革兰阳性菌的鉴定操作36页PPT
合集下载
革兰氏阳性球菌PPT课件
感染产毒菌株后可引起机体多个器官系统的功能紊乱或毒性休 克综合征。 TSST-1可能不是引起TSS的唯一病因，革兰阴性杆菌内毒素、 葡萄球菌肠毒素和溶血素等与TSS的发病也有密切关系
（2）酶类
① 血浆凝固酶（Coagulase） 凝固酶有两种：一种是游离 凝固酶，另一种为结合凝固酶(Bound coagulase)或凝聚因子。 凝固酶和葡萄球菌的毒力关系密切。 ② 耐热核酸酶 此酶能迅速分解核酸，利于病菌扩散。 ③其他 葡激酶、透明质酸酶、脂酶(Lipase)等。
3
一、葡萄球菌属的基本特征 二、分类
根据生化反应和产生色素不同，可分为金黄色葡萄球 菌 （ Staph.aureus ） 、 表 皮 葡 萄 球 菌 (Staph. epidermidis) 和 腐 生 葡 萄 球 菌 (Staph.saparophytics)。
三、金黄色葡萄球菌
（一）形态染色 （二）培养特性 1. 营养要求不高，在普通琼脂平板培养基上生长良好， S型菌落，产色素。 2. 在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，有的菌 株菌落周围形成明显的全透明溶血环（溶血）。 3.在肉汤培养基中呈均匀混浊生长，形成很薄的菌环4 。
4）不同种类链球菌在血液琼脂上可产生不同的溶血现象。
17
3、致病性 致病性链球菌可产生多种毒素或酶，可致人及多种动物 的很多疾病，化脓感染、肺炎、乳房炎等。 4、免疫性 抗M蛋白的抗体具有保护作用. M蛋白有多种抗原型，各型间缺乏有效的交叉保护。 我国研制的猪、羊链球菌疫苗有较好的免疫效果
18
5、微生物学诊断
12
2.所致疾病 （1）侵袭性疾病主要引起化脓性炎症。
（2）中毒性疾病。
（七）微生物学诊断 1.直接涂片镜检 2.分离培养与鉴定
（2）酶类
① 血浆凝固酶（Coagulase） 凝固酶有两种：一种是游离 凝固酶，另一种为结合凝固酶(Bound coagulase)或凝聚因子。 凝固酶和葡萄球菌的毒力关系密切。 ② 耐热核酸酶 此酶能迅速分解核酸，利于病菌扩散。 ③其他 葡激酶、透明质酸酶、脂酶(Lipase)等。
3
一、葡萄球菌属的基本特征 二、分类
根据生化反应和产生色素不同，可分为金黄色葡萄球 菌 （ Staph.aureus ） 、 表 皮 葡 萄 球 菌 (Staph. epidermidis) 和 腐 生 葡 萄 球 菌 (Staph.saparophytics)。
三、金黄色葡萄球菌
（一）形态染色 （二）培养特性 1. 营养要求不高，在普通琼脂平板培养基上生长良好， S型菌落，产色素。 2. 在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，有的菌 株菌落周围形成明显的全透明溶血环（溶血）。 3.在肉汤培养基中呈均匀混浊生长，形成很薄的菌环4 。
4）不同种类链球菌在血液琼脂上可产生不同的溶血现象。
17
3、致病性 致病性链球菌可产生多种毒素或酶，可致人及多种动物 的很多疾病，化脓感染、肺炎、乳房炎等。 4、免疫性 抗M蛋白的抗体具有保护作用. M蛋白有多种抗原型，各型间缺乏有效的交叉保护。 我国研制的猪、羊链球菌疫苗有较好的免疫效果
18
5、微生物学诊断
12
2.所致疾病 （1）侵袭性疾病主要引起化脓性炎症。
（2）中毒性疾病。
（七）微生物学诊断 1.直接涂片镜检 2.分离培养与鉴定
革兰阳性菌感染ppt课件
药物的安全性
同组药物相比，选毒副作用小的品种 同样的药物选毒副作用小的剂型 同组的药物选耐药性不易产生的品种
第一代头孢
G＋ G－ 耐酶 血浓度 蛋白 结合率 中 低 低 高 低 肾毒性 其他 头孢Ⅰ、噻吩 头孢Ⅱ、噻啶 头孢Ⅳ、氨苄 头孢Ⅴ、唑啉 头孢Ⅵ、拉定 ++ +++ +~++ +++ +~++ ++ +++ + +++ + 中 不耐 耐 耐 耐 中 高 低 高 高 单低 明显 低 单低 低 无钠、口服 体内代谢 入CSF
