动物组织石蜡切片制作PPT课件
合集下载
石蜡切片PPT课件
• 透蜡温度要恒定，不第可21忽页/共高26忽页 低；操作要迅速，在
石蜡切片机
第22页/共26页
横向调整旋钮
蜡块竖向调整旋钮 蜡块固定器锁紧扳手 蜡块钳 旋转手轮 刀片固定旋钮
手轮停止旋转手柄 滑动刀座
离合器
切片接收托盘
切片厚薄粗调器 切片厚薄微调器
切片刀倾斜角度调整扳手
第23页/共26页
第24页/共26页
第17页/共26页
17、脱水Ⅱ
• 放入95%乙醇中洗去多余的红色，然后放入无水乙醇中3～5min。最后用吸水纸吸干多余的乙醇。 第18页/共26页
18、透明
• 切片放入二甲苯-乙醇等量混合液中约5min，然后放入纯二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3～5min。二甲苯应尽量保持 无水，应经常更换，或用纱布包无水硫酸铜放入染色缸内吸收水分。切片如在二甲苯中出现白雾现象，说 明脱水未尽，应退回乙醇中重新脱水，否则切片难以镜检。
第14页/共26页
14、漂洗
• 切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。低倍镜检查见细胞核呈蓝色、结构清楚；细胞质或结缔组织纤维 成分无色为标准。然后放入蒸馏水中漂洗一次。
第15页/共26页
15、脱水Ⅰ
• 切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各3～5min。
第16页/共26页
16、复染
• 用0.5%伊红乙醇液对比染色2~5min。伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏木精染细胞核的浓淡相配合， 如果细胞核染色较浓，细胞质也应浓染，以获得鲜明的对比。反之，如果细胞核染色较浅，细胞质也应淡 染。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。
第3页/共26页
【实验过程】
石蜡切片Ⅰ
• 取材 • 固定 • 洗涤 • 脱水 • 透明 • 透蜡 • 包埋 • 切片 • 贴片
石蜡切片机
第22页/共26页
横向调整旋钮
蜡块竖向调整旋钮 蜡块固定器锁紧扳手 蜡块钳 旋转手轮 刀片固定旋钮
手轮停止旋转手柄 滑动刀座
离合器
切片接收托盘
切片厚薄粗调器 切片厚薄微调器
切片刀倾斜角度调整扳手
第23页/共26页
第24页/共26页
第17页/共26页
17、脱水Ⅱ
• 放入95%乙醇中洗去多余的红色，然后放入无水乙醇中3～5min。最后用吸水纸吸干多余的乙醇。 第18页/共26页
18、透明
• 切片放入二甲苯-乙醇等量混合液中约5min，然后放入纯二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3～5min。二甲苯应尽量保持 无水，应经常更换，或用纱布包无水硫酸铜放入染色缸内吸收水分。切片如在二甲苯中出现白雾现象，说 明脱水未尽，应退回乙醇中重新脱水，否则切片难以镜检。
第14页/共26页
14、漂洗
• 切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。低倍镜检查见细胞核呈蓝色、结构清楚；细胞质或结缔组织纤维 成分无色为标准。然后放入蒸馏水中漂洗一次。
第15页/共26页
15、脱水Ⅰ
• 切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各3～5min。
第16页/共26页
16、复染
• 用0.5%伊红乙醇液对比染色2~5min。伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏木精染细胞核的浓淡相配合， 如果细胞核染色较浓，细胞质也应浓染，以获得鲜明的对比。反之，如果细胞核染色较浅，细胞质也应淡 染。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。
第3页/共26页
【实验过程】
石蜡切片Ⅰ
• 取材 • 固定 • 洗涤 • 脱水 • 透明 • 透蜡 • 包埋 • 切片 • 贴片
石蜡切片技术课件
第25页，幻灯片共46页
二、固定的目的和效果 固定组织的目的是设法得到接近正常生命
