中国药科大学新药筛选中心细胞培养基础知识培训材料
药物筛选基础知识PPT课件
药物筛选的流程
样品准备
从各种来源获取大量化合物或 混合物，并进行预处理，以便
进行后续的筛选实验。
筛选模型建立
根据研究目的和筛选目标，建 立合适的生物或化学筛选模型 ，用于评估化合物的生物活性 或药理作用。
筛选实验实施
按照建立的筛选模型，对预处 理的样品进行实验，记录实验 结果并进行初步分析。
活性化合物筛选
针对神经性疾病的药物靶点筛选
利用神经元细胞系和小鼠模型，通过蛋白质组学方法，筛选出与神经性疾病相关 的蛋白质，作为潜在的药物靶点。
03
化合物筛选
化合物筛选的方法
基于细胞活性的筛选
高通量筛选
通过检测细胞对化合物的反应，评估 化合物的生物活性。
利用自动化技术对大量化合物进行快 速、高效的筛选。
基于酶活性的筛选
药物副作用问题
许多已上市的药物存在严重的副作用，这给患者带来极大的风险和困 扰。如何降低药物副作用是药物筛选面临的重要挑战之一。
药物筛选的未来发展方向
人工智能与机器学习在药物筛选中的应用
01
随着人工智能和机器学习技术的发展，越来越多的研究开始探
索其在药物筛选领域的应用，以提高筛选效率和精准度。
精准医疗与个性化药物
药物筛选基础知识PPT课件
• 药物筛选概述 • 药物靶点筛选 • 化合物筛选 • 细胞模型筛选 • 药物筛选的挑战与未来发展
01
药物筛选概述
药物筛选的定义
药物筛选
是指在大量化合物或混合物中快速、准确地找出具有特定生物活性或药理作用 的物质的过程。
特定生物活性或药理作用
指能够影响生物体内特定生理、生化过程或病理过程，并产生一定生物效应的 物质。
药物。
《细胞培养培训》课件
结
1 细胞培养中的安全问题
在进行细胞培养操作时需要注意一些安全问题，如在安全柜操作，穿戴实验外套和化、功能化和量化方向发展，国内企业正加紧提升技术水 平和产业化水平。
细胞培养培训
细胞培养是生物技术和医学研究中不可或缺的重要技术之一。在本次培训中， 我们将全面介绍细胞培养的基本概念、操作流程和常见问题解决方法。欢迎 大家踊跃参与！
介绍
1 定义
2 重要性
细胞培养是指通过在无菌 环境下加入合适的营养液， 使人类或动物细胞在体外 的人工环境中生长和繁殖 的技术。
细胞培养是研究生命科学 和药物研发不可缺少的技 术。它能够帮助我们理解 细胞的生长、分化、凋亡 和信号传导等基本生理过 程。
2
殖，以获得足够的细胞数量用于实验。 细胞传代技术可以使细胞连续繁殖多代
细胞凋亡是指由一系列信号调控的正常
并保持生物学特性。
细胞死亡程序。在细胞培养中凋亡的部
分或全部细胞可能会影响实验结果。因
此，细胞凋亡检测技术成为了细胞培养
3
细胞培养蛋白表达技术
的重要技术方法。
细胞培养蛋白表达技术是指通过转染外
源性质粒或病毒载体进入细胞，使细胞
3 应用场景
细胞培养技术广泛应用于 基础研究、药物筛选、生 物材料研究、环境毒理学 等领域。
细胞培养的基本概念
细胞种类
主要包括原代细胞、细胞株、酶处理细胞等。不 同种类的细胞具有不同的生长要求，因此对于细 胞的选择要根据科学研究的需要作出选择。
细胞培养的条件
温度、CO2浓度和通气等条件对于细胞培养的影 响非常大。合理的培养条件是保证细胞生长和繁 殖的前提。
实验室细胞培养基本知识
细胞培养箱的无菌
• 培养箱是主要的污染源，应每学期做彻底清洁（箱体、架子、 隔板、托盘），可用70%酒精充分擦拭，并完全挥发晾干。
• 培养箱使用时底部湿盘要加入1%硫酸铜。 • 培养细胞时，尽可能选购带渗透盖的培养瓶，不仅可以在CO2
环境中迅速达到平衡，而且不会有污染的危险。
细胞培养中的无菌操作
• 紫外灭菌：洁净台使用前、使用中的间隙、使用后都要用紫外灭菌，但 光束的有效性有限，因为它不能达到缝隙中。
• 70%酒精擦拭：洁净台使用前、使用中有溢出物、使用后都要擦拭，各 种试剂瓶、储液瓶、培养瓶、培养板和培养皿，放入洁净台之前，必须 用 70% 乙醇擦拭其外部，注意要选用抗乙醇的记号笔。
细胞培养中的无菌操作
• 加盖：所有试剂瓶子要用深螺旋的聚丙烯盖子，使用时要将盖 子口朝下放置在工作区域，不用时要及时盖好，但可以不用旋 紧。
• 灼烧：开放工作台才需要灼烧，细胞培养用的洁净台中不需要 也不建议灼烧、明火既破坏了层流又难以除去生物危害物质， 还带来了火灾隐患，明火带来的高温还会影响HEPA过滤的寿命。
• 气流可以呈水平方向，与工作 台面平行吹过，或者也可呈垂 直方向，从通风橱上方吹向工 作台面。
• 细胞培养通风橱通过维持工 作区域上方稳定、单向的 HEPA过滤空气流动，保护工 作环境免受灰尘及其他空气 污染物污染。
准备与灭菌
灭菌方式的选择
• 热稳定的物品（玻璃器皿、金属）用干热灭菌：160℃， 1h；
