实验 金黄色葡萄球菌的分离和鉴定
肉兔金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验
4522023肉兔金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验牛群孟庆福黄敏董旭陈小密王华*周孝琼*（龙岩学院生命科学学院福建龙岩364000）摘要为了诊断福建省龙岩市某兔场乳房炎的具体病原，试验对兔脓肿液进行细菌分离纯化培养、革兰氏染色、显微镜观察、自动微生物鉴定系统鉴定、16S rDNA序列测定以及对所分离菌株进行药敏试验和耐药性分析。
结果表明，所分离菌株为金黄色葡萄球菌。
药敏试验结果显示，分离的金黄色葡萄球菌对青霉素G、青霉素钾、氨苄西林、红霉素、庆大霉素和磺胺甲氧嘧啶高度敏感；对磺胺异亚唑中度敏感；对环丙沙星、卡那霉素、克林霉素等6种药物不敏感。
关键词肉兔金黄色葡萄球菌16S rDNA药敏试验文献标识码：A文章编号：1003-4331（2023）02-0017-04Isolation,identification and drug sensitivity test of Staphylococcus aureus from meat rabbitsNiu Qun Meng Qingfu Huang Min Dong Xu Chen Xiaomi Wang Hua*Zhou Xiaoqiong*(School of Life Sciences,Longyan University,Fujian Longyan364000)Abstract In order to diagnose the specific pathogen of mastitis in a rabbit farm in Longyan city,Fujian province,the experiment was conducted to isolate and purify the bacteria from rabbit abscess fluid,observe it with a Gram staining microscope,identify it with an automatic microbial identification system,determine the16S rDNA sequence,and analyze the drug sensitivity and drug resistance of the isolated strains.The results showed that the isolated strains were Staphylococcus aureus.The drug sensitivity test showed that the isolated strains were highly sensitive to penicillin G,penicillin potassium,ampicillin,erythromycin,gentamycin and sulfamethoxazole; moderately sensitive to sulfamethoxazole;It is insensitive to6drugs such as ciprofloxacin,kanamycin and clindamycin.Key words Meat rabbit Staphylococcus aureus16S rDNA Drug susceptibility test葡萄球菌病是由葡萄球菌属致病性葡萄球菌感染引起人和动物多种疾病的总称。
猪金黄色葡萄球菌的分离培养和药敏试验
猪金黄色葡萄球菌的分离培养和药敏试验龚岳【期刊名称】《养猪》【年(卷),期】2017(000)006【总页数】3页(P108-110)【作者】龚岳【作者单位】滨海新区塘沽动物卫生监督所,天津滨海新区 300454【正文语种】中文【中图分类】S858.282.61金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为革兰氏阳性球形细菌，显微镜下排列成葡萄串状，无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜，是常见的引起食物中毒的致病菌，常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。
金黄色葡萄球菌对营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2 mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10%~15%氯化钠（NaCl）肉汤中生长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气，甲基红反应阳性，VP反应弱阳性[1]。
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。
在干燥环境中可存活数月；在空气中存在，但不繁殖。
耐热性强，加热70℃1 h或80℃30 min不被杀死；耐低温，在冷冻食品中不易死亡；耐高渗，在含有50%~66%蔗糖或15%以上食盐食品中才可被抑制。
日常生活中，人之间的接触或打喷嚏，被猫、狗咬伤等，尤其是猪群大规模饲养中，如果不注意人和易感动物的交叉感染，都可感染金黄色葡萄球菌。
此外，耐药的金黄色葡萄球菌可能通过食物、水源、毛发和其他接触方式传递给人，对公共卫生造成了严重威胁[2]。
本试验采集患病猪只患处脓汁、渗出液、伤口分泌物、血液、尿液、粪便等不同样品，分离培养和鉴定金黄色葡萄球菌，并进行生化试验和药敏试验，研究金黄色葡萄球菌对先锋V、庆大霉素、氯霉素、四环素、青霉素、链霉素和红霉素的耐药性。
细菌分离培养与药敏试验于2016年9月中旬至9月底在天津农学院动物医学实验室进行。
1.2.1 培养皿的准备（1）将30个培养皿清洗干净，并用蒸馏水冲洗、晾干。
金葡球菌实验报告
一、实验目的通过本次实验，掌握金黄色葡萄球菌的分离、培养和鉴定方法，了解其生物学特性，为临床诊断和治疗提供依据。
