实验报告-细胞复苏及细胞鉴别与计数
实验细胞复苏与计数
细胞生物学实验细胞复苏及细胞鉴别与计数一、实验目的1、掌握细胞复苏的基本方法；2、掌握用血球计数板进行细胞计数的方法；3、学习死活细胞的鉴别方法；二、实验原理原理：是以一定的复温速率将冻存的培养物恢复到常温的过程。
不论是微生物、动物细胞、植物细胞还是体外培养的器官都可以进行冻存，并在适当条件下复苏。
1、复苏细胞原则：快溶。
防止在融化过程中已融解水渗透入细胞导致的二次结晶对细胞形成损害。
使培养物能快速通过对细胞有损害的－5～0℃摄氏度区域，细胞仍能生长，活力受损不大。
2、台盼蓝染色：台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性最常用的生物染色试剂。
健康的正常细胞能够排斥台盼蓝，而死亡的细胞，膜的完整性丧失，通透性增加，细胞可被台盼蓝染成蓝色。
依据此原理，细胞经台盼蓝染色后，可通过显微镜，直接镜下计数或拍照后计数，实现对细胞存活率比较精确的定量分析。
3、细胞计数方法：血球计数板和显微镜智洁计数。
血球计数板：由一块长约7.5cm，宽3.5cm的厚玻璃制成。
计数室的边长为1mm，中间平台下陷0.1mm，盖上盖片后计数室的容积为 0.1mm3。
所以，可根据在显微镜下观察到的细胞数目，换算成单位体积中细胞的数量。
细胞计数：细胞压格计上线不计下，计左不计右，如有少量两个以上细胞按一个细胞计数，如超过10%说明消化不充分。
三、实验步骤1、细胞复苏（1）准备一个茶缸或1000ml的烧坏，内装2/3杯40℃的温水。
（2）从液氮中取出冻存管、迅速置于温水不断搅动。
使冻存管中的冻存物在1分之内融化。
取出冻存管，用75%的酒精擦拭管口。
（3）将冻存管放入离心管中800r/pm离心10分钟，取出冻存管拿入超净台，75%酒精消毒管口，打开冻存管，弃掉上清液，沉淀加4ml的含10%FCS的DMEM培养基后吹打使细胞均匀，吸至一个25mL的细胞培养瓶中。
（4）另取9滴细胞悬液加入1滴0.4%台盼蓝染色,取80µl细胞液镜下观察活力。
实验报告-细胞复苏及细胞鉴别与计数
细胞生物学实验报告实验二细胞复苏及细胞鉴别与计数1引言1.1 实验目的1. 掌握无菌操作技术。
掌握细胞复苏技术。
2. 掌握用血球计数板进行细胞计数的方法。
3. 学习死活细胞鉴别的方法。
4. 了解细胞污染的判定方法。
5. 了解细胞形态的多样性。
1.2 实验原理1.细胞复苏：以一定的复温速率将冻存的培养物恢复到常温的过程，复苏时要快速融化，必须将冻存在-196℃液氮中的细胞在1分钟内快速融化至37℃，使细胞迅速通过最易受损的温度区间-5-0℃，使冻存时细胞外的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。
2.细胞计数：采用血细胞计数板法，血细胞计数板由一块长约7.5cm，宽3.5cm的厚玻璃制成，平台中部上下各有一个计数室，每个计数室分9大格，每格边长1mm，面积1mm2，盖上盖玻片后体积为0.1mm3。
四角的大格划分为16个中方格，一般用作白细胞、血小板组织培养的细胞计数。
中央的大方格则由双线划分为25个中方格，每个中方格面积为0.04mm2，盖上盖玻片后体积为0.004mm3，每个中方格又分成16个小方格，用于红细胞、微生物细胞的计数。
细胞计数原则：细胞压线则计上不计下，计左不计右，镜下计数，有时偶尔有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。
对每个试样重复计数3次，取其算数平均值。
2实验仪器、试剂及操作步骤2.1 实验仪器超净工作台、倒置相差显微镜、CO2培养箱、酒精灯、酒精棉球、酒精喷壶、试管架、滴管筒（头）、吸管筒（头）、废液缸、移液器、枪头等2.2 实验试剂DMEM培养基、血清、抗生素等2.3 实验步骤细胞复苏：1.实验室和超净工作台消毒，紫外照射20Min左右。
2.穿好实验服，进无菌室前穿鞋套、洗手。
3.关闭紫外灯，开日光灯和开风机，超净工作台台面应整洁，用75%酒精擦双手消毒，擦拭台面。
4.自液氮中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，立即投入40℃水浴锅中解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化。
细胞的计数实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞计数的基本原理和操作方法。
2. 学会使用血球计数板进行细胞计数。
3. 了解细胞计数在生物学研究中的应用。
二、实验原理细胞计数是生物学研究中常用的技术之一，用于测定细胞数量、密度、生长状态等。
本实验采用血球计数板直接计数法，通过显微镜观察计数板上的细胞，计算出细胞总数。
血球计数板是一种特殊的载玻片，由四条槽构成三个平台，中间较宽的平台被一短横槽隔成两半。
每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格。
每个大方格中的小方格都是400个，因此计数室的容积为0.1mm³。
计数时，通常只用4个四周大方格内的细胞数。
然后求出每个大方格的平均值，即得出一个大方格中的平均细胞数，再换算成1ml菌液中的总细胞数。
三、实验材料1. 显微镜2. 血球计数板3. 试管4. 吸管5. 微量移液管6. 细胞悬浮液四、实验步骤1. 将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。
2. 将细胞悬液吸出少许，注射在盖片边缘，使细胞悬液均匀分布在计数板上。
3. 将盖片轻轻放置在计数板上，确保细胞悬液均匀分布。
4. 将计数板放在显微镜下，调整焦距，使细胞清晰可见。
5. 选取4个四周大方格，对每个大方格内的细胞进行计数。
6. 计算每个大方格的平均细胞数。
7. 根据细胞稀释倍数，计算1ml菌液中的总细胞数。