新鲜培养基，为其提供更多继续生长的空间。 • 细胞系：首次传代培养后，原代培养物即被称为细胞系。 • 细胞株：如果将细胞系的一个细胞通过克隆或者其他方法从培养物中
细胞原代培养PPT课件
3.过滤
• 用400目不锈钢筛网过滤 • 收集滤液于离心管 4.离心 • 平衡、离心5min，1000～1500 rpm • 去上清，加PBS，混匀，离心（同上） • 重复上一步 5.接种 • 去上清，加3～5ml培养基，混匀，接种于培养瓶 • 加培养基3～5mm深，盖紧盖，观察细胞密度 6.培养
针头）
有机试剂过滤除菌，常用0.22µm • 超净工作台
紫外灯照射30min以上 • 培养室
紫外灯照射2～3h/天
操作步骤
1.取材 • 75％酒精浸泡乳鼠2min，取肝脏于平皿中 • PBS溶液洗涤3次 • 去除液体后，剪碎成1～2mm3小块 2.消化 • 加5～8倍组织量的胰蛋白酶溶液 • 转移到离心管内，加盖 • 37℃水浴15min，每5min摇晃1次 • 终止消化：加1ml含血清的培养基DMEM
• 超净工作台 紫外消毒，鼓风，保持干净、整洁
• 高压锅 用电，带压力表，自动恒压，掌握时间
橡胶、塑料、药品——15’，金属——20’ • 培养瓶
玻璃瓶和塑料瓶，洗涤要干净，临时消毒
• 培养基 a.天然培养基：血清、胚胎浸出液、水解乳蛋白等 b.合成培养基：DMEM、RPMI1640、199培养基等 c.无血清培养基：Ham F12和DMEM混合的基础培 养基、自行设计与配制的培养基（加其他成分）
a.组织块法：直接将组织块接种于培养瓶， 24小时就有细胞向四周游出。 简便、易行，适合于来源有限、数量较少 的组织做原代细胞培养
b.消化法
• 用酶消化、分解妨碍细胞生长的间质（基 质、纤维等），形成单个细胞或细胞团
• 对上皮、肝、肾、胚胎等间质少、较软组 织选择胰蛋白酶
• 对骨、前列腺、癌组织等纤维多、较硬的 组织可用胶原酶
中国药科大学药用植物资源学复习
13级药用植物资源学复习一"By:Taxaceae第一章中药资源学中药资源:是指对人类有直接或间接医疗作用和保健护理功能的植物、动物、矿物资源，以及利用生物技术繁殖的个体和产生的活性有效物质中药资源学：研究中药资源的种类、数量、地理分布、时间、空间变化、合理开发利用和科学管理的学科中药资源的特点：1）地域性：各气候带的水热条件和生长期不同2）分散性3）有限性和可解体性4）可再生性：自然更新、人为扩大繁殖能力5）多用性6）国际性中药资源学的学科范围及任务：1）调查研究中药资源的种类、数量、分布2）实施GAF；保证中药资源可持续利用3）积极扩大与寻找中药新品种、新资源4）研究中药资源的动态规律，提出科学的经营管理方法5）中药资源的合理开发与综合利用中药资源学的形成和发展：《神农本草经》，载药365种，是我国现存的第一部记载药物的专著《本草纲目》明李时珍，最著名的古代本草著作，载药1892种中药资源学的研究内容：1）中药资源的调查2）中药资源区划与适宜性分析3）中药资源的野生抚育和可持续利用4）中药资源的动态规律和合理开发利用研究5）积极寻找和扩大中药新资源6）濒危中药资源评价与监测中药资源的开发：目的：可供人类利用实现社会效益、经济效益和生态效益四个层次：初级开发、二级开发、深开发和综合开发1）初级开发：以发展药材和原料为主如何首乌生制之分2）二级开发：以开发中药制剂和其他天然产品为主如人参加入酒中制成的“人参酒"3）深开发：以开发天然化学药品为主如从小檗科小檗属植物中提取的小檗碱为常用的天然抗菌药物4）综合开发：在开发一种用途的同时，利用废弃物进一步开发出其他有用的药物和产品，使一种生药或药用植物发挥多种用途如甘草的根和根茎，除作中药材和提取甘草酸等原料外，其残渣可再提取出甘草黄酮类成分，用作化妆品添加剂和抗氧化剂；甘草地上部分又是优良的牲畜饲料甘草粉和加工品，大量用于食品和烟草工业。
07-离子通道药物筛选策略-50-中国药科大学药物筛选课件
Modulation of ion channel activity represents an effective therapeutic strategy for a wide variety of disorders.
II. Ion channel function 1. Form a narrow aqueous pore spanning the membrane that selectively allows the passage of one or a few classes of ions, e.g. Na+, K+, Ca2+, or Cl-. 2. They are gated pores, allowing controlled, rather than continuous, ion flux.