二、实验材料1. 实验菌株：金黄色葡萄球菌标准菌株2. 培养基：普通琼脂、血琼脂、Baird-Parker培养基、营养肉汤3. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、移液器、试管、培养皿等4. 实验试剂：革兰氏染色液、碱性复红液、氯化钠、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甲基红等三、实验方法1. 菌株分离与纯化（1）将金黄色葡萄球菌标准菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（2）取培养好的肉汤，用无菌移液器吸取适量接种于普通琼脂平板，37℃培养24小时。
（3）挑取单菌落，接种于血琼脂平板，37℃培养24小时。
（4）挑取单菌落，接种于Baird-Parker培养基平板，37℃培养24小时。
2. 鉴定试验（1）革兰氏染色：取纯化后的金黄色葡萄球菌，进行革兰氏染色，观察菌体形态。
（2）生化试验：进行触酶实验、葡萄糖发酵实验、麦芽糖发酵实验、乳糖发酵实验、蔗糖发酵实验、甲基红反应、VP反应等，以确定金黄色葡萄球菌的生化特性。
（3）溶血试验：观察金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的溶血情况。
（4）过氧化氢酶试验：观察金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上的过氧化氢酶反应。
四、实验结果1. 菌株分离与纯化在普通琼脂平板、血琼脂平板和Baird-Parker培养基平板上均分离出金黄色葡萄球菌，菌落呈圆形、凸起、表面光滑、湿润、不透明，产生黄色脂溶性色素。
2. 革兰氏染色金黄色葡萄球菌革兰氏染色阳性，呈球形，排列成葡萄串状。
3. 生化试验金黄色葡萄球菌触酶实验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、产酸不产气，甲基红反应阳性，VP反应阴性。
4. 溶血试验金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生溶血环。
5. 过氧化氢酶试验金黄色葡萄球菌在Baird-Parker培养基平板上产生黑色沉淀。
五、实验结论根据实验结果，分离出的金黄色葡萄球菌符合金黄色葡萄球菌的生物学特性，可以确认为金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌的分离培养试验
实验金黄色葡萄球菌的分离培养一．实验目的；1．掌握Baird-Parker 培养基的配制方法2．掌握利用选择性培养基分离金黄色葡萄球菌的检验方法二．实验内容1 原理；Baird-Parker 培养基在含有氮源的基础上，补充了促进细菌生长的丙酮酸钠，又含有抑制剂：亚碲酸钾，故有较好的选择性。
但对于金葡萄球菌没有抑制，其能将亚碲酸钾还原为碲在菌落中心呈黑色，易于观察；加入卵黄，由于卵磷酯酶阳性特征，其菌落周围可出现明显的沉淀环。
利用选择性培养基进行常见致病菌的分离是致病菌检测中的重要部分。
2 仪器与试剂250ml 三角瓶灭菌锅量筒Baird-Parker 氏培养基、亚碲酸盐卵黄增菌液、7.5%氯化钠肉汤3 操作步骤3.1 培养基配制Baird-Parker琼脂培养板：称取58克干粉，加热溶解于950ml蒸馏水中,分装每瓶95ml, 121 C高压灭菌15分钟,冷至50C左右,于每95 ml加入常温解冻的卵黄亚碲酸钾增菌剂5 ml ，摇匀后倾入无菌平皿。
7.5% 氯化钠肉汤（蛋白胨10g 牛肉膏5g 氯化钠75g 蒸馏水1000mlph7.4 ）将上述成分加热溶解，调节pH,分装，每瓶225 mL, 121 C高压灭菌15 min。
3.2 增菌及分离培养3.2.1挑取金黄色葡萄球菌接种于7.5%NaCI肉汤培养基内，置于（37C）恒温箱中培养6-8h.3.2.2将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker 平板，于36 C±1 C培养18 h〜24h 或45 h 〜48 h。
3.3 观察菌落形态4、结果判定根据菌落形态，鉴别检样中细菌种类三、实验结果实验金黄色葡萄球菌的染色镜检一．实验目的; 掌握细菌革兰氏染色方法；在显微镜下观察金黄色葡萄球菌的形态。
二．实验内容1 原理; 革兰氏阳性菌经结晶紫染色乙醇脱色后，仍为紫色，而革兰氏阴性菌被复染为其他颜色。
2 仪器与试剂；结晶紫染色液（结晶紫1g 95%乙醇20ml 1%草酸铵水溶液80ml 将结晶紫完全溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
实验金黄色葡萄球菌的检验
实验金黄色葡萄球菌的检验实验5金黄色葡萄球菌的检验1目的和要求（1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法（2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理2基本原理金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。
此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。
因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。
绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的DNA 酶。
3实验材料3.1检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料3.2菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。
3.3培养基7.5%氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基3.4试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。
3.5仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。
