第九章：原生质体培养与体细胞杂交
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26
（2）酚藏花红染色法（0.01%） ：无活力
的原生质体能被染成红色，有活力的原生
质体这中染料,因此呈现无色。
（3）伊凡蓝染色法（0.025%）：已受损伤
的的原生质体能摄取这种染料呈现蓝色，
而完整的具活力的原生质体不被染色。
27
六、原生质体的培养 与植株再生
1、培养条件
培养基成分 无机盐：低大量元素浓度；高Ca2+浓度。 有机成分：高的有机物浓度有利于细胞分裂，如 KM8P（Kao等，1975)培养基。 激素：不同种类要求差异较大； pH值：5.5-5.9 培养基渗透压:培养基渗透压与细胞渗透压等渗或略高 于细胞渗透压。 培养环境：初期培养时应臵于25-30℃、散射光或黑暗 下培养
行植物细胞的各项生理活动；
稳定性较差，渗透压稳定剂。
5
二、 原生质体的分离与纯化
（一）原生质体材料的来源
叶肉细胞是分离原生质体的最好的细胞材料。
1、叶肉细胞排列疏松，易于分离； 2、含有叶绿体，为杂种细胞提供天然的选择标记；
适宜于分离原生质 体的细胞培养体系： 结构疏松；处于对 数生长期
7
（二）材料的预处理
在容器底部缓慢注入20%蔗糖溶液
600rpm, 5-10min
收集两层液面之间的纯净的原生质体
21
Leaves were cut in thin stripes and digested in an enzyme solution
Purification of protoplasts
Purified protoplasts
19
1、原生质体的纯化方法
（3）梯度离心法：利用比重不同的溶液，经离心 后使完整无损的原生质体处在两液相的界面之间， 而细胞碎片等杂质则沉于管底。用这种方法可以 获得更为纯净的原生质体。
20
原生质体的纯化步骤
用300-400目不锈钢网过滤酶解材料,弃去残渣
600rpm, 5-10min
wk.baidu.com
吸去上清 原生质体重悬于0.16mol/L CaCl2· 2H2O溶液中
14
（2）酶液的pH值
酶液pH值相当重要，纤维素酶及果胶酶 单独使用时，其pH分别以4.0-5.0及5.8为宜； 混合使用时pH5.8-pH6.0为宜，降至4.8以下
则原生质体破裂。酶液配制后需以0.45μm微
孔膜过滤除菌，而不可采用加热灭菌法。
15
四、原生质体的纯化
1、原生质体的纯化方法
采用40-300μm的网筛过滤细胞混合液，除去未消化的细胞、 细胞团、碎片， 收集滤液，进行以下纯化方法。 （1）沉降法：在适当溶剂内低速离心使原生质体下沉于 离心管底部，细胞碎片留在上清液中，如此收集得到的原 生质，反复3-4次。 （2）漂浮法：原生质体比重较小，能在具有一定渗透压 的溶液（如25%的蔗糖溶液）中漂浮，然后用吸管收集。
作用：改变细胞和细胞壁的生理状态；增加细 胞膜的强度；减轻酶溶液中杂酶对原生质膜的 损伤。 方法：暗处理；预培养；预质壁分离；
8
（三）原生质体的分离方法
1、机械法：
原生质体得率 极低，难以大 量制备
2、酶法：
大量获得植物 原生质体的有 效方法
9
（1）酶的类型
A. 纤维素酶，如Onozuka R-10及RS，国内常用的为EA3867，其中含少量果胶酶，0.5-2.0％ ；
PEG，能与水、蛋白质、糖等具有正极性基团的极 性物质形成氢键，在相邻原生质体表面间作为分子 桥，使原生质体发生粘连
当PEG分子被洗脱时，膜电荷发生紊乱而重新
分配。此时，一种原生质体上带正电的基团可
能与另外一个原生质体中带负电的基团相连，
导致原生质体融合。
48
2、PEG（聚乙二醇）与高pH、 高Ca2+相结合诱导融合
优点： 融合成本低，勿需特殊设备； 融合子产生的异核率较高； 愈伤组织 融合过程不受物种限制。
不定芽 缺点： 融合过程繁琐 根形成 PEG 可能对细胞有毒害。
50
诱导融合方法
（二）电融合法：利用改变电场来诱导原生
质体彼此连接成串，再施以瞬间强脉冲使质膜 发生可逆性电击穿而使原生质体融合的方法。
琼脂糖珠培养