痰培养
清洁漱口后取清晨深部痰 以清洁无菌器皿收痰 涂片见炎症细胞为主，方做培养 痰经生理盐水冲洗等处理 及时作定量培养 取支气管冲洗液、洗刷液、环甲膜穿刺液作培养 重复培养其结果一致，常视为致病菌，而反复变化 的结果，多为污染菌或寄殖菌
直接涂片
痰涂片见抗酸染色阳性杆菌 脑脊液或瘀斑刺破液涂片 脑脊液加墨汁混合后镜检 白喉患者咽部假膜涂片 免疫荧光、酶标抗体检测结合直接涂片镜检
织坏死明显恶臭
绿脓杆菌
厌氧菌
迁移性脓肿
菌 剧烈腹泻，镜检
金葡菌、消化链球菌、类杆
产肠毒素细菌致
脓细胞、白细胞 非入侵性肠炎
革兰阳性菌感染的临床
外毒素（蛋白质、多肽） *发热、高热及其毒性表现（面红、皮肤发 烫 ，心率加快，脉洪、兴奋等） *血象：WBC增高，中性↑ *特殊性表现
外毒素的特殊表现
白喉毒素 心肌炎、循环衰竭、周围神经麻痹 破伤风毒素 肌痉挛搐、抽、角弓反张 肉毒毒素 肌肉麻痹 肠毒素（葡） 呕吐、腹泻 红疹毒素（链） 红斑 炭疽毒素 损伤内皮细胞、出血、渗出↑、 皮肤坏死、休克、DIC 金葡表皮溶解毒素 大疱型天疱疮
《革兰氏染色法》课件
将脱色后的涂片用番红染液复染，时间约为1-2分钟。番红是 一种酸性染料，可以和蛋白质结合，使菌体或细胞呈现红色 。
番红复染的作用是使菌体或细胞呈现红色，使其更加明显， 有助于观察和鉴别。同时，番红还可以与结晶紫形成鲜明的 对比，使观察更加准确。
冲洗与干燥
• 将染色完成的涂片用清水冲洗干净，然后晾干或用吸水纸吸干 水分。冲洗的目的是去除染色过程中残留的染料和媒染剂等物 质，以免对观察造成干扰。干燥的目的是使涂片固定，以便于 保存和观察。
背景
革兰氏染色法的发明对于细菌学的发展起到了重要的推动作 用，为后续的细菌分类、疾病诊断和治疗提供了有力支持。
染色原理
原理
革兰氏染色法的染色原理主要是通过 一系列的脱色处理和复染，使细菌着 色，从而根据颜色差异将细菌分为革 兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
操作流程
革兰氏染色法通常包括涂片、脱色、 媒染、染色和复染等步骤，通过这些 步骤的组合和调整，可以实现对不同 类型细菌的准确鉴别。
革兰氏染色法的结
03
果与意义
革兰氏阳性菌与阴性菌的染色特性
革兰氏阳性菌
被染成紫色或蓝紫色，不易被酒 精脱色，有厚重的革兰氏染色反 应。
革兰氏阴性菌
被染成红色或淡红色，易被酒精 脱色，有较弱的革兰氏染色反应 。
染色结果的分析与解读
根据染色结果判断细菌的种类和特性，有助于临床诊断和 治疗。
通过观察染色后细菌的形态和排列，可以初步判断细菌的 致病性。
重要性
革兰氏染色法对于临床医学、生物技术和食品工业等领域具有重要意义，能够 帮助科学家和医生快速准确地鉴别不同类型的细菌，从而采取相应的治疗和预 防措施。
发展历程与背景
发展历程
革兰氏染色法由丹麦细菌学家汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884 年发明，至今已有百余年历史。随着科学技术的不断进步， 该方法在操作流程和染料选择等方面不断得到优化和改进。
其他需氧革兰阳性杆菌详解演示文稿
•污染杂菌液体标本：离心→弃上清液后→加0.5%洗涤 剂振荡10～15min →离心取沉淀物增菌和分离培养
第20页，共69页。
检验流程
皮毛、腐败脏器等
血液
Ascoli试验 以NG制成悬液 经加温或饱和尿 素处理
肉汤增菌 培养
BAP或戊烷 脒平板
2%兔血清肉汤4～8h G染色镜检
菌落特征
动生
力 观 察
确定报告
初步报告
第22页，共69页。
标本直接检查
• 直接显微镜检查：
G染色、荚膜染色、芽胞染色—初步报告
• 荚膜荧光抗体染色 • 核酸检测：核酸杂交
第23页，共69页。