4检样程序5操作步骤5.15.1.1样品的处理称取25g样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。
若样品为液态，吸取25mL样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。
5.1.2增菌和分离培养将上述样品匀液于36℃±1℃培养18h～24h。
金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。
3种方法分离鉴定金黄色葡萄球菌
3种方法分离鉴定金黄色葡萄球菌
沈锐;马力;严海元;肖陈;赵壮志
【期刊名称】《食品工程》
【年(卷),期】2024()1
【摘要】通过参加2023年中国食品药品检定研究院组织的NIFDC-PT-451金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)检测能力验证计划,采用3种快速分离鉴定金黄色葡萄球菌的方法,与国标方法比较,提高了检验检测效率。
分别采用国标法、全自动酶联免疫荧光分析仪法和实时荧光PCR检测法对随机人工污染样品
TC04510042、TC04510204进行金黄色葡萄球菌检验。
TC04510042、
TC04510204均检出金黄色葡萄球菌,3种方法结果一致。
金黄色葡萄球菌采用国标法,同时辅以全自动酶联免疫荧光分析仪法和实时荧光PCR检测法,不仅降低了假阳性率,也缩短了检测时间。
后2种方法可作为大量样品的前筛查及应急检验,对筛查中出现的阳性样本用国标法进行确认,提高了检验检测效率。
【总页数】5页(P84-87)
【作者】沈锐;马力;严海元;肖陈;赵壮志
【作者单位】重庆市永川食品药品检验所;重庆市黔江食品药品检验所
【正文语种】中文
【中图分类】TS207.5
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4.奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定与耐药分析
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葡萄球菌的检验实训报告
1. 掌握葡萄球菌的检验方法。
2. 了解葡萄球菌的生物学特性及致病性。
3. 培养无菌操作技能，提高实验操作能力。
二、实验原理葡萄球菌是一类革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界及人体皮肤、黏膜等部位。
其中，金黄色葡萄球菌是引起人类感染的重要病原菌之一，可引起多种局部和全身感染。
本实验通过对葡萄球菌的分离、培养、鉴定和计数，了解其生物学特性及致病性。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠2. 实验仪器：显微镜、培养皿、培养箱、培养瓶、灭菌锅、试管、无菌水、葡萄球菌标准菌株等3. 实验试剂：葡萄球菌检验试剂盒、氯化钠、肉汤、胰酪胨大豆肉汤、兔血浆、细菌培养箱等四、实验方法1. 样品采集：取小白鼠血液、尿液、粪便等样品。
2. 样品处理：将样品进行无菌操作处理，制成1:10样品混悬液。
3. 分离培养：将样品混悬液接种于葡萄球菌检验试剂盒中的血平板和Baird-Parker平板，置于36±1℃培养箱中培养24小时。
4. 菌落观察：观察血平板和Baird-Parker平板上的菌落特征，记录金黄色、白色或柠檬色菌落。
5. 革兰氏染色：挑取金黄色、白色或柠檬色菌落进行革兰氏染色，观察菌体形态。
6. 血浆凝固酶试验：将金黄色葡萄球菌培养物与兔血浆混合，观察凝固现象。
7. 生化试验：进行触酶试验、葡萄糖发酵试验等，观察生化反应结果。
8. 计数：根据平板菌落数进行葡萄球菌计数。
1. 菌落观察：血平板和Baird-Parker平板上观察到金黄色、白色或柠檬色菌落。
2. 革兰氏染色：金黄色葡萄球菌呈革兰氏阳性球菌，排列成葡萄串状。
3. 血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌与兔血浆混合后，出现凝固现象。
4. 生化试验：金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，葡萄糖发酵试验阳性。
5. 计数：葡萄球菌计数为每克样品含10^6 CFU。
六、实验分析1. 金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄串状，与实验结果相符。
2. 血浆凝固酶试验阳性，表明金黄色葡萄球菌具有致病性。
金黄色葡萄球菌实训报告
一、实验目的1. 熟悉金黄色葡萄球菌的基本生物学特性。
2. 掌握金黄色葡萄球菌的分离、纯化及鉴定方法。
3. 了解金黄色葡萄球菌的致病性及防治措施。
二、实验原理金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种革兰氏阳性球菌，广泛存在于自然界和人类及动物体内。
该菌具有高度的致病性，可引起多种化脓性感染，如肺炎、败血症、心内膜炎等。
实验中，通过观察金黄色葡萄球菌的形态特征、生化反应和药物敏感性，实现对金黄色葡萄球菌的鉴定。
三、实验材料1. 金黄色葡萄球菌菌种：购自某生物技术公司。
2. 实验器材：显微镜、无菌操作台、接种环、接种针、无菌培养皿、营养琼脂、血液琼脂、药敏纸片、生理盐水、75%酒精、碘酒、显微镜油镜等。
3. 实验试剂：青霉素、红霉素、万古霉素、庆大霉素等药敏纸片。
四、实验方法1. 金黄色葡萄球菌的分离与纯化（1）接种：将金黄色葡萄球菌菌种接种于营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时。
（2）挑取单菌落：用接种环挑取生长良好的单菌落，接种于新的营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时。
（3）重复挑取：继续挑取单菌落，直至获得纯化后的金黄色葡萄球菌。
2. 金黄色葡萄球菌的形态特征观察（1）革兰氏染色：将纯化后的金黄色葡萄球菌涂片，进行革兰氏染色，显微镜下观察。