将含有原生质体的液态琼脂糖培养基用吸 管以大约50ul一滴的量滴于直径6cm的培养皿， 待其固化后向其中添加3ml液体培养基并于摇床 上低速旋转培养。培养过程中，通过调整液体 培养基的渗透压来调节培养物的渗透压以利于 其进一步的生长和发育。这种方法由于改善了 培养物的通气和营养环境，从而促进了原生质 体的分裂和细胞团的形成。
杂种细胞
60
矮牵牛
混合体
融合处理
爬山虎冠瘿
原生质体
NT培养基
原生质体
NT培 养基 MS 培养基 (无激素)
矮牵牛+爬山虎
（异核体）
NT培养基
细胞团
MS 培养基 (有激素) MS 培养基 (无激素)
细胞团 细胞团
MS培养基 (无激素)
愈伤组织
死亡
死亡
愈伤组织
愈伤组织
61
双荧光标记选择法
将两种原生质体用不同的荧光染料进行标记，用电
55
Fusion phases of oat protoplasts (Avena sativa)
56
四、融合细胞的筛选
互补选择法:指利用两个亲本具有不同遗传和
生理特性, 在特定培养条件下,只有发生互补作用 的杂种细胞才能生长的选择方法。
抗性互补选择法 叶绿体缺失互补选择法 营养代谢互补选择法 生长互补选择法
第九章 原生质体培养 与体细胞杂交
第一节 原生质体培养
一、 原生质体概述
（一）定
原生质体(protoplast)—
义
脱去细胞壁、裸露的植
物细胞。原生质体是为
质膜所包围的裸露细胞。
4
（二）原生质体特点
原生质体无细胞壁障碍，便于 进行有关遗传操作；在诱导条件 下易发生融合，形成杂种细胞； 具全能性,能再生细胞壁,能进
拟南芥杂交后代
42
◆原生质体杂交：可以克服了远缘杂交的不亲和
原生质体的选择
选择适宜的原生质体是决定原生质体融合成败 的重要因素。 原生质体选择的考虑因素 ：
量多、活力强、遗传一致； 易于再生植株 ； 具有可识别的异核体标记； 亲缘关系不宜太远。
43
三、融合方式
原生质体融合可分为两大类： 自发融合(spontaneous fusion)—由于 去壁的裸细胞具有彼此融合的能力，在 制备原生质体的酶解保温处理过程中， 相邻的原生质体能彼此融合形成含有多
固体平板培养
即琼脂糖包埋培养。低融点的琼脂糖与原生 质体融化混合，将含有原生质体的培养基铺于 培养皿底部，封口后进行培养。 优点： 可以跟踪观察单个原生质体的发育情 况，易于统计原生质体分裂频率。 缺点：操作要求严格，尤其是混合时的温度掌 握必需合适，温度偏高则影响原生质体的活力， 温度偏低则琼脂糖凝固太快原生质体不易混合 均匀。
原生质体的分离与纯化录相
23
五、原生质体的活力测定
1、目测法
根据形态待征判断
其活力：原生质
体呈绿色（若来
源于叶片）及圆 而鼓者为活原生 质体。
25
2、染色法
（1）FDA （荧光素双 醋酸酯, ）染色法(0.01%) 原理:FDA本身无荧光，
无极性，能自由穿越细胞
质膜，在活细胞内，FDA 被酯酶裂解，分解形成荧 光素，荧光素不能自由穿 越细胞质膜。
51
1、电融合法的原理
在直流电脉冲的诱导下，原生质体质 膜表面的电荷和氧化还原电位发生改 变，使异种原生质体黏合并发生质膜 瞬间破裂，进而质膜开始连接，直到 闭和成完整的膜形成融合体。
52
2、电融合法的优点
与PEG融合比较起来，电融合有三大优点：
不存在对细胞的毒害问题；
融合技术操作简便；
3、植板密度
初始植板密度一般为: 1×104/ml~ 1×105/ml
35
4、原生质体再生植株的过程
细胞壁再生
细胞分裂与生长
愈伤组织或胚状体的形成 再生植株
36
A-D当归(Angelica sinensis(Oliv) Diels)原生质体培养成再生苗 E-H,红豆草(Onobrychis vicaefolia Scop) )原生质体培养再生植株
31
液体-固体双层培养
在培养皿的底部铺一层琼脂糖固体培养基， 再将原生质体悬浮液滴于固体培养基表面。 优点：固体培养基中的营养物质可缓慢释放到 液体培养基中，如果在下层固体培养基中加一 定量的活性炭，则还可以吸附培养物产生的一 些有害物质，促进原生质体的分裂和细胞团的 形成。 缺点：不易观察细胞的发育过程。
46
机理：
1、NaNO3诱导融合
原生质体表面带有负电荷(-10～-30mV)，同性 质电荷彼此凝聚的原生质体质膜无法靠近到足 以融合的程度。 NaNO3中的钠离子能中和原生质体表面的负 电荷，使凝聚的原生质体质膜紧密接触，促进 细胞融合.