状态的细胞结构，有人说“形态学的美是 良好固定产物”，这说明固定的特殊重要 作用。
第26页，幻灯片共46页
1、抑制自溶和腐败： 组织的固定能保持细胞与生活时的形态 相似。因为当机体生命活动停止、或局部器官、组织割离机体 之后，组织细胞的代谢功能即行丧失，新鲜组织如果不经固定 ，任意放置，由于细胞内酶对蛋白质的分解，以及细胞的孳生 等各种因素的作用，则易因细菌繁殖而致组织腐烂。细胞内的 蛋白质分解酶将蛋白质分解为氨基酸后脱离细胞而引起组织的 自溶。
第9页，幻灯片共46页
1. 了使组织切片的结构清楚，取材要及时，组织块必须争取时间
及时固定，组织的固定以愈新鲜愈好。
2. 取材时对大体标本（肉眼标本）绘制图象，进行仔细描述 。包括形状、大小，硬度，颜色，病灶（或可疑病变）部位等 。对所取的组织应定位编号。
3. 切取各组织块时，切勿挤压损伤，对典型或具有教学和 科研价值的肉眼标本，不能因取材而对标本造成人为的“ 病变”。
任何固定液对人体都有损害作用，因此固定液的容器必须密闭，以防挥发损伤 器官和眼睛，忌用手与固定剂直接接触，以免损伤皮肤。
第32页，幻灯片共46页
四、固定剂的选择 理想的固定剂应该具备下列几种性能： 1、渗透性强：固定剂必须能迅速渗入组织，这样组织内各种成分才能
尽快地被固定在原位置，而不致弥散。 2、组织在固定液的作用下，不应发生显著的收缩和膨胀现象
福尔马林主要是由甲醛的聚合形式构成，然而聚合形式的固定效
果低于单体形式构成的10%福尔马林，为阻止在放置一定时间 的重聚作用，一般将溶液的PH值调节至中性或偏碱性。
10. 切取镜检组织块后，可将剩余的组织放入70%洒精 中保存，这样有利于日后再取材切片时的细胞染色 。
二、固定的目的和效果 固定组织的目的是设法得到接近正常生命
状态的细胞结构，有人说“形态学的美是 良好固定产物”，这说明固定的特殊重要 作用。
第26页，幻灯片共46页
1、抑制自溶和腐败： 组织的固定能保持细胞与生活时的形态 相似。因为当机体生命活动停止、或局部器官、组织割离机体 之后，组织细胞的代谢功能即行丧失，新鲜组织如果不经固定 ，任意放置，由于细胞内酶对蛋白质的分解，以及细胞的孳生 等各种因素的作用，则易因细菌繁殖而致组织腐烂。细胞内的 蛋白质分解酶将蛋白质分解为氨基酸后脱离细胞而引起组织的 自溶。
第9页，幻灯片共46页
1. 了使组织切片的结构清楚，取材要及时，组织块必须争取时间
及时固定，组织的固定以愈新鲜愈好。
2. 取材时对大体标本（肉眼标本）绘制图象，进行仔细描述 。包括形状、大小，硬度，颜色，病灶（或可疑病变）部位等 。对所取的组织应定位编号。
3. 切取各组织块时，切勿挤压损伤，对典型或具有教学和 科研价值的肉眼标本，不能因取材而对标本造成人为的“ 病变”。
任何固定液对人体都有损害作用，因此固定液的容器必须密闭，以防挥发损伤 器官和眼睛，忌用手与固定剂直接接触，以免损伤皮肤。
第32页，幻灯片共46页
四、固定剂的选择 理想的固定剂应该具备下列几种性能： 1、渗透性强：固定剂必须能迅速渗入组织，这样组织内各种成分才能
尽快地被固定在原位置，而不致弥散。 2、组织在固定液的作用下，不应发生显著的收缩和膨胀现象
福尔马林主要是由甲醛的聚合形式构成，然而聚合形式的固定效
果低于单体形式构成的10%福尔马林，为阻止在放置一定时间 的重聚作用，一般将溶液的PH值调节至中性或偏碱性。
10. 切取镜检组织块后，可将剩余的组织放入70%洒精 中保存，这样有利于日后再取材切片时的细胞染色 。
第二讲 石蜡切片技术1：动物麻醉与取材
（16）神经 ）
部位：坐骨神经、股神经。 部位：坐骨神经、股神经。 方法：横切。 方法：横切。 注意：两端结扎固定，然后投入固定液中。 注意：两端结扎固定，然后投入固定液中。
（17）大脑 ）
部位：中央前回或后回。 部位：中央前回或后回。 方法：垂直切入。 方法：垂直切入。 注意：皮质、髓质均切到。 注意：皮质、髓质均切到。
（20）内耳 ）
动物：豚鼠等较小的动物。 动物：豚鼠等较小的动物。 方法：整体取材。 方法：整体取材。 注意： 先用注射法固定 ， 然后将内耳整体取下 并投 注意 ： 先用注射法固定， 然后将内耳整体取下并投 入固定液中继续固定。 此外， 需用火棉胶包埋切片。 入固定液中继续固定 。 此外 ， 需用火棉胶包埋切片 。
3．取材注意事项 ．