分离培养 --BAP、戊烷脒多黏菌素B平板 --2%兔血清肉汤增菌→分离培养
第24页，共69页。
鉴定试验
• 形态和菌落特征
• 生化试验：见教材表13-1 • 噬菌体裂解试验：
•接种半固体培养基，置室温孵育可出现倒 伞形生长
第50页，共69页。
•生化反应：
• 触酶阳性 • 分解葡萄糖、麦芽糖、鼠李糖、水杨苷 • 不分解甘露醇、木糖、蔗糖 • 能水解七叶苷，甲基红和V-P试验阳性 • 不形成吲哚，不分解尿素，不还原硝酸盐
第51页，共69页。
•抵抗力：
• 耐盐、耐碱、不耐酸 • 对热、常用消毒剂敏感 • 首选氨苄青霉素，青霉素、链霉素、红霉素
其他需氧革兰阳性杆菌详解演 示文稿
第1页，共69页。
优选其他需氧革兰阳性杆菌
第2页，共69页。
第一节 炭疽芽胞杆菌 （Bacillus anthracis)
一、临床意义 • 炭疽是人畜共患的急性传染病 • 主要是牛、羊等食草类动物的传染病 • 人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染 • “生物恐怖”
第20页，共69页。
检验流程
皮毛、腐败脏器等
血液
Ascoli试验 以NG制成悬液 经加温或饱和尿 素处理
肉汤增菌 培养
BAP或戊烷 脒平板
2%兔血清肉汤4～8h G染色镜检
菌落特征
动生
力 观 察
确定报告
初步报告
第22页，共69页。
标本直接检查
• 直接显微镜检查：
G染色、荚膜染色、芽胞染色—初步报告
• 荚膜荧光抗体染色 • 核酸检测：核酸杂交
第23页，共69页。
分离培养 --BAP、戊烷脒多黏菌素B平板 --2%兔血清肉汤增菌→分离培养
第24页，共69页。
鉴定试验
• 形态和菌落特征
• 生化试验：见教材表13-1 • 噬菌体裂解试验：
•接种半固体培养基，置室温孵育可出现倒 伞形生长
第50页，共69页。
•生化反应：
• 触酶阳性 • 分解葡萄糖、麦芽糖、鼠李糖、水杨苷 • 不分解甘露醇、木糖、蔗糖 • 能水解七叶苷，甲基红和V-P试验阳性 • 不形成吲哚，不分解尿素，不还原硝酸盐
第51页，共69页。
•抵抗力：
• 耐盐、耐碱、不耐酸 • 对热、常用消毒剂敏感 • 首选氨苄青霉素，青霉素、链霉素、红霉素
其他需氧革兰阳性杆菌详解演 示文稿
第1页，共69页。
优选其他需氧革兰阳性杆菌
第2页，共69页。
第一节 炭疽芽胞杆菌 （Bacillus anthracis)
一、临床意义 • 炭疽是人畜共患的急性传染病 • 主要是牛、羊等食草类动物的传染病 • 人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染 • “生物恐怖”
革兰阳性球菌PPT课件
广泛存在于自然界，多数是不致 病的腐物寄生菌。
致病性葡萄球菌可引起化脓性炎 症、败血症、食物中毒等。
.
3
分类
（1）金黄色葡萄球菌(S. aureus)：多数致病 （2）表皮葡萄球菌(S. epidermidis)：偶可致病 （3）腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)：不致病
.
4
金黄色葡萄球菌S. aureus
细菌学各论
了解各种细菌的形态、培养特性、致病因子 及微生物学诊断。
李丹毒，白结核，芽孢球菌除淋膜， 若问芽孢菌有何，炭肿气疽破三梭， 这些细菌均阳性，其他细菌阴性多。
.
1
第一章 革兰氏阳性球菌
阳性：葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌
球菌
阴性：淋球菌、脑膜炎球菌
第一节 葡萄球菌属
Staphylococcus
检验方法
（一）直接检查： 可直接涂片，革兰氏染色镜检。
（二）分离培养: 接种血平板，观察菌落形态和溶血情况。 （三）细菌鉴定：菌落形态、溶血特性、细菌形态、生化
特性。如定群、定型，则要作血清学试验。
.