融合率 0.1%-4%。
47
2、PEG（聚乙二醇）与高pH、 高Ca2+相结合诱导融合
个细胞核的融合体。
44
三、融合方式
诱导融合（induced fusion）——通过诱
导剂使两个彼此相邻的原生质体相互融合的
过程，称为诱发融合。
45
诱导融合方法
（一）化学诱导融合：利用化学融合剂，促
使原生质体相互靠近、粘连融合的方法。
NaNO3融合法
高pH 、高Ca2+法
聚乙二醇（PEG）法
B.半纤维素酶，如Rhozyme HP150，用于悬浮细胞、豆 科根瘤、幼苗子叶及根细胞原生质体的分离; C.果胶酶，如Macerozyme R-10 又叫离析酶，主要含果 胶酶，活力较高，其含杂酶较多，用量不超过2％，作用 时间长有毒害作用；此外亦用Pectalyase Y-23，也叫离 析软化酶，活力极高，叶片用量一般为0.1-1.0％，悬浮 细胞为0.05％； D.崩溃酶（Driselase)，为一种粗酶制剂，具有纤维素 酶及果胶酶活性；
子荧光激活选择器进行自动分类。
融合效率高。
53
3、电融合的基本过程
细胞膜的接触：当原生质体臵于 电导率很低的溶液中时，电场通 电后，电流即通过原生质体而不 是通过溶液，其结果是原生质体 在电场作用下极化而产生偶极子 ，从而使原生质体紧密接触排列 成串；
原生质体成串
54
膜的击穿：原生质体成串排列后，立即给 予高频直流脉冲就可以使原生质膜击穿，从 而导致两个紧密接触的细胞融合在一起。
29
2、培养方法
30
液体浅层培养
将含有原生质体的培养液在培养皿底部铺一薄 层，封口后进行培养。 优点：操作简单，对原生质体的损伤小，且易 于添加新鲜培养基转移培养物。 缺点：原生质体分布不均匀，常常发生原生质 体之间的粘连现象而影响其进一步的生长和发 育。此外，难以跟踪观察某一个细胞的发育情 况。
A-E, 培养的欧当归(Levisticum officinale Koch))原生质体分裂再生成植株的过程 F-L, 培养过程的核变化；F.多核，G.核穿壁，H.无丝分裂，I.染色体桥，J. 2n=22，K.L.多倍体.
第二节 体细胞杂交
一、定 义
细胞融合（Cell fusion）:是指使用人工方法使 两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技 术。 植物体细胞杂交（Somatic hybridization）： 来自不同亲本的原生质体通过人工方法诱导融 合、离体培养、再生成杂种植株的技术。
钙离子浓度决定着细胞膜的稳定性和可塑性，影响原生 质体膜的结合； 高pH又能改变质膜的表面电荷，有利于细胞融合,但对
细胞有毒害；
在高Ca2+和pH溶液的作用下，将与质膜结合的PEG分 子洗脱，将进一步加剧电荷平衡失调，从而提高融合的
几率。
融合率10-50%
49
培养过程：
PEG法诱导融合的特点
矮牵牛+爬山虎融合体的选择
57
抗性互补选择
抗A不抗B 型细胞 融合体
抗B不抗A 型细胞
含A、B 培养基
杂种细胞
58
白化互补选择法
以矮牵牛为例： 白化苗原 生质体1
融合
杂种细胞
限定培养基
白化苗原 生质体2
绿色愈伤组织 或幼苗杂种
59
营养缺陷型互补选择
Gly-型细胞 融合 Pro-型细胞
培养
Gly-、Pro-培 养基
40
1978年，Melchers获得了第
一个属间细胞杂种（番茄＋
马铃薯）；
Tomato+Potato= Pomato
41
二、研究意义
◆杂交优势：两个遗传基础不同的植物或动物 进行杂交，其杂交后代所表现出的各种性状均 优于杂交双亲，比如抗逆性强、早熟高产、品 质优良等。
性，使有性杂交根本无法获得的种间、属间、 科间远缘杂种成为现实。
（2）酚藏花红染色法（0.01%） ：无活力
的原生质体能被染成红色，有活力的原生
质体这中染料,因此呈现无色。
（3）伊凡蓝染色法（0.025%）：已受损伤
的的原生质体能摄取这种染料呈现蓝色，
而完整的具活力的原生质体不被染色。
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六、原生质体的培养 与植株再生
1、培养条件
培养基成分 无机盐：低大量元素浓度；高Ca2+浓度。 有机成分：高的有机物浓度有利于细胞分裂，如 KM8P（Kao等，1975)培养基。 激素：不同种类要求差异较大； pH值：5.5-5.9 培养基渗透压:培养基渗透压与细胞渗透压等渗或略高 于细胞渗透压。 培养环境：初期培养时应臵于25-30℃、散射光或黑暗 下培养
