水样的微生物检测
水体微生物检测方法
水体微生物检测方法1 水体微生物检测方法水是生命存在的必要条件，水体中的微生物是水质健康状况的重要指示物，所以检测水体微生物是监测污染质量、污染程度以及保证水生态环境健康、生物多样性等的重要技术手段之一。
检测水体中的微生物，常用的方法有活性测定法、培养分离法、PCR以及荧光探针法等。
1.1 活性测定法活性测定是水体微生物检测中应用最为广泛的方法之一。
在活性测定法中，样品会添加选定的培养基，配合观察和测定时间、温度、湿度以及添加凝结剂等来选择培养条件，通过特殊的检测仪器可以观测到微生物的活动，得出结论。
优点是流程简单、方法全面、检测灵敏，适应性强；但方法不适用于菌类多样性检测。
1.2 培养分离法培养分离法是最常用的一种微生物检测方法，在样品中添加特殊培养基，用于培养水体中的微生物。
采集不同条件下培养出的细菌株进行形态学分析、生理与生化特性分析和分子生物学分析等操作，从而获取对应的菌类信息。
优点是检测单元多、可检测菌类多样性；缺点是方法较复杂，时间较长。
1.3 PCR聚合酶链反应法（PCR）是水质检测的一种快速、灵敏的检测方法，它能够实现对特定微生物核酸序列片段的快速，灵敏的检测。
PCR采用不同条件，以几个温度周期反复扩增，以此形成检测抗原特异性的DNA 片段，最终得出该片段的扩增结果，通过特殊的检测仪器，得出检测结论。
优点是抗原检测的特异性更高、检测灵敏度高，时间短；缺点是不能检测到活体细菌，技术成本较高。
1.4 荧光探针法荧光探针法是运用荧光或发射荧光的探针分子，通过其与特定抗原发生特异性结合，以检测活态微生物的一种分子方法。
从而检测水体中活态微生物类型及数量，快速精准地检测水样中的微生物活性。
与传统活性测定法相比，优点是检测时间短、灵敏度高、减少误报率，方法进行简单；缺点是设备成本较高。
以上就是四种常用的水体微生物检测方法，每种方法都有优缺点，检测人员根据实际情况来选择恰当的检测方法。
除此之外，正确使用相关设备、操作标准的熟悉度对水体微生物的检测也是非常重要的。
平板菌落计数法水中微生物的检测
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之
水中细菌总数的测定
——平板菌落计数法
一、细菌总数测定的意义
水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈 正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一
细菌总数：指水样在一定条件下培养后，1mL水样 所含菌落的总数。
我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细 菌总数不得超过100个/ml
含细菌10-100个/ml的水体为极清洁
代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以 获得均匀稀释液。
2 水样的10倍稀释
第一步 稀释 水样 第二步： 接种平板
注意：稀释 度的选择
平板混合分离法： 将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的
菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至45℃ 左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15 ml， 摇匀，凝固，制成平板。
4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之
630水样的微生物检测
水样的采集和保存方法
2.3 水样的过滤和离心 需要进行微生物检测的样品 不能进行过滤和离心
水样的采集和保存方法
3 水样的管理 3.1 水样的标签设计 水样采集后，往往根据不同的分析要求，分装成 数份，并分别加入保存剂。对每一份样品都应附 一张完整的水样标签。水样标签的设计可以根据 实际情况，一般包括: 实际情况，一般包括:采样目的，监测点数目、位 置，监测日期，时间，采样人员等。标签应用不 退色的墨水填写，并牢固地贴于盛装水样的容器 外壁上。
50 cfu/mL 3 MPN/100mL 10 cfu/mL 10 cfu/mL 不得检出
10000 个/L 2000 个/L
水样的采集和保存方法
1 水样的采集方法
GB/T 2
范围：适用于生活饮用水和及其水源水样的采集和保存
采样容器：玻璃材质，不透明非活性玻璃容器。 采样容器：玻璃材质，不透明非活性玻璃容器。 ♣容器及塞子、盖子应经灭菌温度并且在此温度下不释放 容器及塞子、 或产生出任何能抑制生物活性、 或产生出任何能抑制生物活性、灭活或促进生物生长的化学 物质。 物质。 采样容器的洗涤和灭菌： 采样容器的洗涤和灭菌： 容器洗涤：将容器用自来水和洗涤剂洗涤， 1 容器洗涤：将容器用自来水和洗涤剂洗涤，并且用自来 水彻底冲洗后用质量分数为10 的盐酸溶液浸泡过夜， 10％ 水彻底冲洗后用质量分数为10％的盐酸溶液浸泡过夜，然后 依次用自来水，蒸馏水洗净。 依次用自来水，蒸馏水洗净。 容器灭菌：热力灭菌。干热灭菌要求160 160℃ 2h； 2 容器灭菌：热力灭菌。干热灭菌要求160℃，2h；高压 蒸汽灭菌121℃ 15min。 蒸汽灭菌121℃，15min。高压蒸汽灭菌后的容器如不立即使 应于60℃将瓶内冷凝水烘干，灭菌后的容器应在2 60℃将瓶内冷凝水烘干 用，应于60℃将瓶内冷凝水烘干，灭菌后的容器应在2周内 使用。 使用。
