性病实验室检测

2.
3.
暗视野显微镜检查
检测方法-血清学检测
根据检测所用抗原不同，临床血 清试验分为两大类：
1.非梅毒螺旋体抗原血清试验
2.梅毒螺旋体抗原血清试验
检测方法-非梅毒螺旋体血清试验


所有的非梅毒螺旋体血清试验的抗原基本 成分都一样,其基本成分是心磷脂 、卵磷脂 和胆固醇 抗原抗体结合形成复合物 凝集成网状沉淀 颗粒 被肉眼所见 敏感性和特异性都基本相似
成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FTIC）标记的抗人
免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原 抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧 光，即为阳性反应。 FTA-ABS试验是检测梅毒的“金标准”试验。
检测方法-梅毒螺旋体血清试验的临床意义

作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本 的确证试验。
实验室诊断的必要性
HSV实验室诊断的必要性


生殖器疱疹感染的临床表现变化多样，临床诊断的准 确性不足50%～70%，常常需要通过实验室检测手段来 证实 亚临床感染: 孕妇、性伴的检测等
进行HSV分型的必要性


HSV-2是该病的主要病原体，但近年来HSV-1所致生殖 器感染正在增多，约占该病的10%～40% 两型HSV感染的预后(复发性与复发频率)不同
外有疱疹病毒分型的单克隆抗体试剂供应，可用
于病毒细胞培养鉴定和临床标本检测。
3．抗原酶联免疫试验
酶联免疫诊断试剂盒可检测水泡、溃疡和痂
皮中的疱疹病毒。本法与细胞培养比较，敏感
性为85.6％，特异性为97.8％。本法的缺点是
疱疹病毒不能分型。
4.核酸扩增试验

实时荧光PCR检测
PCR反应时加入一对引物和一个与PCR模板特异 性杂交的寡核苷酸荧光探针，探针的5´和3´端 分别标记了一个荧光报告基团（R基团）和一 个荧光淬灭基团（Q基团）。探针完整时，R基 团发射的荧光信号被Q基团吸收，即PCR反应前 荧光探针不发荧光；PCR扩增过程中，使R基团 和Q基团分离，Q基团对R基团的淬灭作用消失 ，荧光监测系统就可接收到R基团的荧光信号 。每完成一次扩增，就有一个荧光分子形成， 通过自动化的荧光检测仪进行实时荧光检测。
衣原体的培养
评 价 敏感性70％～80％ 特异性100％
缺点

费时（需3～5天），费力，技术要求高
不宜作为临床常规检查
不宜用于大规模的筛查和流行病学调查
直接免疫荧光法
原理： 衣原体Ag+荧光素标记的单克隆Ab 评 价


敏感性70%～90% 特异性83%～99% 由于有可能将某些发光颗粒(白细胞、上皮细胞、 色素颗粒)、细菌和酵母菌误认为沙眼衣原体， 因此此法对于实验人员的技术水平要求较高
优点
简易，方便，快速，尤其适用于基层单位
缺点
标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则有假 阴性结果
核酸扩增检测

核酸扩增技术是通过扩增沙眼衣原体的多拷贝基因（如隐 蔽性质粒、染色体和RNA）检测病原体。方法包括 聚合酶链反应（PCR）

连接酶链反应（LCR）
等温链臵换扩增技术（SDA） 转录介导扩增技术（TMA） 核酸序列扩增技术（NASBA） 实时荧光PCR等。
实验室诊断方法分类
病原学检测
－病毒检测
－抗原检测
－DNA检测 血清学检测
1．细胞学检查

HSV感染细胞后,可使细胞产生特征性的病变
。取疱液或溃疡渗液涂片，在显微镜下观察细 胞的变化，同时观察病毒包涵体，有助于诊断
。
2．直接免疫荧光法
直接免疫荧光法检测简单，阳性结果为上皮细
胞的浆和细胞核内可见亮绿色的荧光。目前，国

淋球菌培养

培养条件 ： 35 ℃ ～ 36℃，含 5% ～ 10% CO2，湿润（70%湿度）的环境。
CO2环境可由CO2培养箱、CO2产气袋及烛缸提供。 使用烛缸时，应使用白色、无芳香味的无毒性蜡烛。 在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。

