人工冬虫夏草不同部位核苷类成分分析
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无水乙醇、石油醚：分析纯；甲醇：色谱纯； 超纯水：自制；腺嘌呤、腺苷标准品：Sigma；虫 草素标准品(98%)；人工冬虫夏草药材：益康高科 技生物医药有限公司。
2 方法与结果
1
2.5
5.0
7.5
10.0
mL
图 3 子实体 HPLC 图
3
2 1
2.1 色谱条件与系统适应性实验 流 动 相 : 甲 醇 - 水 (20 ∶80) ， 依 利 特 ODS(4.6
本实验结果表明， 湖南益康高科技生物医药 有限公司培养的人工冬虫夏草子实体、菌丝体及 固体培养残基中都含有核苷类物质，仅含量有差 别，其中子实体中核苷类量最高，虫草素含量明 显高于文献报道的西藏虫草(5.4 μg/g)和蚕蛹虫草 (726 μg/g)[4]，菌丝体和固体培养残基亦含各有效
平均回收率/% 98.02 98.56 99.09
RSD/% 1.3 1.2 1.2
2.9 样品含量测定 分别将 3 个样品的供试液进样测定。测定结
果见表 2、表 3、表 4。
表 2 人工冬虫夏草不同部位虫草素含量比较(n=5)
样品
不同批次含量置信区间/(μg/g)
子实体
1356.92±0.74
菌丝体
3 讨论 色谱条件的选择 流动相的选择：调整甲酸 -
表 4 人工冬虫夏草不同部位腺嘌呤含量比较
样品 子实体 菌丝体 固体培养残基
不同批次含量置信区间/(μg/g) 197.29±0.28 144.05±0.16 70.08±0.10
RSD/% 4.0 5.0 2.2
水、乙腈 - 水、甲醇 - 乙腈 - 水的比例及尝试钾 盐缓冲溶液，考察柱子的分离度、对称性及理论 塔板数，最终确定 HPLC 测定的最佳流动相：甲醇 - 水(20∶80)。
Key words: artificial Cordyceps; adenosine; adenine; cordycepin; high -performance liquid chromatography;
determination
冬虫夏草作为我国传统名贵的药用植物，由 于特殊的生长要求，市场的需求量在不断增加，
LU Yan-yan 1, QIU Xi-min 1*, JIANG Cheng1, LIU Sheng-zi 1, GUO Si-wei 1, CHEN Wen2
(1.Pharmacy Department of Medical College of Hunan Normal University, Changsha 410006; 2.Changsha Medical University, Changsha 410219)
Байду номын сангаас
1101.040±0.37
固体培养残基
350.96±0.14
RSD/% 2.0 4.4 1.4
表 3 人工冬虫夏草不同部位腺苷含量比较(n=5)
样品 子实体 菌丝体 固体培养残基
不同批次含量置信区间/(μg/g) 1302.52±0.47 635.02±0.14 171.73±0.06
RSD/% 1.3 1.6 3.4
进样 1 、4 、8 、12 、16 μL ，以进样量(μL) 对 算三者的 RSD 分别为 0.27%、0.19%、0.16% 。结
峰面积( A) 作回归方程，分别为：腺嘌呤：Y =8 果表明， 仪器精密度良好。
410 X - 2 180.3 ， r = 0.999 2 ，在 1.0～16.0 ng 范 2.7 稳定性实验
食品安全与检测
野生虫草已经远远不能满足当前需求。20 世纪 70 年代以后，我国开始进行人工冬虫夏草培养及药 理方面的研究， 取得显著成果[1]。核苷类物质为冬 虫夏草有效成分之一，尤以腺嘌呤、腺苷和虫草 素具有明显的药理作用， 可用于调节免疫力，治 疗肝 肾疾 病 和 抗 肿 瘤 等 [2- 3]。 目 前 人 工 冬 虫 夏 草 药 用部位主要采用子实体，本实验针对工业生产中 的副产物菌丝体未能充分利用，固体培养残基更 是作为废料处理的浪费现象，以湖南益康高科技 生物医药有限公司培养的人工冬虫夏草为样本， 通过测定比较人工冬虫夏草不同部位及固体培养 残基中核苷类物质的含量差别，力图为进一步开 发利用人工冬虫夏草资源提供参考。
2.4 线性关系和线性范围实验
mg/L 的腺嘌呤、腺苷、虫草素对照品溶液 8 μL ，
取腺嘌呤 1.0 mg/L，腺苷 25.0 mg/L ，虫草素 在上述色谱条件下，连续进样 6 次，峰面积值平
19.1 mg/L 的对照品溶液，在上述色谱条件下分别 均值分别为：62 865.4、694 330.4、726 705.0，计
收稿日期： 2010-09-07
* 通讯作者
基金项目： 国家大学生创新性实验项目(043-0094)；湖南省教育厅重点项目(10A071)。
作者简介： 陆艳艳(1985—)，女(侗族)，硕士，主要从事中草药分离分析研究工作。
·250·
2011 年 第 36 卷 第 4 期
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