28
复习思考题
1.金黄色葡萄球菌可产生的毒素、酶及其致病作用。 2.链球菌产生的毒素、酶及其致病作用。 3.链球菌在血液琼脂培养基上的溶血表现。 4.链球菌的兰氏分群。 5.如何从污染的病料组织中分离致病性葡萄球菌？
幼畜炎症及败血症
.
24
猪链球菌病
猪链球菌（Streptococcus suis）2型
S. equi subsp. zooepidemicus ATCC35246
S. suis type 2 HA9801
五、微生物学诊断
标本的采集：采集适当的标本—渗出液、脓汁、乳腺炎
致病性葡萄球菌可引起化脓性炎 症、败血症、食物中毒等。
.
3
分类
（1）金黄色葡萄球菌(S. aureus)：多数致病 （2）表皮葡萄球菌(S. epidermidis)：偶可致病 （3）腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)：不致病
.
4
金黄色葡萄球菌S. aureus
细菌学各论
了解各种细菌的形态、培养特性、致病因子 及微生物学诊断。
李丹毒，白结核，芽孢球菌除淋膜， 若问芽孢菌有何，炭肿气疽破三梭， 这些细菌均阳性，其他细菌阴性多。
.
1
第一章 革兰氏阳性球菌
阳性：葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌
球菌
阴性：淋球菌、脑膜炎球菌
第一节 葡萄球菌属
Staphylococcus
检验方法
（一）直接检查： 可直接涂片，革兰氏染色镜检。
（二）分离培养: 接种血平板，观察菌落形态和溶血情况。 （三）细菌鉴定：菌落形态、溶血特性、细菌形态、生化
特性。如定群、定型，则要作血清学试验。
.
28
复习思考题
1.金黄色葡萄球菌可产生的毒素、酶及其致病作用。 2.链球菌产生的毒素、酶及其致病作用。 3.链球菌在血液琼脂培养基上的溶血表现。 4.链球菌的兰氏分群。 5.如何从污染的病料组织中分离致病性葡萄球菌？
幼畜炎症及败血症
.
24
猪链球菌病
猪链球菌（Streptococcus suis）2型
S. equi subsp. zooepidemicus ATCC35246
S. suis type 2 HA9801
五、微生物学诊断
标本的采集：采集适当的标本—渗出液、脓汁、乳腺炎
革兰阳性球菌PPT课件
17
抗原构造
(1)葡萄球菌A蛋白： 细胞壁表面蛋白
质，完全抗原。capsFra bibliotekle peptidoglycan teichoic acid
SPA (2)荚膜多糖： 有利于细菌粘附
(3)多糖抗原： 存在于细胞壁，
有群特异性。
18
SPA（staphylococcal protein A）
SPA功能
PHAGOCYTE 体内作用：
7
凝固酶
意义：鉴别有无致病性的重要指标 致病机理：抵抗吞噬细胞的吞噬；保护病菌不受
血清中杀菌物质的破坏；使感染局限 化和形成血栓。
8
耐热核酸酶：水解DNA 纤维蛋白溶酶：水解纤维素（纤维蛋白溶酶、葡
激酶）
透明质酸酶：降解结缔组织（扩散因子） 脂酶：分解脂肪 触酶：分解H2O2
9
②毒素
葡萄球菌溶素 有α、β、γ、δ等 损伤细胞膜的毒素（细胞毒素）,破坏红细胞、 白细胞、血小板以及肝细胞等
根据感染的部位，采集不同的标本。 该属细菌广泛分布在人体皮肤和黏膜，采
取时避免病灶周围正常菌群污染。
21
（三）标本直接检查
无菌体液如脑脊液和关节穿刺液可使用涂 片、革兰染色后直接显微镜检查，查见细菌 具有重要临床价值。
其他体液标本如同时伴有炎性细胞时则直接 显微镜检查结果也具有参考价值。
11
肠毒素（enterotoxin）
—约1/3临床分离金黄色葡萄球菌可产生 —对热稳定的可溶性蛋白质，耐热100℃30min ,
能够抵抗胃肠液中蛋白酶的水解作用
根据抗原性和等电点的不同可分为A、B 、C1、C2、 C3、D、E、G和H等9个血清型，以A、D 型多见