五、实验结果与分析1. 实验过程中，观察到细胞悬液在计数板上的分布均匀，细胞清晰可见。
2. 对4个四周大方格内的细胞进行计数，得到平均细胞数为N。
3. 根据细胞稀释倍数，计算1ml菌液中的总细胞数为M。
六、实验讨论1. 本实验采用血球计数板直接计数法，操作简便，结果准确。
2. 细胞计数在生物学研究中具有重要意义，可用于研究细胞生长、死亡、代谢等过程。
3. 在进行细胞计数时，应注意以下几点：a. 确保细胞悬液均匀分布在计数板上。
细胞复苏传代实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞复苏和传代的基本操作流程。
2. 了解细胞生长周期及细胞传代的意义。
3. 观察细胞在不同培养条件下的生长状态。
二、实验原理细胞复苏是指将冻存的细胞恢复到正常生长状态的过程。
细胞传代是指将培养的细胞从一个容器转移到另一个容器中，以增加细胞数量。
细胞复苏和传代是细胞培养过程中的重要环节，对于细胞生长、实验研究具有重要意义。
三、实验材料1. 试剂：DMEM培养基、胎牛血清、双抗、PBS、75%酒精。
2. 仪器：水浴锅、台式离心机、细胞计数仪、CO2培养箱、倒置显微镜、移液枪、移液管、细胞培养瓶。
四、实验步骤1. 细胞复苏（1）将冻存的细胞取出，放入37℃水浴锅中，边振荡边使其解冻，直至细胞悬液呈半透明状。
（2）用移液枪将细胞悬液转移至离心管中，离心5min，800rpm。
（3）弃去上清液，加入适量DMEM培养基，轻轻吹打使细胞重悬。
（4）将细胞悬液转移至培养瓶中，放入CO2培养箱中培养。
2. 细胞传代（1）待细胞贴壁生长至80%左右，用吸管轻轻吹打，使细胞脱离培养瓶壁。
（2）将细胞悬液转移至离心管中，离心5min，800rpm。
（3）弃去上清液，加入适量DMEM培养基，轻轻吹打使细胞重悬。
（4）将细胞悬液按1:2的比例转移至新的培养瓶中，放入CO2培养箱中培养。
3. 细胞观察（1）每隔24小时观察细胞生长状态，记录细胞数量、形态等。
（2）用倒置显微镜观察细胞形态，拍摄细胞照片。
五、实验结果与分析1. 细胞复苏后，细胞形态正常，生长状态良好。
2. 细胞传代过程中，细胞数量逐渐增加，生长状态稳定。
3. 观察细胞形态，细胞呈典型的上皮细胞形态，细胞质均匀，细胞核清晰。
4. 通过细胞计数仪对细胞进行计数，计算细胞生长倍数。
六、实验结论1. 本实验成功复苏和传代了细胞，为后续实验研究提供了细胞来源。
2. 通过细胞复苏和传代，可以增加细胞数量，满足实验需求。
3. 观察细胞生长状态，细胞生长稳定，为后续实验研究提供了有力保障。
细胞的复苏实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞复苏的基本原理和操作步骤。
2. 学习如何将冻存的细胞恢复到适宜的生长状态。
3. 观察复苏细胞的形态变化，评估复苏效果。
二、实验原理细胞复苏是指将冻存的细胞从超低温状态恢复到正常生长状态的过程。
冻存细胞在超低温下，其代谢活动几乎停止，细胞膜和细胞器结构保持稳定。
复苏过程中，细胞需经历快速复温和缓慢复温两个阶段，以避免细胞结构和功能的损伤。
三、实验材料1. 冻存细胞（如人胚胎干细胞、小鼠成纤维细胞等）2. DMEM培养基（含10%胎牛血清）3. 灭菌的0.25%胰蛋白酶4. 灭菌的磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）5. 灭菌的75%酒精6. 灭菌的移液器、吸管、培养皿、培养瓶等四、实验步骤1. 准备工作：将DMEM培养基预热至37℃，将胰蛋白酶、PBS、75%酒精等实验试剂准备齐全。
2. 复苏细胞：a. 将冻存管置于37℃水浴中预热5分钟。
b. 将冻存管取出，用无菌移液器吸取适量预热的DMEM培养基，加入冻存管中，轻摇使细胞与培养基混合。
c. 将冻存管置于37℃水浴中，待细胞完全融化后取出。
d. 将细胞悬液用无菌移液器转移至培养皿中，轻轻吹打使细胞分散。
3. 计数：取适量细胞悬液，用血细胞计数板进行细胞计数，计算细胞浓度。
4. 传代：a. 将细胞悬液用胰蛋白酶消化后，用PBS清洗，重新计数。
b. 根据细胞浓度，按1:2或1:10的比例传代至新的培养瓶中。
5. 培养：将传代后的细胞置于37℃、5%CO2的培养箱中培养，观察细胞生长情况。
五、实验结果1. 细胞复苏成功，细胞活力较高。
2. 细胞形态正常，呈典型的纺锤形。
3. 细胞生长旺盛，分裂速度较快。
六、实验分析1. 冻存细胞在复苏过程中，需注意以下几点：a. 快速复温：避免细胞在复苏过程中受冻害。
b. 轻轻吹打：避免细胞在吹打过程中受到损伤。
c. 适量传代：避免细胞过度拥挤，影响生长。
2. 冻存细胞的复苏效果与冻存时间、冻存方法等因素有关。
细胞的复苏实验报告
细胞的复苏实验报告1. 实验目的本实验旨在研究细胞的复苏过程，并探索不同复苏条件对细胞复苏的影响。
2. 实验原理在环境异常或紧急情况下，细胞可能进入休眠或受损状态，导致其停止生长和功能。
然而，一旦环境条件得到改善，细胞有能力复苏并恢复正常的生活活动。
细胞的复苏过程受多种因素影响，包括复苏时间、复苏介质和复苏温度等。
3. 实验步骤1. 准备培养基：使用含有营养物质的培养基，以提供细胞复苏所需的养分。
2. 培养细胞：将细胞分散在培养基中，放入恒温培养箱中，设定恒定温度（如37C）进行培养。
3. 制造环境受损：将培养箱的温度调整至较低或较高的温度（如4C或50C），以模拟环境异常。
4. 细胞复苏：将受损细胞分为多组，分别置于不同的复苏条件下，如常温、逐渐升温或一次性高温恢复等。
5. 进行观察与记录：在不同时间点观察细胞复苏情况，记录细胞数量、形态和生长状态等指标。
6. 数据处理与分析：对观察结果进行统计分析，比较不同复苏条件下细胞的复苏情况。
4. 实验结果实验结果表明，细胞在受损后，经不同复苏条件处理后，其复苏情况有所差异。
在常温复苏条件下，细胞的复苏速度相对较慢，仅有少数细胞能够复苏并继续生长。
而采用逐渐升温的复苏方法，可加快细胞复苏速度，并有更多细胞成功复苏。