中不但子实体含有腺嘌呤、腺苷和虫草素，菌丝体及固体培养残基也含有这 3 种主要核苷类物
质，具有进一步开发利用价值。
关键词： 人工冬虫夏草；腺苷；腺嘌呤；虫草素；高效液相色谱法；含量测定
中图分类号： TS 567.3+5
文献标志码： A
文章编号： 1005-9989(2011)04-0250-03
Analysis of nucleoside constituents in different parts of the artificial Cordyceps sinensis
1 仪器与试剂
3
12
2.5
5.0
7.5
10.0
mL
图 2 固体培养残基 HPLC 图
3
2
1.1 仪器 高效液相色谱仪：HPLC - 2010，紫外检测器，
SHIMADZU(LC- solution 工作站)；色谱柱：依利特 Sinochrom 300A ODS(4.6 mm×200 mm)；超声清洗 仪：AS 2060，autosience；超纯水制备仪：Water Purifier。 1.2 药材与试剂
2.5
5.0
7.5
10.0
mL
图 4 菌丝体 HPLC 图
2.2 供试品溶液的制备
取人工冬虫夏草干品的子实体、菌丝体及固
体培养残基适量，粉碎称质量，加无水乙醚于圆 底烧瓶中，连续回流脱脂。过滤药渣风干后用 8 倍量沸水回流提取 3 次，分别以 10、6、6 倍体积 的沸水，各提取 2、1、1 h，合并抽提液[5]，浓缩 后，用 3 倍体积无水乙醇沉淀 3 次，室温下放置 24 h ，离心 15 min(3000 r/min)，上清液为核苷类物 质[9-10]。精 密量取上清 液 0.1 mL 于 10 mL 容量 瓶 中， 流动相稀释至刻度， 摇匀， 过滤， 取续滤 液， 即得。 2.3 对照品溶液的制备
305.6 ng 范围内线性关系良好。
内稳定，满足实验要求。
2.5 重复性实验
2.8 回收率实验
取虫草子实体粉末，平行提取 5 份， 在拟定
精密称取虫草子实体粉末各 9 份，每份约 5 g ，
HPLC 条件下测定。结果腺嘌呤平均值为 194. 87 平均分为 3 组。分别加入与试样含量相当的腺嘌
μg/g， RSD 1.8% ； 腺 苷 的 平 均 值 为 1 302.96 呤、腺苷和虫草素，按 2.2 制备供试品溶液，测定
围内呈线性关系; 腺苷: Y =83 838 X - 5 687.1 ， r =
取虫草子实体溶液 1 份，分别于 0、2、4、6、
0.999 6 ，在 24.0～400 ng 范围内呈线性关系; 虫草 8、12 h 测定，记录色谱图，测定结果腺嘌呤、腺
素: Y =91 351 X + 35 403 ， r = 0.999 6，在 19.1 ～ 苷、虫草素的 RSD 均小于 3%，样品溶液在 12 h
加入标样量/mg 0.1973 0.1973 0.1973 1.3025 1.3025 1.3025 1.3569 1.3569 1.3569
测得量/mg 0. 1966 0.1934 0.1902 1.3010 1.2631 1.2873 1.3219 1.3541 1.3575
回收率/% 99.64 98.02 96.40 99.88 96.97 98.83 97.42 99.79 100.0
Abstract: To determine nucleoside constituents in different parts of the artificial Cordyceps sinensis, to
provide a reference for taking full advantage of artificial Cordyceps sinensis resources. Methods: Water extraction and alcohol precipitation, RP-HPLC Separation，quantitative analysis of cordycepin, adenosine and adenine using UV-Vis etector. Results: The content of adenine(μg/g) in the fruiting bodies, the mycelia of artificial Cordyceps and the solid culture Residues was 193.916, 142.658, 71.25，that of adenosine 1302.52, 308.17, 71.51, and that of cordycepin 1356.92, 1101.04, 350.96. Conclusion: Not only the fruiting bodies, but also the Mycelia of the artificial Cordyceps inensis and the solid culture residues contain adenine, adenosine and cordycepin, which is worthy to explore further for its useful value.