—作用机制：刺激呕吐中枢导致以呕吐为主要 症状的食物中毒
抗原构造
(1)葡萄球菌A蛋白： 细胞壁表面蛋白
质，完全抗原。capsFra bibliotekle peptidoglycan teichoic acid
SPA (2)荚膜多糖： 有利于细菌粘附
(3)多糖抗原： 存在于细胞壁，
有群特异性。
18
SPA（staphylococcal protein A）
SPA功能
PHAGOCYTE 体内作用：
7
凝固酶
意义：鉴别有无致病性的重要指标 致病机理：抵抗吞噬细胞的吞噬；保护病菌不受
血清中杀菌物质的破坏；使感染局限 化和形成血栓。
8
耐热核酸酶：水解DNA 纤维蛋白溶酶：水解纤维素（纤维蛋白溶酶、葡
激酶）
透明质酸酶：降解结缔组织（扩散因子） 脂酶：分解脂肪 触酶：分解H2O2
9
②毒素
葡萄球菌溶素 有α、β、γ、δ等 损伤细胞膜的毒素（细胞毒素）,破坏红细胞、 白细胞、血小板以及肝细胞等
根据感染的部位，采集不同的标本。 该属细菌广泛分布在人体皮肤和黏膜，采
取时避免病灶周围正常菌群污染。
21
（三）标本直接检查
无菌体液如脑脊液和关节穿刺液可使用涂 片、革兰染色后直接显微镜检查，查见细菌 具有重要临床价值。
其他体液标本如同时伴有炎性细胞时则直接 显微镜检查结果也具有参考价值。
11
肠毒素（enterotoxin）
—约1/3临床分离金黄色葡萄球菌可产生 —对热稳定的可溶性蛋白质，耐热100℃30min ,
能够抵抗胃肠液中蛋白酶的水解作用
根据抗原性和等电点的不同可分为A、B 、C1、C2、 C3、D、E、G和H等9个血清型，以A、D 型多见
—作用机制：刺激呕吐中枢导致以呕吐为主要 症状的食物中毒
革兰氏染色课件PPT
复染
复染：将脱色后的涂片用复染液进行复染处理，以便更好地观察菌体或组织的形态和结构。
复染时应注意控制复染时间，避免过长或过短，以免影响染色效果。
冲洗和干燥
冲洗
将染色和脱色处理后的涂片用清 水冲洗干净，以便观察菌体或组 织的染色效果。
干燥
将冲洗干净的涂片放在干净的纸 巾上自然干燥，以便后续观察。
Part
固定时应注意控制火焰温度，避免过高或过低，以免影响 染色效果。
染色
染色：将涂片浸入革兰氏染色液中， 染色一定时间后取出晾干。
染色时应注意控制染色时间，避免过 长或过短，以免影响染色效果。
脱色
脱色：将染色后的涂片用脱色液进行脱色处理，以去除菌体或组织表面的色素。
脱色时应注意控制脱色时间，避免过长或过短，以免影响染色效果。
复染与初次染色要匹配
复染的颜色要与初次染色相匹配，以 便更好地观察染色效果。
其他注意事项
染色液要新鲜
染色液使用前要确保新鲜，过期 或变质的染色液会影响染色效果
。
避免交叉污染
在染色过程中要避免不同染色液之 间的交叉污染，以免影响染色结果 。
注意安全
染色过程中要注意安全，避免染色 液溅到皮肤或眼睛上，如不慎溅到 应立即用大量清水冲洗并及时就医 。
革兰氏染色还可以用于研究细菌的生 物学特性和分类学研究，有助于深入 了解细菌的生态学和进化关系。
Part
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
涂片：将待染色的菌体或组织薄而均匀地涂在洁净的玻片上，然后晾干或烘干， 以便后续染色。
涂片时应注意避免涂层过厚，以免影响染色效果。
固定
固定：将涂片在火焰上快速通过两次，使菌体或组织固定 在玻片上，以便后续染色。
革兰阳性菌的鉴定操作
5.β溶血菌落
5.葡萄糖发酵试验
5.API板条试验
小、黄色菌落；镜下呈四联、八叠排列细菌，则做葡萄糖发酵试验：
阳性 则转为上一个步骤试验；
阴性 报微球菌属
6.七叶苷NaCl试验 6.Optochin试验
6.CAMP试验
6.杆菌肽试验