Gating mechanisms: “ligand-binding” (ligand-gatedm (voltage-gated)
III. Ion channel-related disease Long-QT syndromes (遗传性长QT综合症） (K+ ) Defects in cardiac K+ channels (occur in only 1 in 15,000 individuals and result in cardiac arrhythmia (心律失常) and sudden death). Deafness （耳聋)、Hyperinsulinemia (高胰岛素症) (K+ ) Cystic fibrosis (囊肿纤维化) 、Myopathies (肌肉病变) (Cl+ ) Hereditary hypertension (遗传性高血压) (Na+) Periodic paralysis (周期性瘫痪) (Na+) Malignant hyperthermia (恶性高热) (Ca2+)
细胞培养技术教案
细胞培养技术教案
一、课程名称：细胞培养技术
二、教学目标：
1. 了解细胞培养的基本原理和方法。
2. 掌握细胞培养的操作技能和注意事项。
3. 了解细胞培养在生物医学研究中的应用。
三、教学内容：
1. 细胞培养的基本原理和方法
- 细胞培养的定义和意义。
- 细胞培养的基本条件：培养基、血清、细胞因子等。
- 细胞培养的方法：原代培养、传代培养、细胞系建立等。
2. 细胞培养的操作技能和注意事项
- 细胞培养的基本操作：细胞接种、细胞传代、细胞冻存等。
- 细胞培养的注意事项：无菌操作、培养环境、细胞状态等。
3. 细胞培养在生物医学研究中的应用
- 细胞培养在药物筛选中的应用。
- 细胞培养在疾病模型建立中的应用。
- 细胞培养在基因工程中的应用。
四、教学方法：
1. 课堂讲授。
2. 实验操作演示。
3. 小组讨论和案例分析。
五、教学要求：
1. 掌握细胞培养的基本原理和方法。
2. 掌握细胞培养的操作技能和注意事项。
3. 了解细胞培养在生物医学研究中的应用。
六、教学评价：
1. 课堂测试。
2. 实验操作考核。
3. 课程论文。
七、教学材料：
1. 教材：《细胞培养技术》。
2. 实验材料：培养基、血清、细胞株等。
3. 参考资料：相关研究论文、学术期刊等。
《细胞培养技术》课件
细胞培养技术是一项重要的生物学技术，通过将细胞生长在适宜的培养基中， 实现细胞的体外培养和繁殖，为研究细胞和开发生物制品提供了重要手段。
什么是细胞培养技术
1 定义
2 历史
细胞培养技术指的是将细胞从生物体中取出， 在适宜的培养基中进行体外培养的技术。
细胞培养技术起源于20世纪初，随着科学技 术的进步，逐渐成为生物学和医学领域的重 要工具。
常用的细胞培养方法
传统细胞培养方法
通过将细胞放置在培养皿中，利用培养基中的营 养物质供养细胞并促进其生长和繁殖。
三维细胞培养技术
通过构建具有三维结构的培养环境，模拟生物体 内的细胞生长环境，促进细胞在体外的功能表达。
动物细胞培养技术
主要应用于医学研究和生物制药领域，常用于人 类或动物细胞的培养和研究。
环保领域
细胞培养技术有助于环境修复和污染物降解，如 污水处理等。
细胞培养技术的挑战和发展趋势
1 挑战
细胞培养技术面临着细胞变异、细胞老化、 污染等问题，需要不断解决和改进。
2 发展趋势
随着科技的不断发展，细胞培养技术将越来 越趋向自动化、高通量和个性化。
结语
1 总结
细胞培养技术是一项重要的生物学技术，推 动了许多领域的发展和进步。
2 展望
未来，细胞培养技术将继续发展，为人类的 健康和社会发展做出更大贡献。
细胞培养基础知识
1 细胞的分类
2 培养基的种类
3 细胞培养条件
细胞可以根据形态、功能、 组织来源等进行分类，不 同类型的细胞需要不同的 培养条件。
培养基可以根据成分和用 途进行分类，常见的有无 血清培养基、无动物成分 培养基等。
细胞的培养需要一定的温 度、湿度、二氧化碳浓度 等环境条件，以及适当的 营养物质供给。
细胞培养基础知识
胞分离。
•
胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过一定限
度会损伤细胞。
•
胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用无Ca2+、Mg2+的
PBS缓冲液配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25％。用滤
器过滤除菌。
• 胰蛋白酶液消化时间：2-10分钟。
• 用含血清培养液终止其对细胞的消化作用
培养基
• 培养基（培养液）是维持体外细胞生存和生长的溶液，分天然培养基 和合成培养基。
②保持培养箱内空气干净。定期消毒(90 ℃ ， 14 h)。
③箱内火菌蒸馏水3000毫升蒸馏水槽中以 保持箱内湿度，避兔培养液蒸发。
自动双重纯水蒸馏器
纯水仪
酶标仪
微孔板震荡器
培养板
培养瓶，培养皿
移液管，移液枪
• 常用玻璃器皿清洗
• 浸泡（自来水）、刷洗（洗衣粉）、酸泡 （24小时）、
• 流水冲洗、蒸溜水浸泡和冲洗、50℃烘干
四唑盐（MTT）比色法
• 四唑盐（MTT）商品名为噻唑蓝，
•
四吐盐比色法的原理：活细胞中脱氢酶能将四唑盐还
原成不溶干水的蓝紫色产物（formazan)，并沉淀在细胞 中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解 沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的