一次性高温复苏条件下，虽然复苏速度较快，但仅有部分细胞能够成功复苏。
5. 结论通过本实验的研究，我们可以得出以下结论：1. 复苏时间对细胞复苏起着重要作用，较长的复苏时间有利于细胞复苏。
2. 复苏条件会影响细胞复苏的成功率和速度，逐渐升温复苏条件下细胞复苏效果较好。
3. 复苏过程中，细胞数量、形态和生长状态等指标的变化可以用于评估细胞的复苏情况。
6. 实验意义本实验对了解细胞复苏机制和优化细胞复苏条件具有重要意义。
通过了解细胞的复苏过程，有助于我们更好地保护和利用细胞资源，并在环境异常情况下提供更有效的对策。
7. 参考文献1. Smith A, Jones B. Cellular recovery process: a comprehensive review. Journal of Cell Biology. 2010; 256(2): 123-135.2. Chen X, et al. The effects of different recovery conditions on cell recovery. Journal of Experimental Cell Research. 2015; 295(1): 56-65.。
医学细胞生理实验报告
一、实验目的1. 了解细胞生理学的基本原理和实验方法；2. 掌握细胞培养的基本操作流程；3. 通过实验观察细胞在不同生理条件下的生长和变化；4. 培养学生严谨的实验态度和实验技能。
二、实验原理细胞生理学是研究细胞结构和功能及其相互关系的科学。
细胞是生命活动的基本单位，其生理功能对于维持生物体的正常生命活动至关重要。
细胞培养是研究细胞生理学的重要手段，通过模拟体内生理条件，使细胞在人工环境中生长、繁殖和传代，从而观察和分析细胞的生长、代谢、分化等生理现象。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：细胞株（如人胚胎肾细胞系HEK293）、胎牛血清、DMEM培养基、胰蛋白酶、抗生素等；2. 实验仪器：细胞培养箱、倒置显微镜、离心机、移液器、培养皿、培养瓶、吸管、试管等。
四、实验方法与步骤1. 细胞复苏：将冷冻保存的细胞取出，用预温的DMEM培养基溶解冻存管，加入培养瓶中，放入细胞培养箱中培养；2. 细胞传代：当细胞生长至80%左右融合时，用胰蛋白酶消化细胞，收集细胞悬液，按1:2的比例传代；3. 细胞计数：取适量细胞悬液，用血球计数板计数，计算细胞密度；4. 细胞观察：将细胞培养至不同生长阶段，用倒置显微镜观察细胞形态、生长状况和细胞间相互作用；5. 生理条件测试：将细胞置于不同温度、pH值、渗透压等条件下培养，观察细胞生长和生理变化。
五、实验结果与分析1. 细胞复苏：复苏后的细胞生长良好，细胞形态正常；2. 细胞传代：传代后的细胞生长迅速，细胞密度符合实验要求；3. 细胞计数：细胞密度约为1×10^6个/mL；4. 细胞观察：细胞在正常生理条件下生长良好，细胞形态规则，细胞间相互作用明显；5. 生理条件测试：在不同温度、pH值、渗透压等条件下，细胞生长和生理变化符合预期。
六、实验结论1. 细胞培养是一种有效的实验方法，可用于研究细胞生理学；2. 细胞在不同生理条件下表现出不同的生长和生理变化，为细胞生理学研究提供了重要依据；3. 本实验结果表明，细胞培养技术可应用于医学研究，为临床应用提供理论支持。
生物细胞护理实验报告
实验名称：生物细胞护理实验实验日期：2023年X月X日实验地点：实验室实验目的：1. 了解生物细胞的培养条件及护理方法。
2. 掌握生物细胞的基本操作技巧。
3. 观察细胞在不同培养条件下的生长状态。
实验原理：生物细胞培养是利用体外培养技术，模拟生物体内的生理环境，使细胞在人工条件下生长、繁殖和传代。
细胞培养的成功与否，关键在于培养条件的控制和细胞的护理。
实验器材：1. 培养瓶2. 培养基3. 细胞计数板4. 显微镜5. 吸管6. 灭菌器7. 灭菌手套8. 灭菌工作台实验材料：1. 生物细胞2. 无菌水3. 灭菌滤纸实验步骤：1. 细胞复苏：将冻存的细胞取出，用无菌水溶解后，用吸管轻轻吹打，使其分散均匀。
2. 细胞计数：取一定量的细胞悬液，用细胞计数板计数，计算出细胞浓度。
3. 细胞接种：将计算好的细胞悬液加入培养瓶中，置于培养箱中培养。
4. 细胞培养：保持培养箱温度、湿度、pH值等条件适宜，观察细胞生长状态。
5. 细胞传代：当细胞生长到一定密度时，用胰蛋白酶消化细胞，制成细胞悬液，进行传代培养。
6. 细胞观察：定期用显微镜观察细胞形态、生长状态等。
实验结论：1. 细胞在适宜的培养条件下，生长状态良好，细胞形态正常。
2. 细胞传代培养过程中，细胞活力保持稳定。
3. 细胞护理过程中，无菌操作至关重要。
结果分析与讨论：1. 细胞培养的成功与否，关键在于培养条件的控制和细胞的护理。
本实验中，我们严格控制了培养箱的温度、湿度、pH值等条件，并严格按照无菌操作规程进行，保证了细胞培养的成功。
2. 细胞传代培养过程中，细胞的活力保持稳定，说明细胞具有较强的再生能力。
3. 本实验结果表明，生物细胞护理实验对细胞培养具有重要意义，可以为后续的生物学研究提供有力支持。
注意事项：1. 无菌操作是细胞培养的关键，实验过程中应严格遵守无菌操作规程。
2. 培养条件对细胞生长状态有重要影响，应严格控制培养箱的温度、湿度、pH值等条件。
生物细胞的计数实验报告
生物细胞的计数实验报告一、引言细胞计数是生物学实验中常用的重要手段，它可以帮助我们了解生物体内细胞的数量及相关现象的变化。
本次实验旨在通过计数细胞的数量，进一步了解细胞的特点和活性，为后续的生物学研究和医学应用提供有效数据支持。
二、实验方法1. 实验材料- 细胞培养物：本实验中选取了人体肺癌细胞株A549作为研究对象。
- 细胞培养基：选择适宜的细胞培养基，其中包含必需的营养物质和培养细胞所必需的生长因子。
- 显微镜和细胞计数板：为观察和计数细胞提供必要工具和设备。
- 0.4% 尝试啶蓝溶液：用于染色细胞，以便更加清晰地观察和计数。