七叶苷试验（阴性或阳性）6.5％Nacl试验阴性： 1.α溶血，做Optochin试验：敏感且G+矛头状双球菌、脐窝状 菌落，则判断为肺炎链球菌（Optochin试验抑菌圈的直径 ≥14mm为阳性） 2.β溶血：2.1.杆菌肽试验敏感，则判断为A群链球菌
肺炎链球菌
脐窝状菌落
粘液状菌落
原理：Optochin（乙基氢化去甲奎宁的商品名） 可干扰肺炎链球菌叶酸的生物合成， 抑制该菌的生长 故肺炎链球菌对其敏感，而其他链球菌 对其耐药。
Optochin试验抑菌圈的直径≥14mm为阳性
Optochin敏感试验
化脓性链球菌
临床标本培养后混杂 在口腔正常菌群中的
培养特性
菌落特征：光滑、完整微隆起、半 透明，β-溶血，奶黄色、橙黄色、 柠檬色、白色（ 脂溶性色素）
金黄色葡萄球菌
菌落特征：菌落相对较小， 2.5～6.0mm，取决于不同菌 株，通常不产生色素，某些菌 株产生黏液性常黏附在琼脂表 面
表皮葡萄球菌
菌落特征：菌落5～8mm大小 ，完整，有光泽，不透明、光 滑，比前面提到菌种菌落较凸 起，约一半菌株产色素，奶油 、黄-橙色。
5：Staphaurex胶乳凝集试验
本法不仅可以检测金葡菌的凝固酶而还可通过 IgG抗体的FC段与金葡菌的A蛋白有特殊的亲 和力而检测之。
中等大小、黄或灰白，β溶血或不溶血的菌落，则做Staphaurex胶乳凝集试验：
革兰氏阳性菌PPT幻灯片课件
20
细胞壁的基本骨架——肽聚糖
革兰氏阳性细菌肽聚糖单体
革兰氏阴性细菌肽聚糖单体
21
细胞壁的基本骨架——肽聚糖
肽聚糖网格状结构
22
革兰氏阳性菌细胞壁
由肽聚糖和磷壁酸组成
磷壁酸：占40%。G+ 菌所特有,其主链由数 十个磷酸甘油或磷酸 核糖醇组成,有的还有 由D-Ala和还原糖组 成的侧链。
肽聚糖:
32
3、拟核（或核质体、核区） 由大型环状双链DNA纤丝不规则地折叠或缠绕而构成
的无核膜、核仁的区域。
细菌DNA：长度一般为1~3mm
例：大肠杆菌的DNA长约1mm。
生长迅速的细菌在核分裂之后细胞往
往来不及分裂,所以细胞中常有2~4个
核，而生长缓慢的细菌细胞中一般只
有1~2个核。
拟核
功能：负载遗传信息。
鞭毛的观察： 电镜 特殊鞭毛染色，在光学显微镜下观察 半固体穿刺培养 从固体培养基上的菌落形态判断 一般情况下： 菌落形状大，薄且不规则，边缘极不平整，可能有鞭毛。 菌落十分圆滑，边缘平整且相对较厚，可能没有鞭毛。
46
3 纤毛（或线毛、菌毛、伞毛） 某些菌体表面存在的短而多的附属物。 纤毛比鞭毛更短、更细，且又直又硬。数量很多，不具有运 动功能，但与菌的致病性．吸附等有关。
11
细菌的染色
12
13
革兰氏染色法
革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法，由丹麦 医生Hans Christian Gram于1884年创立。
基本步骤： 涂片固定→ 结晶紫初染1min →碘液媒染1min
→95%乙醇脱色0.5min →沙黄复染1min 结果:
革兰氏阳性菌——紫色； 革兰氏阴性菌——红色。
43
细胞壁的基本骨架——肽聚糖
革兰氏阳性细菌肽聚糖单体
革兰氏阴性细菌肽聚糖单体
21
细胞壁的基本骨架——肽聚糖
肽聚糖网格状结构
22
革兰氏阳性菌细胞壁
由肽聚糖和磷壁酸组成
磷壁酸：占40%。G+ 菌所特有,其主链由数 十个磷酸甘油或磷酸 核糖醇组成,有的还有 由D-Ala和还原糖组 成的侧链。
肽聚糖:
32
3、拟核（或核质体、核区） 由大型环状双链DNA纤丝不规则地折叠或缠绕而构成
的无核膜、核仁的区域。
细菌DNA：长度一般为1~3mm
例：大肠杆菌的DNA长约1mm。
生长迅速的细菌在核分裂之后细胞往
往来不及分裂,所以细胞中常有2~4个
核，而生长缓慢的细菌细胞中一般只
有1~2个核。
拟核
功能：负载遗传信息。