行植物细胞的各项生理活动；
稳定性较差，渗透压稳定剂。
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二、 原生质体的分离与纯化
（一）原生质体材料的来源
叶肉细胞是分离原生质体的最好的细胞材料。
1、叶肉细胞排列疏松，易于分离； 2、含有叶绿体，为杂种细胞提供天然的选择标记；
适宜于分离原生质 体的细胞培养体系： 结构疏松；处于对 数生长期
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（二）材料的预处理
在容器底部缓慢注入20%蔗糖溶液
600rpm, 5-10min
收集两层液面之间的纯净的原生质体
21
Leaves were cut in thin stripes and digested in an enzyme solution
Purification of protoplasts
Purified protoplasts
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1、原生质体的纯化方法
（3）梯度离心法：利用比重不同的溶液，经离心 后使完整无损的原生质体处在两液相的界面之间， 而细胞碎片等杂质则沉于管底。用这种方法可以 获得更为纯净的原生质体。
20
原生质体的纯化步骤
用300-400目不锈钢网过滤酶解材料,弃去残渣
600rpm, 5-10min
wk.baidu.com
吸去上清 原生质体重悬于0.16mol/L CaCl2· 2H2O溶液中
14
（2）酶液的pH值
酶液pH值相当重要，纤维素酶及果胶酶 单独使用时，其pH分别以4.0-5.0及5.8为宜； 混合使用时pH5.8-pH6.0为宜，降至4.8以下
则原生质体破裂。酶液配制后需以0.45μm微
孔膜过滤除菌，而不可采用加热灭菌法。
15
四、原生质体的纯化
1、原生质体的纯化方法
采用40-300μm的网筛过滤细胞混合液，除去未消化的细胞、 细胞团、碎片， 收集滤液，进行以下纯化方法。 （1）沉降法：在适当溶剂内低速离心使原生质体下沉于 离心管底部，细胞碎片留在上清液中，如此收集得到的原 生质，反复3-4次。 （2）漂浮法：原生质体比重较小，能在具有一定渗透压 的溶液（如25%的蔗糖溶液）中漂浮，然后用吸管收集。
作用：改变细胞和细胞壁的生理状态；增加细 胞膜的强度；减轻酶溶液中杂酶对原生质膜的 损伤。 方法：暗处理；预培养；预质壁分离；
8
（三）原生质体的分离方法
1、机械法：
原生质体得率 极低，难以大 量制备
2、酶法：
大量获得植物 原生质体的有 效方法
9
（1）酶的类型
A. 纤维素酶，如Onozuka R-10及RS，国内常用的为EA3867，其中含少量果胶酶，0.5-2.0％ ；
PEG，能与水、蛋白质、糖等具有正极性基团的极 性物质形成氢键，在相邻原生质体表面间作为分子 桥，使原生质体发生粘连
当PEG分子被洗脱时，膜电荷发生紊乱而重新
分配。此时，一种原生质体上带正电的基团可
能与另外一个原生质体中带负电的基团相连，
导致原生质体融合。
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2、PEG（聚乙二醇）与高pH、 高Ca2+相结合诱导融合
优点： 融合成本低，勿需特殊设备； 融合子产生的异核率较高； 愈伤组织 融合过程不受物种限制。
不定芽 缺点： 融合过程繁琐 根形成 PEG 可能对细胞有毒害。
50
诱导融合方法
（二）电融合法：利用改变电场来诱导原生
质体彼此连接成串，再施以瞬间强脉冲使质膜 发生可逆性电击穿而使原生质体融合的方法。
琼脂糖珠培养
将含有原生质体的液态琼脂糖培养基用吸 管以大约50ul一滴的量滴于直径6cm的培养皿， 待其固化后向其中添加3ml液体培养基并于摇床 上低速旋转培养。培养过程中，通过调整液体 培养基的渗透压来调节培养物的渗透压以利于 其进一步的生长和发育。这种方法由于改善了 培养物的通气和营养环境，从而促进了原生质 体的分裂和细胞团的形成。
杂种细胞
60
矮牵牛
混合体
融合处理
爬山虎冠瘿