2. 实验步骤- 步骤一：将细胞培养物均匀取一小部分（如100μL）放入离心管中。
- 步骤二：使用显微镜观察培养物中细胞的形态、颜色和大小。
- 步骤三：取1:1的比例混合细胞培养物和0.4% 尝试啶蓝溶液，并在计数板中排放好。
- 步骤四：在显微镜下进行细胞计数，计数每个小方格内的细胞数量，并计算平均值。
- 步骤五：根据计数板上的标尺，计算出细胞密度并求出总细胞数量。
三、实验结果经过实验观察和计算，得出以下结果：在计数板的10个小方格中，每个方格内的细胞数量分别为30、28、33、32、29、31、34、27、30、33个。
取平均值计算总细胞数量。
综合计算可得，本次实验观察到的细胞总数为301个。
四、讨论与分析通过细胞计数实验，我们成功地获取了细胞的数量，并得出细胞总数为301个。
这一数据为我们后续实验和研究提供了重要依据。
同时，我们还观察到细胞在培养物中的形态、颜色和大小等特征，这些观察结果对衡量细胞的生长状态和活性也具有重要参考价值。
然而，本次实验也存在一些不确定因素和可改进之处。
首先，由于细胞在培养物中不断生长和分裂，其数量可能会随时间的变化而有所波动。
因此，在实际应用中应多次重复实验，并取平均值以增加数据的可靠性。
其次，在实验过程中，使用0.4% 尝试啶蓝溶液染色可以使细胞更加清晰可见，但染色不当可能会对细胞自身产生影响。
细胞复苏实验报告
细胞复苏实验报告细胞复苏实验报告引言：细胞复苏是一项重要的生物学研究领域，它关注的是如何使受损细胞恢复正常功能。
本实验旨在探索不同方法对细胞复苏的影响，以期为细胞治疗和再生医学领域的发展提供有益的指导。
实验设计：本实验采用了体外培养的细胞模型，以人类肺癌细胞株A549为研究对象。
首先，我们将细胞分为四组，分别为对照组、低温处理组、药物处理组和光照处理组。
每组细胞都经历了相同的培养条件，但在处理过程中有所区别。
通过比较不同组细胞的形态学和功能特征，我们可以评估不同处理对细胞复苏的影响。
实验过程：1. 对照组：对照组细胞在常温下进行培养，没有任何额外处理。
我们观察细胞的生长情况、形态特征和细胞周期等指标，并记录下来。
2. 低温处理组：在培养基中将细胞置于低温环境中，模拟细胞受到寒冷刺激的情况。
我们将细胞暴露在4摄氏度的环境中，持续24小时。
之后，将细胞恢复到常温下培养，并观察其复苏情况。
3. 药物处理组：在培养基中添加一种已知具有细胞保护作用的药物。
我们选择了一种抗氧化剂，它被广泛应用于细胞保护和抗衰老研究中。
将药物加入培养基中，细胞在常温下培养，并观察其复苏情况。
4. 光照处理组：细胞对光线的敏感性是一个重要的生理特征。
在培养基中，我们将细胞置于光照条件下，并观察其对光线的响应和复苏情况。
实验结果：1. 对照组：对照组细胞在常温下正常生长，形态特征良好，细胞周期正常。
2. 低温处理组：低温处理导致细胞停止生长，形态发生变化，细胞周期延长。
然而，当细胞恢复到常温下培养后，细胞逐渐恢复正常生长和形态特征。
3. 药物处理组：药物处理组细胞在常温下生长良好，形态特征与对照组相似。
细胞周期也没有明显变化。
这表明该药物具有一定的细胞保护作用，可以促进细胞复苏。
4. 光照处理组：光照处理对细胞的影响较为复杂。
在适宜的光照条件下，细胞生长正常，形态特征良好。
然而，过强或过弱的光照都会导致细胞受损和生长受阻。
细胞对光照的复苏能力较弱，需要一定时间来恢复正常状态。
细胞计数的实验报告
细胞计数的实验报告细胞计数的实验报告细胞计数是生物学研究中常见的实验操作，通过对细胞数量的准确测定，可以为后续的实验设计和数据分析提供重要依据。
本次实验旨在探究不同细胞计数方法的准确性和可行性，并比较它们在不同实验条件下的适用性。
一、实验目的本次实验的主要目的是比较常用的细胞计数方法，包括显微镜计数法和细胞计数仪法在细胞计数中的应用优势和局限性，探究它们在不同实验条件下的准确性和可行性。
二、实验材料与方法1. 实验材料：- 显微镜- 细胞计数板- 细胞培养物- 小型离心机- 细胞计数仪2. 实验方法：- 显微镜计数法：a. 取适量细胞培养物，将其均匀悬浮于一定体积的培养基中。
b. 取一块细胞计数板，将悬浮液滴于计数板的特定区域。
c. 使用显微镜观察计数板上的细胞数量，计数细胞数量并记录。
- 细胞计数仪法：a. 取适量细胞培养物，将其均匀悬浮于一定体积的培养基中。
b. 使用小型离心机离心细胞悬浮液，以沉淀细胞。
c. 倒掉上清液，用适量缓冲液洗涤细胞沉淀。
d. 将细胞沉淀重新悬浮于缓冲液中。
e. 使用细胞计数仪准确测定细胞数量。
三、实验结果与讨论在本次实验中，我们选取了两种常用的细胞计数方法，即显微镜计数法和细胞计数仪法。
通过对比它们在实验中的应用情况，我们可以得出以下结论：1. 显微镜计数法的优势：显微镜计数法是一种传统且常用的细胞计数方法，其优势在于操作简单、成本低廉。
只需要使用显微镜即可对细胞数量进行直接观察和计数。
此外，显微镜计数法适用于各种类型的细胞，无需特殊处理。
2. 显微镜计数法的局限性：显微镜计数法的局限性主要体现在对细胞数量的准确性和可重复性方面。
由于人眼的视觉限制和主观性，显微镜计数法在高密度细胞计数时容易出现误差，并且对于小型细胞的计数也存在困难。
此外，显微镜计数法需要操作者具备一定的经验和技巧，否则可能导致计数结果的不准确。
3. 细胞计数仪法的优势：细胞计数仪法是一种自动化的细胞计数方法，其优势在于高度准确和可重复性。
细胞培养实验报告
细胞培养实验报告一、实验目的细胞培养是一种在体外模拟体内环境，使细胞生长、繁殖和分化的技术。
本次实验的目的是掌握细胞培养的基本操作流程，包括细胞的复苏、传代、培养和冻存，以及观察细胞在不同培养条件下的生长状态和形态变化。
二、实验材料与设备1、细胞株：本次实验选用的是人肝癌细胞株 HepG2。
2、培养基：DMEM 高糖培养基，添加 10%胎牛血清（FBS）、1%双抗（青霉素和链霉素）。
3、试剂：胰蛋白酶、DMSO（二甲基亚砜）、PBS（磷酸盐缓冲液）。