摘要： 目的：分析测定人工冬虫夏草不同部位核苷类含量，为充分利用人工冬虫夏草资源提供
参考。方法：水提醇沉，RP-HPLC 分离，紫外检测器检测虫草素、腺苷和腺嘌呤含量。结果：
人工虫草中子实体、菌丝体和固体培养残基中腺嘌呤含量(μg/g)分别为 193.92、142.66、71.25；
腺苷分别 1302.52、635.02、171.73；虫草素分别为 1356.92、1101.04、350.96。结论：人工虫草
食品安全与检测
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
2011 年 第 36 卷 第 4 期
人工冬虫夏草不同部位核苷类 成分分析
陆艳艳 1， 邱细敏 1*， 蒋 诚 1， 刘胜姿 1， 郭思维 1， 陈 文 2 (1.湖南师范大学医学院药学系，长沙 410006； 2.长沙医学院，长沙 410219)
取腺嘌呤、腺苷、虫草素对照品适量，精密
·251·
食品安全与检测
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
2011 年 第 36 卷 第 4 期
称定，配制成质量浓度分别为 0.1、25、19.1 mg/L 2.6 精密度实验
的对照品溶液[8]。
精 密 吸 取 质 量 浓 度 分 别 为 0.1、 25.0 、 19.1
μg/g，RSD 1.8%；虫草素平均值 1 316.93 μg/g， 回收率。实验结果见表 1。结果表明，回收率满足
RSD 1.2%。证明此方法重现性良好。
实验要求[6]。
表 1 加样回收率实验结果(n=5)
编号 1 2 3 1 2 3 1 2 3
取样量/g 1.004 1.009 1.013 1.017 1.019 1.018 1.009 1.008 1.009
mm×200 mm)色谱柱[5-7]；柱温 :25 ℃；流速：0.8 mL/min；检测 波长： 260 nm； 进 样 量 ： 10 μL 。 在此条件下，3 种核苷类成分和样品中其他物质可 达到良好的分离[8]，见图 1、图 2、图 3、图 4。
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5.0
7.5
图 1 标准品 HPLC 图
2 方法与结果
1
2.5
5.0
7.5
10.0
mL
图 3 子实体 HPLC 图
3
2 1
2.1 色谱条件与系统适应性实验 流 动 相 : 甲 醇 - 水 (20 ∶80) ， 依 利 特 ODS(4.6
本实验结果表明， 湖南益康高科技生物医药 有限公司培养的人工冬虫夏草子实体、菌丝体及 固体培养残基中都含有核苷类物质，仅含量有差 别，其中子实体中核苷类量最高，虫草素含量明 显高于文献报道的西藏虫草(5.4 μg/g)和蚕蛹虫草 (726 μg/g)[4]，菌丝体和固体培养残基亦含各有效
平均回收率/% 98.02 98.56 99.09
RSD/% 1.3 1.2 1.2
2.9 样品含量测定 分别将 3 个样品的供试液进样测定。测定结
果见表 2、表 3、表 4。
表 2 人工冬虫夏草不同部位虫草素含量比较(n=5)
样品
不同批次含量置信区间/(μg/g)
子实体
1356.92±0.74
菌丝体
3 讨论 色谱条件的选择 流动相的选择：调整甲酸 -
表 4 人工冬虫夏草不同部位腺嘌呤含量比较
样品 子实体 菌丝体 固体培养残基
不同批次含量置信区间/(μg/g) 197.29±0.28 144.05±0.16 70.08±0.10
RSD/% 4.0 5.0 2.2
水、乙腈 - 水、甲醇 - 乙腈 - 水的比例及尝试钾 盐缓冲溶液，考察柱子的分离度、对称性及理论 塔板数，最终确定 HPLC 测定的最佳流动相：甲醇 - 水(20∶80)。
Key words: artificial Cordyceps; adenosine; adenine; cordycepin; high -performance liquid chromatography;
determination
冬虫夏草作为我国传统名贵的药用植物，由 于特殊的生长要求，市场的需求量在不断增加，
LU Yan-yan 1, QIU Xi-min 1*, JIANG Cheng1, LIU Sheng-zi 1, GUO Si-wei 1, CHEN Wen2
(1.Pharmacy Department of Medical College of Hunan Normal University, Changsha 410006; 2.Changsha Medical University, Changsha 410219)
Байду номын сангаас
1101.040±0.37
固体培养残基
350.96±0.14
RSD/% 2.0 4.4 1.4
表 3 人工冬虫夏草不同部位腺苷含量比较(n=5)