水中微生物的测定-国标法(水质检测)
水中微生物的测定-国标法(水质检测)
摘要
本文介绍了水中微生物的测定方法，以国家标准法为基础。
水中微生物的测定是水质检测的重要环节，可以评估水的卫生状况，以及相关的环境健康风险。
引言
水是人类生活中必不可少的资源，保证水质安全对于人类健康至关重要。
水中微生物作为一种主要的水质指标，可以反映水中存在的微生物污染程度。
因此，精确测定水中微生物的数量是进行水质检测的基本要求之一。
国标法测定方法
样品收集与处理
1. 确定采样点及采样时间，避免样品受到外界干扰。
2. 使用干燥及密闭的收集水样，并尽量防止样品受到氧气、光照和高温的影响。
3. 避免采样与外界环境接触，以防止二次污染的发生。
样品制备与预处理
1. 根据国家标准法的要求，将收集的水样进行适当的稀释，使其微生物数量在可测量的范围内。
2. 使用适当的培养基进行预处理，以促进微生物的生长。
微生物测定方法
1. 平板计数法：将经稀释处理的水样均匀地分布在培养基上，通过培养基固化后，计数形成的菌落数量，并据此推算出水样中微生物的浓度。
2. 膜过滤法：通过将水样通过细孔滤膜，然后将膜过滤板放置在含培养基的平板上，根据过滤后膜上菌落的数量计算水样中微生物的浓度。
结论
本文介绍了水中微生物的测定方法，基于国家标准法。
这些测定方法可以用于水质检测，评估水的卫生状况，以及相关的环境健康风险。
采样、制备和处理样品的正确操作，以及准确的测定方法选择，对于保证测定结果的可靠性至关重要。
微生物与水质检测
微生物与水质检测水是生命之源，对人类和其他生物而言，保持水质的安全和健康至关重要。
微生物在水质检测中起着至关重要的作用。
本文将探讨微生物在水质检测中的重要性以及常见的检测方法。
一、微生物与水质检测的重要性水质中的微生物可以直接或间接地影响人类健康。
例如，水中的细菌和寄生虫可以引起肠胃疾病，水中的藻类和细菌可以产生毒素，对周围环境和生物多样性产生不良影响。
因此，监测和评估水质中的微生物是确保公众健康和环境保护的关键环节。
二、常见的微生物检测方法1. 培养法培养法是最常用的微生物检测方法之一。
它涉及将水样品置于含有特定培养基的培养皿中，然后在恰当的温度、湿度和氧气条件下进行孵育。
随着时间的推移，如果水样中存在微生物，它们将在培养基上生长形成可见的生物群落。
2. PCR法聚合酶链反应（PCR）是一种灵敏且快速的微生物检测方法。
它利用水中微生物的DNA或RNA分子作为模板，在特定的温度环境下进行放大，从而使微生物的存在可以通过检测其特定的基因序列来确定。
3. 流式细胞仪流式细胞仪是一种高通量的微生物检测技术。
通过将水样中的微生物与荧光标记的抗体结合，流式细胞仪可以在短时间内准确地计数和鉴定微生物群落的成分。
4. 蛋白质分析法蛋白质分析法是一种基于水样中微生物蛋白质的定量和鉴定的方法。
通过分析水样中微生物的蛋白质组成，可以快速识别和鉴定微生物群落的类型和数量。
三、微生物检测的挑战和解决方案微生物检测在实践中面临一些技术和方法上的挑战。
首先，微生物群落的复杂性使得检测和识别变得困难。
其次，某些微生物可能存在背景噪声中，这可能会干扰检测结果的准确性。
为了克服这些问题，科学家们正在不断开发新的技术和方法，以提高微生物检测的敏感性和特异性。
其中一种解决方案是使用高通量测序技术。
通过对水样中微生物的DNA进行测序和分析，科学家们可以了解微生物群落的结构和功能，并对其进行定量和鉴定。
此外，一些新兴的技术如纳米生物传感器也显示出在微生物检测方面的潜力。
水质微生物检测
调味水，不经调色，增加各种香精风味。
三、与水质相关的各类标准和检验方法
GB5749-2006， 《生活饮用水卫生标准》 GB/T5750-2006， 《生活饮用水标准检验方法》 GB8537－2008，《 饮用天然矿泉水》 GB/T8538－2008，《饮用天然矿泉水检验方法》 GB17323－1998，《瓶装饮用纯净水》 GB17324－2003，《瓶装饮用纯净水卫生标准》 GB19298－2003，《瓶（桶）装饮用水卫生标准》
8.不同稀释度的选择及报告方法
①首选30～300之间进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落 数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之（见表 1实例1）； ②若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视 二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数 （见表1实例2），若大于或等于2则报告其中稀释度较小的 菌落数（见表1实例3、4）；
第二节饮用水种类及卫生微生物指标
一、饮用水分类 1、生活饮用水：供人生活的饮水和生活用水 2、包装饮用水： • 饮用天然矿泉水 • 饮用天然泉水 • 其他天然饮用水 • 饮用纯净水 • 饮用矿物质水 • 其他包装饮用水
二、饮用水介绍
（一）、生活饮用水
• 新发布的产品标准 GB5749-2006
• 标准检验方法为 GB/T5750-2006