（2）菌落观察：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于营养琼脂平板，37℃恒温培养24小时，观察菌落形态。
3. 金黄色葡萄球菌的生化反应鉴定（1）糖发酵实验：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于糖发酵培养基，37℃恒温培养24小时，观察是否产生气泡。
（2）氧化酶实验：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于氧化酶培养基，37℃恒温培养24小时，观察是否产生颜色变化。
4. 金黄色葡萄球菌的药物敏感性实验（1）药敏纸片法：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于营养琼脂平板，将药敏纸片贴于平板表面，37℃恒温培养24小时，观察抑菌圈的大小。
（2）最低抑菌浓度（MIC）测定：将纯化后的金黄色葡萄球菌接种于微量肉汤稀释法培养基，分别加入不同浓度的药物，37℃恒温培养24小时，观察生长情况，确定最低抑菌浓度。
金黄色葡萄球菌检测实验报告
金黄色葡萄球菌检测实验报告一、实验目的金黄色葡萄球菌是一种常见的病原菌，能够引起多种感染性疾病。
本次实验的目的是通过一系列的检测方法，准确检测出样本中是否存在金黄色葡萄球菌，并确定其数量和特性，为食品安全、临床诊断和环境卫生等领域提供可靠的检测依据。
二、实验原理金黄色葡萄球菌具有一些独特的生物学特性和生化反应，可通过以下几种方法进行检测：1、血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌能够产生血浆凝固酶，使血浆发生凝固。
2、甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇产酸。
3、革兰氏染色：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。
三、实验材料1、样本：食品样本（如乳制品、肉类）、临床样本（如脓液、血液）等。
2、培养基和试剂：血琼脂平板甘露醇氯化钠琼脂培养基兔血浆革兰氏染色液生理盐水3、仪器设备：恒温培养箱显微镜无菌接种环、移液管等四、实验步骤1、样本处理食品样本：称取一定量的样品，加入适量生理盐水进行均质处理，制成稀释液。
临床样本：直接进行涂片或适当稀释。
2、增菌培养将处理后的样本接种于 75%氯化钠肉汤中，置于 36±1℃恒温培养箱中培养 18 24 小时。
3、分离培养从增菌培养物中分别划线接种于血琼脂平板和甘露醇氯化钠琼脂培养基上，于 36±1℃培养 18 24 小时。
4、形态观察观察血琼脂平板上的菌落形态，金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，周围有明显的透明溶血圈。
观察甘露醇氯化钠琼脂培养基上的菌落，金黄色葡萄球菌能使培养基变黄。
5、革兰氏染色挑取可疑菌落进行革兰氏染色，在显微镜下观察，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串状排列。
6、血浆凝固酶试验取兔血浆与可疑菌落混合，置于 36±1℃培养箱中观察，若血浆发生凝固，则为阳性。
7、甘露醇发酵试验接种可疑菌落于甘露醇氯化钠琼脂培养基中，观察是否产酸。
五、实验结果1、形态观察在血琼脂平板上观察到金黄色、周围有透明溶血圈的菌落。
在甘露醇氯化钠琼脂培养基上观察到变黄的菌落。
实验十二金黄色葡萄球菌
致病性金葡菌可产生血浆凝固酶。
精品课件
5
金葡菌镜下特征
精品课件
6
操作流程
检样25g(mL) +稀释液225mL，均质
7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤）
36℃±1 ℃， 18h~24h
Baird-Parker平板，血平板
36℃±1 ℃
B-P平板18h~24h或45h~48h 血平板 18h~24h
涂片染色
观察溶血
BHI肉汤和营养琼脂斜面 血浆凝固酶试验
结果报告
精品课件
7
菌落特征
Baird-Parker平板：呈灰色到黑色，边缘为淡色， 周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。直径 2mm~3mm。
长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典 型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干 燥。
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23
取新鲜配置兔血浆 0.5 mL，放入小试管中， 再加入 BHI培养物 0.2 mL～0.3 mL，振荡摇 匀，置 36 ±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时 观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管 倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原 体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆 凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培 养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明 书操作，进行血浆凝固酶试验。
精品课件
3
生化特性
典型的金葡菌呈球形，大小0.5×1.0μm。致病 性菌较非致病性菌小。在液体培养基中生长， 常呈双球菌或短链状排列。
本菌无鞭毛及芽孢，一般不形成荚膜。革兰 氏染色阳性。
金葡菌耐盐性强，最适宜生长的盐浓度为 5%～7.5%,可利用此特性对金葡菌增菌，抑制 杂菌。
金黄色葡萄球菌的分离和初步鉴别
品种名称：金黄色葡萄球菌显色培养基品种编号：CRM012英译名称：Chromogenic Staph. aureus Agar金黄色葡萄球菌显色培养基用途：用于金黄色葡萄球菌的分离和初步鉴别。
