鸡胚接种

鸡胚接种技术
前言
1911年应用鸡胚研究鸡肉瘤病毒，后可用于痘病毒、 正/副粘病毒和疱疹病毒、立克次体等
鸡胚接种技术的优点:
– 为一活的机体，有血管神经及脏器 – 可多种途径接种，病毒易繁殖，在病毒感染的膜和液体含有
大量的病毒 – 鸡胚来源充足，很少携带病毒和细菌，对多种病毒敏感，不
产生抗体
缺点：
– 不产生特异性指征；可被食入的抗生素污染；可携带细菌 （沙门氏菌）和病毒（Rous肉瘤病毒）
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一、鸡胚的结构和生理
卵壳与壳膜：
– 卵壳位于最外层的坚硬壳层 – 壳膜位于卵壳的下层，允许气体和液体分子交换，因此培
养鸡胚需一定的湿度和气体
气室
– 功能主要是呼吸和调节压力
绒毛尿囊膜
免病毒凝集红细胞造成滴度的下降
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四、病毒的检测
无菌试验
– 目的:证实收集的鸡胚是否受到细菌的污染 – 方法:
❖收集鸡胚组织接种肉汤观培养 ❖37度培养36h ❖肉汤清亮则无污染,肉汤浑浊或有菌落,说明鸡胚被细菌污染
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四、病毒的检测
检测方法
– 直接观察法
❖在绒毛尿囊腔形成损害或疱疹:如痘类病毒和疱疹病毒,常产生白色 或灰色痘疱,并有充血
– 壳膜之下，主要是胚胎的呼吸器官
羊膜
– 胚胎的最内层包被，含羊水，胚胎在其中
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尿囊腔
– 位于绒毛尿囊腔和羊膜之间 ，胚胎排泄器官 – 含5－20ml尿囊液，含大量的尿酸盐 – 为减少沉淀，盐水稀释再4℃保存
卵黄囊
– 主要营养的储藏场所，为胚胎提供营养
卵白
– 外于卵的锐端，为胚胎发育晚期提供营养
检卵
– 目的标记气室和胚胎位置，了解胚胎活动情况 – 血管是否明显；有无胎动；
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三、鸡胚接种途径及方法
尿囊腔接种
– 流感病毒、流行性腮腺炎病毒、新城鸡瘟病毒的传代 – 取9－11日龄的鸡胚 – 检卵灯下划出气室和胚胎位置 – 收集尿囊液前4 ℃冰箱过夜
羊膜腔接种
– 分离流感病毒；收集羊水和尿囊液 – 收集前4 ℃冰箱过夜，目的是冻死鸡胚，使血液凝固，避
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二、鸡胚的孵育和检查
受精鸡卵的供给
– 没有受到病毒和细菌的污染如新城鸡瘟病毒、布氏杆菌 – 培养立克次体和衣原体，不能来自食用抗生素的鸡
鸡胚的孵育
– 温度为38～39 ℃ – 湿度为40％－70％ – 翻蛋：防止蛋白粘连，促进羊膜运动和空气流通 – 通风：排出CO2和吸入O2
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❖引起鸡胚死亡:如新城疫病毒、乙脑病毒 ❖造成鸡胚损害和胚胎生长迟缓
– 实验检测法
❖血凝试验和血凝抑制试验：流感病毒的存在 ❖中和实验、IFA ❖PCR
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第五节 鸡胚接种技术的应用
病毒的培养、分离与鉴定
– 流感病毒的分离和鉴定 – 禽流感病毒的分离和鉴定
疫苗的研制
– 活疫苗和死疫苗