样品 子实体 菌丝体 固体培养残基
不同批次含量置信区间/(μg/g) 1302.52±0.47 635.02±0.14 171.73±0.06
RSD/% 1.3 1.6 3.4
进样 1 、4 、8 、12 、16 μL ，以进样量(μL) 对 算三者的 RSD 分别为 0.27%、0.19%、0.16% 。结
峰面积( A) 作回归方程，分别为：腺嘌呤：Y =8 果表明， 仪器精密度良好。
410 X - 2 180.3 ， r = 0.999 2 ，在 1.0～16.0 ng 范 2.7 稳定性实验
食品安全与检测
野生虫草已经远远不能满足当前需求。20 世纪 70 年代以后，我国开始进行人工冬虫夏草培养及药 理方面的研究， 取得显著成果[1]。核苷类物质为冬 虫夏草有效成分之一，尤以腺嘌呤、腺苷和虫草 素具有明显的药理作用， 可用于调节免疫力，治 疗肝 肾疾 病 和 抗 肿 瘤 等 [2- 3]。 目 前 人 工 冬 虫 夏 草 药 用部位主要采用子实体，本实验针对工业生产中 的副产物菌丝体未能充分利用，固体培养残基更 是作为废料处理的浪费现象，以湖南益康高科技 生物医药有限公司培养的人工冬虫夏草为样本， 通过测定比较人工冬虫夏草不同部位及固体培养 残基中核苷类物质的含量差别，力图为进一步开 发利用人工冬虫夏草资源提供参考。
2.4 线性关系和线性范围实验
mg/L 的腺嘌呤、腺苷、虫草素对照品溶液 8 μL ，
取腺嘌呤 1.0 mg/L，腺苷 25.0 mg/L ，虫草素 在上述色谱条件下，连续进样 6 次，峰面积值平
19.1 mg/L 的对照品溶液，在上述色谱条件下分别 均值分别为：62 865.4、694 330.4、726 705.0，计
收稿日期： 2010-09-07
* 通讯作者
基金项目： 国家大学生创新性实验项目(043-0094)；湖南省教育厅重点项目(10A071)。
作者简介： 陆艳艳(1985—)，女(侗族)，硕士，主要从事中草药分离分析研究工作。
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FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
中不但子实体含有腺嘌呤、腺苷和虫草素，菌丝体及固体培养残基也含有这 3 种主要核苷类物
质，具有进一步开发利用价值。
关键词： 人工冬虫夏草；腺苷；腺嘌呤；虫草素；高效液相色谱法；含量测定
中图分类号： TS 567.3+5
文献标志码： A
文章编号： 1005-9989(2011)04-0250-03
Analysis of nucleoside constituents in different parts of the artificial Cordyceps sinensis
1 仪器与试剂
3
12
2.5
5.0
7.5
10.0
mL
图 2 固体培养残基 HPLC 图
3
2
1.1 仪器 高效液相色谱仪：HPLC - 2010，紫外检测器，
SHIMADZU(LC- solution 工作站)；色谱柱：依利特 Sinochrom 300A ODS(4.6 mm×200 mm)；超声清洗 仪：AS 2060，autosience；超纯水制备仪：Water Purifier。 1.2 药材与试剂
2.5
5.0
7.5
10.0
mL
图 4 菌丝体 HPLC 图
2.2 供试品溶液的制备
取人工冬虫夏草干品的子实体、菌丝体及固
体培养残基适量，粉碎称质量，加无水乙醚于圆 底烧瓶中，连续回流脱脂。过滤药渣风干后用 8 倍量沸水回流提取 3 次，分别以 10、6、6 倍体积 的沸水，各提取 2、1、1 h，合并抽提液[5]，浓缩 后，用 3 倍体积无水乙醇沉淀 3 次，室温下放置 24 h ，离心 15 min(3000 r/min)，上清液为核苷类物 质[9-10]。精 密量取上清 液 0.1 mL 于 10 mL 容量 瓶 中， 流动相稀释至刻度， 摇匀， 过滤， 取续滤 液， 即得。 2.3 对照品溶液的制备
305.6 ng 范围内线性关系良好。
内稳定，满足实验要求。
2.5 重复性实验
2.8 回收率实验
取虫草子实体粉末，平行提取 5 份， 在拟定
精密称取虫草子实体粉末各 9 份，每份约 5 g ，
HPLC 条件下测定。结果腺嘌呤平均值为 194. 87 平均分为 3 组。分别加入与试样含量相当的腺嘌
μg/g， RSD 1.8% ； 腺 苷 的 平 均 值 为 1 302.96 呤、腺苷和虫草素，按 2.2 制备供试品溶液，测定
围内呈线性关系; 腺苷: Y =83 838 X - 5 687.1 ， r =
取虫草子实体溶液 1 份，分别于 0、2、4、6、
0.999 6 ，在 24.0～400 ng 范围内呈线性关系; 虫草 8、12 h 测定，记录色谱图，测定结果腺嘌呤、腺
