SDS-PAGE试剂配方

SDS-PAGE电泳试剂配制

SDS-PAGE电泳试剂配制SDSPAGE 电泳试剂配制在生物化学和分子生物学的研究领域中，SDSPAGE 电泳是一种常用的技术手段，用于分离和分析蛋白质。

而要成功进行 SDSPAGE 电泳实验，准确配制各种试剂是至关重要的一步。

接下来，让我们详细了解一下 SDSPAGE 电泳试剂的配制方法。

首先，我们来谈谈分离胶缓冲液的配制。

分离胶缓冲液通常使用TrisHCl 缓冲液，其 pH 值一般在 88 左右。

配制时，我们需要称取一定量的 Tris 碱，然后加入适量的浓盐酸进行调节 pH 值。

这个过程需要用到 pH 计来精确测量，以确保 pH 值的准确性。

一般来说，每升分离胶缓冲液中，Tris 的用量约为 1815g，而浓盐酸的用量则需要根据实际测量的 pH 值进行调整。

接下来是浓缩胶缓冲液的配制。

浓缩胶缓冲液的 pH 值通常为 68，同样使用 TrisHCl 缓冲液。

配制方法与分离胶缓冲液类似，但 Tris 的用量和浓盐酸的用量有所不同。

每升浓缩胶缓冲液中，Tris 的用量约为 606g，浓盐酸的用量也需要根据实际 pH 值测量结果进行微调。

然后是 30%丙烯酰胺溶液的配制。

这是 SDSPAGE 电泳中的关键试剂之一。

丙烯酰胺是一种有毒物质，在配制过程中需要特别小心。

我们将丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺按照 29:1 的比例混合。

称取 29g 丙烯酰胺和 1g 甲叉双丙烯酰胺，加入适量的去离子水，搅拌溶解后，定容至 100ml。

需要注意的是，丙烯酰胺具有神经毒性，操作时应戴手套在通风橱中进行。

SDS 溶液的配制也不能马虎。

SDS 即十二烷基硫酸钠，是一种阴离子去污剂。

称取 10g SDS，加入适量的去离子水，加热搅拌溶解后，定容至 100ml。

10%过硫酸铵溶液是引发丙烯酰胺聚合的重要试剂。

称取 1g 过硫酸铵，加入 10ml 去离子水，现配现用。

因为过硫酸铵溶液不稳定，容易分解，所以不宜长时间保存。

电泳缓冲液也是必不可少的。

SDS-PAGE所有详细试剂配方

S D S-P A G E 30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide【组分浓度】各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)30%Acr-Bis(29:1) 1000ml 100ml29%Acrylamide(丙烯酰胺) 290g 29g1%BIS(N,N’-亚甲丙烯酰胺) 10g 1g【配制方法】将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。

0.45μm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。

严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。

使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。

如有沉淀，可以过滤。

【保存条件】4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。

称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。

可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。

1MTris-HCL（pH6.8）(浓缩胶buffer)【组分浓度】1MTris-HCL名称用量备注Tris 12.1g去离子水80ml浓盐酸9ml (36%的浓盐酸)预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存【配制方法】称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加>0.7mL的浓HCL调节所需要的pH 值（7.4-大约0.7mL，7.6-大约0.6mL，8.0-大约0.42mL），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

【保存条件】室温保存。

【注意事项】对人体有刺激性，请注意适当防护。

1.5MTris-HCL（pH8.8）(分离胶buffer)【组分浓度】1.5MTris-HCL名称用量备注Tris 18.17g去离子水80ml浓盐酸3ml (36%的浓盐酸)预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存【配制方法】1L称量181.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

SDS-PAGE试剂配方SDS-PAGE电泳所用溶液:30 %聚丙烯酰胺溶液 (100 mL)丙烯酰胺 (Arc) 29 gN,N’-亚甲双丙烯酰胺 (Bis) 1 g用双蒸水定容至100mL，过滤备用，4?存放丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH 值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4?贮存。