原生质体
NT培养基
原生质体
NT培 养基 MS 培养基 (无激素)
矮牵牛+爬山虎
（异核体）
NT培养基
细胞团
MS 培养基 (有激素) MS 培养基 (无激素)
细胞团 细胞团
MS培养基 (无激素)
愈伤组织
死亡
死亡
愈伤组织
愈伤组织
61
双荧光标记选择法
将两种原生质体用不同的荧光染料进行标记，用电
55
Fusion phases of oat protoplasts (Avena sativa)
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四、融合细胞的筛选
互补选择法:指利用两个亲本具有不同遗传和
生理特性, 在特定培养条件下,只有发生互补作用 的杂种细胞才能生长的选择方法。
抗性互补选择法 叶绿体缺失互补选择法 营养代谢互补选择法 生长互补选择法
第九章 原生质体培养 与体细胞杂交
第一节 原生质体培养
一、 原生质体概述
（一）定
原生质体(protoplast)—
义
脱去细胞壁、裸露的植
物细胞。原生质体是为
质膜所包围的裸露细胞。
4
（二）原生质体特点
原生质体无细胞壁障碍，便于 进行有关遗传操作；在诱导条件 下易发生融合，形成杂种细胞； 具全能性,能再生细胞壁,能进
拟南芥杂交后代
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◆原生质体杂交：可以克服了远缘杂交的不亲和
原生质体的选择
选择适宜的原生质体是决定原生质体融合成败 的重要因素。 原生质体选择的考虑因素 ：
量多、活力强、遗传一致； 易于再生植株 ； 具有可识别的异核体标记； 亲缘关系不宜太远。
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三、融合方式
原生质体融合可分为两大类： 自发融合(spontaneous fusion)—由于 去壁的裸细胞具有彼此融合的能力，在 制备原生质体的酶解保温处理过程中， 相邻的原生质体能彼此融合形成含有多
固体平板培养
即琼脂糖包埋培养。低融点的琼脂糖与原生 质体融化混合，将含有原生质体的培养基铺于 培养皿底部，封口后进行培养。 优点： 可以跟踪观察单个原生质体的发育情 况，易于统计原生质体分裂频率。 缺点：操作要求严格，尤其是混合时的温度掌 握必需合适，温度偏高则影响原生质体的活力， 温度偏低则琼脂糖凝固太快原生质体不易混合 均匀。
原生质体的分离与纯化录相
23
五、原生质体的活力测定
1、目测法
根据形态待征判断
其活力：原生质
体呈绿色（若来
源于叶片）及圆 而鼓者为活原生 质体。
25
2、染色法
（1）FDA （荧光素双 醋酸酯, ）染色法(0.01%) 原理:FDA本身无荧光，
无极性，能自由穿越细胞
质膜，在活细胞内，FDA 被酯酶裂解，分解形成荧 光素，荧光素不能自由穿 越细胞质膜。
51
1、电融合法的原理
在直流电脉冲的诱导下，原生质体质 膜表面的电荷和氧化还原电位发生改 变，使异种原生质体黏合并发生质膜 瞬间破裂，进而质膜开始连接，直到 闭和成完整的膜形成融合体。
52
2、电融合法的优点
与PEG融合比较起来，电融合有三大优点：
不存在对细胞的毒害问题；
融合技术操作简便；
3、植板密度
初始植板密度一般为: 1×104/ml~ 1×105/ml
35
4、原生质体再生植株的过程
细胞壁再生
细胞分裂与生长
愈伤组织或胚状体的形成 再生植株
36
A-D当归(Angelica sinensis(Oliv) Diels)原生质体培养成再生苗 E-H,红豆草(Onobrychis vicaefolia Scop) )原生质体培养再生植株
31
液体-固体双层培养
在培养皿的底部铺一层琼脂糖固体培养基， 再将原生质体悬浮液滴于固体培养基表面。 优点：固体培养基中的营养物质可缓慢释放到 液体培养基中，如果在下层固体培养基中加一 定量的活性炭，则还可以吸附培养物产生的一 些有害物质，促进原生质体的分裂和细胞团的 形成。 缺点：不易观察细胞的发育过程。
46
机理：
1、NaNO3诱导融合
原生质体表面带有负电荷(-10～-30mV)，同性 质电荷彼此凝聚的原生质体质膜无法靠近到足 以融合的程度。 NaNO3中的钠离子能中和原生质体表面的负 电荷，使凝聚的原生质体质膜紧密接触，促进 细胞融合.