素: Y =91 351 X + 35 403 ， r = 0.999 6，在 19.1 ～ 苷、虫草素的 RSD 均小于 3%，样品溶液在 12 h
加入标样量/mg 0.1973 0.1973 0.1973 1.3025 1.3025 1.3025 1.3569 1.3569 1.3569
测得量/mg 0. 1966 0.1934 0.1902 1.3010 1.2631 1.2873 1.3219 1.3541 1.3575
回收率/% 99.64 98.02 96.40 99.88 96.97 98.83 97.42 99.79 100.0
Abstract: To determine nucleoside constituents in different parts of the artificial Cordyceps sinensis, to
provide a reference for taking full advantage of artificial Cordyceps sinensis resources. Methods: Water extraction and alcohol precipitation, RP-HPLC Separation，quantitative analysis of cordycepin, adenosine and adenine using UV-Vis etector. Results: The content of adenine(μg/g) in the fruiting bodies, the mycelia of artificial Cordyceps and the solid culture Residues was 193.916, 142.658, 71.25，that of adenosine 1302.52, 308.17, 71.51, and that of cordycepin 1356.92, 1101.04, 350.96. Conclusion: Not only the fruiting bodies, but also the Mycelia of the artificial Cordyceps inensis and the solid culture residues contain adenine, adenosine and cordycepin, which is worthy to explore further for its useful value.
摘要： 目的：分析测定人工冬虫夏草不同部位核苷类含量，为充分利用人工冬虫夏草资源提供
参考。方法：水提醇沉，RP-HPLC 分离，紫外检测器检测虫草素、腺苷和腺嘌呤含量。结果：
人工虫草中子实体、菌丝体和固体培养残基中腺嘌呤含量(μg/g)分别为 193.92、142.66、71.25；
腺苷分别 1302.52、635.02、171.73；虫草素分别为 1356.92、1101.04、350.96。结论：人工虫草
食品安全与检测
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
2011 年 第 36 卷 第 4 期
人工冬虫夏草不同部位核苷类 成分分析
陆艳艳 1， 邱细敏 1*， 蒋 诚 1， 刘胜姿 1， 郭思维 1， 陈 文 2 (1.湖南师范大学医学院药学系，长沙 410006； 2.长沙医学院，长沙 410219)
取腺嘌呤、腺苷、虫草素对照品适量，精密
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FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
2011 年 第 36 卷 第 4 期
称定，配制成质量浓度分别为 0.1、25、19.1 mg/L 2.6 精密度实验
的对照品溶液[8]。
精 密 吸 取 质 量 浓 度 分 别 为 0.1、 25.0 、 19.1
μg/g，RSD 1.8%；虫草素平均值 1 316.93 μg/g， 回收率。实验结果见表 1。结果表明，回收率满足
RSD 1.2%。证明此方法重现性良好。
实验要求[6]。
表 1 加样回收率实验结果(n=5)
编号 1 2 3 1 2 3 1 2 3
取样量/g 1.004 1.009 1.013 1.017 1.019 1.018 1.009 1.008 1.009
mm×200 mm)色谱柱[5-7]；柱温 :25 ℃；流速：0.8 mL/min；检测 波长： 260 nm； 进 样 量 ： 10 μL 。 在此条件下，3 种核苷类成分和样品中其他物质可 达到良好的分离[8]，见图 1、图 2、图 3、图 4。
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图 1 标准品 HPLC 图