培养时间：24~48小时
淋球菌培养-培养条件
淋球菌培养-观察结果

治疗前
一期
治疗后
早 期
二期
早期潜伏
晚 晚期潜伏 期 三期 阳性 阴性
梅毒血清学试验结果的临床意义总汇
USR RPR VDRL _ TPHA TPPA FTA-ABS _
意义
排除梅毒 一期梅毒的早期 艾滋病患者合并梅毒 现症梅毒(梅毒孕妇所生 的婴儿除外) 生物学假阳性 早期梅毒经治疗后 前带现象
检测方法-非梅毒螺旋体血清试验
甲苯胺红试验(TRUST)特点： 其原理和成分与RPR试验相同 用红色的甲苯胺红替代了碳颗粒 其余的特点均与RPR相同

检测方法非梅毒螺旋体血清试验临床意义

非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏
感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。 早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效 观察、判愈、复发或再感染的指征。
淋球菌培养
培养法为诊断淋病的金标准. 对女性淋病的确诊应做淋球菌培养 从选择性培养基上分离出淋球菌即可诊断淋病。 培养的敏感性81~100%。 培养的优点有： — 特异性极高（100%）； — 可发现无症状淋球菌感染患者； — 可确诊儿童性虐待； — 可用于进一步作药敏试验； — 可用于治疗后的判愈试验。
+
Sheep red cell T.pallid um Sensitise d cell
+
Sensitise d cell Specific Antibody
Hemaggluti nation
检测方法-梅毒螺旋体血清试验

FTA-ABS
剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒患者血清形
其原理是将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收
+
+
+ --
-+
二、淋
病
概况-病原学

淋病是指由淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae,简称淋球菌)引起的各种 化脓性感染，是一种经典的常见的性传 播疾病. 淋球菌为革兰阴性双球菌，大小约 0.6~0.8µm。通常成对生长，两菌接 触面平坦。

淋病的实验室诊断方法


直接显微镜检查；
检测方法-梅毒螺旋体血清试验
TPPA
TPPA试验原理与TPHA试验基本相同。TPPA试验用 梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致敏羊红细胞， 此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生 可见的凝集反应，具有较高的敏感性。明胶粒子为洋红
色，在操作部步上也较为方便，出结果较快。
TPPA/TPHA
行动缓慢而有规律 - 围绕其长轴旋转中前后移动 - 伸缩其圈间之距离而移动 - 全身弯曲如蛇行

检测方法-病原体检查

梅毒螺旋体检查是诊断早期梅毒的最佳方法。
诊断一期梅毒、二期梅毒时，可取患者的渗 出液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视 野显微镜下观察螺旋体的特征性形态和运动 方式. 病原学检查的主要方法有暗视显微镜检查、 镀银染色法和直接荧光法
性病实验室检测
性病实验室在性病防治中的作用
临床服务
疫情监测
实验室诊断
效果评价 科学研究
性病实验室在性病疫情监测中的任务
疾病准确诊断 梅毒 淋病 沙眼衣原体感染
淋球菌耐药监测 分离株收集 MIC检测
实验室检测
实验室质量控制 专项性病患病率调查
一、梅
毒
概述-梅毒病原体

小而纤细的螺旋状微生物 长5～20μm，粗细<0.2μm 有6 ～ 12个规则的螺旋 基本结构为一原生质的圆柱体， 为两层膜所围绕
培养 24 小时后检查平皿，此时没有菌生长的 平皿应继续培养至 48 小时，仍无菌生长才可 丢弃，作出淋球菌培养阴性的报告。


对选择性培养基上分离的直径在0.5～1mm，
无色、灰白色的半透明菌落应作进一步鉴定。
淋球菌培养-观察结果
淋球菌培养-淋球菌的初步鉴定

初步鉴定淋球菌的主要依据
菌落特征 氧化酶试验 革兰染色

检测方法-病原体检查的临床意义
1.
暗视野显微镜检查、镀银染色和荧光抗梅毒螺旋体单克 隆抗体等检查方法，直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可 确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。暗视野 显微镜检查已被世界卫生组织指定为性病实验室必备项 目之一。 螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者 的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十 分重要的意义。 如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性.
淋球菌的鉴定特征
菌落形态
革兰染色
淋球菌样
革兰阴性双球菌
氧化酶试验
过氧化物酶试验
阳性
阳性
快速糖发酵试验
G+ L-
M- S-
淋球菌氧化酶阳性
生殖道沙眼衣原体感染
生殖道沙眼衣原体感染-病原体