formazan量成正比。再用酶标仪测定OD值
（3）吸出孔内培养液后，加入DMSO液（150微升／孔），将 培养板置于微孔板扳荡器上振荡10分钟，使结晶物溶解。 （4）酶标仪检测各孔OD值（检测波长570nm）。记录结果。
细胞冻存和复苏
• 细胞低温冷冻贮存是细胞室的常规工作。 细胞冻存与细胞传代保存相比可以减少入 力、经费，减少污染，减少细胞生物学特 性变化。
细胞培养教学案例
细胞培养教学案例教学案例：细胞培养实验教学目标：1.了解细胞培养的基本原理和步骤。
2.掌握细胞培养的基本技巧和方法。
3.培养和观察细胞的生长和活性。
实验材料：1.细胞培养基2.细胞培养器具（离心管、移液管、培养皿等）3.细胞培养物（悬浮细胞或贴壁细胞）4.培养箱5.显微镜实验步骤：1.准备工作a.将培养基取出，并预热到37℃。
b.消毒实验台和培养器具。
c.准备培养皿，加入适量的培养基，确保均匀覆盖整个培养面。
d.将培养箱预热到37℃，并设置好适当的湿度。
2.准备细胞a.将细胞培养物放在离心管中，在1500rpm离心5分钟。
b.弃去上清液，加入适量的培养基悬浮细胞。
c.将细胞分散均匀，然后将细胞培养物转移到培养皿中。
3.细胞培养a.将培养皿放入预热的培养箱中，保持适当的温度和湿度。
b.观察细胞的生长和分裂情况，并记录时间。
c.根据细胞类型和实验目的，定期更换新的培养基。
4.细胞观察a.使用显微镜观察培养皿中的细胞。
b.调整显微镜的倍数和焦距，以获得清晰的细胞图像。
c.观察细胞的形状、大小、数量和亚细胞结构等特征。
d.记录观察结果，并进行细胞计数和图像分析。
注意事项：1.严格遵守实验室操作规范和安全要求。
2.在细胞培养过程中，保持培养器具和环境的无菌状态。
3.避免细胞暴露在空气中的时间过长，尽量保持培养皿的盖子关闭。
4.定期检查培养箱的温度和湿度，确保恒定的培养条件。
5.使用显微镜时，注意调节焦距，以避免对细胞造成损伤。
教学评估：1.观察学生在实验中的操作是否规范、有条理。
2.评估学生对细胞培养技术和相关概念的理解程度。
3.检查学生对细胞观察结果的记录和分析能力。
延伸实验：1.尝试不同细胞的培养和观察，比较其生长速度和特征。
2.进行细胞药物敏感性实验，评估不同药物对细胞的影响。
3.尝试细胞凋亡实验，研究细胞的生命周期和调控机制。
教学案例结束。
细胞培养及抗肿瘤药物筛选
细胞培养及抗肿瘤药物筛选博哥(中山大学化学与化学工程学院，广州510275)一引言随着分子生物学和细胞生物学的崛起，为了在活细胞中研究生命现象，细胞培养方法得到了广泛的发展和应用。
细胞培养的突出优点，是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响。
因为人工培养条件易于改变，并能得到严格的控制，有利于单因子分析。
另外，细胞培养还便于我们对细胞生长、发育过程的观察，可以用显微镜直接观察亦可应用显微缩时电影技术记录其进程。
因而，细胞培养是探索和解释细胞生命活动规律的一种简而易行的技术。
然而，细胞培养方法也有其局限性，由于培养的细胞生活在脱离了机体的复杂的环境条件下，其生态环境和细胞之间的相互关系都改变了，因此，其细胞生物学性质必然也会发生某些改变。
所以在人工培养条件下观察到的结果难于正确反映细胞或组织在机体内部的状况。
这一点是我们在应用此技术进行研究时应该注意的。
本实验采用的培养基由合成培养基、小牛血清配和双抗制而成。
实验对Hela细胞进行了复苏、传代培养、观察不同状态下的Hela细胞，并用MTT法测定8种药物的抗癌作用。
二、实验原理1．培养基的配制组织培养使用的培养基一般是由合成培养基和小牛血清配制而成。
合成培养基有商品出售，它是根据细胞生长的需要按一定配方制成的粉状物质。
其主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子和其他辅助物质。
它的酸碱度和渗透压与活体内细胞外液相似。
小牛血清含有一定的营养成分，更重要的是它含有细胞生长所必须的生长因子、激素、粘附因子等，这是合成培养基所无法替代的。
此外它还能中和有毒物质的毒性。
故一般体外培养细胞时要加入一定量的小牛血清(10％-20％)。
在培养液配制后，培养液内常加适量抗菌素，以抑制可能存在的细菌的生长。
通常是青霉素和链霉素联合使用(双抗)。
培养液内青霉素、链霉素最终使用浓度为每毫升100单位。
2．细胞的冻存与复苏细胞低温冷冻贮存是细胞室的常规工作。
细胞培养技术复习资料(全)
名词解释：细胞组织培养：细胞（组织）培养是指从生物体内取出细胞（组织），模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存、生长并维持其结构和功能的方法。
二倍体细胞株：具有二倍体染色体数的细胞株。
细胞组织培养选材：根据实验目的、观察指标确定所选组织器官。
培养选材一般来自胚胎组织的培养物；比成体组织更易生存和生长。
这主要是因为胚胎组织有更多的胚胎组织干细胞，它们具有更高的自我更新和多能分化能力。
原代培养：一般指从组织中分离在体外生长至传代之前的细胞培养。
这种培养通常是异质性，生长缓慢，但比较能代表原组织的类型并表达原组织特性。
缺点是在培养过程中会失去许多原组织的细胞。
传代细胞：原代细胞生长物或细胞系生长到一定阶段，分散成单个细胞，按一定比例接种于新的培养容器内称之传代。
传代细胞称之细胞系，可分为两类：有限细胞系和连续细胞系。
传代形成的具有各自生物特性或标志的细胞系称之为细胞株。
世代：指细胞经过一次分裂后完成后至下次分裂的过程。
细胞富集：当细胞分离纯化并不完全彻底，培养物中能达到以某种细胞为主（占绝大多数）的程度。
