水样的微生物检测

细菌总数的检验

不同稀释度的选择及报告方法
实例 不同稀释 度的平均菌落数 10 1 2 3 4 5 6 7 8
1
10
2
10
3
两个稀释度 菌落数之比 － 1.6 2.2 2 － － － －
菌落总数 (CFU/mL) 16400 37750 27100 1500 513000 270 30500 < l×l0
总大肠菌群的检验

检验步骤 乳糖发酵试验 1 检验生 活饮用 水时， 取 10mL 水样接种到 10mL双料乳糖蛋白胨培养液中，取1mL水样，接种 到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中，另取1mL水样注 入 到 9mL 灭 菌 生 理 盐 水 中 ， 混 匀 后 吸 取 1mL( 即 0.1mL 水样 ) 。注入到 10mL 单料乳糖蛋白胨培养液 中，每一稀释度共接种5管。 对已处理过的出厂自来水，需经常检验或每 天检验一次的，可直接种5份10mL双料培养基，每 份接种10mL水样。
总大肠菌群的检验

证实试验：

经革兰氏染色为阴性无芽孢杆菌，同时接种乳 糖蛋白胨培养液，36℃±1℃培养箱中培养 24h±2h，有产酸产气者，证实有总大肠菌群存 在。

结果报告：

根据证实为总大肠菌群的管数，查MPN检索表。
总大肠菌群的检验

方法：滤膜法 总大肠菌群滤膜法：
是指用孔径为 0.45μ m 的微孔滤膜过滤水样， 将滤膜贴在添加乳糖的选择性培养基上 37℃ 培养24h，能形成特征菌落的需氧和兼性厌氧 的革兰氏阴性无芽孢杆菌以检测水中总大肠 菌群的方法。
细菌总数的检验

检验步骤： 1 生活饮用水 1.1 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml充分混 匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15ml已融化 并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋 摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验对 应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养 琼脂培养基作为空白对照。 1.2 待冷却凝固后，旋转平皿，使底面向上，置 于37℃恒温箱内培养48h，进行菌落计数，即为水 样1ml中的细菌总数。
生活饮用水 卫生规范 饮用天然矿 泉水
卫 生 2001.9.1
部
GB8537-1995
各类水质的细菌学指标要求(续)
瓶 装 饮 用 纯 净 GB17324 － 1998 水卫生标准 菌落总数 ≤ 大肠菌群 ≤ 霉菌和酵母 ≤ 致病菌 （沙门氏菌、 志贺氏菌、金黄色葡萄 球菌） 瓶（桶）装饮用 GB19298 － 菌落总数 ≤ 2003 水卫生标准 大肠菌群 ≤ 霉菌 ≤ 酵母 ≤ 致病菌 （沙门氏菌、 志贺氏菌、金黄色葡萄 球菌） 海水水质标准 GB3097 － 大肠菌群 ≤ 1997 粪大肠菌群 ≤ 20 cfu/mL 3 MPN/100mL 不得检出 不得检出
水样的采集和保存方法


3.2 水样的运送 装有水样的容器必须加以妥善的保护和密封，并 装在包装箱内固定，以防在运输途中破损，包括 材料和运输水样的条件都应严格要求。除了防震、 避免日光照射和低温运输外，还要防止新的污染 物进入容器和沾污瓶口使水样变质。 3.3 实验室对水样的接收 水样送至实验室时，首先要核对水样，验明标签， 确切无误时签字验收。 如果不能立即进行分析时，则应尽快采取保存措 施，并防止水样被污染。
总大肠菌群的检验
3 将接种管置36±1℃培养箱内，培养24±2h，如 所有乳糖蛋白胨培养管都不产气、产酸，则可报 告为总大肠菌群阴性。如有产酸产气者，则按下 列步骤进行。 4 分离培养 将产酸、产气的发酵管，分别转种在伊红美蓝琼 脂平板上，于 36±1℃培养箱内，培养 18 ～ 24h ， 观察菌落形态，挑取符合下列特征的菌落： 深紫黑色，具有金属光泽的菌落 紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落 淡紫红色，中心较深的菌落 做革兰氏染色，镜检和证实试验。
细菌总数的检验