（1）动作轻柔，避免挤压组织。一般用刀片，少用 ）动作轻柔，避免挤压组织。一般用刀片， 或不用剪刀， 切取时要一刀下去， 或不用剪刀 ， 切取时要一刀下去 ， 不要来回拉锯式 拖动。 拖动。 内完成。 （2）及时取材。动物死后 ）及时取材。动物死后30min内完成。若制作电 内完成 镜标本，最好10min内完成。 内完成。 镜标本，最好 内完成 （ 3） 组织块大小适中 ， 一般为 ×1×0.3~0.5cm， ） 组织块大小适中， 一般为1× × ， 并有代表性。 并有代表性。 （4）取材后及时固定。 ）取材后及时固定。
十二 指肠、空肠、回肠
肠绒毛
大肠：肠腺、淋巴组织
（7）肾 ）
动物：较小者为好。 动物：较小者为好。 方法： 最好先进行灌注固定， 而后取材， 方法 ： 最好先进行灌注固定 ， 而后取材 ， 即从肾动 脉注入固定液， 同时切开肾静脉， 当血液流尽后， 脉注入固定液 ， 同时切开肾静脉 ， 当血液流尽后 ， 将全肾投入固定液中固定2~4h后，再沿正中矢面剖 将全肾投入固定液中固定 后 然后在任一半面上， 开 ， 然后在任一半面上 ， 从皮质向髓质的方向切一 扇形组织块， 以确保皮质、 髓质完全， 扇形组织块 ， 以确保皮质 、 髓质完全 ， 再投入固定 液继续固定。 液继续固定。 注意：皮质、髓质一定要完整。 注意：皮质、髓质一定要完整。
最新实验11生物显微制片技术PPT课件
• 固定：用化学药液浸渍切成小块的新鲜材料，迅 速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细 胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化， 尽可能保持其活体时的结构。此外固定还有使组 织硬化作用，助染作用。此外还有物理方法如干 燥、高热和低温骤冷等方法固定。
• 洗涤与脱水：
• 洗涤：固定后的组织材料需除去留在组织内的固 定液及其结晶沉淀，以免影响以后的染色效果。多 以流水冲洗。
4.2 石蜡切片法（根、茎、叶）
• 显微观察，便于器官的立体重构。 • 硬质材料可用滑走切片机，一般可用手摇切片机。 • 程序：取材（0.5-1cm3）→固定（卡诺、FAA，2-24h，
材料有空气的需抽气） →洗涤（70%乙醇2次） →脱水 （80 % 、90、100、100%乙醇各0.5h）→透明（乙醇+ 二甲苯等量混合15min，二甲苯0.5h 2次）→透蜡（二甲 苯+石蜡各半35-37 ℃,0.5-48h ，石蜡56-60 ℃,0.5-1h 2 次）→包埋（凝30min）→切片（8μm，水面展开）→贴 片（涂粘片剂，滴水1滴）→展片（40-45℃）→烘干 （37 ℃，24h ）。
4 植物组织制片技术实例
4.1 徒手切片 重要的是切下一小片平而薄的组织，而不是切下完整的组织
片； 左手持材料或夹持物（莴苣茎、胡萝卜根、泡沫塑料等），
右手平稳持刀（刀片或手术刀），用臂力不用腕力； 刀刃平置经削平的平面上，轻轻压住刀片，以均匀的力量平
稳的动作，从刀刃的右侧斜向左侧切削，不可挤压材料或 拉锯式切割； 材料切面上和刀刃上保持有水，以免材料干枯； 切片可简易染色1-2min，0.1%亚甲基蓝，0.5%中性红，1% 番红（木质化细胞壁及核染成红色）I2-KI溶液（淀粉粒 蓝色，核呈黄色）
• 洗涤与脱水：
• 洗涤：固定后的组织材料需除去留在组织内的固 定液及其结晶沉淀，以免影响以后的染色效果。多 以流水冲洗。
4.2 石蜡切片法（根、茎、叶）
• 显微观察，便于器官的立体重构。 • 硬质材料可用滑走切片机，一般可用手摇切片机。 • 程序：取材（0.5-1cm3）→固定（卡诺、FAA，2-24h，
材料有空气的需抽气） →洗涤（70%乙醇2次） →脱水 （80 % 、90、100、100%乙醇各0.5h）→透明（乙醇+ 二甲苯等量混合15min，二甲苯0.5h 2次）→透蜡（二甲 苯+石蜡各半35-37 ℃,0.5-48h ，石蜡56-60 ℃,0.5-1h 2 次）→包埋（凝30min）→切片（8μm，水面展开）→贴 片（涂粘片剂，滴水1滴）→展片（40-45℃）→烘干 （37 ℃，24h ）。
4 植物组织制片技术实例
4.1 徒手切片 重要的是切下一小片平而薄的组织，而不是切下完整的组织
片； 左手持材料或夹持物（莴苣茎、胡萝卜根、泡沫塑料等），
右手平稳持刀（刀片或手术刀），用臂力不用腕力； 刀刃平置经削平的平面上，轻轻压住刀片，以均匀的力量平