金黄色葡萄球菌显色培养基使用原理：蛋白胨、大豆胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;显色剂与金黄色葡萄球菌具有的酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在无色透明平板上，金黄色葡萄球菌产生粉红-紫红的边缘整齐菌落;抑菌剂可抑制杂菌的生长。
操作步骤：1、称取67.4g培养基干粉，加入1L蒸馏水或去离子水(可按比例扩大增或缩小)，搅拌加热煮沸至完全溶解(避免过度加热)，无需高压灭菌，冷至50℃左右倾注平板备用;2、待检样品按照相应的标准(GB、SN、FDA等)进行取样及前增菌，挑取一环增菌液划线接种于制备好的该培养基平板上，于36±1℃培养18～24 h，观察结果，挑取典型可疑菌落进行鉴定试验。
结果判断：菌属菌落特征金黄色葡萄球菌粉红-紫红色菌落其它菌蓝绿色或无色或受抑制金黄色葡萄球菌显色培养基质量控制：外观：流动性良好的淡黄色粉末，制备好的平板呈浅黄色透明固体培养基。
生物学：下列菌株接种后于36±1℃培养24h生长情况如下表：质控菌菌落特征金黄色葡萄球菌ATCC25923 生长良好，粉红-紫红色单核增生李斯特菌ATCC19115 蓝绿色表皮葡萄球菌(CMCC(B)26069 受抑制粪肠球菌ATCC29212 受抑制普通变形杆菌CMCC(B)49027 受抑制规格：67.4克 /瓶，可配置1L的培养基。
贮存：脱水培养基：2～8℃，在标签上注明的保质期内使用。
制备好平板：2～8℃，最多保存一周。
实验_金黄色葡萄球菌的分离和鉴定
鸡蛋卵清芽孢杆菌的分离和鉴定专业：11生技姓名：张媛梦学号：201111001086摘要：芽孢杆菌，细菌的一科，能形成芽孢（内生孢子）的杆菌或球菌。
它们对外界有害因子抵抗力强，分布广，存在于土壤、水、空气以及动物肠道等处。
绝大多数是一个菌体仅形成一个芽孢芽孢位于菌体内,由核心、皮层、芽孢壳和外壁组成。
核心是芽孢的原生质体，内含DNA、RNA、可能与DNA相联系的特异芽孢蛋白质以及合成蛋白质和产生能量的系统。
关键字：芽孢杆菌分离纯化革兰氏染色1、实验原理1.1芽孢杆菌的分离：芽孢杆菌无湿状态可耐低温－60℃、耐高温+280℃，耐强酸、耐强碱、抗菌消毒、耐高氧（嗜氧繁殖）、耐低氧（厌氧繁殖）。
所以，在微量的磺胺药物的环境中依然可以繁殖。
芽孢是芽孢杆菌特有的结构，其主要特点是抗性强，对高湍、紫外线、干燥、辐射等有毒化学物质有较强的抵抗力。
1.2芽孢杆菌的革兰氏染色：革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性（G－）两种类型，这是由于这两种细菌细胞壁结构和组合的差异所决定。
首先利用草酸铵结晶紫初染，所有细菌都会着上结晶紫的蓝紫色。
然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理，由于碘与结晶紫形成碘-结晶紫复合物，增强了染料在菌体的滞留能力。
之后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时，两种细菌的脱色效果不同。
革兰氏染色细菌细胞壁含糖量高，壁厚且脂质含量低，肽聚糖本身并不结合染料，但其所有的网孔结构可以滞留碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。
而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低，壁薄且脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加原先滞留下来的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来，菌体变为无色，用复染剂染色后又复变为染色剂颜色。
2、实验材料和设备2.1.培养基牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏0.75g，蛋白胨2.5g，氯化钠1.25g，琼脂3.75g，蒸馏水250ml，PH7.0-7.2 121℃灭菌20min后倒平板。
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析金黄色葡萄球菌是一种常见的细菌，它是引起人体多种感染的病原菌之一。
金黄色葡萄球菌检验技术是通过分离、培养和鉴定来检测和确定金黄色葡萄球菌的存在与类型。
以下是金黄色葡萄球菌检验技术的介绍及分析。
金黄色葡萄球菌的分离是检验的第一步。
样品通常是从患者的伤口、分泌物或体液中获取的，也可以从环境中收集。
分离可以通过将样品涂抹到适当的察尔染色的琼脂平板上，然后进行培养和鉴定来完成。
金黄色葡萄球菌会在琼脂平板上形成金黄色的菌落。
培养是金黄色葡萄球菌检验的关键步骤。
常用的培养基包括牛肉蛋白胨琼脂、亚洲互联网的Tag：脑心制剂琼脂、亚洲互联网的Tag：镜光菌属琼脂等。
金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性球菌，它可以在各种营养富集培养基中生长，但最好使用富含血液、蛋白质和碳水化合物的培养基。
培养的时间通常为24小时，金黄色葡萄球菌菌落会呈现金黄色且凸起。
鉴定是确认金黄色葡萄球菌的类型的步骤。
鉴定方法包括形态学观察、生化试验和分子生物学方法。
形态学观察是通过显微镜观察菌落和细胞形态来判断。
金黄色葡萄球菌是圆形或椭圆形的，常呈簇状分布。
生化试验可以通过检测金黄色葡萄球菌对特定底物的代谢能力来进行鉴定。
一些常用的测试包括氧化酶试验、半乳糖发酵试验等。
分子生物学方法可以通过检测特定基因或DNA序列来鉴定金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌检验技术的分析主要集中在以下几个方面。
金黄色葡萄球菌的检验可以帮助医生确定感染的病原菌，从而指导合理的治疗方案。
金黄色葡萄球菌是耐药菌中的重要成员，对多种抗生素具有耐药性，因此及早检测和鉴定金黄色葡萄球菌可以避免无效的药物治疗。
金黄色葡萄球菌还可以引起食物中毒和医院相关感染等，检验技术的应用可以有助于减少相关疾病的发生。
金色葡萄球菌实验报告