⑧菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于 100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以 四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指 数来表示。
表1 稀释度选择及菌落总数报告方式
实例
10-1 1 2 3 4 5 6 7 8 1365 2760 2890 150 多不可计 27 多不可计 0
水的微生物检验
水的微生物检验一、器材：1 •培养基：PCA、灭菌双料5支、单料10支/每个样品（乳糖蛋白胨）2．仪器或其他用具：灭菌三角烧瓶（带塞）且加入稳定剂，灭菌培养皿、灭菌吸管、灭菌镊子、灭菌棉球、灭菌10 ml 生理盐水（灭菌9 ml 生理盐水）、酒精灯（打火机、酒精棉球）、样品筐二、水样的采集：1 • 用灭菌棉球将水龙头擦干（钢铁管口用酒精灯烧灼消毒水龙头周围 3 分钟）2. 完全打开水龙头使水流2-5分钟后，将水龙头关小，以灭菌三角烧瓶接取水样。
方法二：1. 流1-2分钟2. 关上，擦水龙头四周3. 打开水龙头，流2-5 分钟4. 接水注意：1.加硫代硫酸钠的量：500 ml水加1.5%硫代硫酸钠2ml或每500 ml加0.4ml硫代硫酸钠。
2. 样品瓶必须专瓶专用，灭菌后须干燥。
3. 人手和手套不得与样品瓶内壁或瓶塞接触。
4. 采样记录用胶纸粘贴或悬挂标签于水样瓶上，注明水样编号、采样者、日期、时间及地点等。
5. 运送水样应避免瓶摇动（充满容器并密封，除冷冻样品），以免水样溢出后又回流瓶中增加污染。
6. 取样后2 小时内检验，冷藏4小时内检验7. 做样在无菌间做。
三、细菌总数、大肠菌群测法参照GB5750-85 （2001 版）水的余氯检测程序一、器材：配好的比色管10 支，洁净的50ml 比色管1 支，三角锥瓶2个（带塞）二、水样采集：打开水龙头流水1-2 分钟后，以三角烧瓶接取水样，涮洗3 次，接取200ml 左右，迅速送到实验室比色。
三、操作：准确吸取2.5ml 邻联甲苯胺溶液于50ml 比色管中，加水样至50ml 刻度处。
当接近刻度时，改用滴管加至刻度处，以与眼平行时，凹液面与刻度相平为准。
（盖上瓶塞，颠倒混匀2-3 次），迅速比色，然后审核并做记录。
四、注意事项：1. 抽取时间：车间上班30 分钟后。
2. 每天三角锥瓶、比色管用完后刷洗并控干。
3. 5ml 吸管每月换1（或2）支。
4. 抽取按编号顺序抽取。
水中微生物检验的基本流程
水中微生物检验的基本流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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生活饮用水水质微生物检验结果分析
生活饮用水水质微生物检验结果分析水质微生物检验结果分析的主要目的是确定水源的卫生状况，判断其是否适合作为饮用水。
在分析水质微生物检验结果时，通常需要考虑以下几个方面：
1.细菌含量：细菌是水中最常见的微生物之一，其数量可以反映水源的卫生状况。
常见的细菌有大肠杆菌、沙门氏菌和霍乱弧菌等。
如果水中细菌超过国家标准要求的限值，说明水源受到污染，可能存在细菌性感染的风险。
2.病毒含量：病毒是一种较小的微生物，常见的有轮状病毒、流感病毒和腺病毒等。
病毒的检测对于评估水源的卫生状况也很重要。
水中的病毒主要通过人类或动物的排泄物进入水体，因此高病毒含量可能意味着污水排放或人畜共患传染病的存在。
3.真菌含量：真菌是一类常见的微生物，其数量通常不会像细菌和病毒那样严重影响水源的安全性。
然而，一些真菌可能会引起过敏或其他健康问题，因此在分析水质检验结果时，还需要关注真菌的含量。
4.原生动物含量：原生动物是一类单细胞的微生物，常见的有滋养泳鞭毛虫、滋养壶虫和滋养韧带虫等。
在水质微生物检验结果分析中，原生动物数量通常与水源的水质有一定的关系。
较高的原生动物含量可能意味着有机物的富集，或者其他污染源的存在。
除了以上几点，还需要注意水质微生物检验结果的采样方式和样品保存条件。
正确的采样和保存能够保证检验结果的准确性和可靠性。
此外，还需要与国家、地区或行业标准进行对比，以判断水质是否符合要求。
总之，水质微生物检验结果分析是评估生活饮用水卫生状况的重要方法之一、通过分析细菌、病毒、真菌和原生动物等微生物的种类和数量，可以判断水源的卫生状况，为公众提供健康饮用水的保障。
水的微生物检验
水的微生物检验一、器材：1．培养基：PCA、灭菌双料5支、单料10支/每个样品（乳糖蛋白胨）2．仪器或其他用具：灭菌三角烧瓶（带塞）且加入稳定剂，灭菌培养皿、灭菌吸管、灭菌镊子、灭菌棉球、灭菌10 ml生理盐水（灭菌9 ml生理盐水）、酒精灯（打火机、酒精棉球）、样品筐二、水样的采集：1．用灭菌棉球将水龙头擦干（钢铁管口用酒精灯烧灼消毒水龙头周围3分钟）2．完全打开水龙头使水流2-5分钟后，将水龙头关小，以灭菌三角烧瓶接取水样。
方法二：1．流1-2分钟2．关上，擦水龙头四周3．打开水龙头，流2-5分钟4．接水注意：1．加硫代硫酸钠的量：500 ml水加1.5％硫代硫酸钠2ml或每500 ml加0.4ml硫代硫酸钠。
2.样品瓶必须专瓶专用，灭菌后须干燥。
3.人手和手套不得与样品瓶内壁或瓶塞接触。
4.采样记录用胶纸粘贴或悬挂标签于水样瓶上，注明水样编号、采样者、日期、时间及地点等。
5.运送水样应避免瓶摇动（充满容器并密封，除冷冻样品），以免水样溢出后又回流瓶中增加污染。
6.取样后2小时内检验，冷藏4小时内检验7.做样在无菌间做。