2 水源水 2.1 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml充分混 匀的水样，注入盛有9ml灭菌水的试管中，混匀成 1：10稀释液。 2.2 吸取1：10稀释液1ml注入盛有9ml灭菌水 的试管中，混匀成1：100稀释液。按同法依次稀 释成1：1000、1：10000稀释液等备用。吸取不同 浓度的稀释液时必须更换吸管。 2.3 用灭菌吸管吸取2～3个适宜浓度的稀释液 1ml，分别注入灭菌平皿内。以下操作同生活饮用 水的检验步骤。
食品加工用水的微生物检测 方法介绍
姜英辉
与水质相关的各类标准和检验方法


GB5749-2006， 《生活饮用水卫生标准》 代替 （GB5749-85） GB/T 5750-2006 《生活饮用水卫生标准检验方法》 GB/T 5750.1 总则 GB/T 5750.2 水样的采集和保存 GB/T 5750.3 水质分析质量控制 GB/T 5750.4 感官性状和物理指标 GB/T 5750.5 无机非金属指标 GB/T 5750.6 金属指标 GB/T 5750.7 有机物综合指标 GB/T 5750.8 有机物指标 GB/T 5750.9 农药指标 GB/T 5750.10 消毒副产物指标 GB/T 5750.11 消毒剂指标 GB/T 5750.12 微生物指标 GB/T 5750.13 放射性指标 以上标准于2007年7月1日正式实施，代替1985年的相关标准

培养 水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门， 取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分， 移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留 细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧， 两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置， 放入37℃恒温箱内培养24h±2h
结果观察与报告：

与水质相关的各类标准和检验方法

GB8537－1995，《饮用天然矿泉水》 GB8538－1995，《饮用天然矿泉水检验方法》 GB17323－1998，《瓶装饮用纯净水》 GB17324－1998，《瓶装饮用纯净水卫生标准》 GB19298－2003，《瓶（桶）装饮用水卫生标准》 GB12997－1991， 水质 采样方案设计技术规定 GB12998－1991， 水质 采样技术指导 GB12999－1991， 水质采样，样品的保存和管理 技术规定
50 cfu/mL 3 MPN/100mL 10 cfu/mL 10 cfu/mL 不得检出
10000 个/L 2000 个/L
水样的采集和保存方法
1 水样的采集方法
GB/T 5750.2
范围：适用于生活饮用水和及其水源水样的采集和保存
采样容器：玻璃材质，不透明非活性玻璃容器。 容器及塞子、盖子应经灭菌温度并且在此温度下不释放 或产生出任何能抑制生物活性、灭活或促进生物生长的化学 物质。 采样容器的洗涤和灭菌： 1 容器洗涤：将容器用自来水和洗涤剂洗涤，并且用自来 水彻底冲洗后用质量分数为10％的盐酸溶液浸泡过夜，然后 依次用自来水，蒸馏水洗净。 2 容器灭菌：热力灭菌。干热灭菌要求160℃，2h；高压 蒸汽灭菌121℃，15min。高压蒸汽灭菌后的容器如不立即使 用，应于60℃将瓶内冷凝水烘干，灭菌后的容器应在2周内 使用。
水样的采集和保存方法
1 水Biblioteka Baidu的采集方法
取样体积：0.5L
GB5750.2
同一水源，同一时间采集几类检测指标的水样 时，应先采集供微生物学指标检测的水样，采样时 应直接采集，不得用水样涮洗已灭菌的采样瓶，并 避免手指和其他物品对瓶口的污染。 在取自来水样时，先用酒精灯将水龙头烧灼消毒， 然后把水龙头完全打开，放水几分钟后，再取水样。 采取含有余氯的水样时，应在水样瓶未消毒前按 每125ml水样加入0.1mg硫代硫酸钠除去残余余氯。
水样的采集和保存方法

2.3 水样的过滤和离心
需要进行微生物检测的样品 不能进行过滤和离心


水样的采集和保存方法

3 水样的管理 3.1 水样的标签设计 水样采集后，往往根据不同的分析要求，分装成 数份，并分别加入保存剂。对每一份样品都应附 一张完整的水样标签。水样标签的设计可以根据 实际情况，一般包括:采样目的，监测点数目、位 置，监测日期，时间，采样人员等。标签应用不 退色的墨水填写，并牢固地贴于盛装水样的容器 外壁上。
4
4
3
510000 或 5.1×10 270 或 2.7×10
2
5
31000 或 3.1×10 < l×l0
4
总大肠菌群的检验

