨基酸纸层析法一、目的1、了解并掌握氨基酸纸层析的原理、意义和具体操作。

2、了解不同溶剂体系对样品的分离效果；3、了解氨基酸的一些理化性质。

二、原理用滤纸为支持物进行层析的方法，称为纸层析法。

纸层析所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，水是固定相，有机溶剂是流动相。

溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向下移动的，称下行法。

将样品点在滤纸上（此点称为原点），进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。

出于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。

溶质在滤纸上的移动速率用R f值表示：R f=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离只要条件（如温度、展层溶剂的组成）不变，R f值是常数，故可根据R f值作定性依据。

样品中如有多种氨基酸，其中某些氨基酸的R f值相同或相近，此时如只用一种溶剂展层，就不能将它们分开。

为此，当用一种溶剂展层后，将滤纸转动90°，再用另一溶剂展层，从而达到分离的目的，这种方法称为双向纸层析法。

氨基酸无色，利用茚三酮反应，可将氨基酸层析点显色作定性、定量用。

三、实验器材滤纸（大滤纸，新华双圈滤纸60cm×60cm等）烧杯，剪刀，层析缸，毛细管，电吹风，培养皿，小订书机等。

四、实验试剂四种氨基酸：组氨酸，酪氨酸，脯氨酸，精氨酸各1g正丁醇（A.R.），正丙醇（A.R），95%乙醇，甲酸，0.4mol/L茚三酮-异丙醇五、操作1、配制氨基酸溶液：分别称取组氨酸，酪氨酸，脯氨酸，精氨酸60mg，分别溶解在10mL 0.1mol/L的盐酸溶液中，贴好标签（6mg/ml）。

极性不相似样品：分别称取60mg组氨酸，酪氨酸，脯氨酸，混合溶解在10mL 0.1mol/L的盐酸溶液中。

极性相似样品：分别称取60mg组氨酸、精氨酸，混合溶解在10ml 0.1mol/L的盐酸溶液中。

实验一氨基酸的分离鉴定纸层析法

分离鉴定方法：通过比较氨基酸标准品的Rf值，确定样品中各氨基酸的种类。也可以采用其他方法如色谱法、质谱法等对分离出的氨基酸进行鉴定。
02
实验原理
纸层析法的原理
纸层析法是一种基于物质在固定相和流动相之间分配系数的差异进行分离的方法。在纸层析中，固定相是纸纤维上的水分子，而流动相是溶剂。当流动相通过固定相时，物质在两相之间的分配系数不同，导致它们在固定相和流动相之间的移动速度不同，从而实现分离。
01
02
03
改进实验操作流程
进一步规范实验操作步骤，提高实验效率。
优化实验条件
尝试不同的实验条件，如温度、湿度、展开剂等，以提高实验结果的准确性和可靠性。
引入先进技术
考虑引入高效液相色谱等技术手段进行氨基酸的分离鉴定，以提高分离效果和鉴定精度。
THANKS
感谢观看
通过纸层析法，可以根据氨基酸的极性大小将其分离成不同的组分。
影响氨基酸分离的因素
01 02
流动相的组成
流动相的组成对氨基酸的分离效果有显著影响。改变流动相的组成可以调整氨基酸在固定相和流动相之间的分配系数，从而改变它们的移动速度。
固定相的性质
固定相的粒径、吸附能力等性质也会影响氨基酸的分离效果。选择合适的固定相可以提高分离效果和分辨率。
准备实验材料
选择适当的滤纸、展开剂、氨基酸样品等。
展开
将滤纸悬挂在展开剂中，控制展开剂的流速和高度，确保展开充分。
观察和记录
观察各氨基酸在滤纸上的位置，记录各组分的Rf值（相对迁移率）。
了解氨基酸的理化性质和分离鉴定方法
氨基酸的理化性质包括极性、溶解度、酸碱性、光学活性等。这些性质决定了氨基酸在纸层析法中的分离效果。

生物化学实验氨基酸的纸层析法

生物化学实验氨基酸的纸层析法实验氨基酸的纸层析法一、目的了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法。