三、细菌总数、大肠菌群测法参照GB5750-85（2001版）水的余氯检测程序一、器材：配好的比色管10支，洁净的50ml比色管1支，三角锥瓶2个(带塞)二、水样采集：打开水龙头流水1-2分钟后，以三角烧瓶接取水样，涮洗3次，接取200ml左右，迅速送到实验室比色。
三、操作：准确吸取2.5ml邻联甲苯胺溶液于50ml比色管中，加水样至50ml刻度处。
当接近刻度时，改用滴管加至刻度处，以与眼平行时，凹液面与刻度相平为准。
(盖上瓶塞，颠倒混匀2-3次)，迅速比色，然后审核并做记录。
四、注意事项：1.抽取时间：车间上班30分钟后。
2.每天三角锥瓶、比色管用完后刷洗并控干。
3.5ml吸管每月换1(或2)支。
4.抽取按编号顺序抽取。
5.比色管每半年换一次。
抽样程序一、器材：灭菌镊子8把（2把备用），抽样塑料袋6个，筐1个，记号笔，标签二、抽取方法：1.更衣及洗手消毒参照SSOP。
制药用水微生物限度检查
1．饮用水⑴取样于500ml玻璃瓶中加入2毫升1.5%硫代硫酸钠溶液，加盖后高压蒸汽灭菌。
（121℃，30分钟）。
取样前，先用酒精灯将水龙头烧灼消毒，然后把水龙头完全打开，放水1～3分钟后取样。
⑵细菌数检查（不得过100个/ml）①以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15ml 已融化并冷却至45℃左右的营养琼脂培养基，每个水样应倾注二个平皿，待培养基冷却后将平皿置于37℃恒温箱内培养24小时。
②菌落计数按微生物限度检查法菌落计数项进行计数。
③菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。
⑶大肠菌群（不得检出）①取10ml水样接种到10ml双料乳糖蛋白胨培养液中，取1ml水样接种到10ml单料乳糖蛋白胨培养液中，另取1ml水样注入到9ml灭菌生理盐水中，混匀后吸取1ml（即0.1ml 水样）注入到10ml单料乳糖蛋白胨培养液，每一稀释度接种5管。
对已处理过的出厂自来水，可直接种5份10ml水样双料培养基，每份接种10ml水样。
②分离培养将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，于36℃±1℃培养箱内培养18h～24h，观察菌落形态，挑取符合下列特征的菌落作革兰氏染色，镜检和证实实验。
深紫黑色，具有金属光泽的菌落；紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落；淡紫红色，中心较深的菌落。
③证实实验经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，同时接种乳糖蛋白胨培养液，置36℃±1℃培养箱中培养18h～24h，有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在。
④结果报告根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100ml水样中的总大肠菌群最可能数（MPN）值。
5管法结果见表表2 用5份10ml水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数（MPN）2.纯化水⑴测定：取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，取10ml，照薄膜过滤法，过滤，取出滤膜，菌面朝上，分别贴于营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基平板上培养，每种培养基至少制备一张滤膜。
水质微生物检测
免疫学方法
利用特异性抗体进行检测，具 有较高的特异性和灵敏度，是 未来发展的重要方向。
生物传感器技术
生物传感器技术可实现快速、 连续的检测，具有广阔的应用 前景。
自动化与智能化
通过自动化和智能化技术，可 提高检测效率，减少人为误差
。
未来研究方向与趋势
新型检测方法的研发
针对不同水质和微生物种类，研发新型的检 测方法。
水质微生物检测
目录
• 水质微生物检测概述 • 水质微生物检测技术 • 水质微生物检测标准与法规 • 水质微生物检测实践与应用 • 水质微生物检测的挑战与展望
01
水质微生物检测概述
定义与目的
定义
水质微生物检测是对水体中微生 物的数量、种类和活性进行检测 的过程。
目的
评估水质的安全性和卫生状况， 预防和控制水传播疾病，保障公 众健康。
检测方法
培养法、荧光原位杂交技 术、PCR-DGGE等。
工业废水微生物检测
检测目的
监控工业废水处理效果，确保达标排放。
检测项目
总需氧量、总有机碳、氨氮等。
检测方法
化学分析法、生物分析法、在线监测技术等。
05
水质微生物检测的挑战 与展望
当前面临的主要挑战
微生物多样性
水质中的微生物种类繁 多，包括细菌、病毒、 原生动物等，检测难度
质量控制与保证
加强水质微生物检测的质量控制与保证，确 保检测结果的准确性和可靠性。
标准化与规范化
建立水质微生物检测的标准化和规范化体系， 提高检测结果的可靠性。
多指标综合评价
结合多种指标进行综合评价，以更全面地反 映水质状况和微生物污染情况。
谢谢观看
水环境中微生物检测原理简析
水环境中微生物检测原理简析随着城市化和工业化的发展，水资源污染的问题日益突出，水环境中微生物的检测对于评估水质污染程度和保护水资源具有重要意义。