鞭毛的观察： 电镜 特殊鞭毛染色，在光学显微镜下观察 半固体穿刺培养 从固体培养基上的菌落形态判断 一般情况下： 菌落形状大，薄且不规则，边缘极不平整，可能有鞭毛。 菌落十分圆滑，边缘平整且相对较厚，可能没有鞭毛。
46
3 纤毛（或线毛、菌毛、伞毛） 某些菌体表面存在的短而多的附属物。 纤毛比鞭毛更短、更细，且又直又硬。数量很多，不具有运 动功能，但与菌的致病性．吸附等有关。
11
细菌的染色
12
13
革兰氏染色法
革兰氏染色法是细菌细胞的复合染色法，由丹麦 医生Hans Christian Gram于1884年创立。
基本步骤： 涂片固定→ 结晶紫初染1min →碘液媒染1min
→95%乙醇脱色0.5min →沙黄复染1min 结果:
革兰氏阳性菌——紫色； 革兰氏阴性菌——红色。
43
革兰阳性菌的鉴定操作
4：触酶试验 原理：2H2O2 O2 &#。
2、触酶阴性，可初步判断 为链球菌属和肠球菌属
Staphaurex胶乳凝集试验是一种鉴定 金葡菌的快速、简便的商品化直接凝集 试验。 基本原理是在纸板或玻片上滴加包被有纤维蛋 白原和IgG抗体的聚苯乙烯胶乳，然后用接种 环挑取待鉴定的新鲜培养物加入混匀出现凝集 块现象为阳性。
杆菌肽（Bacitracin）试验
CAMP试验
无乳链球菌
马链球菌 β 溶血
血清分群诊断： A、B、C、D、F、G
G+球菌 触酶 － 七叶苷：－或＋ 6.5％Nacl：－ γ BAP溶 血 上机 α Optochin试验
链球菌属
β
乳胶凝集或CAMP 阳 性 B群链球菌 其他上机
敏感
杆菌肽 敏 感 A群链球菌 G+矛头状双球菌 、脐窝状菌落 肺炎链球菌
小、黄色菌落；镜下呈四 联、八叠排列细菌 葡萄糖发酵 － 报微球菌属
+
24hβ溶 血
金黄色葡萄球 菌
上机
链球菌属
链球菌属概述
链球菌属（Streptococcus）是一群触酶实验阴 性、呈链状排列的革兰氏阳性球菌，广泛存在于 自然界和人及动物粪便和健康人鼻咽部，可引起 各种化脓性炎症、猩红热、丹毒、新生儿败血症 、脑膜炎、产褥热以及链球菌变态反应性疾病等 该菌属种类繁多，目前临床上仍沿用Lancefield 血清学方法分为A、B、C、D、E、F、G群，或根 据其在血平板上的溶血现象进行分类（β 溶血或完 全溶血、α 溶血或草绿色溶血、γ 溶血或不溶血）
无芽孢，无鞭毛，革兰染色阳性。
菌落特征： 生长在血琼脂平板或哥伦比亚血平板上的菌落圆形，表面光滑、灰白色、边缘 整齐、半透明，开始扁平以后中心塌陷，呈脐窝状，具体呈矛头状成双排列。 该菌Optochin敏感，胆汁溶菌试验阳性。
2、触酶阴性，可初步判断 为链球菌属和肠球菌属
Staphaurex胶乳凝集试验是一种鉴定 金葡菌的快速、简便的商品化直接凝集 试验。 基本原理是在纸板或玻片上滴加包被有纤维蛋 白原和IgG抗体的聚苯乙烯胶乳，然后用接种 环挑取待鉴定的新鲜培养物加入混匀出现凝集 块现象为阳性。
杆菌肽（Bacitracin）试验
CAMP试验
无乳链球菌
马链球菌 β 溶血
血清分群诊断： A、B、C、D、F、G
G+球菌 触酶 － 七叶苷：－或＋ 6.5％Nacl：－ γ BAP溶 血 上机 α Optochin试验
链球菌属
β
乳胶凝集或CAMP 阳 性 B群链球菌 其他上机
敏感
杆菌肽 敏 感 A群链球菌 G+矛头状双球菌 、脐窝状菌落 肺炎链球菌
小、黄色菌落；镜下呈四 联、八叠排列细菌 葡萄糖发酵 － 报微球菌属
+
24hβ溶 血
金黄色葡萄球 菌
上机
链球菌属
链球菌属概述
链球菌属（Streptococcus）是一群触酶实验阴 性、呈链状排列的革兰氏阳性球菌，广泛存在于 自然界和人及动物粪便和健康人鼻咽部，可引起 各种化脓性炎症、猩红热、丹毒、新生儿败血症 、脑膜炎、产褥热以及链球菌变态反应性疾病等 该菌属种类繁多，目前临床上仍沿用Lancefield 血清学方法分为A、B、C、D、E、F、G群，或根 据其在血平板上的溶血现象进行分类（β 溶血或完 全溶血、α 溶血或草绿色溶血、γ 溶血或不溶血）