稳的动作，从刀刃的右侧斜向左侧切削，不可挤压材料或 拉锯式切割； 材料切面上和刀刃上保持有水，以免材料干枯； 切片可简易染色1-2min，0.1%亚甲基蓝，0.5%中性红，1% 番红（木质化细胞壁及核染成红色）I2-KI溶液（淀粉粒 蓝色，核呈黄色）
【大学实验】动物组织石蜡切片制作-PPT课件
docin/sundae_meng
（二）石蜡切片制作
• 用切片机将石蜡包埋的组织块（蜡块）制成适宜厚度的切 片，是目前在病理学科中最常用的一种制片方法。切片厚 度为一般4~6μ m。 【切片前的准备】 1、修切蜡块 切片前应先修块，即切去组织周围过多的石 蜡，一般留下约2mm宽度的蜡边为宜。注意蜡块不能留 得太窄，在切片时易损坏组织；蜡边不能留得太多，否则 影响展片。室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却 一定时间。 2、切片用品准备 （1）切片刀：预先磨好切片刀备用或切片前更换新的一 次性切片。 （2）载物片：载物片经清洁液、95%乙醇处理后备用。 （3）展片仪：加入温水，接通电源，调整温度。 （4）其他用品：准备好毛笔、记号笔、镊子、冰块等。
docin/sundae_meng
方案一:病理石蜡切片的制作
（一）石蜡组织块制作 1．取材。 2．固定。 3．脱水、透明及浸蜡（具体步骤见表）。 4．包埋
docin/sundae_meng
步骤 （1） （2） （3） （4） （5） （6） （7） （8） （9） （10） （11） （12）
操作项目 60%乙醇 70%乙醇 80%乙醇 90%乙醇 95%乙醇Ⅰ 95%乙醇Ⅱ 无水乙醇Ⅰ 无水乙醇Ⅱ 二甲苯Ⅰ 二甲苯Ⅱ 石蜡Ⅰ 石蜡Ⅱ
小鼠 15min 15min 20min 20min 20min 20min 20min 20min 5min 3min 10min 20min
大鼠 20min 20min 30min 30min 30min 20min 30min 30min 8min 5min 15min 25min
家兔 30min 30min 40min 40min 40min 30min 40min 40min 10min 5min 20min 30min
《石蜡切片技术》课件
2 不足
制备石蜡切片需要复杂的操作和专业设备，同时样本可能发生失真和伪影。
石蜡切片技术的发展前景
科技创新
随着科技的
石蜡切片技术在不同领域的应 用将促进跨学科的合作和创新。
新发现
通过石蜡切片技术，我们将有 机会发现更多细胞和组织的奥 秘，推动科学的发展。
总结和展望
《石蜡切片技术》是一项重要的科学技术，它在医学和科学研究中发挥着重要作用。我们相信随着技术的不断 发展，石蜡切片技术将为我们带来更多的新发现和突破。
《石蜡切片技术》PPT课 件
欢迎来到《石蜡切片技术》的世界！让我们一起探索这个令人着迷的技术， 揭开它的奥秘！
技术背景
在科学研究和医学领域中，石蜡切片技术起着重要作用。了解其背景将有助于我们深入了解该技术的重要性和 应用。
石蜡切片技术的定义与原理
1
定义
石蜡切片技术是一种用于制作细胞切片的方法，它可以保持细胞结构的完整性。
2
原理
该技术的原理是将固定的组织样本浸入石蜡中，使其固化，然后使用显微切片机 切割出薄片。
3
挑战
石蜡切片技术需要严格的控制温度和时间，以确保薄片的质量和细胞结构的完整 性。
石蜡切片制备方法
石蜡切片技术有多种制备方法，包括冷冻切片、热切片和冷热切片等。每种 方法都有其适用的情况和优缺点。
石蜡切片技术的应用领域
医学研究
石蜡切片技术在病理学和生 物医学研究中广泛应用，有 助于揭示疾病发生的机制。
植物学
通过石蜡切片技术，科学家 可以观察植物的细胞结构、 组织构造和生长过程。
材料科学
该技术也用于材料科学中， 用于观察材料的结构和性能。
石蜡切片技术的优势与不足
1 优势
制备石蜡切片需要复杂的操作和专业设备，同时样本可能发生失真和伪影。
石蜡切片技术的发展前景
科技创新
随着科技的
石蜡切片技术在不同领域的应 用将促进跨学科的合作和创新。
新发现
通过石蜡切片技术，我们将有 机会发现更多细胞和组织的奥 秘，推动科学的发展。
总结和展望
《石蜡切片技术》是一项重要的科学技术，它在医学和科学研究中发挥着重要作用。我们相信随着技术的不断 发展，石蜡切片技术将为我们带来更多的新发现和突破。
《石蜡切片技术》PPT课 件