微生物检测主要是针对水中的细菌、真菌、藻类等微生物进行检测，通过对微生物群落结构和数量的分析，可以快速、准确地了解水环境的污染情况。
本文将对水环境中微生物检测的原理进行简析，包括微生物检测的常用方法、检测指标及其意义等内容，以期为水环境微生物检测提供一定的参考。
一、微生物检测的常用方法1.培养法培养法是最常见的微生物检测方法之一，通过在富含营养物质的培养基上培养水样中的微生物，利用微生物在培养基上生长的特点，可以快速、准确地检测出水样中的微生物数量。
培养法的优点是可以得到微生物的生长数量和种类信息，是一种比较客观的检测方法，但也存在一些局限性，比如部分微生物无法在常规培养条件下生长，因此可能漏报一部分微生物。
2.分子生物学方法分子生物学方法是近年来发展迅速的微生物检测技术，主要包括PCR（聚合酶链式反应）、实时荧光定量PCR、荧光原位杂交等技术。
这些方法利用微生物的DNA或RNA信息作为检测目标，可以快速、准确地检测出水样中微生物的种类和数量，尤其适用于检测那些不易培养的微生物。
分子生物学方法的优点是灵敏度高、特异性强，但也存在一定的局限性，比如需要昂贵的实验设备和专业技术人员，且不能区分活菌和死菌。
3.浊度法浊度法是一种简单、快速的微生物检测方法，通过测定水样中微生物颗粒对光的散射情况来间接反映微生物的数量。
浊度法的优点是简便易行，适用于快速检测大样本数量，但也存在一定的局限性，比如不能区分不同种类的微生物，只能大致反映微生物的数量。
二、微生物检测的指标及其意义1.总菌落总数（TVC）总菌落总数是指在一定培养条件下，水样中的细菌总数。
TVC是评价水质卫生状况和预警水环境中细菌污染的重要指标，其数量直接反映了水样中的微生物污染程度。
TVC的检测方法主要包括培养法和分子生物学方法，通过TVC的检测，可以及时了解水环境的卫生状况，并采取相应的治理措施。
水中微生物的测定-国标法(水质检测)
水中微生物的测定-国标法(水质检测)---摘要水中微生物的测定是水质检测中的重要环节，用于评估水体中微生物的生物学活性和污染程度。
本文介绍了水中微生物测定的国标法，包括样品收集、菌落计数、培养方法和结果评价等内容。
---1. 引言水是人类生活中必不可少的资源，但水中微生物的存在可能对人类健康造成威胁。
因此，对水中微生物的测定和监控非常重要。
国标法是国家规定的水质检测方法，为测定水中微生物数量提供了一种科学准确的方法。
2. 范围本文所介绍的国标法适用于表面水、地下水、饮用水和废水等各类水样中微生物数量的测定。
3. 原理国标法采用了经典的菌落计数法。
采样后，将水样在含有适当营养物质的琼脂培养基上培养，利用微生物在培养基上形成的菌落数量来反映水样中微生物的数量。
4. 设备和试剂- 干净的采样和采样器具- 可密封的培养皿和琼脂培养基- 高温高压灭菌器- 灭菌匀平器和移涂棒- 防护设备（手套、口罩、护目镜等）- 干净的试剂和培养基5. 检测步骤1. 样品采集：选择合适的水质监测点，使用采样器具在适当深度和位置处采集水样。
2. 样品处理：将采集的水样转移至干净的中，在采样前进行预处理，如过滤去除大颗粒杂质。
3. 菌落计数：将适量的水样分别移涂于含有琼脂培养基的培养皿上，用灭菌匀平器均匀涂布。
4. 培养：将培养皿密封后，放置于适当的培养箱中，恒温培养。
5. 结果评价：培养适当时间后，根据培养基上形成的菌落数量进行计数，并根据国家标准确定水样的微生物数量。
6. 数据分析根据测定结果，可对水质进行评估。
水质检测中微生物数量的国家标准可以作为参考，判断水样是否符合相关的卫生要求。
7. 结论水中微生物的测定是水质检测中重要的环节。
本文介绍了水中微生物的测定国标法，包括样品收集、菌落计数、培养方法和结果评价等内容。
该方法可用于各类水质样品的微生物测定，并提供了科学准确的结果评价。
水质监测部门可根据该方法进行水质检测，保障人民群众的健康和生活安全。
用显微镜观察水中的微生物实验方法
用显微镜观察水中的微生物实验方法
1、准备工作：
（1）准备工作台、显微镜、玻片、滤纸、滤管、滤液、制备鹅卵石沉淀液及酒精灯；
（2）准备水样，用滤管取取50ml水，滤纸过滤保留悬浮物；
2、显微镜观察：
（1）将玻片沾取滤纸上的水样，滴上制备的鹅卵石沉淀液，沾取玻片；
（2）将沾有悬浮物的玻片放在显微镜底座上，杂质留在玻片表面；
（3）将显微镜的光线调整到中等强度，狭窄的光束有利于显微镜的观察；
（4）将显微镜的聚焦调到最佳状态，使细菌更清晰地显示出来；
（5）照亮玻片，慢慢调整显微镜，观察水中的微生物，根据形态特征判断其种类。
;。
水中微生物测定——水样的采集及保存
实验十六水中微生物测定——水样的采集及保存一、实训目的：掌握水样的采集方法和保存方法二、实验原理：饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总数和大肠菌群数来确定。
在水质卫生学检验中，细菌菌落总数(CFU)是指1mL水样在营养琼脂培养基上、有氧条件下37°C培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数(GB/T5750.12--2006)。
我国现行生活饮用水卫生标准(GB/T5749-2006)规定:1mL自来水中细菌菌落总数不得超过100个。
三、实验步骤（一）水样的采集方法1.采样容器：玻璃材质和聚乙烯塑料瓶，容器及塞子、盖子应经灭菌温度并且在此温度下不释放或产生出任何能抑制生物活性、灭活或促进生物生长的化学物质。