4、仪器设备：CO₂培养箱、超净工作台、倒置显微镜、离心机、移液器、无菌培养瓶、无菌离心管等。
三、实验步骤1、细胞复苏从液氮罐中取出冻存的 HepG2 细胞，迅速放入 37℃水浴中，轻轻摇动，使其快速解冻。
待细胞完全解冻后，将其转移至 15ml 离心管中，加入 5ml 含10%FBS 的 DMEM 培养基，轻轻混匀。
1000rpm 离心 5min，弃上清。
加入 5ml 新鲜培养基，重悬细胞，将细胞悬液转移至培养瓶中，置于 37℃、5%CO₂培养箱中培养。
2、细胞传代当细胞生长至汇合度约 80%时，进行传代。
吸弃培养瓶中的旧培养基，用 5ml PBS 冲洗细胞 2 次，以去除残留的血清和杂质。
加入 2ml 胰蛋白酶，轻轻晃动培养瓶，使胰蛋白酶均匀覆盖细胞表面，放入培养箱中消化 1-2min。
在倒置显微镜下观察，当细胞变圆、间隙增大时，立即加入 5ml 含血清的培养基终止消化。
用移液器轻轻吹打细胞，使其从培养瓶壁上脱落，形成细胞悬液。
将细胞悬液按 1:2 或 1:3 的比例转移至新的培养瓶中，加入适量新鲜培养基，置于培养箱中继续培养。
3、细胞培养细胞培养在 37℃、5%CO₂培养箱中进行。
每天观察细胞的生长状态，包括细胞形态、密度和培养液的颜色等。
每隔 2-3 天更换一次培养基，以提供充足的营养物质和维持适宜的pH 值。
4、细胞冻存当细胞生长良好且达到一定数量时，进行细胞冻存。
细胞复苏及细胞鉴别与计数
细胞生物学实验报告细胞复苏及细胞鉴别与计数姓名：学号：班级：专业：同组成员：Part1、细胞复苏一、实验原理细胞复苏是以一定的复温速率将冻存的培养物恢复到常温的过程。
不论是微生物、动物细胞、植物细胞还是体外培养的器官都可以进行冻存，并在适当条件下复苏。
复苏细胞原则：快溶。
防止在融化过程中已融解水渗透入细胞导致的二次结晶对细胞形成损害。
使培养物能快速通过对细胞有损害的－5～0℃摄氏度区域，细胞仍能生长，活力受损不大。
二、实验目的掌握细胞复苏的基本方法三、实验器材（1）仪器CO2培养箱，显微镜、倒置显微镜，超净台（2）材料培养瓶，试管，移液管，废液缸，75%酒精棉球，酒精灯，冻存的Hela人宫颈癌细胞，滴管（3）试剂完全培养基（DMEM），小牛血清，双抗四、实验步骤1、准备一个茶缸或1000ml的烧坏，内装2/3杯40℃的温水。
2、从液氮中取出冻存管、迅速置于温水中并搅动。
使冻存管中的冻存物在1分钟内融化。
3、将冻存管放入离心管中800rpm离心10分钟，取出冻存管拿入超净台中，75%酒精消毒管口，打开冻存管，弃上清。
4、沉淀加1ml完全培养基吹打细胞使之均匀，将细胞转移至25ml培养瓶中，补加3ml新鲜培养基于干净培养瓶中培养。
5、另取90微升细胞悬液于1.5ml离心管中，再加入10微升0.4%台盼蓝染色,取80µl细胞液镜下观察活力。
6、再向上述培养瓶中加入4ml10%含FCS及双抗的DMEM培养基，轻轻混匀，显微镜下观察。
盖上瓶盖, 去倒置显微镜上观察细胞形态。
做好标记。
将瓶盖适度拧紧后再稍回转，以利于CO2气体的进入，将培养瓶放回CO2培养箱。
7、将用过的试剂仪器等摆回原处，将超净台打扫干净，关闭照明灯及抽风机。
8、实验后数小时后去观察细胞生长情况，并拍摄照片。
五、实验结果传代后在显微镜下可看到细胞呈悬浮状态，全部为单个的分散的细胞。
复苏后大部分细胞生长状态良好，透明度大，细胞内颗粒少，没有空泡,细胞形态完整。
细胞复苏_实验报告
一、实验背景细胞复苏是细胞培养过程中的重要环节，它是指将冷冻保存的细胞从低温环境中恢复到生理活性的过程。
在科研工作中，细胞复苏技术广泛应用于细胞库的建立、细胞传代、基因工程等实验。
本实验旨在通过细胞复苏技术，将冷冻保存的细胞复苏并培养，为后续实验提供良好的细胞来源。
二、实验目的1. 掌握细胞复苏的基本原理和操作步骤；2. 熟悉细胞复苏过程中可能遇到的问题及解决方法；3. 提高细胞复苏的成功率，为后续实验提供高质量的细胞。
三、实验原理细胞复苏的原理是利用低温保存细胞，使细胞代谢减缓，从而延长细胞寿命。
在复苏过程中，细胞从低温环境中逐渐恢复到正常生理状态，恢复代谢活动，实现细胞复苏。
四、实验材料1. 冷冻保存的细胞冻存管；2. 37℃预温的ddH2O；3. 75%酒精；4. 超净台；5. 培养基；6. 培养皿；7. 移液器；8. 离心机；9. 显微镜。
五、实验步骤1. 准备工作（1）将ddH2O预温至37℃；（2）戴好手套和口罩帽子，从液氮罐中取出装有细胞的冻存管；（3）将冻存管投入37℃的ddH2O中，轻摇冻存管，使细胞在1分钟内快速溶解；（4）待细胞完全溶解后，用75%酒精擦拭冻存管外壁，消毒后带进超净台。
2. 细胞复苏（1）将冻存管中的细胞悬液转移至离心管中，1000r/min离心5分钟；（2）弃去上清液，加入适量的培养基，轻柔吹打细胞；（3）将细胞悬液转移至培养皿中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
3. 观察细胞生长（1）每隔24小时观察细胞生长情况，记录细胞数量、形态等；（2）待细胞长至一定密度时，进行后续实验。
六、实验结果与分析1. 细胞复苏成功率较高，细胞在培养箱中逐渐生长，形态正常；2. 细胞生长过程中，未出现明显异常现象；3. 通过细胞复苏技术，成功恢复了冷冻保存的细胞，为后续实验提供了高质量的细胞。
七、实验讨论1. 细胞复苏过程中，关键步骤是预温ddH2O和细胞溶解。
预温ddH2O可以使细胞在短时间内迅速溶解，减少细胞损伤；细胞溶解过程中，应轻柔吹打，避免细胞损伤；2. 细胞复苏成功率受多种因素影响，如细胞冻存时间、冻存方法、复苏方法等。
生化实验室活体实验报告(3篇)
第1篇实验名称：细胞培养与细胞染色观察实验目的：1. 学习细胞培养的基本操作和注意事项。
2. 掌握细胞染色技术，观察细胞形态和结构。
3. 了解细胞生长周期及其在不同培养条件下的变化。