融合率 0.1%-4%。
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2、PEG（聚乙二醇）与高pH、 高Ca2+相结合诱导融合
个细胞核的融合体。
44
三、融合方式
诱导融合（induced fusion）——通过诱
导剂使两个彼此相邻的原生质体相互融合的
过程，称为诱发融合。
45
诱导融合方法
（一）化学诱导融合：利用化学融合剂，促
使原生质体相互靠近、粘连融合的方法。
NaNO3融合法
高pH 、高Ca2+法
聚乙二醇（PEG）法
B.半纤维素酶，如Rhozyme HP150，用于悬浮细胞、豆 科根瘤、幼苗子叶及根细胞原生质体的分离; C.果胶酶，如Macerozyme R-10 又叫离析酶，主要含果 胶酶，活力较高，其含杂酶较多，用量不超过2％，作用 时间长有毒害作用；此外亦用Pectalyase Y-23，也叫离 析软化酶，活力极高，叶片用量一般为0.1-1.0％，悬浮 细胞为0.05％； D.崩溃酶（Driselase)，为一种粗酶制剂，具有纤维素 酶及果胶酶活性；
子荧光激活选择器进行自动分类。
融合效率高。
53
3、电融合的基本过程
细胞膜的接触：当原生质体臵于 电导率很低的溶液中时，电场通 电后，电流即通过原生质体而不 是通过溶液，其结果是原生质体 在电场作用下极化而产生偶极子 ，从而使原生质体紧密接触排列 成串；
原生质体成串
54
膜的击穿：原生质体成串排列后，立即给 予高频直流脉冲就可以使原生质膜击穿，从 而导致两个紧密接触的细胞融合在一起。
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2、培养方法
30
液体浅层培养
将含有原生质体的培养液在培养皿底部铺一薄 层，封口后进行培养。 优点：操作简单，对原生质体的损伤小，且易 于添加新鲜培养基转移培养物。 缺点：原生质体分布不均匀，常常发生原生质 体之间的粘连现象而影响其进一步的生长和发 育。此外，难以跟踪观察某一个细胞的发育情 况。
A-E, 培养的欧当归(Levisticum officinale Koch))原生质体分裂再生成植株的过程 F-L, 培养过程的核变化；F.多核，G.核穿壁，H.无丝分裂，I.染色体桥，J. 2n=22，K.L.多倍体.
第二节 体细胞杂交
一、定 义
细胞融合（Cell fusion）:是指使用人工方法使 两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技 术。 植物体细胞杂交（Somatic hybridization）： 来自不同亲本的原生质体通过人工方法诱导融 合、离体培养、再生成杂种植株的技术。
钙离子浓度决定着细胞膜的稳定性和可塑性，影响原生 质体膜的结合； 高pH又能改变质膜的表面电荷，有利于细胞融合,但对
细胞有毒害；
在高Ca2+和pH溶液的作用下，将与质膜结合的PEG分 子洗脱，将进一步加剧电荷平衡失调，从而提高融合的
几率。
融合率10-50%
49
培养过程：
PEG法诱导融合的特点
矮牵牛+爬山虎融合体的选择
57
抗性互补选择
抗A不抗B 型细胞 融合体
抗B不抗A 型细胞
含A、B 培养基
杂种细胞
58
白化互补选择法
以矮牵牛为例： 白化苗原 生质体1
融合
杂种细胞
限定培养基
白化苗原 生质体2
绿色愈伤组织 或幼苗杂种
59
营养缺陷型互补选择
Gly-型细胞 融合 Pro-型细胞
培养
Gly-、Pro-培 养基
40
1978年，Melchers获得了第
一个属间细胞杂种（番茄＋
马铃薯）；
Tomato+Potato= Pomato
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二、研究意义
◆杂交优势：两个遗传基础不同的植物或动物 进行杂交，其杂交后代所表现出的各种性状均 优于杂交双亲，比如抗逆性强、早熟高产、品 质优良等。
性，使有性杂交根本无法获得的种间、属间、 科间远缘杂种成为现实。