无芽孢，无鞭毛，革兰染色阳性。
菌落特征： 生长在血琼脂平板或哥伦比亚血平板上的菌落圆形，表面光滑、灰白色、边缘 整齐、半透明，开始扁平以后中心塌陷，呈脐窝状，具体呈矛头状成双排列。 该菌Optochin敏感，胆汁溶菌试验阳性。
革兰阳性菌感染及鉴定 ppt课件
2. 根据抗原结构（C多糖抗原）---- A、B、C、D、E、F等 20群
3. 根据生化反应----需氧、兼性厌氧、厌氧等
20
根据溶血现象分为3类
21
医学常见链球 菌
22
一、A群链球菌 group A streptococcus
23
（一）生物学性状
形态与染色
球形或椭圆形，链状排列，G（＋），无芽胞，无鞭毛， 培养早期形成透明质酸的荚膜。
7
5. 葡萄球菌属的分类
8
新生霉素敏感试验
新生霉素敏感的金葡菌
新生霉素敏感的表皮葡菌
新生霉素不敏感的腐生葡菌
9
血浆凝固酶实验
金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌
+
-
10
（二）致病性
1. 致病物质 ①酶 ② 毒素 ③ 细菌的一些表面结构蛋白
11
1. 致病物质
凝固酶：使血浆纤维蛋白原转为纤维蛋白，血浆凝固。 抵抗吞噬细胞的吞噬；保护病菌不受血清中杀菌物质的
27
(2) M蛋白
是A群链球菌的主要致病因子，含M蛋白的链球 菌具有抗吞噬和抵抗细胞内杀菌作用；与某些超敏反应 疾病有关。
(3) 肽聚糖
A群链球菌的肽聚糖具有致热、溶解血小板、提 高血管通透性和诱发实验性关节炎等作用。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ28
(4) 致热外毒素
是人类猩红热的主要毒性物质。致热外毒素抗原 性强，具有超抗原作用，对兔有致热性和致死性。
革兰阳性菌感染及鉴定
1
球菌
coccus
2
第一节 葡萄球菌属(staphylococcus)
G(+)，分布广泛。 大部分为腐物寄生菌，不致病 。 对 人 类 致 病 的 主 要 是 金 黄 色 葡 萄 球 菌 ， 引起化脓性感染，亦可引起败血症。
第七章 革兰氏阳性球菌
被动免疫
自然被动免疫：通过胎盘、初乳
人工被动免疫：注射抗毒素、丙种球蛋 白、转移因子
第七章 革兰氏阳性球菌
• 球菌(Coccus)是球状细菌的总称，是细菌中的一大类。 • 根据革兰氏染色反应的不同可分为：
G＋球菌 G－球菌
葡萄球菌、 双球菌、 链球菌、 四联球菌、 八叠球菌等
脑膜炎球菌、 淋病球菌、 卡他球菌、 干燥奈氏球菌、 黄色奈氏球菌等
四、生化特性
• 多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气;
• 致病性葡萄球菌具有 DNA酶、血浆凝固酶 和分解甘露醇的能力， 而非致病性葡萄球菌 则无。
五、抗原构造
• 葡萄球菌抗原构造复杂，已发现的在 30种以上，其化学组成及生物学活 性了解的仅少数几种，如：
1、葡萄球菌A蛋白2、Biblioteka 糖抗原第七章 革兰氏阳性球菌
• 球菌(Coccus)是球状细菌的总称，是细菌中的一大 类。
• 根据革兰氏染色反应的不同可分为：
G＋球菌
葡萄球菌、 双球菌、 链球菌、 四联球菌、 八叠球菌等
G－球菌
脑膜炎球菌、 淋病球菌、 卡他球菌、 干燥奈氏球菌、 黄色奈氏球菌等
细菌感染的检查 方法与防治原则
细菌学诊断的途径
1、葡萄球菌A蛋白 （Staphylococcal protein A，SPA）：
• SPA是存在于细胞壁的一种表面蛋白，90%以上的金黄色葡萄球 菌菌株有此抗原，所有来自人类的菌株都有此抗原，动物源则少 见。
• SPA是一种单链多肽，可与人类以及许多哺乳动物的IgG的Fc片 段发生非特异性结合，免疫学中协同凝集试验就是利用这个特性。
➢其中葡萄球菌和链球菌是 最具有代表性的G＋球菌；