金色葡萄球菌实验报告1. 引言金色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的细菌，广泛存在于自然界和人体内。
它是一种革兰氏阳性细菌，通常以球状或卵圆形的形态出现。
金色葡萄球菌可以引起多种疾病，包括皮肤感染、血液感染和肺炎等。
本实验旨在研究金色葡萄球菌的生长特性和抗菌药物敏感性。
2. 材料和方法2.1 材料•金色葡萄球菌培养基•无菌琼脂平板•无菌培养皿•无菌试管•灭菌吸管•无菌移液器•紫外灯2.2 方法1.准备工作：将培养皿、试管、琼脂平板等器材进行灭菌处理，保证实验环境的无菌。
2.采集样品：使用无菌吸管，从待测样品中采集适量的金色葡萄球菌。
3.培养金色葡萄球菌：将采集的样品转移到金色葡萄球菌培养基中，轻轻摇匀，然后在无菌琼脂平板上均匀涂抹样品。
4.孵育：将涂有样品的琼脂平板置于恒温培养箱中，在37摄氏度下孵育24小时。
5.观察生长情况：观察琼脂平板上是否有金色葡萄球菌的生长，记录菌落的形态、颜色和大小等特征。
6.统计菌落数量：使用计数板或显微镜统计菌落数量，以评估金色葡萄球菌的生长情况。
7.抗菌药物敏感性测试：使用纸片扩散法或碟片扩散法，将不同种类的抗菌药物施加到含有金色葡萄球菌的琼脂平板上，观察是否形成抑制圈，评估菌株的敏感性。
3. 结果与讨论根据实验结果，我们观察到金色葡萄球菌在培养基上形成了典型的黄色菌落。
菌落呈圆形，直径约为2-4毫米，表面平整光滑。
这与金色葡萄球菌的形态特征相符合。
在抗菌药物敏感性测试中，我们使用了几种常见的抗菌药物。
结果显示，金色葡萄球菌对某些抗菌药物表现出抗性，即在药物施加区域没有形成抑制圈，而对其他抗菌药物则表现出敏感性，形成了明显的抑制圈。
这表明金色葡萄球菌对不同抗菌药物的敏感性存在差异。
4. 结论通过本实验，我们成功培养了金色葡萄球菌，并观察到了其典型的生长特征。
同时，通过抗菌药物敏感性测试，我们发现金色葡萄球菌对不同抗菌药物表现出不同的敏感性。
实验脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定(精)
标本+甘露醇
阳性（+）/阴性（─）
注：第2天观察记录结果
白葡菌+甘露醇
实验报告
本次实验的目的要求、器材、检查原则、标本检测程序 （简要）、结果报告和结论
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革兰染色镜检
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形态
排列 染色性
金黄色 葡萄球菌
注：若染色后未发现细菌，可报告“直接镜检未发现细菌”
检查方法结果报告
细菌分离培养：取脓液或创伤分泌物接种于血琼脂平板上 （接种后4℃保存），划线分离，37℃培养18~24h后，观察菌 落特征，取单个菌落进行革兰染色镜检。
金黄色 葡萄球菌
血平板培养结果观察
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菌落特点 溶血性 菌落颜色
注：第2天观察记录结果；如培养48~72h后仍然无菌生长，则 报告“无细菌生长”。
检查方法和结果报告
血浆凝固酶试验（玻片法）：
用灭菌接种环取标本和白葡菌（阴性对照）培养物少许，分 别与玻片左右二侧的生理盐水制成均匀菌悬
于玻片玻片左右二侧菌悬液中各加血浆一滴并轻轻摇匀
1~3分钟内观察结果，出现颗粒状凝集为血浆凝固酶试验阳性， 否则为阴性
结果报告：
标本+血浆 白葡菌+血浆
阳性（+）/阴性（─）
检查方法和结果报告
甘露醇发酵试验：无菌操作取标本和白葡菌（阴性对照） 培养物分别接种于甘露醇发酵管，其上覆盖无菌液体石 蜡油，37℃培养18~24小时，观察结果。金葡菌发酵甘 露醇产酸，使培养基变混浊，颜色由紫色变黄色，是为 甘露醇发酵试验阳性，而白葡菌相反。
金黄色葡萄球菌的分离及其抗药性的研究
葡萄球 菌的抗药性十分有利。
［ 关键词 ］金 黄 色葡 萄球 菌 分 离 抗 药性 金 黄 色葡 萄球 菌 是一 种 革兰 氏阳性 球 菌 ，属 于微 球 菌科 ，能 够 引起 化 脓性 的 炎症 。如果 侵 入血 液 ，可 能 引起 致病 性 败血 症 。 部分由葡萄球菌产生的耐热性肠毒素 ，会引起食物中毒反应 ，金 黄 色 葡萄 球 菌对 抗生 素 较为 敏感 ，因 此 ，大 部分 抗生 素 对其 相 关 病 症 的 治疗 效 果较 为 明显 ｌ １ ｌ 。本 文通 过 对 金 黄色 葡 萄球 菌 的分 离
菌的微球菌科和消化球菌科细菌共２ ５ 个。
２ ． ２ 金 黄 色 葡 萄 球 菌 耐 药 性 观 察 ４ ０ 株 金 黄色 葡 萄球 菌 以青 霉素 、红霉 素 、四环 素 、链 霉 素和 氯 霉 索五 种 常 见抗 生素 进行 实 验 ，实 验结 果 现实 ，对 以上 五 种抗
生 素 耐药 率 均 大于 ６ ５ ％，对其 他 两 种抗 生 素包 括 万 古霉 素 、利 奈 以及其 抗 药性 的研究 ，以期 为 治疗 病原 菌 抗 生素 提供 理论 指 导 依 唑 胺 的 敏感 率可 达 到 ９ ８ ％。 针对 ７ 种 抗 生 素 的耐 药 性 和 敏感 性 分 据 ，现 报道 如下 。 析 ，具 体结 果如 下 ： 对 青 霉 素 耐 药性 为９ ８ ． １ ％，敏 感 率 为 Ｉ ． ９ ％ ；红霉 素 耐 药 性 １ 材料与方法 １ ． １ 试 验 材 料 为９ １ ． ２ ％，敏 感 率 为 ８ ． ８ ％ ； 四环 素 耐 药 性 为 ７ ７ ． １ ％ ，敏 感 率 为 菌种 ：由金黄色葡萄球菌作为菌株 ，将其从花园与某大学宿 ２ ２ ． ９ ％；链 霉 素 耐药 性 为７ ５ ． ６ ％，敏感 率 为 ２ ４ ． ４ ％ ；氯霉 素 耐药 性 舍 楼 的土壤 中进行 分 离 。培 养基 和试 剂 ：培养 基包 括 糖发 酵 培养 为７ ２ ． １ ％，敏感率为２ ７ ． ９ ％。对万古霉素和利奈唑胺 的敏感率分别 基 、牛 肉膏蛋 白胨 培 养 基 以及醇 类 发酵 培 养基 。试剂 包括 ：生理 为９ ８ ． １ ％和９ ９ ． ３ ％，耐 药性 分别 为 １ ． ９ ％和０ ． ７ ％。 盐 水 ，Ｎ ａ Ｎ Ｏ 溶 液 ，和在 市 面上 常 见 的青 红 霉素 、 四环素 和 氯霉 ２ ． ３ 亚硝酸盐诱变后的耐药性观察 素 、链霉 素等 。 在５ 种抗 生 素 梯 度 平 板上 ，菌 落 的 生 长 如 下 ：抗 生 素 浓 度 为 １ ． ２ 方 法 ４ ０（ ｇ ｍｌ ）时 ，５ 种抗 生 素 均 可 生 长 ，抗 生 素 浓 度 为６ ０（ ｇ １ ． ２ ． １ 金黄 色葡萄球 菌 的分 离方法 ｍ ｌ ）时 ，青 霉 素和 红霉 素 可生 长 ，抗 生 素浓 度 ≥８ ０（ ｇ ｍｌ ） （ １ ） 选择１ ０ 处采 样地 点 ，采样 均在 表层下 ８ ｃ ｍ 左 右采样 ，后 时 ，只有 青霉 素可 生长 。由此 可 以看 出 ，当金黄 色葡 萄球 菌 经 过 种实 验抗 生 素的抗 性均 有所 增加 ，但对 四环 于 容器 ，集 体 烘 干后 混 匀 ； （ ２）针对 样 品 进 行 统一 处 理 ，选取 亚 硝酸钠 诱 变后 ，对 ５