欢迎来到《石蜡切片技术》的世界！让我们一起探索这个令人着迷的技术， 揭开它的奥秘！
技术背景
在科学研究和医学领域中，石蜡切片技术起着重要作用。了解其背景将有助于我们深入了解该技术的重要性和 应用。
石蜡切片技术的定义与原理
1
定义
石蜡切片技术是一种用于制作细胞切片的方法，它可以保持细胞结构的完整性。
2
原理
该技术的原理是将固定的组织样本浸入石蜡中，使其固化，然后使用显微切片机 切割出薄片。
3
挑战
石蜡切片技术需要严格的控制温度和时间，以确保薄片的质量和细胞结构的完整 性。
石蜡切片制备方法
石蜡切片技术有多种制备方法，包括冷冻切片、热切片和冷热切片等。每种 方法都有其适用的情况和优缺点。
石蜡切片技术的应用领域
医学研究
石蜡切片技术在病理学和生 物医学研究中广泛应用，有 助于揭示疾病发生的机制。
植物学
通过石蜡切片技术，科学家 可以观察植物的细胞结构、 组织构造和生长过程。
材料科学
该技术也用于材料科学中， 用于观察材料的结构和性能。
石蜡切片技术的优势与不足
1 优势
石蜡切片的制作及HE染色课件
02
取材的大小和厚度也会影响后续 的切片制作，一般而言，组织块 的大小应为2-3cm³，厚度在24mm之间。
固定
固定是为了防止组织自溶和腐败，保 持组织细胞的形态和结构。常用的固 定剂有甲醛、乙醇、丙酮等。
固定时需要将组织放入适当的固定液 中，固定时间一般为1-24小时，具体 时间根据组织类型和大小而定。
04
石蜡切片制作及HE染色的质量控制
切片厚度控制
切片厚度
石蜡切片的厚度应控制在2-5微米之间， 过薄或过厚都会影响染色效果和显微镜 观察。
VS
切片均匀度
确保切片厚薄均匀，无裂痕或气泡，以提 高染色和观察的准确性。
染色浓度与时间控制
染色浓度
根据组织类型和染色需求，选择合适的染色浓度，以达到最佳染色效果。
01
02
03
04
防止脱片
在染色过程中要保持切片的湿 润，避免脱片。
控制染色时间
染色时间不宜过长或过短，应 根据实际情况进行调整，以达
到最佳染色效果。
注意染液浓度
染液的浓度要适中，过浓或过 淡都会影响染色效果。
避免污染
在染色过程中要保持染缸的清 洁，避免污染影响染色效果。
03
石蜡切片HE染色结果分析
浸蜡
浸蜡是为了将石蜡渗透到组织中，使组织变得硬固，以便 切片。常用的石蜡有固体石蜡和液体石蜡。
浸蜡时需要将组织放入适当的石蜡中，时间一般为1-2小 时，具体时间根据组织类型和大小而定。
包埋
包埋是将组织用石蜡包裹起来，以便 切片。包埋时需要将组织放入包埋盒 中，并确保组织平整、无气泡。
包埋盒需要用标签标记清楚，以便后 续的切片和观察。
染色时间
染色时间的长短也会影响染色效果，时间过短会使染色不明显，时间过长则可能导致染 色过度。
取材的大小和厚度也会影响后续 的切片制作，一般而言，组织块 的大小应为2-3cm³，厚度在24mm之间。
固定
固定是为了防止组织自溶和腐败，保 持组织细胞的形态和结构。常用的固 定剂有甲醛、乙醇、丙酮等。
固定时需要将组织放入适当的固定液 中，固定时间一般为1-24小时，具体 时间根据组织类型和大小而定。
04
石蜡切片制作及HE染色的质量控制
切片厚度控制
切片厚度
石蜡切片的厚度应控制在2-5微米之间， 过薄或过厚都会影响染色效果和显微镜 观察。
VS
切片均匀度
确保切片厚薄均匀，无裂痕或气泡，以提 高染色和观察的准确性。
染色浓度与时间控制
染色浓度
根据组织类型和染色需求，选择合适的染色浓度，以达到最佳染色效果。
01
02
03
04
防止脱片
在染色过程中要保持切片的湿 润，避免脱片。
控制染色时间
染色时间不宜过长或过短，应 根据实际情况进行调整，以达
到最佳染色效果。
注意染液浓度
染液的浓度要适中，过浓或过 淡都会影响染色效果。
避免污染
在染色过程中要保持染缸的清 洁，避免污染影响染色效果。
03
石蜡切片HE染色结果分析
浸蜡
浸蜡是为了将石蜡渗透到组织中，使组织变得硬固，以便 切片。常用的石蜡有固体石蜡和液体石蜡。
浸蜡时需要将组织放入适当的石蜡中，时间一般为1-2小 时，具体时间根据组织类型和大小而定。
包埋
包埋是将组织用石蜡包裹起来，以便 切片。包埋时需要将组织放入包埋盒 中，并确保组织平整、无气泡。
包埋盒需要用标签标记清楚，以便后 续的切片和观察。
染色时间
染色时间的长短也会影响染色效果，时间过短会使染色不明显，时间过长则可能导致染 色过度。