细胞纯化：是指从原代培养前成分混杂的异质性细胞悬液中或者从培养物中获得单一类型细胞的过程。
通过细胞分离和纯化得到细胞株或系。
传代：也称为再培养，把一瓶培养细胞全部或分成几份再培养的过程。
组织工程：组织工程是应用生命科学和工程学的原则及方法，在正确认识哺乳动物的正常及病理两种状态下的组织结构与功能关系的基础上，研究、开发用于修复、维护、促进人体各种组织或器官损伤后的功能和形态的生物替代物的一门新兴学科。
Density inhibition:密度抑制，由于细胞密度过大，培养液营养耗尽、代谢产物过多和生存空间消失所引起细胞增殖的抑制现象。
消化液：在原代细胞培养和细胞传代时，都要用消化液，最常用的是胰蛋白酶和二乙烯四乙酸二钠（EDTA），其次是一些特殊的组织细胞培养用的各型胶原酶。
在原代细胞培养中，使用消化液从组织块中分离（散）出单个的细胞；在进行细胞传代时，消化液使细胞脱离生长表面并离散成单个细胞。
药物筛选细胞实验报告
药物筛选细胞实验报告药物筛选细胞实验是一种常用的实验方法，用于评估药物对细胞的活性和毒性。
本实验的目的是通过体外细胞实验，筛选出对特定疾病有活性的候选药物，并评估其毒性。
在实验中，我们首先选取了一种与目标疾病相关的细胞系作为实验模型。
然后，我们将候选药物以不同浓度加入细胞培养基中，与细胞体外共同培养一段时间。
接下来，我们可以通过不同的实验方法和技术手段来评估药物对细胞的活性和毒性。
一种常用的实验方法是MTT法，通过测量细胞代谢产物的形成情况来评估细胞的生存能力。
MTT是一种黄色水溶液，能够被细胞内的还原酶还原成紫色晶体。
通过测量晶体的吸光度，可以间接反映细胞的活力。
在实验中，我们可以将MTT 溶液加入细胞培养基中，与细胞共同培养一段时间后，用溶解剂将晶体溶解，并测量其吸光度。
吸光度越高，细胞活力越高。
另一种常用的方法是细胞凋亡检测。
细胞凋亡是一种程序性的细胞死亡方式，常常受到药物的影响。
在实验中，我们可以使用荧光染料（如荧光素磷酸酯）或流式细胞术来标记和检测凋亡细胞。
凋亡细胞通常会出现DNA断裂、细胞核染色质浓缩、细胞体积缩小等特征，可以通过显微镜观察或流式细胞仪检测进行定量。
除了以上方法外，还可以使用细胞周期检测来评估药物对细胞的影响。
正常细胞在不同的生长阶段有不同的表型和功能。
通过荧光染料（如荧光素磷酸酯）染色并使用流式细胞术进行分析，我们可以确定细胞在不同的细胞周期阶段的比例，从而了解药物对细胞周期的影响。
在药物筛选实验中，除了评估药物对细胞的活性之外，还需要评估其毒性。
毒性评估可以通过测量细胞的存活率、细胞膜氧化和溶胀等指标来进行。
存活率可以使用MTT法进行测定，细胞膜氧化可以通过检测ROS（活性氧种）水平来评估。
而溶胀可以通过流式细胞仪分析或显微镜观察细胞的形态和结构变化等方法进行评估。
总之，药物筛选细胞实验是一种常用的实验方法，用于评估药物对细胞的活性和毒性。
通过测量细胞的生存能力、凋亡情况和细胞周期等指标，我们可以初步评估药物的活性和毒性，为进一步的研究和开发提供参考。
中国药科大学国家新药筛选实验室
中国药科大学国家新药筛选实验室送样单位：甲方：____________________（盖章）接收单位：乙方：江苏省新药筛选中心（盖章）国家新药筛选实验室江苏省新药筛选中心保密协议书年月日负责人（签名）_____________负责人（签名）_____________中国药科大学新药筛选中心创立于1995年，随后在国家科技部“1035”工程和“十五”重大专项支持下建立国家新药筛选实验室，2001年获江苏省科技厅资助成为“江苏省新药筛选中心”。
中心已从分子、细胞、器官和整体水平上建立了47类200余种筛选方法，其主要任务是为国内外科研院所和医药企业提供科学、简便、快捷的药物筛选服务和成药性评价。
为确保送样人的合法权益，明确双方的权利与义务，特制订以下保密协议。
1.对送样人所送样品，除送样人与本新药筛选中心协商同意外，本新药筛选中心将严格遵守以下原则：筛选样品不做与筛选无关的其他用途；筛选样品不转移到与筛选无关的任何单位或个人；本新药筛选中心不利用筛选中的信息开发药物；本新药筛选中心不将筛选中的信息告知其他单位或个人；2.本新药筛选中心在收到送样人的样品后，立即将样品置于存放化合物的专门房间，由专人负责妥善保管。
4.本新药筛选中心数据库管理员将把化合物样品的结构式、理化数据、生物活性测试数据、5.本新药筛选中心将建立样品使用的登记制度，随时跟踪样品的使用情况。
6.同时作为送样人，应确保所提供信息的准确性，避免隐瞒、歪曲样品理化信息。
7.送样人应认真，如实地填写《样品筛选登记表》以及跟踪样品筛选信息的《样品筛选相关信息表》，作为本新药筛选中心药理实验和数据统计的依据。
8.本协议一式两份，双方签字盖章后生效，甲、乙双方各执一份为据。
单位：（盖章）（盖章）负责人（签字）负责人（签字）日期：年月日日期：年月日。
细胞培养-Protocol
细胞培养是一项常用的生物技术，其原理是基于细胞在适当的培养条件下能够维持存活和增殖的能力。
通过细胞培养，可以获得大量的细胞样本，用于研究、药物筛选、疾病治疗等应用。
以下是细胞培养的原理、所需试剂和耗材、实验仪器、准备工作、实验方法、注意事项、常见问题及解决方法。
一、原理细胞培养的基本原理是模拟细胞在生物体内的生长环境，提供细胞生存和增殖所需的基本条件。
这些条件包括适当的温度、湿度、营养物质（如氨基酸、葡萄糖、脂肪酸等）和气体环境（如氧气、二氧化碳等）。
通过提供这些适宜的条件，细胞可以在体外环境中维持生存和增殖。
细胞培养中涉及的关键生物学过程包括细胞的贴壁、增殖和传代。
细胞的贴壁是指细胞在培养瓶内附着于瓶壁上的过程，这通常发生在细胞悬液加入培养液之后。