金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析
按照现行的国标方法，金黄色葡萄球菌检测方法分为第一法定性检验、第二法平板计数法（适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品），以及第三法M P N 计数法（适用于金黄色葡萄球菌含量较低的食品）。
第一法定性检验过程包括样品处理、样品增菌、平板分离划线、初步鉴定、确证鉴定这5个步骤，整个流程全部完成至少需要5天时间。
第二法平板计数法包括5个步骤——样品稀释、样品接种涂布、典型菌和可疑菌计数、鉴定试验、结果计算，整个流程全部完成至少需要4天时间。
第三法M P N 计数法同样包括5个步骤，即样品稀释、样品增菌、平板分离划线、鉴定试验、查MPN 表确认结果，整个流程全部完成至少需要5天时间。
以下将对金黄色葡萄球菌的检测流程进行简单介绍，并对难点、注意事项进行梳理和讲解。
1 第一法：金黄色葡萄球菌定性1.1 样品处理固态和半固态样品：称取25g样品至盛有225mL 7.5%氯化钠肉汤中，充分混匀。
液体样品：吸取25m L 样品至盛有225m L 7.5%氯化钠肉汤的无菌锥形瓶（瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠）中，振荡混匀。
1.2 样品增菌将上述样品匀液置于金黄色葡萄球菌检验技术介绍及分析□ 李留洋 锐德检测技术（天津）有限公司重的感染。
该菌对营养的要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧。
容易受金黄色葡萄球菌污染的食品主要为乳制品、蛋及蛋制品、各类熟肉制品，其次是含有乳类的冷冻食品等，因此对于该菌的检验也被确定为食品致病性菌种检验中的重要项目。
图1 样品处理36±1℃的恒温培养箱中培养18~24h 。
1.3 平板分离划线该步骤是整个金黄色葡萄球菌检测环节中最重要的步骤之一，因为平板划线分离的效果决定了可疑菌落的判定和选择。
平板划线选择三分法或四分法则分离效果较好，更容易出现单菌落平板。
1.4 初步鉴定分离的培养基选用B a i r d -Pa r k e r 平板（B P 平板）和血平板。
结果显示，金黄色葡萄球菌在B a i r d -Pa r k e r 平板上呈圆形，表面光滑、凸起、湿润，菌落直径为2~3m m ，颜色呈灰黑色至黑色、有光泽，常有浅色（非白色）边缘，周围绕以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰带，当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感；有时可见到不分解脂肪的菌株——除没有不透明圈和清晰带外，其他外观基本相同；从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落，其颜色常较典型菌落略浅，且外观可能较为粗糙，质地较干燥。
实验金黄色葡萄球菌的分离和鉴定
实验题目金黄色葡萄球菌的分离和鉴定一、实验目的金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到;因而,食品受其污染的机会很多;近年来,美国疾病控制中心报告,由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位,仅次于大肠杆菌;金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题,在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒,占整个细菌性食物中毒的33%,加拿大则更多,占到45%,我国每年发生的此类中毒事件也非常多;为控制金黄色葡萄球菌的对人的危害,我们要分离出它们并研究;二、实验原理典型的金黄色葡萄球菌为球型,直径左右,显微镜下排列成葡萄串状;金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛,大多数无荚膜,革兰氏染色阳性;金黄色葡萄球菌营养要求不高,在普通培养基上生长良好,需氧或兼性厌氧,最适生长温度37°C,最适生长,干燥环境下可存活数周;平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起,直径1—2mm;血平板菌落周围形成透明的溶血环;金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性,可在10—15%NaCl肉汤中生长;可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖,产酸不产气;甲基红反应阳性,V—P反应弱阳性;许多菌株可分解精氨酸,水解尿素,还原硝酸盐,液化明胶;金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力,对磺胺类药物敏感性低,但对青霉素、红霉素等高度敏感;对碱性染料敏感,十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长;三、实验材料和设备1.培养基牛肉膏蛋白胨培养基13%NaCl：牛肉膏5g,蛋白胨10g,氯化钠130g,琼脂15g,蒸馏水1000ml,121℃灭菌20min后倒平板;肉汤培养基：酵母膏5g,蛋白胨10g,氯化钠10g,蒸馏水1000ml,121℃灭菌20min;甲苯胺兰-DNA平板2.