2.采样容器的洗涤和灭菌：（1）容器洗涤：将容器用自来水和洗涤剂洗涤，并且用自来水彻底冲洗后用质量分数为10％的盐酸溶液浸泡过夜，然后依次用自来水，蒸馏水洗净。
（2）容器灭菌：热力灭菌。
干热灭菌要求160℃，2h；高压蒸汽灭菌121℃，15min。
高压蒸汽灭菌后的容器如不立即使用，应于60℃将瓶内冷凝水烘干，灭菌后的容器应在2周内使用。
3.取水样：（1）同一水源，同一时间采集几类检测指标的水样时，应先采集供微生物学指标检测的水样，采样时应直接采集，不得用水样涮洗已灭菌的采样瓶，并避免手指和其他物品对瓶口的污染。
（2）取自来水样：先用酒精灯将水龙头烧灼3min灭菌，然后把水龙头完全打开，放水5-10min后用无菌瓶取样，速送实验室检测。
（3）取含有余氯的水样：应在水样瓶未消毒前按每125ml水样加入0.1mg硫代硫酸钠除去残余余氯。
（4）取河水、湖水等水样：用特制的采样瓶和采样器，一般在距水面10-15cm的水层打开瓶塞取样，盖上盖子后再从水中取出，速送实验室检测。
（二）水样保存各种水质的水样，从采集到分析这段时间里，由于物理的、化学的、生物的作用会发生不同程度的变化，这些变化使得进行分析时的样品已不再是采样时的样品，为了使这种变化降低到最小的程度，必须在采样时对样品加以保护。
水环境中微生物检测原理简析
水环境中微生物检测原理简析水环境中微生物检测是为了评估水质的卫生状况，并用于监测水中潜在的病原微生物的存在。
水环境中的微生物包括细菌、病毒和寄生虫等。
下面是对水环境中微生物检测的原理进行简析。
水样的采集是微生物检测的第一步。
采集样品时要遵循严格的操作规程，以确保获得代表性的样品。
水样可以从自然水体（如河流、湖泊等）或供水系统中采集。
采集的样品应尽快送至实验室进行分析。
样品预处理是微生物检测的关键步骤之一。
样品预处理的目的是去除悬浮在水中的杂质，并集中微生物。
常用的样品预处理方法包括过滤、浓缩和沉淀。
过滤是将水样通过微孔滤膜，去除颗粒物和细菌；浓缩是通过离心等方法，将微生物在较小的体积中集中；沉淀则是利用沉淀剂沉淀微生物。
然后，微生物的分离和培养是检测的关键步骤之一。
分离和培养是将微生物从样品中分离出来，并使其在适宜的培养基上生长和繁殖。
常用的微生物培养方法包括平板培养法、液体培养法和膜过滤方法。
在培养过程中，需要控制培养条件，如温度、光照和pH值等，以促进微生物的生长。
接着，对微生物进行鉴定和计数是微生物检测的核心步骤。
鉴定和计数可以通过形态学、生理学和分子生物学等方法进行。
形态学方法是基于微生物的形态特征进行鉴定和计数，如细菌的形状、大小和颜色等；生理学方法是根据微生物的代谢特征进行鉴定和计数，如细菌的氧化还原能力和碳源利用能力等；分子生物学方法是利用微生物的基因序列进行鉴定和计数，如PCR和DNA测序等。
鉴定和计数的结果将用于评估水质的卫生状况和判断是否存在潜在的病原微生物。
微生物检测的结果需要进行数据分析和解读。
分析和解读的依据是国家和行业标准，如《水质标准检验方法》和《饮用水卫生标准》等。
通过对数据的分析和解读，可以判断水质是否符合标准要求，并采取相应的措施，如消毒和过滤等，保证水质的安全。
水环境中微生物检测需要进行样品采集、预处理、分离和培养、鉴定和计数以及数据分析和解读等步骤。
这些步骤相互依存，缺一不可。
水体微生物的检测
水体微生物的检测指标菌落总数(aerobic bacterial count)是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。
检测意义：作为一般性污染的指标，即评价被检样品的微生物污染程度和安全性。
水样菌落总数越多，说明水被微生物污染程度越严重，病原微生物存在的可能性越大，但不能说明污染的来源总大肠菌群(coliform bacteria)是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
检测意义：作为粪便污染的指标。
水样总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。
水样采集菌落总数的测定；总大肠菌群的测定。
采样原则所采集的样品具有代表性。
采样容器：选择硼硅玻璃瓶和聚乙烯塑料瓶。
不能是新的污染源；不吸收或吸附某些待测组分；不与待测组分发生反应。
保证从采样到分析期间，样品各组分的浓度不发生改变。
必须按一般无菌操作的基本要求采集，并保证在运送、贮存过程中不受污染。
▪自来水水样：先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5 min（经常用水的水龙头放水1～3min）后，采集水样于无菌锥形瓶，约占瓶容量80%，以便摇匀水样。
▪水源水水样：选有代表性的地点及可疑地方，一般距水面下10～15cm采样。
采样后，将瓶塞盖好，再从水中取出。
▪注意事项▪严格无菌操作。
▪做好标记：采得水样后应立即记录水样名称、地点、时间等项目。
▪从速送检。
水样从采集到检验不应超过2h，在0～4℃下保存不应超过24h。
—平板菌落计数法（一）生活饮用水➢[器材与试剂]无菌1ml吸管1支/组，无菌平皿3个/组，营养琼脂。
➢[方法]水样摇匀20~25次，使细菌分散。
倾注培养：无菌吸取1ml水样分别置于2个空平皿，另一个作空白对照。
再倾注15ml琼脂（约45℃）于平皿中旋转，混匀待琼脂凝固后倒置37℃24h。
菌落计数：用肉眼或放大镜检查，计数平皿内菌落数目。