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
石蜡Ⅰ 石蜡Ⅱ 石蜡Ⅲ
小鼠 15min 15min 20min 20min 20min 20min 20min 20min 5min 3min 10min 20min 30min
大鼠 20min 20min 30min 30min 30min 20min 30min 30min 8min 5min 15min 25min 30min
10
方案二 石蜡切片的制作
三、切片的注意事项 1、切片质量的好坏，与技术熟练程度和切片机、 切片刀的好坏有关外。 2、切片机的各个零件和螺丝应旋紧，否则将会产 生震动。 3、在摇动切片机时，用力要求均匀一致，不宜过 重过猛，否则造成切片厚薄不均。或空洞现象。 4、在夏秋季节进行切片时，应使用冰块加强冷却， 可保持石蜡的硬度，减少切片的褶皱。
2021/3/7
8
方案二 石蜡切片的制作
1—6微米。制作大批的或是连续的切片。长期保存。 一、切片前的准备： 1、恒温水浴锅首先预热至35℃—40℃。 2、蜡块整修，暴露组织并修平，减少刀的磨。 3．载玻片应事先洗涤干净，无油腻和不透明现象。涂粘片
剂。 4、将锋利的刀片，调整角度和位置，以20°-30°为佳。 5、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。
2021/3/7
3
方案一:病理石蜡切片的制作
（一）石蜡组织块制作 1．取材。 2．固定。 3．脱水、透明及浸蜡（具体步骤见表）。 4．包埋
2021/3/7
4
步骤 （1） （2） （3） （4） （5） （6） （7） （8） （9） （10） （11） （12） （13）
2021/3/7
操作项目 60%乙醇 70%乙醇 80%乙醇 90%乙醇 95%乙醇Ⅰ 95%乙醇Ⅱ 无水乙醇Ⅰ 无水乙醇Ⅱ 二甲苯Ⅰ 二甲苯Ⅱ
家兔 30min 30min 40min 40min 40min 30min 40min 40min 10min 5min 20min 30min 40min
5
注意事项
• 一般实质性脏器的组织及肿瘤组织应把最大切面朝下包埋；食管、胃、 肠等组织须将管壁横断面朝下包埋，若在同一蜡块中包埋数块管壁组 织时，应平行横埋且黏膜面（内膜）的方向应一致，以便切片及观察。 △同一蜡块包埋多个组织块时，组织的性质应相同，方向要一致，不 能把大小、厚薄差别悬殊的组织包埋在一起，组织块间的距离不能太 大。 △皮肤、骨等难切组织及需要连续切片的组织都应单独包埋。 △神经、脊髓及需要定向包埋的组织应注意组织块的相互关系。 △包埋（尤其在室温较低的情况下）操作应迅速，防止组织块变凉、 蜡液凝结及出现气泡，组织块与蜡液不能很好凝固定在一起，导致组 织与蜡分离。 △遇有管腔或空洞标本与小标本同埋一个蜡块时，不能将小标本放入 其他标本的管腔或空洞内。
2021/3/7
9
方案二 石蜡切片的制作
二、切片的步骤： 1、将蜡块固定于切片机头上的夹座内， 2、调整蜡块组织切面恰好与刀口接触，旋 紧刀架 3、根据需要调整切片厚度。 4、修整切片，直到切出完整的最大组织切 面后，再行切制。 5、切下的切片带，用毛笔从刀口向上挑起， 拉下切片带
2021/3/7
2021/3/7
11
方案二 石蜡切片的制作
四、贴片： 1、将单张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起， 铺于恒温水中（光亮的一面朝下）立即用毛笔轻 轻拉展以切片无皱褶为最好。 2、待切片在恒温水内充分摊开展平后，将载玻片 垂直插入水中轻靠切片，随即将玻片直立提起， 拨正切片位置。 3、用铅笔在玻片的毛玻璃上写上标本编号，字要 写得小而清楚、端正。 4、贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时，蛋 白质凝固后即可染色。
动物组织石蜡切片制作
科研仪器管理中心
2021/3/7
1
实验目的
• 制作实验动物的组织切片并染色，掌握动 物组织制片技术
2021/片机、展片仪、毛笔、载
玻片、盖玻片、烤箱、显微镜。 3．试剂：60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、
90%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯、 石蜡、中性树胶。
