超氧化物歧化酶SOD活性的测定方法

超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定方法

一、试剂

1. 0.1mol/L HCl

2. 10mmol/L HCl

3. 0.1mol/L Tris标准溶液：12.114g三羟甲基氨基甲烷溶于蒸馏水，并定容至1000ml.

4. 50mmol/LTris缓冲溶液：L Tris标准溶液中加入L HCl ～,定容至100ml，PH为。

5.30mmol/L邻苯三酚盐酸溶液：3.7833g邻苯三酚溶于10mmol/LHCl中，并用10mmol/LHCl定容至1000ml.

二、仪器

1. 紫外分光光度计

2. 酸度计

3. 恒温水浴锅

三、操作方法

1.邻苯三酚自氧化速率测定

在试管中加入50mmol/LTris缓冲溶液，于25℃保温20min,加入10～20ul 30mmol/L邻苯三酚，立即计时并摇匀，倾于比色杯内，于325nm下，每隔1min测吸光值一次，空白以10mmol/L HCl代替邻苯三酚，要求自氧化速率控制在OD/min左右。

活性测定

将样液加入到Tris缓冲溶液中，其余步骤同自氧化速率测定方法。

活力单位定义：将一定条件下使每毫升反应液自氧化速率抑制50%的酶量定义为一个单位（u）。