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生活饮用水 卫生规范 饮用天然矿 泉水
卫 生 2001.9.1
部
GB8537-1995
各类水质的细菌学指标要求(续)
瓶 装 饮 用 纯 净 GB17324 － 1998 水卫生标准 菌落总数 ≤ 大肠菌群 ≤ 霉菌和酵母 ≤ 致病菌 （沙门氏菌、 志贺氏菌、金黄色葡萄 球菌） 瓶（桶）装饮用 GB19298 － 菌落总数 ≤ 2003 水卫生标准 大肠菌群 ≤ 霉菌 ≤ 酵母 ≤ 致病菌 （沙门氏菌、 志贺氏菌、金黄色葡萄 球菌） 海水水质标准 GB3097 － 大肠菌群 ≤ 1997 粪大肠菌群 ≤ 20 cfu/mL 3 MPN/100mL 不得检出 不得检出
培养 水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门， 取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分， 移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留 细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧， 两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置， 放入37℃恒温箱内培养24h±2h
结果观察与报告：
食品加工用水的微生物检测 方法介绍
姜英辉
与水质相关的各类标准和检验方法
GB5749-2006， 《生活饮用水卫生标准》 代替 （GB5749-85） GB/T 5750-2006 《生活饮用水卫生标准检验方法》 GB/T 5750.1 总则 GB/T 5750.2 水样的采集和保存 GB/T 5750.3 水质分析质量控制 GB/T 5750.4 感官性状和物理指标 GB/T 5750.5 无机非金属指标 GB/T 5750.6 金属指标 GB/T 5750.7 有机物综合指标 GB/T 5750.8 有机物指标 GB/T 5750.9 农药指标 GB/T 5750.10 消毒副产物指标 GB/T 5750.11 消毒剂指标 GB/T 5750.12 微生物指标 GB/T 5750.13 放射性指标 以上标准于2007年7月1日正式实施，代替1985年的相关标准
水样的采集和保存方法
2 水样保存 各种水质的水样，从采集到分析这段时间里，由 于物理的、化学的、生物的作用会发生不同程度 的变化，这些变化使得进行分析时的样品已不再 是采样时的样品，为了使这种变化降低到最小的 程度，必须在采样时对样品加以保护。 微生物：0～4℃避光保存，每125ml水样加入 0.1mg硫代硫酸钠除去残余余氯，保存时间4h。
与水质相关的各类标准和检验方法
GB8537－1995，《饮用天然矿泉水》 GB8538－1995，《饮用天然矿泉水检验方法》 GB17323－1998，《瓶装饮用纯净水》 GB17324－1998，《瓶装饮用纯净水卫生标准》 GB19298－2003，《瓶（桶）装饮用水卫生标准》 GB12997－1991， 水质 采样方案设计技术规定 GB12998－1991， 水质 采样技术指导 GB12999－1991， 水质采样，样品的保存和管理 技术规定
水样的采集和保存方法
微生物分析样品保存技术
待测项目 细菌总计数 大肠菌总数 粪便大肠菌 粪便链球菌 沙门氏菌 容器类 保存方法 别 灭菌容 2～5℃冷 器 藏 玻璃 分析地点 实验室 可保存时 间 尽快 建议 取氯化或溴化过的水样时， 所用 的样品瓶清毒之前，每125ml水 样加入0.1mg硫代硫酸钠除去残 余余氯， 保存时间4h以消除氯或 溴对细菌的抑制作用。 对重金属含量高于0.Ol mg/L 的 水样，应在容器消毒之前，按每 125mL容积加入0.3mL 的15% (m/m)EDTA。
总大肠菌群的检验
证实试验：
经革兰氏染色为阴性无芽孢杆菌，同时接种乳 糖蛋白胨培养液，36℃±1℃培养箱中培养 24h±2h，有产酸产气者，证实有总大肠菌群存 在。
结果报告：
根据证实为总大肠菌群的管数，查MPN检索表。
总大肠菌群的检验
方法：滤膜法 总大肠菌群滤膜法：
是指用孔径为 0.45μ m 的微孔滤膜过滤水样， 将滤膜贴在添加乳糖的选择性培养基上 37℃ 培养24h，能形成特征菌落的需氧和兼性厌氧 的革兰氏阴性无芽孢杆菌以检测水中总大肠 菌群的方法。
准备工作： 1 滤膜灭菌：将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏 水，置于沸水浴中煮沸灭菌3次，每次 15min，前两次煮沸后需更换水洗涤2~3次， 以除去残留溶剂。 2 滤器灭菌：用点燃的酒精棉球灭菌，也可 用蒸汽灭菌，121℃，20min。
过滤水样 用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗 糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，固定 好 滤器，将100mL水样注入滤器中，打开 滤器阀门，在 -5.07×104Pa下抽滤
细菌总数的检验