方法：多管发酵法 总大肠菌群： 指一群在37培养24h能发酵乳糖、产酸产 气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞 杆菌。 该菌群主要来源于人畜粪便，具有指示 菌的一般特征，故以此作为粪便污染指标， 评价饮水的卫生质量
总大肠菌群的检验

检验步骤
乳糖发酵试验
2 检验水源水时，如污染较严重，应加大 稀释度，可接种1，0.1，0.01mL甚至0.1， 0.01，0.001mL，每个稀释度接种5管，每 个水样接种15管，接种1mL以下水样时，必 须作10倍递增稀释后，取1mL接种。每递增 稀释一次，换用1支1mL灭菌分度吸管。
各类水质的细菌学指标要求
标准名称 生活饮用水 卫生标准 标准号 GB57492006 细菌学项目 菌落总数 总大肠菌群 耐热大肠菌群 大肠埃希氏菌 贾第鞭毛虫 隐孢子虫 细菌总数 总大肠菌群 粪大肠菌群 菌落总数 < < 大肠菌群 限量 100cfu/ml 不得检出， MPN/100mL； cfu/100mL 不得检出， MPN/100mL； cfu/100mL 不得检出， MPN/100mL； cfu/100mL <1 （个/10L） <1 （个/10L） 100（cfu/ml） 每 100ml 水样中不得检出 每 100ml 水样中不得检出 水源水 5 cfu/mL 罐装产品 50 cfu/mL 0 /100mL

水样的采集和保存方法
微生物分析样品保存技术
待测项目 细菌总计数 大肠菌总数 粪便大肠菌 粪便链球菌 沙门氏菌 容器类 保存方法 别 灭菌容 2～5℃冷 器 藏 玻璃 分析地点 实验室 可保存时 间 尽快 建议 取氯化或溴化过的水样时， 所用 的样品瓶清毒之前，每125ml水 样加入0.1mg硫代硫酸钠除去残 余余氯， 保存时间4h以消除氯或 溴对细菌的抑制作用。 对重金属含量高于0.Ol mg/L 的 水样，应在容器消毒之前，按每 125mL容积加入0.3mL 的15% (m/m)EDTA。


准备工作： 1 滤膜灭菌：将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏 水，置于沸水浴中煮沸灭菌3次，每次 15min，前两次煮沸后需更换水洗涤2~3次， 以除去残留溶剂。 2 滤器灭菌：用点燃的酒精棉球灭菌，也可 用蒸汽灭菌，121℃，20min。

过滤水样 用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗 糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，固定 好 滤器，将100mL水样注入滤器中，打开 滤器阀门，在 -5.07×104Pa下抽滤
水样的采集和保存方法
2 水样保存 各种水质的水样，从采集到分析这段时间里，由 于物理的、化学的、生物的作用会发生不同程度 的变化，这些变化使得进行分析时的样品已不再 是采样时的样品，为了使这种变化降低到最小的 程度，必须在采样时对样品加以保护。 微生物：0～4℃避光保存，每125ml水样加入 0.1mg硫代硫酸钠除去残余余氯，保存时间4h。
报告方式 (CFU/mL) 16000 或 1.6×10 38000 或 3.8×10 27000 或 2.7×10 1500 或 1.5×10
4
1365 2760 2890 150 多不可 计 27 多不可 计 0
164 295 271 30 1650 11 305 0
20 46 60 8 513 5 12 0
水样中细菌学项目检测方法
1 菌落总数 2 总大肠菌群 1 平皿计数法 1 多管发酵法 2 滤膜法
3 酶底物法 1 多管发酵法
GB/T 5750.12
3 耐热大肠菌群
4大肠埃希氏菌
2 滤膜法 1 多管发酵法 2 滤膜法
3 酶底物法
菌落总数的检验

方法：平皿计数法 范围
此方法规定了生活饮用水及其水源水中细菌总数的 测定方法 此方法适用于测定生活饮用水及其水源水中的细 菌总数