二、原理以滤纸为支持物的层析法，称为纸层析法。

纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。

展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力强;有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。

有机溶剂在滤纸上又下向上移动的，称为上行法;有上向下移动的，称为下行法。

在一定条件下(室温、展层剂的组成、滤纸的质量、PH值等不变)，不同的氨基酸有固定的移动速率(Rf值)Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离用混合氨基酸做样品时，如果只用一种溶剂展层，由于某些氨基酸的移动速率相同或相近，就不能将它们分开，为此，当用一种溶剂展层后，可将滤纸旋转90度，以第一次所的层析点为原点，在用另一溶剂展层，从而达到分离的目的。

这种方法称为双向层析法。

本试验主要介绍的是单向层析法。

其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成。

、实验仪器三1、新华滤纸2、层析缸3、细线4、点样管5、橡皮筋6、电吹风7、喷雾器四、实验试剂1、混合氨基酸溶液(甘氨酸，苯丙氨酸)，甘氨酸溶液，苯丙氨酸溶液2、展层剂:正丁醇:12%氨水:95%乙醇:蒸馏水=13:3:3:1(v:v)3、0.5%茚三酮—无水丙酮溶液:0.5g茚三酮溶于100ml无水丙酮，贮于棕色瓶中五、试验步骤1、取滤纸剪成20×10厘米的滤纸条一张，在一端打孔，系一根细线，在另一端2~3cm处用铅笔画一横线，中间画一圆点(原点)。

2、取毛细管一支(回收)，吸取氨基酸混合液，在原点处点样，样点直径不宜超过5mm,每点一次用吹风机吹干，点2~3次为佳。

3、点样后将滤纸放入层析缸中展层，注意点样线要高于层析液面，滤纸不要贴在层析缸璧上，当展层至另一端1~2cm处时，停止展层(大约2~3小时)。

第六周-氨基酸的纸层析

生命科学学院一实验目的二实验原理生命科学学院生命科学学院pctlccclplcmplchplc生命科学学院分配系数溶质在固定相的浓度cs溶质在流动相的浓度生命科学学院迁移率值的主要决定因素是分配系数
生命科学学院
生物化学实验
氨基酸的分离鉴定 -------纸层析法
生命科学学院
一、实验目的
通过对氨基酸的分离，学习纸层析的基本原理和操作方法。
(3) 显色剂：0.1%水合茚三酮乙醇溶液。 2. 器材层析缸、毛细管、电吹风、PE手套
生命科学学院
四、实验步骤
1．将配好的层析液(约50-60mL)倒入层析缸中，液高0.3cm-0.4cm，盖紧缸盖（确定密封），放置以饱和层析缸。 2．取层析滤纸一张。在垂直于滤纸的纹路一端距边缘1.5cm处用铅笔划一条直线，在此直线上每间隔2cm作一记号，作为点样位置（共6点），并用铅笔在点样点下端写出所点氨基酸的名称。 3．点样：用毛细管吸取样品约1-1.5cm高，将各氨基酸样品分别点在这六个位置上，用电吹风冷风吹干后再点一次，共点三次。每点在纸上扩散的直径最大不超过0.5 cm。
越是随移动相移动得迅速。
生命科学学院
迁移率Rf ＝
原点到层析斑点中心的距离
原点到溶剂前沿的距离
Rf 值的主要决定因素是分配系数（α）。对于某一物质在一定条件下的α值是固定的,因此Rf 值为其特征常数。
生命科学学院
Rf 值的影响因素：
1. 氨基酸的结构: 相似相溶。氨基酸分子极性的大小决定了氨基酸在水和有机溶剂之间的分配情况。氨基酸极性越低，越容易溶于有机溶剂； 2. 溶剂：同一氨基酸在不同溶剂中的Rf值不同； 3. pH值：溶液的pH值影响氨基酸的解离情况，从而影响氨基酸的极性。如酸性氨基酸在酸性溶液中所带净电荷更少，Rf值更大。