细胞贴壁后，会开始进行有丝分裂，进行增殖生长。
当细胞数量增加到一定程度时，需要将培养瓶中的细胞传代到新的培养瓶中，以维持细胞的适宜生长密度。
二、所需试剂和耗材细胞培养所需的主要试剂和耗材包括：1.培养基：为细胞提供基本的营养物质，如胎牛血清、氨基酸、葡萄糖等。
2.添加剂：包括抗生素、抗真菌药物等，用于防止培养过程中的污染。
3.培养瓶：用于细胞的培养，有不同的规格和形状。
4.移液器：用于吸取和转移细胞悬液和培养液。
5.离心管：用于离心收集细胞。
6.过滤器：用于过滤培养液中的杂质和颗粒。
7.DEPC水：用于制备无RNA酶的水。
8.无菌操作台：用于进行无菌操作，防止污染。
三、实验仪器细胞培养常用的实验仪器包括：1.细胞计数器：用于细胞计数和细胞密度测量。
2.显微镜：观察细胞的生长情况和形态变化。
3.CO2培养箱：为细胞提供适宜的生长温度和气体环境。
4.高压灭菌器：用于消毒处理实验器材和试剂。
5.超净工作台：用于进行无菌操作。
6.分光光度计：用于测量细胞生长的生化指标，如蛋白质含量等。
四、准备工作在进行细胞培养前，需要进行以下准备工作：1.选择适当的细胞：根据实验需求选择适合的细胞，了解其特性、来源和培养条件。
细胞培养技术课件-PPT
潜伏期（有生长活动，而无细胞分裂，一般为6～24小时 对数生长期（细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳。
最适合进行实验研究） 停止期（平台期）（细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不
再分裂。机制：接触抑制、密度依赖性）
（悬浮细胞没有贴壁过程）
注意： 开放式操作，小心谨慎、谨防污染！
细胞冻存（慢冻）
1 细胞冻存液（1ml/管） 基础培养基70％ 胎牛血清20％ DMSO 10％ （二甲基亚砜，一种渗透性保护剂，可迅
速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓 冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞 外形成冰晶，减少胞内冰晶对细胞的损伤。）
（2）用培养液稀释后低速离心10分钟。 （3）去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。 （4）隔天换液，但贴壁细胞若未贴壁则勿需处理。 复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶而损伤细胞。
细胞传代
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上 饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数 量扩大，就必须进行传代（再培养）。
其他实验所需的试剂： 药物（如ATRA）、检测试剂（如MTT）、细胞因子 （如SCF）等
试剂标注规范
试剂名称 配制浓度 配制人 配制日期
NaCl 0.5 mM 张三
耗材
培养皿、瓶、孔板 离心管、移液管 枪尖 其他
小结二 试剂及耗材的分类及用途
培养基（成分、分类）
耗材（分类、用途）
生物安全柜
无菌培养瓶、吸管、离心管的准备 主要用于操作者的皮肤，操作台表面及无菌室内的壁面处理（蛋白凝固）（不能擦拭有机玻璃）
细胞生长过程，细胞来源
湿热（高压蒸气灭菌法）：121℃，20min，破坏微生物孢子、蛋白变性。
中国药科大学新药筛选中心细胞培养基础知识培训材料
细胞培养添加剂
1.谷氨酰胺 & 丙酮酸钠 2.抗生素---青霉素/链霉素溶液 SV30010 3.非必需氨基酸---根据细胞而定 4.胰酶 5.平衡盐溶液 6. HEPES 7.酚红
胰酶 Trypsin
• 用途：用于贴壁细胞的消化，使贴壁生长 的细胞重新悬浮起来，以便传代 • -含或不含EDTA, 根据细胞和实验要求选择
碳酸氢钠的作用及含量？
1. 与CO2一起形成缓冲系统，保持培养基PH 值稳定； 2. 不同的培养基要求添加NaHCO3的量不一 样，如DMEM要求添加3.7g/L，为了保持 PH值稳定，必须用高浓度的CO2平衡，一 般不低于8%，而1640等要求添加NaHCO3 2.2g/L，还有些培养基要求添加更少，那么 这些培养基就要求较低的浓度平衡，一般 是5%；
•
DMEM or DME (Dulbecco’s Modification of Eagle’s Medium) 是Dulbecco改进的MEM. 氨基酸和维生素浓度是BME的4倍.最先葡萄糖的浓 度是 1g/L，称为低糖DMEM, 后来增加到4.5g/L，称为高糖DMEM，广泛用于 各种贴壁细胞培养。
血清出现沉淀？
1.纤维蛋白：是常出现的较大的沉淀物。因为血清都是在低 温下进行收集和快速处理的，一些纤维蛋白原（形成絮状 纤维蛋白的可溶性前体）在处理过程中仍处于溶解状态， 在经过最后的过滤后发生凝结，形成纤维蛋白沉淀。 2.磷酸钙：是一种常见的沉淀物，通常会使血清出现浑浊， 并且在37℃培养时会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观 察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动， 因此经常被误认为是微生物污染 3.其他的脂类和蛋白 4.血清中的沉淀物是难以预测和预防的，但通常沉淀不会影 响血清的质量
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