实验时间：2023年X月X日实验地点：生化实验室实验材料：1. 细胞株：人肺上皮细胞（A549）2. 培养基：DMEM培养基3. 细胞培养瓶：25cm²培养瓶4. CO2培养箱5. 离心机6. 显微镜7. 细胞染色剂：姬姆萨染液8. 吸管、移液器、试管等实验器材实验步骤：1. 细胞复苏：- 将冻存的细胞株取出，用DMEM培养基溶解。
- 将溶解后的细胞悬液离心，弃去上清液。
- 用DMEM培养基重悬细胞，调整细胞浓度为1×10⁵个细胞/mL。
2. 细胞接种：- 将25cm²培养瓶用75%乙醇消毒，晾干。
- 将细胞悬液接种于培养瓶中，每瓶接种1mL。
- 将培养瓶放入CO2培养箱中，37℃、5%CO2培养。
3. 细胞培养：- 每隔24小时更换一次培养基。
- 观察细胞生长情况，记录细胞生长周期。
4. 细胞染色：- 取对数生长期的细胞，用胰酶消化。
- 收集细胞，离心，弃去上清液。
- 用姬姆萨染液染色30分钟。
- 水洗，晾干。
5. 显微镜观察：- 将染色后的细胞涂片放在显微镜下观察。
- 观察细胞形态、核质比、细胞核染色质等。
实验结果：1. 细胞培养成功，细胞生长旺盛，呈典型的铺路石状排列。
2. 细胞染色效果好，细胞核染色质清晰，核质比适中。
3. 观察到细胞生长周期为G1期、S期、G2期和M期。
实验讨论：1. 细胞培养过程中，应注意无菌操作，避免污染。
2. 细胞染色剂的选择和浓度对染色效果有重要影响。
3. 细胞生长周期受多种因素影响，如培养基成分、温度、CO2浓度等。
实验结论：本次实验成功培养了人肺上皮细胞，并观察了细胞形态和结构。
细胞染色效果良好，成功观察到细胞生长周期。
实验结果表明，细胞培养和染色技术在生物学研究中具有重要意义。
实验室培育细胞实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握细胞培养的基本原理和方法；2. 了解细胞培养过程中的无菌操作和细胞传代技术；3. 观察细胞在体外培养过程中的生长和变化。
二、实验原理细胞培养是将细胞从生物体中取出，在体外模拟生物体内环境，使其在适宜的条件下生长、繁殖和传代。
细胞培养技术是生物学研究的重要手段，广泛应用于医学、生物工程等领域。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠脾脏细胞、胰蛋白酶、细胞培养液、DMSO（二甲基亚砜）、培养瓶、移液器、细胞计数板、显微镜等。
2. 仪器：超净工作台、细胞培养箱、离心机、冰箱等。
四、实验步骤1. 细胞复苏：将冷冻保存的细胞复苏，解冻后用移液器吹打均匀，加入适量培养液，调整细胞浓度；2. 细胞接种：将复苏后的细胞接种于培养瓶中，放入细胞培养箱培养；3. 细胞传代：待细胞长满培养瓶后，用胰蛋白酶消化细胞，调整细胞浓度后，重新接种于新的培养瓶中；4. 细胞观察：定期观察细胞生长情况，记录细胞形态、数量和生长速度；5. 细胞冻存：将细胞传代后，取适量细胞加入DMSO，冷冻保存。
五、实验结果与分析1. 细胞复苏：复苏后的细胞呈圆形，细胞膜完整，无碎片；2. 细胞接种：接种后的细胞在培养箱中生长良好，细胞形态规则，细胞间连接紧密；3. 细胞传代：传代后的细胞生长迅速，细胞数量逐渐增加；4. 细胞观察：细胞在体外培养过程中，形态、数量和生长速度逐渐稳定。
六、实验结论1. 成功掌握了细胞培养的基本原理和方法；2. 掌握了细胞培养过程中的无菌操作和细胞传代技术；3. 观察到细胞在体外培养过程中的生长和变化。
七、实验讨论1. 细胞培养过程中，无菌操作至关重要，应严格遵循无菌操作规程；2. 细胞传代时，应选择合适的胰蛋白酶浓度和消化时间，以减少对细胞的损伤；3. 细胞培养过程中，应定期观察细胞生长情况，及时调整培养条件，以保证细胞生长良好。
八、实验总结本次实验成功进行了细胞培养，掌握了细胞培养的基本原理和方法，为后续的细胞学研究奠定了基础。
细胞复苏总结报告范文(3篇)
第1篇一、前言细胞复苏是细胞培养过程中的重要环节，它关系到细胞培养的成败。
细胞复苏是指将冷冻保存的细胞从冷冻状态恢复到活细胞状态的过程。
本报告旨在总结细胞复苏过程中的经验教训，为今后的细胞培养工作提供参考。
二、实验目的1. 掌握细胞复苏的基本原理和方法。
2. 提高细胞复苏成功率，保证细胞活力。
3. 分析影响细胞复苏的因素，为细胞培养提供理论依据。
三、实验材料1. 冷冻保存的细胞：细胞种类、冻存时间、冻存液等。
2. 解冻设备：水浴锅、冰盒等。
3. 培养基：DMEM、胎牛血清等。
4. 工具：移液枪、吸管、细胞培养皿等。
四、实验方法1. 解冻：将冷冻保存的细胞从冻存管中取出，放入37℃水浴锅中解冻，解冻时间约为2-3分钟。
2. 洗涤：将解冻后的细胞用预热的DMEM培养基洗涤2-3次，以去除冻存液中的保护剂。
3. 添加培养基：将洗涤后的细胞转移至细胞培养皿中，加入适量的DMEM培养基。
4. 培养：将细胞培养皿放入细胞培养箱中，在适宜的条件下培养，观察细胞生长情况。
五、实验结果与分析1. 细胞复苏成功率：经过多次实验，细胞复苏成功率在90%以上，说明本实验方法基本可行。
2. 细胞活力：复苏后的细胞活力较好，细胞形态饱满，生长旺盛。
3. 影响细胞复苏的因素：a. 解冻速度：解冻速度过快会导致细胞损伤，解冻速度过慢会导致细胞复苏不完全。
本实验采用37℃水浴锅解冻，效果较好。
b. 洗涤次数：洗涤次数过多会导致细胞活力下降，洗涤次数过少会导致残留保护剂影响细胞生长。
本实验洗涤2-3次，效果较好。
c. 培养基：适宜的培养基有助于细胞生长，本实验使用DMEM培养基，效果较好。
d. 温度：适宜的温度有助于细胞生长，本实验在细胞培养箱中培养，温度控制在37℃左右，效果较好。
六、结论1. 本实验成功掌握了细胞复苏的基本原理和方法，提高了细胞复苏成功率。
2. 通过分析影响细胞复苏的因素，为今后的细胞培养工作提供了理论依据。
3. 在细胞复苏过程中，应注意解冻速度、洗涤次数、培养基和温度等因素，以保证细胞复苏效果。
细胞复苏实验报告模板
实验名称：细胞复苏实验实验日期：____年__月__日实验地点：____实验室实验者：____姓名指导教师：____姓名一、实验目的1. 掌握细胞复苏的基本原理和操作步骤。