检验步骤： 1 生活饮用水 1.1 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml充分混 匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15ml已融化 并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋 摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验对 应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养 琼脂培养基作为空白对照。 1.2 待冷却凝固后，旋转平皿，使底面向上，置 于37℃恒温箱内培养48h，进行菌落计数，即为水 样1ml中的细菌总数。
总大肠菌群的检验
检验步骤
乳糖发酵试验
2 检验水源水时，如污染较严重，应加大 稀释度，可接种1，0.1，0.01mL甚至0.1， 0.01，0.001mL，每个稀释度接种5管，每 个水样接种15管，接种1mL以下水样时，必 须作10倍递增稀释后，取1mL接种。每递增 稀释一次，换用1支1mL灭菌分度吸管。
水样的采集和保存方法
3.2 水样的运送 装有水样的容器必须加以妥善的保护和密封，并 装在包装箱内固定，以防在运输途中破损，包括 材料和运输水样的条件都应严格要求。除了防震、 避免日光照射和低温运输外，还要防止新的污染 物进入容器和沾污瓶口使水样变质。 3.3 实验室对水样的接收 水样送至实验室时，首先要核对水样，验明标签， 确切无误时签字验收。 如果不能立即进行分析时，则应尽快采取保存措 施，并防止水样被污染。
水样的采集和保存方法
2.3 水样的过滤和离心
需要进行微生物检测的样品 不能进行过滤和离心
水样的采集和保存方法
3 水样的管理 3.1 水样的标签设计 水样采集后，往往根据不同的分析要求，分装成 数份，并分别加入保存剂。对每一份样品都应附 一张完整的水样标签。水样标签的设计可以根据 实际情况，一般包括:采样目的，监测点数目、位 置，监测日期，时间，采样人员等。标签应用不 退色的墨水填写，并牢固地贴于盛装水样的容器 外壁上。
总大肠菌群的检验
检验步骤 乳糖发酵试验 1 检验生 活饮用 水时， 取 10mL 水样接种到 10mL双料乳糖蛋白胨培养液中，取1mL水样，接种 到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中，另取1mL水样注 入 到 9mL 灭 菌 生 理 盐 水 中 ， 混 匀 后 吸 取 1mL( 即 0.1mL 水样 ) 。注入到 10mL 单料乳糖蛋白胨培养液 中，每一稀释度共接种5管。 对已处理过的出厂自来水，需经常检验或每 天检验一次的，可直接种5份10mL双料培养基，每 份接种10mL水样。
细菌总数的检验
2 水源水 2.1 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml充分混 匀的水样，注入盛有9ml灭菌水的试管中，混匀成 1：10稀释液。 2.2 吸取1：10稀释液1ml注入盛有9ml灭菌水 的试管中，混匀成1：100稀释液。按同法依次稀 释成1：1000、1：10000稀释液等备用。吸取不同 浓度的稀释液时必须更换吸管。 2.3 用灭菌吸管吸取2～3个适宜浓度的稀释液 1ml，分别注入灭菌平皿内。以下操作同生活饮用 水的检验步骤。
各类水质的细菌学指标要求
标准名称 生活饮用水 卫生标准 标准号 GB57492006 细菌学项目 菌落总数 总大肠菌群 耐热大肠菌群 大肠埃希氏菌 贾第鞭毛虫 隐孢子虫 细菌总数 总大肠菌群 粪大肠菌群 菌落总数 < < 大肠菌群 限量 100cfu/ml 不得检出， MPN/100mL； cfu/100mL 不得检出， MPN/100mL； cfu/100mL 不得检出， MPN/100mL； cfu/100mL <1 （个/10L） <1 （个/10L） 100（cfu/ml） 每 100ml 水样中不得检出 每 100ml 水样中不得检出 水源水 5 cfu/mL 罐装产品 50 cfu/mL 0 /100mL
水样的采集和保存方法
1 水样的采集方法
取样体积：0.5L
GB5750.2
同一水源，同一时间采集几类检测指标的水样 时，应先采集供微生物学指标检测的水样，采样时 应直接采集，不得用水样涮洗已灭菌的采样瓶，并 避免手指和其他物品对瓶口的污染。 在取自来水样时，先用酒精灯将水龙头烧灼消毒， 然后把水龙头完全打开，放水几分钟后，再取水样。 采取含有余氯的水样时，应在水样瓶未消毒前按 每125ml水样加入0.1mg硫代硫酸钠除去残余余氯。
总大肠菌群的检验
3 将接种管置36±1℃培养箱内，培养24±2h，如 所有乳糖蛋白胨培养管都不产气、产酸，则可报 告为总大肠菌群阴性。如有产酸产气者，则按下 列步骤进行。 4 分离培养 将产酸、产气的发酵管，分别转种在伊红美蓝琼 脂平板上，于 36±1℃培养箱内，培养 18 ～ 24h ， 观察菌落形态，挑取符合下列特征的菌落： 深紫黑色，具有金属光泽的菌落 紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落 淡紫红色，中心较深的菌落 做革兰氏染色，镜检和证实试验。
水样中细菌学项目检测方法
1 菌落总数 2 总大肠菌群 1 平皿计数法 1 多管发酵法 2 滤膜法
3 750.12
3 耐热大肠菌群
4大肠埃希氏菌
2 滤膜法 1 多管发酵法 2 滤膜法
3 酶底物法
菌落总数的检验
方法：平皿计数法 范围