中国药科大学新药筛选中心
此材料仅供中心内部使用 最终解释权归新药筛选中心
细胞培养基本介绍• 血清 Nhomakorabea 培养基 • 其他产品
体外培养细胞的分型
• 贴壁细胞：细胞贴附在 支持物表面生长，只 有依赖贴附才能生长 的细胞叫做贴附型细 胞 • 悬浮细胞：培养时不 贴附于底物而成悬浮 状态生长，主要来自 血，脾或骨髓
• 如想去除这些絮状沉淀物，可将血清分装 到无菌离心管中，以400g离心，上清液即 可直接加入到培养液内 • 不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物， 因为这可能阻塞滤膜
血清选择？
a. 尽量使用同批次的血清；如果需要更 换血清批次，则需事先验证3代以上，因此 建议客户单次购买大量血清； b.原代细胞或ES细胞，提供澳洲或新西 兰的FBS不同批次进行试用，选择使用效果 好的批次；
体外培养细胞
• 原代培养：直接从体内取出的细胞进行第 一次培养，其优点是组织细胞刚脱离机体， 生物性状尚未发生较大变化，在一定程度 上能够反应体内的状态；缺点是细胞生长 较为缓慢，生长条件要求高 • 传代培养：将细胞从一个培养瓶按照一定 比例转移到另外的培养瓶即为传代培养， 其目的是将高密度的细胞进行稀释扩大培 养，以避免营养枯竭，影响细胞生长
如何避免血清出现严重沉淀？
血清有轻微絮状物，但产品比较澄清或略显浑浊 是正常现象，但下属操作会致使血清出现严重沉 淀，应尽量避免 a.储存不当：反复冻融；长期储存在2-8℃；在 室温下放置时间过长 b.不正确地解冻操作，融化时没有混匀。 c.热灭活血清 d.37℃培养血清 e.γ射线辐照
血清常见问题
常见问题处理
1. 如果细胞培养基偶然被冻，应该融化培养基并观察是否有沉淀产生。 如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果出现沉淀，只能丢弃 这些培养基。 2. 当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使 用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条 件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到毒性水平。 3.大部分添加物和试剂最多可以冻融3次，如果次数更多都会在包含蛋白 的溶液引起一定水平的降解和沉淀，将会影响它的性能。 4. 在溶解的一周内使用贮存在4℃冰箱中的液体胰蛋白酶溶液。胰蛋白酶 在4℃就可能开始降解，如果在室温下放置超过30分钟，就会变得不 稳定。 5. 产品说明在超过指定的贮存期的一段时间内，产品仍然在可接受的范 围内，但是由于在超过指定的效期后，产品的性能和稳定性没有检测， 我们不推荐使用过了效期的产品。
普通培养基的应用
• BME ( Basal Medium Eagle): 是由Eagle发明的，是最简单的培养基，只有11种氨基酸和盐及一些维生素。 最先用于培养小鼠的L 细胞和人类HeLa细胞，现在广泛用于各种细胞的培养
•
MEM or EMEM (Eagle’s Minimum Essential Medium): ’ 是BME的升级版，氨基酸浓度是BME的两倍，适用于更多的细胞
碳酸氢钠的作用及含量？
1. 与CO2一起形成缓冲系统，保持培养基PH 值稳定； 2. 不同的培养基要求添加NaHCO3的量不一 样，如DMEM要求添加3.7g/L，为了保持 PH值稳定，必须用高浓度的CO2平衡，一 般不低于8%，而1640等要求添加NaHCO3 2.2g/L，还有些培养基要求添加更少，那么 这些培养基就要求较低的浓度平衡，一般 是5%；
培养基PH值偏高？
a.干粉配置中调好pH后使用负压过滤；-- 请 使用正压 b. 液体培养基启封后长时间无法用完；-- 请 尽量快用，或用之前用小体积容器分装 （不能在液面上留有太多空气）； c. 如结果已经造成；--客户接种前请将装有培 养基的培养瓶在CO2温箱孵育（甚至过 夜），直到pH恢复正常； d.不建议用HCl 调节，增加污染风险和高渗透 压结果；
是否含有酚红？
1. 酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂： 中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为 紫色 2. 酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是 雌激素） 3. 由于酚红干扰检测，在做流式细胞检测时， 不使用加有酚红的培 养基
无血清培养基 Serum-Free Medium （SFM）
•成分更加清晰 •消除因血清批次不同而带来的不确定性 – 保持实验 的连续性 •易于纯化和下游处理 •优化特殊细胞及其功能的培养条件 •越来越多的无血清培养基 用非动物/人来源的原料 制造 •有利于准确阐述细胞功能, 更好控制生理反应 •降低成本，控制污染
平衡盐溶液
• 平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成； 它的作用是维持细胞渗透压平衡，保持pH 稳定及提供简单的营养； • 用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配 制其他试剂等
PBS 磷酸盐缓冲液 DPBS（Dulbecco’s Phosphate-Buffered Salines） Earle’s 平衡盐 Hank’s 平衡盐