2. 熟悉细胞复苏过程中可能遇到的问题及解决方法。
3. 提高细胞培养技术操作水平。
二、实验原理细胞复苏是指将冷冻保存的细胞在适宜条件下恢复到正常生长状态的过程。
细胞在冷冻保存过程中，由于低温抑制了细胞内各种生化反应，细胞代谢几乎停止。
因此，复苏过程中需要缓慢复温，使细胞逐步恢复活力。
三、实验材料1. 冻存细胞：含有细胞冻存液的冻存管。
2. 实验器材：37℃水浴、无菌操作台、移液枪、培养皿、吸管、无菌移液器、消毒液等。
3. 实验试剂：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素等。
四、实验步骤1. 复苏前准备- 将37℃水浴预热。
- 将无菌操作台消毒，准备好实验所需器材和试剂。
2. 复苏细胞- 将冻存管从液氮罐中取出，迅速放入37℃水浴中。
- 待细胞融化后，用无菌移液器吸取适量细胞悬液，轻轻吹打混匀，使细胞充分分散。
- 将细胞悬液转移到培养皿中，放入培养箱中静置30分钟。
3. 细胞计数- 使用细胞计数仪对细胞进行计数，记录细胞密度。
4. 细胞传代- 将细胞悬液转移到培养瓶中，加入适量的DMEM培养基。
- 在培养箱中培养24小时，观察细胞生长情况。
- 根据细胞生长情况，进行细胞传代。
5. 复苏后观察- 观察细胞复苏后的生长状态，记录细胞形态、密度等指标。
五、实验结果1. 细胞复苏情况- 细胞复苏成功，细胞形态正常，生长良好。
2. 细胞计数- 细胞密度：____细胞/mL。
3. 细胞传代- 传代次数：____次。
4. 复苏后观察- 细胞形态：____。
- 细胞密度：____。
六、实验讨论1. 复苏过程中可能遇到的问题及解决方法- 细胞复苏失败：可能是冻存细胞质量差、复苏操作不当等原因导致。
解决方法：检查冻存细胞质量，规范复苏操作。
- 细胞生长缓慢：可能是复苏后细胞活力不足、培养基或培养条件不适宜等原因导致。
复生实验报告
一、实验名称：细胞复苏与培养实验二、实验目的：1. 掌握细胞复苏的基本方法；2. 了解细胞培养的基本操作；3. 观察细胞复苏与培养过程中的形态变化。
三、实验原理：细胞复苏是指将冷冻保存的细胞在适宜条件下重新恢复活性。
细胞培养是指将细胞在体外环境中进行繁殖和生长。
本实验通过冷冻保存的细胞复苏，观察细胞在培养过程中的生长、分裂和形态变化。
四、实验材料：1. 冷冻保存的细胞；2. 37℃恒温水浴；3. 10%胎牛血清；4. DMEM培养基；5. 离心机；6. 吸管；7. 移液枪；8. 培养皿；9. 显微镜。
五、实验步骤：1. 将冷冻保存的细胞在37℃恒温水浴中解冻，解冻时间约5分钟；2. 将解冻后的细胞用移液枪转移至培养皿中，加入适量DMEM培养基；3. 将培养皿放入37℃、5%CO2的培养箱中培养；4. 观察细胞复苏与培养过程中的形态变化，包括细胞贴壁、分裂、形态变化等；5. 在显微镜下观察细胞形态变化，并拍照记录。
六、实验结果：1. 细胞复苏：解冻后的细胞逐渐恢复活性，出现明显的细胞贴壁现象；2. 细胞培养：细胞在培养过程中逐渐增多，细胞分裂速度加快，形态变化明显；3. 显微镜观察：细胞在培养过程中呈现出典型的细胞形态，如圆形、椭圆形等。
七、实验讨论：1. 本实验成功复苏了冷冻保存的细胞，说明冷冻保存技术是一种有效的细胞保存方法；2. 细胞在培养过程中表现出良好的生长和分裂能力，说明细胞培养技术是一种重要的生物实验技术；3. 观察到细胞在培养过程中的形态变化，为后续实验提供了基础数据。
八、实验结论：1. 冷冻保存技术是一种有效的细胞保存方法，能够保持细胞的活性和功能；2. 细胞培养技术是一种重要的生物实验技术，能够为生物科学研究提供有力支持；3. 本实验成功复苏了冷冻保存的细胞，并观察到细胞在培养过程中的形态变化，为后续实验提供了基础数据。
九、实验注意事项：1. 在解冻细胞时，注意控制解冻时间，避免细胞损伤；2. 在细胞培养过程中，注意观察细胞生长情况，及时调整培养条件；3. 使用显微镜观察细胞形态变化时，注意调整显微镜参数，确保观察效果。
细胞功能恢复实验报告
细胞是生命活动的基本单位，细胞功能的正常与否直接关系到生物体的健康和生命。
近年来，随着细胞生物学和分子生物学的不断发展，细胞功能恢复研究已成为生物医学领域的重要研究方向。
本实验旨在探讨细胞功能恢复的机制，为临床治疗相关疾病提供理论依据。
二、实验目的1. 观察细胞功能恢复过程中的细胞形态、生长、代谢等变化；2. 分析细胞功能恢复的分子机制；3. 探讨细胞功能恢复在临床治疗中的应用前景。
三、实验材料与方法1. 实验材料（1）细胞：选用健康的小鼠成纤维细胞；（2）试剂：细胞培养液、胎牛血清、胰蛋白酶、DNA酶、MTT试剂、DMSO等；（3）仪器：细胞培养箱、倒置显微镜、酶标仪等。
2. 实验方法（1）细胞培养：将小鼠成纤维细胞接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养，待细胞生长至对数生长期时，进行实验；（2）细胞损伤：采用DNA酶处理细胞，模拟细胞损伤过程；（3）细胞功能恢复：将损伤后的细胞分为实验组和对照组，实验组加入一定浓度的细胞功能恢复剂，对照组加入等体积的DMSO；（4）观察指标：①细胞形态观察：通过倒置显微镜观察细胞形态变化；②细胞生长曲线：采用MTT法检测细胞生长曲线；③细胞代谢功能检测：采用MTT法检测细胞代谢功能；④分子机制研究：通过Western blot技术检测相关蛋白表达水平。
1. 细胞形态观察：损伤后的细胞出现细胞质皱缩、细胞膜破损等现象，加入细胞功能恢复剂后，细胞形态逐渐恢复正常；2. 细胞生长曲线：实验组细胞生长曲线与对照组相比，呈现上升趋势，表明细胞功能得到恢复；3. 细胞代谢功能检测：实验组细胞代谢功能显著提高，与对照组相比，细胞代谢活性明显增强；4. 分子机制研究：实验组细胞中相关蛋白表达水平显著升高，表明细胞功能恢复与相关蛋白表达有关。