2021/3/7
7
• 【切片制作过程】 以使用旋转式切片机石蜡切片为例： 1．将切片刀装在刀架上，后将蜡块装在切片机固定装置上。调整蜡块与刀至 合适位置（刀刃与蜡块切面呈5°夹角）旋转式切片机切取组织，是由下向上 切，为得到完整的切片，防止组织出现刀纹裂缝，应将组织硬脆难切的部分 放在上端（如皮肤组织，应将表皮部分向上。而胃肠等组织，应将浆膜面朝 上）。 2．左手执手笔，右手旋转切片机旋转轮。先粗切标本，直到暴露出组织最大 切面（但对小标本不要修切得太多，以免将整个组织块修切掉）。再连续旋 转切出蜡带，左手持毛笔将蜡片带下端轻轻托起，右手用镊子夹起蜡带上端， 正面向上放入展片仪水盒内，展片温度根据使用的石蜡熔点进行调整，一般 水温为45℃左右，待蜡片带中的组织展平后，即可进行分片和捞片。对于展 片困难的切片经30%的乙醇初展后，再用载玻片捞起蜡带放人展片仪水盒内 可使切片更易展平。在夏季切片时可用冰块冷却切片刀和组织块，减少切片 刀与组织块在切片过程中产生的热时，使石蜡保持合适的硬度以利于切片。 3．捞起切片后，写上编号。捞片时注意切片的位置，一般切片的中心位于载 物片右侧1/3与2/3交界处为佳，并注意整齐美观。 4．烤箱60℃左右烘烤切片30min，对血凝块和皮肤组织应及时烤片，烤片 温度应稍低；脑组织切片捞出后直立晾干，再烤片，否则产生气泡。
2021/3/7
6
（二）石蜡切片制作
• 用切片机将石蜡包埋的组织块（蜡块）制成适宜厚度的切 片，是目前在病理学科中最常用的一种制片方法。切片厚 度为一般4~6μm。 【切片前的准备】 1、修切蜡块 切片前应先修块，即切去组织周围过多的石 蜡，一般留下约2mm宽度的蜡边为宜。注意蜡块不能留 得太窄，在切片时易损坏组织；蜡边不能留得太多，否则 影响展片。室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却 一定时间。 2、切片用品准备 （1）切片刀：预先磨好切片刀备用或切片前更换新的一 次性切片。 （2）载物片：载物片经清洁液、95%乙醇处理后备用。 （3）展片仪：加入温水，接通电源，调整温度。 （4）其他用品：准备好毛笔、记号笔、镊子、冰块等。
小鼠 15min 15min 20min 20min 20min 20min 20min 20min 5min 3min 10min 20min 30min
大鼠 20min 20min 30min 30min 30min 20min 30min 30min 8min 5min 15min 25min 30min
10
方案二 石蜡切片的制作
三、切片的注意事项 1、切片质量的好坏，与技术熟练程度和切片机、 切片刀的好坏有关外。 2、切片机的各个零件和螺丝应旋紧，否则将会产 生震动。 3、在摇动切片机时，用力要求均匀一致，不宜过 重过猛，否则造成切片厚薄不均。或空洞现象。 4、在夏秋季节进行切片时，应使用冰块加强冷却， 可保持石蜡的硬度，减少切片的褶皱。
2021/3/7
8
方案二 石蜡切片的制作
1—6微米。制作大批的或是连续的切片。长期保存。 一、切片前的准备： 1、恒温水浴锅首先预热至35℃—40℃。 2、蜡块整修，暴露组织并修平，减少刀的磨。 3．载玻片应事先洗涤干净，无油腻和不透明现象。涂粘片
剂。 4、将锋利的刀片，调整角度和位置，以20°-30°为佳。 5、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。
2021/3/7
3
方案一:病理石蜡切片的制作
（一）石蜡组织块制作 1．取材。 2．固定。 3．脱水、透明及浸蜡（具体步骤见表）。 4．包埋
2021/3/7
4
步骤 （1） （2） （3） （4） （5） （6） （7） （8） （9） （10） （11） （12） （13）
2021/3/7
操作项目 60%乙醇 70%乙醇 80%乙醇 90%乙醇 95%乙醇Ⅰ 95%乙醇Ⅱ 无水乙醇Ⅰ 无水乙醇Ⅱ 二甲苯Ⅰ 二甲苯Ⅱ
家兔 30min 30min 40min 40min 40min 30min 40min 40min 10min 5min 20min 30min 40min
5
注意事项