革兰阴性、专性细胞内寄生的微生物
衣原体有特殊的发育周期,可见2种不同的结 构 －原体：感染型，较小，呈球形 －始体：增殖型，大，呈圆形或卵圆形
革兰染色：多形核白细胞增多
美兰染色
直接显微镜检查的临床意义


男性淋菌性尿道炎的尿道标本 敏感性及特异性可高达95%～99%，具诊断价值。 宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时 敏感性仅40～70%。
不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部淋球菌感染。 亦不能用于疗后判愈。如果在多形核细胞外见到形态 典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。
沙眼衣原体感染-实验室检测
细胞培养
抗原检测试验
快速抗原试验
核酸扩增检测(NAAT)法

细胞培养
1.
2.
原理： 沙眼衣原体专性细胞内寄生，将其接种 于易于其感染的敏感细胞，在适宜培养条件 下，可在细胞中形成胞浆内包涵体，染色后 镜检可见。 方法： McCoy细胞或Hela229细胞单层包被96孔 微量板中小圆盖玻片；标本接种；培养。

梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPA试验仍可阳性，故 TPPA试验阳性不能作为疗效观察的指标。

TPPA阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒 螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。
非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图

治疗前
一期 二期 早期潜伏
治疗后
早 期
晚 晚期潜伏 期 三期
阳性
阴性
梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图
分离培养淋球菌；

非培养技术检测淋球菌细胞成份如抗原 或DNA（EIA, PCR/LCR）
直接显微镜检查
染色方法: 革兰染液 美兰染液
姬姆萨染液
荧光抗体
革兰染色为一传统方法，因简便、快捷及价廉、仍然 为最广泛采用的方法。革兰染色将菌分为二大类，即染成 紫色的革兰阳性菌及染成红色的革兰阴性菌。
革兰染色：细胞内革兰阴性双球菌


检测方法-非梅毒螺旋体血清试验特点

前带现象
指非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中 存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴 性反应的结果，而临床上又象二期梅毒，此时将 血清稀释后再进行试验，出现了阳性的结果，该 现象称为前带现象。
检测方法-梅毒螺旋体血清试验
采用梅毒螺旋体作抗原，是特异性的抗原体反应。 梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA） 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TP-PA） 荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）、 梅毒螺旋体抗体酶联免疫试验（ELSA-TP） 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB-Test）
酶联免疫吸附试验
评 价

敏感性和特异性与直接免疫荧光法相似
敏感性：79－97％ 高 特异性: 97－99％ 高

试验结果阴性时，不能完全排除沙眼衣原体感
染，有可能是沙眼衣原体数量不足或标本采集
不当的缘故
抗原快速检测
试剂盒如Clearview Chlamydia（C-C），即立明 试验，为乳胶免疫扩散法。
核酸扩增检测

核算扩增检测具有很高的敏感性和特异性，世界卫生组织 已推荐为扩大的生殖道沙眼衣原体感染实验室诊断的“金 标准”。

核算扩增检测不仅可用于宫颈、尿道标本中沙眼衣原体的
检测，也可用于男女性尿液标本的检测。 开展核酸检测的实验室应通过有关部门考核取得开展临床

核酸检测技术资格证。
生殖器疱疹
非梅毒螺旋体血清试验原理示意图
检测方法-非梅毒螺旋体血清试验
性病研究实验室试验（VDRL） 不加热血清反应素试验（USR） 血浆反应素环状卡片试验（RPR） 甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）

检测方法-非梅毒螺旋体血Fra Baidu bibliotek试验

RPR试验特点： 在USR试剂成分的基础上 加入黑色碳颗粒 作为沉 淀的指示物 用白色的硬纸片替代玻片 血清不需要灭活 不需要显微镜观测结果 可作定量试验 有现成的试剂盒 携带方便 操作简单 价格便宜 试验的结果可长期保存