经典：模块四--逆境胁迫对植物生理生化指标的

mL PBS洗研钵→5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 mL。
• 测定：分别取上清液各3 mL →加入0.1%Ti(SO4)2 [用20%(v/v)
H2SO4配制] 1 mL→摇匀→ 5000 rpm离心10 min → OD410
• 计算：
H2O2 content =
A410 V显V总 (mmol.g-1FW)
另50个半粒进行曙红染色（室温染色10 min） 根据两种方法的染色情况，分别计算发芽率。
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实验方法I
品种为晴3或鲁玉13的玉米种子（购于西山种子公司）→ 用0.1% HgCl2消毒10 min后 → 用蒸馏水漂洗干净 → 用蒸馏水 于26℃下吸涨12 h → 播于垫有6层湿润滤纸的带盖白磁盘 （24cm×16cm）中 → 于26℃下暗萌发60 h →计算发芽率（注 意与前面结果比较） → 选取长势一致的玉米幼苗做干旱、高温、 盐渍或低温下处理（去除较矮或较高的玉米幼苗）。
• 测定：分别取上清液各2 mL →加入0.6%TBA（用0.6% TCA配制） 2 mL→煮沸12 min→冷却后→5000 rpm离心10 min →分别测定OD450和OD532
• 计算：
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实验方法V
• H2O2提取：分别取0.5 g实验组和对照组→加入3 mL 50 mM PBS (pH=6.8，内含1mM HA)和少许石英砂→充分研磨→用2
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实 验 方 法 III
• Pro的提取：分别取0.5 g实验组和对照组的胚芽鞘→加入3 mL
3%磺基水杨酸（SSA）和少许石英砂→充分研磨→用2 mL
3% SSA洗研钵→5000 rpm离心10 minຫໍສະໝຸດ Baidu→上清液定容至5 mL。
• 测定：上清液各2 mL →分别加入2 mL冰乙酸和2 mL茚三酮试
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实 验 方 法 II
• 呼吸作用的测定： • 材料的准备：将预测量的材料称重后（0.5g）放入测量瓶。 • 测定方法：打开电源预热5 min→打开气泵开关→打开闭路
开关→用碱石灰管分别连接面板上的“OUT”和“IN”， 主机 的“OUT1”和“IN1”分别与测量瓶的“OUT1”和“IN1”相连 →立即开始记时→测量1min的CO2增加量 • 计算：每分钟每克材料的CO2释放量（mL.g-1.min-1）。
抗氧化酶 (POD)
脯氨酸 （Pro）
GSH
可溶性糖
丙二醛 （MDA）
H2O2
3
实验原理I
根据生物膜透性
染料法
5%红墨水染色法 0.1%靛蓝、曙红等染色法
纸上荧光法：种皮的透性，十字花科
TTC法:作为H受体
根据呼吸作用
BTB法：外界pH的变化
I2-KI染色法：松、衫科种子
4
实 验 原 理 II
4260 nm
min→测定A412
• 计算： GSH content = A412 V显V总 (mmol.g-1FW)
LW
V用
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模块实验报告
• “以逆境胁迫对玉米幼苗生理生化指标的影响”为 题撰写科技论文。
• 题目 引言
署名
摘要
关键词
材料与方法
5
实 验 原 理 III
6
实 验 原 理 IV
7
实验原理V
8
实 验 原 理 VI
POD
PPO
9
实 验 原 理 VII
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实验方法I
• 种子发芽率的测定：各取50粒吸胀的玉米种子或小 麦种子→沿胚的中心线切成两半（严格区分两个半 粒），进行下列实验： 其中50个半粒进行TTC染色（30℃水浴 20 min）
L/O/G/O
模块四 综 合 性 实 验
逆境胁迫对植物生理生化指标的影响
李忠光，2011.5.25
1
目的
• 掌握逆境胁迫下一些植物生理指标的测定方法； • 了解逆境胁迫下植物生理生化指标的变化以及逆境伤害和
适应的原因。
2
流程图
玉米幼苗
盐胁迫 高温胁迫 水涝胁迫
干旱胁迫
重金属 胁迫
低温胁迫
发芽率
呼吸速率
LW V用
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实 验 方 法 VI
• 1、抗氧化酶的提取：分别取0.5 g实验材料→加入少许石 英砂和3 ml提取液（50mmol/L PBS, pH5.8,内含0.１mmol/ LEDTA, 1%PVP） → 充分研磨 →转入离心管中→用2 ml提取液洗研钵→ 5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 ml →用于测定POD和PPO酶活性或分装后转至-20或-80℃ 保存。
剂→煮沸15 min→冷却后→5000 rpm离心10 min →分别测定
A520 • 计算：
Pro content = A520 V显V总(mmol.g-1FW)
LW
V用
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实 验 方 法 IV
• MDA提取：分别取0.5 g实验组和对照组→加入3 mL 50mM PBS (pH=7.8)和少许石英砂→充分研磨→用2 mL PBS洗研钵 →5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 mL。
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实 验 方 法 VI
2、POD测定：取POD反应混合液（10 mmol/L愈创木酚，5 mmol/L H2O2,用PBS溶解）3.00 ml，加入酶液100 ml（空白调 零用PBS取代），立即记时，摇匀，读出反应3 min时的A470。
3、PPO测定：取PPO反应混合液（ 20 mmol/L邻苯二酚，用 PBS溶解）2.8 ml，加入酶液0.2 ml（空白调零用PBS取代）， 立即记时，摇匀，读出反应 2 min时的A410。 以每分钟A值变化0.01所需要的酶液的量为一个活力单位 （U），则：
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实 验 方 法 VI
4、计算
POD activities = A470 V显V总 (mmol.g-1FWmin-1)
Wt V用
PPO activities =
A410 V总 (U.g-1FW)
0.01Wt V用
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实 验 方 法 VII
• GSH的提取：分别取0.5 g实验组和对照组的胚芽鞘→加入3 mL 5%三氯
乙酸（TCA）和少许石英砂→充分研磨→用2 mL 5% TCA洗研钵→
5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 mL。
• 测定：上清液各1 mL → 分别加入1 mL0.1M PBS (pH=7.7) → 0.5 mL 4
mM DTNB (用0.1M pH6.8PBS现配，空白用此PBS代替) → 25 ℃5