• 一般实质性脏器的组织及肿瘤组织应把最大切面朝下包埋；食管、胃、 肠等组织须将管壁横断面朝下包埋，若在同一蜡块中包埋数块管壁组 织时，应平行横埋且黏膜面（内膜）的方向应一致，以便切片及观察。 △同一蜡块包埋多个组织块时，组织的性质应相同，方向要一致，不 能把大小、厚薄差别悬殊的组织包埋在一起，组织块间的距离不能太 大。 △皮肤、骨等难切组织及需要连续切片的组织都应单独包埋。 △神经、脊髓及需要定向包埋的组织应注意组织块的相互关系。 △包埋（尤其在室温较低的情况下）操作应迅速，防止组织块变凉、 蜡液凝结及出现气泡，组织块与蜡液不能很好凝固定在一起，导致组 织与蜡分离。 △遇有管腔或空洞标本与小标本同埋一个蜡块时，不能将小标本放入 其他标本的管腔或空洞内。
2021/3/7
9
方案二 石蜡切片的制作
二、切片的步骤： 1、将蜡块固定于切片机头上的夹座内， 2、调整蜡块组织切面恰好与刀口接触，旋 紧刀架 3、根据需要调整切片厚度。 4、修整切片，直到切出完整的最大组织切 面后，再行切制。 5、切下的切片带，用毛笔从刀口向上挑起， 拉下切片带
2021/3/7
2021/3/7
11
方案二 石蜡切片的制作
四、贴片： 1、将单张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起， 铺于恒温水中（光亮的一面朝下）立即用毛笔轻 轻拉展以切片无皱褶为最好。 2、待切片在恒温水内充分摊开展平后，将载玻片 垂直插入水中轻靠切片，随即将玻片直立提起， 拨正切片位置。 3、用铅笔在玻片的毛玻璃上写上标本编号，字要 写得小而清楚、端正。 4、贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时，蛋 白质凝固后即可染色。
动物组织石蜡切片制作
科研仪器管理中心
2021/3/7
1
实验目的
• 制作实验动物的组织切片并染色，掌握动 物组织制片技术
2021/片机、展片仪、毛笔、载
玻片、盖玻片、烤箱、显微镜。 3．试剂：60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、
90%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯、 石蜡、中性树胶。
2021/3/7
7
• 【切片制作过程】 以使用旋转式切片机石蜡切片为例： 1．将切片刀装在刀架上，后将蜡块装在切片机固定装置上。调整蜡块与刀至 合适位置（刀刃与蜡块切面呈5°夹角）旋转式切片机切取组织，是由下向上 切，为得到完整的切片，防止组织出现刀纹裂缝，应将组织硬脆难切的部分 放在上端（如皮肤组织，应将表皮部分向上。而胃肠等组织，应将浆膜面朝 上）。 2．左手执手笔，右手旋转切片机旋转轮。先粗切标本，直到暴露出组织最大 切面（但对小标本不要修切得太多，以免将整个组织块修切掉）。再连续旋 转切出蜡带，左手持毛笔将蜡片带下端轻轻托起，右手用镊子夹起蜡带上端， 正面向上放入展片仪水盒内，展片温度根据使用的石蜡熔点进行调整，一般 水温为45℃左右，待蜡片带中的组织展平后，即可进行分片和捞片。对于展 片困难的切片经30%的乙醇初展后，再用载玻片捞起蜡带放人展片仪水盒内 可使切片更易展平。在夏季切片时可用冰块冷却切片刀和组织块，减少切片 刀与组织块在切片过程中产生的热时，使石蜡保持合适的硬度以利于切片。 3．捞起切片后，写上编号。捞片时注意切片的位置，一般切片的中心位于载 物片右侧1/3与2/3交界处为佳，并注意整齐美观。 4．烤箱60℃左右烘烤切片30min，对血凝块和皮肤组织应及时烤片，烤片 温度应稍低；脑组织切片捞出后直立晾干，再烤片，否则产生气泡。
2021/3/7
6
（二）石蜡切片制作
• 用切片机将石蜡包埋的组织块（蜡块）制成适宜厚度的切 片，是目前在病理学科中最常用的一种制片方法。切片厚 度为一般4~6μm。 【切片前的准备】 1、修切蜡块 切片前应先修块，即切去组织周围过多的石 蜡，一般留下约2mm宽度的蜡边为宜。注意蜡块不能留 得太窄，在切片时易损坏组织；蜡边不能留得太多，否则 影响展片。室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却 一定时间。 2、切片用品准备 （1）切片刀：预先磨好切片刀备用或切片前更换新的一 次性切片。 （2）载物片：载物片经清洁液、95%乙醇处理后备用。 （3）展片仪：加入温水，接通电源，调整温度。 （4）其他用品：准备好毛笔、记号笔、镊子、冰块等。