5×Tris-甘氨酸缓冲液 (1 L)Tris碱 15.1 g甘氨酸(电泳级) 94 g10 %SDS 50 mL使用时稀释5倍使用2×SDS凝胶加样缓冲液(10mL)0.5 mol/L Tris-Cl (pH 6.8) 2 mL10,(W/V)SDS 4 mL甘油 2 mLβ-巯基乙醇 1.0 mL(DTT(二硫苏糖醇) 0.31g)溴酚兰 0.02g双蒸水 0.5 mL室温存放备用考马斯亮蓝染色液考马斯亮蓝R-250 (G-250) 1.0 g甲醇 450 mL冰醋酸 100 mLddHO 450 mL 20.2g考马斯亮蓝R250+84mL 95,乙醇+20mL冰醋酸，定容至200mL，过滤备用考马斯亮蓝脱色液(甲醇脱色液效果好，但有毒性)甲醇 100 mL冰醋酸 100 mLddHO 800 mL 2医用酒精:冰醋酸:水=4.5:0.5:5(V:V:V)SDS-PAGE所需溶液:A液——30,丙稀酰胺(W/V):丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4?贮存。

B液——1.5mol/L Tris?HCl，pH8.8:18.17g(9.09g)Tirs碱，溶于80mL(40mL)去离子水中，加入约3mL(1.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至8.8，定容至100mL(50mL)。

C液——1.5mol/L Tris?HCl，pH6.8:12.1g(6.05g)Tirs碱，溶于80mL(40mL)去离子水中，加入约7mL(3.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至6.8，定容至100mL(50mL)。

SDSPAGE所有详细试剂配方精修订

SDSPAGE所有详细试■ 剂配方SANY 标准化小组#QS8QHH-HHGX8Q8-GNHHJ8-HHMHGN# 称S181.7gTrisfi«溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解.加浓HCL调节所需耍的pH值=8・&将洛液定容至ILt 高温高压灭菌后.室温保存。

(1. 5mmol/LTris"HCL(pH8. 8) : 18. 15gTris 和48mllmol/LHCL 混合.加水稀释到100ml 终体积。

过滤后4七保存。

)【保存条件】室温保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定pH值，I大I为Tris溶液的pH值随温度的变化差界很大.温度每升商1°C,溶液称取2g高纯度的SDS迓于100、200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水.689加热溶解.滴加浓盐酸调节PH 至7・2・定容至20ml后，室温保存【保存条件】室温保存【注意事项】对人体有害•请注总:防护。

io%过硫酸鞍溶液------ io%(w G AP称取O・lg过硫酸钱宜于l・5ml离心管•加ImL去离子水吹打溶解.JC保存【保存条件】49保存【注意事项】10%过疏酸钱溶液在49保存时•可使用2周左右•超过期限会失去催化作用5XTris-酸电泳缓冲液------------ oXTris-Clycinebuffer (SDS-PAGE 电泳缓冲液)【组分浓度】称取15. IgTris, 91. 0g甘氮酸(glycine) , 5. OgSDS,用800ml蒸馅水或去离子水溶解.充分搅拌溶解•定容至1000ml,室温保存。

得0・125mol/LTris7 25mol/L甘氨酸电极缓冲液。

临用前稀释5倍。

【保存条件】室温保存•两年有效。

【注意事项】配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。

电泳缓冲液可以回收.回收后可再使用「2次.但为了取得最佳的电泳效果,应使用新电泳液°0. 25MTris-HCL (pH6. 8)：10%(W/V)SDS：0. 5%(W/V)BPB(^酚蓝):50%(V/V)廿油：5%(W/V) 0-筑基乙醇(2-ME)【配制方法】fit取1.25mLlMTris-HCL (pH6・8) , 0・5gSDS, 25mgBPB・2・5mL甘油,宜于lOmL塑料离心管中■加去离子水溶解后•定容至5mL,小份(0・5mL/份)分装，于室温保存。

SDS-PAGE实验步骤

试剂：1. 5x样品缓冲液（10ml）:0.6ml 1mol/L的Tris-HCl（Tris-HCl缓冲液（0.05mol/L，25℃）50ml 0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与x ml 0.1mol/L 盐酸混匀后，加水稀释至100ml）(pH6.8),5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml 1%溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。