五、讨论与分析1. 本实验结果表明，细胞功能恢复剂能够有效恢复细胞损伤后的功能，这可能与细胞功能恢复剂能够调节细胞内信号通路、促进细胞增殖和代谢有关；2. 细胞功能恢复过程中，细胞形态、生长、代谢等指标的变化为细胞功能恢复提供了客观依据；3. 细胞功能恢复的分子机制研究有助于揭示细胞损伤与功能恢复之间的内在联系，为临床治疗相关疾病提供理论依据。
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细胞生物学实验报告
实验二细胞复苏及细胞鉴别与计数
1引言
1.1 实验目的
1. 掌握无菌操作技术。
掌握细胞复苏技术。
2. 掌握用血球计数板进行细胞计数的方法。
3. 学习死活细胞鉴别的方法。
4. 了解细胞污染的判定方法。
5. 了解细胞形态的多样性。
1.2 实验原理
1.细胞复苏：以一定的复温速率将冻存的培养物恢复到常温的过程，复苏时要快速融化，必须将冻存在-196℃液氮中的细胞在1分钟内快速融化至37℃，使细胞迅速通过最易受损的温度区间-5-0℃，使冻存时细胞外的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。
2.细胞计数：采用血细胞计数板法，血细胞计数板由一块长约7.5cm，宽
3.5cm的厚玻璃制成，平台中部上下各有一个计数室，每个计数室分9大格，每格边长1mm，面积1mm2，盖上盖玻片后体积为0.1mm3。
四角的大格划分为16个中方格，一般用作白细胞、血小板组织培养的细胞计数。
中央的大方格则由双线划分为25个中方格，每个中方格面积为0.04mm2，盖上盖玻片后体积为0.004mm3，每个中方格又分成16个小方格，用于红细胞、微生物细胞的计数。
细胞计数原则：细胞压线则计上不计下，计左不计右，镜下计数，有时偶尔有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。
对每个试样重复计数3次，取其算数平均值。
2实验仪器、试剂及操作步骤
2.1 实验仪器
超净工作台、倒置相差显微镜、CO2培养箱、酒精灯、酒精棉球、酒精喷壶、试管架、滴管筒
（头）、吸管筒（头）、废液缸、移液器、枪头等
2.2 实验试剂
DMEM培养基、血清、抗生素等
2.3 实验步骤
细胞复苏：
1.实验室和超净工作台消毒，紫外照射20Min左右。
2.穿好实验服，进无菌室前穿鞋套、洗手。
3.关闭紫外灯，开日光灯和开风机，超净工作台台面应整洁，用75%酒精擦双手消毒，擦拭台面。
4.自液氮中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，立即投入40℃水浴锅中解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内
全部融化。
5.正确摆放超净台内的实验用品，点燃酒精灯，准备一次性滴管和移液管。
6.将冻存管放入离心机中800转/分钟离心10分钟。
7.小心将冻存管移入超净台中，用75％的酒精棉球擦拭冻存管外部，打开冻存管用巴氏吸管弃上清，
加1mL的DMEM培养基吹打细胞使之均匀，取90uL细胞悬液和10uL台盼蓝染液于小指管中进行活细胞染色计数。
8.剩余细胞悬液吸至一个细胞培养瓶中，在细胞培养瓶中补加4mL的DMEM培养基，将盖子拧好稍回转，
混匀，镜下看细胞密度和状态。
看完后细胞培养瓶放进5%CO2培养箱中。
9.整理实验用品，使超净工作台整洁干净。
细胞计数：
1.检查计数板：在正式计数前，先用显微镜检查计数板的计数室，看其是否有杂质或干枯的菌体。
若
有污物，则需要按以下步骤清洗：1）擦洗，用药棉蘸取95%酒精，轻轻擦洗计数板的计数室。
2）冲洗，用蒸馏水冲洗计数板，并用毛边纸吸干其上的水分，最后用擦镜纸擦干净。
3）镜检，镜检清洗后的计数板，直至计数室无污物时，才可用于细胞的计数。
2.加样：先将盖玻片安放在计数室上面，然后摇匀样品取悬液，从盖玻片边缘滴加细胞悬液，连续2-3
次，直至充满计数板和盖玻片间的空隙。
3.计数：将加好样品的计数板置于显微镜载物台的中央，然后按下列步骤操作：1）找计数室，先在低
倍镜下寻找计数板上的大方格位置。
寻找时显微镜的光圈要适当缩小，使视野偏暗。
然后顺着大方格线，移动计数板，使计数室位于视野中间。
2）转高倍镜，转至高倍镜后，适当调节光度，使细胞和计数室线条均清晰为止。
然后将计数室一角的中格移至视野中。
3）计数，计算计数板的四角大格内的细胞数，压线者只计算左侧和上方的，右和下的不计算在内。
4）重复计数3次，取算术平均值。
细胞数/mL细胞原液=4大格细胞总数/4 X 104
4.清洗：计数完毕后，计数板先用95%酒精轻轻擦洗，再用蒸馏水冲洗，然后吸干，最后用擦镜纸擦干
净。
3 结果与分析
3.1 细胞计数结果
3.2 细胞复苏结果
图 1 Hela细胞在复苏16h后在显微镜下的状态（放大倍数：7*10）
图注：细胞为人宫颈癌Hela细胞，在复苏后进行培养，图为细胞在复苏16h后的状态，该视野下大约有64个细胞。
结果分析：如表1所示，细胞计数的结果是细胞数目在4.5 X 105 个/mL左右，细胞数量适中，死细胞数目在2.2 X 104 个/mL左右，在可接受的范围内。
如图2所示，细胞在复苏后16h后，大部分细胞贴壁生长，生长情况较好，少部分细胞死亡，悬浮在培养基中。
4 思考题
1.细胞传代的步骤和注意事项？
细胞传代步骤在实验一内容中，细胞传代的注意事项有：1）把握好传代时机，80%~90%的细胞融合最佳，过早传代时细胞量少，过晚时细胞生长状态不佳。
2）消化时间要适度，过短时细胞不易脱落，过长时细胞易脱落流失并造成细胞损伤。
3）消化液浓度要适宜，过浓时消化作用强烈，细胞反应快，所需消化时间短，掌握不好，细胞易流失；过低时细胞则不易消化。
不同细胞对消化液反应不同。
4）细胞传代后，应每日对细胞进行观察，并对细胞进行常规性检测，包括：细胞形态、细胞生长状况、营养液颜色、微生物污染等方面进行检查。
2.如何提高细胞冻存的成活率？
1）慢冻快融，冻存过程要逐步降温；2）选择恰当的冻存保护剂；3）冻存保护剂要提前预冷，滴加过程要缓慢。