试剂磺胺类药物、革兰氏染液3.仪器和设备显微镜、超净工作台、水浴锅、培养皿、锥形瓶、移液器、灭菌锅、培养箱、试管、载玻片、接菌环;四、实验方法金黄色葡萄球菌的分离：1.称取5g土样,在无菌条件下放入灭菌的锥形瓶中,加入50ml蒸馏水,再加入200ul磺胺类药物,振荡10min,使土样充分混匀;利用金黄色葡萄球菌对磺胺类药物敏感性低的特性,杀死其他细菌;2.从上述锥形瓶中取5ml上清液放入一只干净的试管中,30℃,200rpm,24h;3.取培养好的菌液,按梯度稀释法稀释土壤悬液,依次制备成100、1000、10000、100000倍悬液后,分别取200ul涂布于牛肉膏蛋白胨培养基平板上,置于37℃培养箱中培养24h;利用高盐培养基抑制其他细菌的生长,从而分离金黄色葡萄球菌;金黄色葡萄球菌的鉴定：1.菌落形态：菌落较小,较湿,较透明,边缘整齐,隆起;2.染色观察：从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色,金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性,显微镜下呈葡萄状排列、无芽孢、荚膜,直径—1um;3.血浆凝固酶试验：吸取兔血浆与金黄色葡萄球菌试液浸液肉汤24小时培养物充分混匀,置36±1°C培养,每隔半小时观察一次,连续观察6小时,出现凝固,即将小试管倾斜或倒置时,内容物不流动,判为阳性;同时做阴阳性对照;4.耐热核酸酶试验：将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min,用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板,36±1°C培养24小时,在刺种线周围出现淡粉色者为阳性;本试验金黄色葡萄球菌为阳性;。
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实验题目金黄色葡萄球菌的分离和鉴定
一、实验目的
金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。
因而，食品受其污染的机会很多。
近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。
为控制金黄色葡萄球菌的对人的危害，我们要分离出它们并研究。
二、实验原理
典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8um左右，显微镜下排列成葡萄串状。
金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。
金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存活数周。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1—2mm。
血平板菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10—15%NaCl肉汤中生长。
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。
甲基红反应阳性，V—P反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。
金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。
对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。
三、实验材料和设备
1.培养基
牛肉膏蛋白胨培养基（13%NaCl）：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠130g，琼脂15g，蒸
馏水1000ml，121℃灭菌20min后倒平板。
肉汤培养基：酵母膏5g，蛋白胨10g，氯化钠10g，蒸馏水1000ml，121℃灭菌20min。
甲苯胺兰-DNA平板
2.试剂
磺胺类药物、革兰氏染液
3.仪器和设备
显微镜、超净工作台、水浴锅、培养皿、锥形瓶、移液器、灭菌锅、培养箱、试管、载玻片、接菌环。
四、实验方法
金黄色葡萄球菌的分离：
1.称取5g土样，在无菌条件下放入灭菌的锥形瓶中，加入50ml蒸馏水，再加入200ul 磺胺类药物，振荡10min，使土样充分混匀。
利用金黄色葡萄球菌对磺胺类药物敏感性低的特性，杀死其他细菌。
2.从上述锥形瓶中取5ml上清液放入一只干净的试管中，30℃，200rpm，24h。
3.取培养好的菌液，按梯度稀释法稀释土壤悬液，依次制备成100、1000、10000、100000倍悬液后，分别取200ul涂布于牛肉膏蛋白胨培养基平板上，置于37℃培养箱中培养24h。
利用高盐培养基抑制其他细菌的生长，从而分离金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌的鉴定：
1.菌落形态：菌落较小，较湿，较透明，边缘整齐，隆起。
2.染色观察：从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列、无芽孢、荚膜，直径0.5—1um。
3.血浆凝固酶试验：吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌试液浸液肉汤24小时培养物充分混匀，置36±1°C培养，每隔半小时观察一次，连续观察6小时，出现凝固，即将小试管倾斜或倒置时，内容物不流动，判为阳性。
同时做阴阳性对照。
4.耐热核酸酶试验：将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min，用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板，36±1°C培养24小时，在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。
本试验金黄色葡萄球菌为阳性。