细胞培养液= 无血清培养基+营养添加剂+抗生素
培养基和相关产品
• 普通液体培养基（Liquid Media，LM） • 普通干粉培养基（Dry Powder Media， DPM） • 减血清培养基（Reduce Serum Media） • 无血清培养基（Serum-Free Media，SFM） • 营养成分添加剂（Nutrient Media Supplements） • 试剂和辅助产品（Reagents and Cell Culture Support）
培养基的选择？
a. 查询ATCC或文献，参照该细胞之前的培养方 案 b.实验室常用的培养基不妨一试，许多培养基可 以适合多种细胞培养；
干粉培养基的配制？
a. 建议当开封一个包装后，请立即将其一次 性全部配置； b. 我们不建议将干粉培养基或者盐类物质配 置成为浓缩液，这样可能会导致某些盐类 混合物难融而导致其它沉淀物的增多； c.其它的添加剂可以选择在最终配置和无菌过 滤之前加入；如果添加剂是无菌的，则可 以直接添加到无菌的培养基。
血清出现沉淀？
1.纤维蛋白：是常出现的较大的沉淀物。因为血清都是在低 温下进行收集和快速处理的，一些纤维蛋白原（形成絮状 纤维蛋白的可溶性前体）在处理过程中仍处于溶解状态， 在经过最后的过滤后发生凝结，形成纤维蛋白沉淀。 2.磷酸钙：是一种常见的沉淀物，通常会使血清出现浑浊， 并且在37℃培养时会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观 察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动， 因此经常被误认为是微生物污染 3.其他的脂类和蛋白 4.血清中的沉淀物是难以预测和预防的，但通常沉淀不会影 响血清的质量
胎牛血清
特殊处理的胎牛血清 新生牛血清及小牛血清 其他血清：成牛血清、马血清、猪血清等 胎牛血清替代品
• 检测体系 每批产品都经过严格的细菌、支原体、病毒、内毒素、 血红蛋白等检测
如何保存和解冻血清？
a. 血清应该在-20℃保存。如果一次无法 用完一瓶，应该无菌分装后冷冻保存。注 意：避免反复冻融。 b. 解冻时将血清首先置于冰箱2-8℃中1224小时使之缓慢部分溶解，然后再放在室 温下使之全溶。注意：溶解过程中要每隔 一段时间（2小时）缓慢地摇动血清使之混 匀。
细胞培养添加剂
1.谷氨酰胺 & 丙酮酸钠 2.抗生素---青霉素/链霉素溶液 SV30010 3.非必需氨基酸---根据细胞而定 4.胰酶 5.平衡盐溶液 6. HEPES 7.酚红
胰酶 Trypsin
• 用途：用于贴壁细胞的消化，使贴壁生长 的细胞重新悬浮起来，以便传代 • -含或不含EDTA, 根据细胞和实验要求选择
丙酮酸钠的作用？
丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源， 尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源。但 是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代 谢丙酮酸钠。 保证细胞更好地生长，但非必需成分；
谷氨酰胺的作用？
a.几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有较高的要 求。谷氨酰胺脱掉氨基后，可作为培养细 胞的能量来源，参与蛋白质的合成和能量 代谢。在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良 而死亡。但同时L－谷氨酰胺的降解导致氨 的形成，而氨对于一些细胞具有毒性； b. 谷氨酰胺在溶液中很不稳定，加有谷氨酰 胺的液体培养基4度冰 箱储存两周以上时， 应重新加入原来量的谷氨酰胺；
如何储存培养基？
a.液体培养基分装后不可以在-20 ℃下保存; 因为培养基中的盐容易析出，而再次融化 后，有的盐可能无法重新溶解，从而导致 培养基营养成分和渗透压改变，培养细胞 时，容易细胞破裂而死亡； b. 培养基开瓶后尽快用完，不宜长时间保存， 因为时间过长会导 致液体培养基中盐分的 析出和pH值的改变；
贴壁细胞培养基本流程
基础培养 基 + FBS + 添加剂 + 抗生素 去除Media
用PBS或 Trypsin清洗 加入Trypsin 以分离贴壁 细胞 将部分细胞 传代到新的 Media中
细胞培养主要成分
①血清 ②基本培养基 ③细胞培养试剂（抗生素、细胞解离，生长 因子等） ④平衡盐溶液
血清产品及FAQ
• Ham’s F12 (Ham’s Nutrient Mixture F12): ’ ’
F10 的升级版，含有更多的维生素，肌醇，氨基酸。用于培养大鼠， 兔子和鸡胚细胞，还用于中国仓鼠卵巢细胞以及肺细胞的培养
普通培养基
• 5大常用培养基 •RPMI 1640 •Dulbecco’s Modified Eagles Medium (DMEM) •Minimum Essential Medium (MEM) •Iscove’s Modified Dulbecco’s Medium (IMDM) •Medium 199 •培养基提供形式 •干粉 •液体
无血清培养基产品体系
五大细胞培养平台： CHO Cell (仓鼠卵巢细胞) Hybridoma and Myeloma Cell (杂交瘤和骨 髓瘤细胞) HEK 293 and PER.C6® Cell Culture Insect Cell Culture (昆虫细胞） Viral Vaccine Cell Culture(病毒生产用细胞)