可在4℃保存数周，或在－20℃保存数月。

2. 凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。

过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。

3. pH8.9分离胶缓冲液： Tris 36.3g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml 使其溶解，调pH8.9，定容至100ml，4℃保存。

4. pH6.7浓缩胶缓冲液： Tris5.98g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml 使其溶解，调pH6.7，定容至100ml，4℃保存。

5. TEMED（四乙基乙二胺）原液。

6. 10%过硫酸铵（用重蒸水新鲜配制）。

7. pH8.3 Tris-甘氨酸电极缓冲液：称取Tris 6.0g，甘氨酸28.8g，加蒸馏水约900ml，调pH8.3后，用蒸馏水定容至1000ml。

置4℃保存，临用前稀释10倍。

8. 考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸，最后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。

器材电泳仪，电泳槽，水浴锅，摇床。

样品制备将蛋白质样品与5X样品缓冲液（20ul＋5ul）在一个Eppendorf管中混合。

放入100℃加热5－10min，离心，取上清点样。

电泳1. 将玻璃板、样品梳、Spacer用洗涤剂洗净，用ddHO冲洗数次，再用乙醇擦2拭，晾干；2. 将两块洗净的玻璃板之间加入Spacer，装好玻璃板；3. 按如下体积配制10％分离胶8.0 ml，混匀；O 3.0 ml ddH21.0 mol/LTris-HCl pH=8.82.1 ml30% Acr-Bis 2.8 ml 10% SDS 80 ul10%AP 56 ul TEMED 6 ul4. 向玻璃板间灌制分离胶，立即覆一层重蒸水，大约20 min后胶即可聚合；5. 按如下体积配制6％浓缩胶3.0 ml，混匀；O 2.0 ml ddH21.0 mol/LTris-HCl pH=6.8 400 ul30% Acr-Bis 600 ul 10% SDS 36 ul10%AP 24 ul TEMED 4 ul6. 将上层重蒸水倾去，滤纸吸干，灌制浓缩胶，插入样品梳；7. 装好电泳系统，加入电极缓冲液，上样20 μl;8. 稳压200V，溴酚蓝刚跑出分离胶时，停止电泳，约需45 min～1hr；9. 卸下胶板，剥离胶放入染色液中，室温染色1～2 hr；加入脱色液，置于80 rpm 脱色摇床上,每20 min更换一次脱色液（10 ml 冰乙酸；45 ml乙醇；45 ml蒸馏水）至完全脱净。

SDS-PAGE分离胶配方表-及其原理

SDS-PAGE电泳原理：聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。

聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。

SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。

因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。

这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS—PAGE）。

由于SDS-PAGE 可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以略而不计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的蛋白质，那么SDS—PAGE 后，就只出现一条蛋白质区带。

TEMED：通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合。

过硫酸铵（AP）：提供驱动丙烯酰胺与双丙烯酰胺所必须的自由基。

SDS—PAGE 可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。

本实验采用垂直板状不连续系统。

所谓“不连续”是指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、pH 和凝胶孔径等所组成。

1.蛋白样品浓缩效应在不连续电泳系统中，含有上、下槽缓冲液(Tris—Gly，、浓缩胶缓冲液(Tris—HCl，、分离胶缓冲液(Tris—HCl，，两种凝胶的浓度(即孔径)也不相同。

在这种条件下，缓冲系统中的HCl 几乎全部解离成Cl－，两槽中的Gly (pI＝，pK a=只有很少部分解离成Gly 的负离子，而酸性蛋白质也可解离出负离子。

sds-page 试剂配制

SDS-PAGE 试剂配制
凝胶脱色染色方法：
溶液1：无水乙醇250mL，冰醋酸50mL，水200mL；
溶液2：无水乙醇50mL，冰醋酸37.5mL，水437.5mL；
溶液3：0.25g考马斯亮蓝R-250 溶于100mL 95%乙醇中，滤纸过滤，待用。

电泳结束，取出胶放在胶盒中，加约50mL溶液1，微波炉加热1min，摇床摇10-20nin；倒掉溶液1，加入溶液2，再加1mL溶液3，混匀，微波炉加热1min，摇床摇，直至条带染色清晰为止。

上样缓冲液（5×）：（5×loading buffer）有
10%（W/V,g/ml）过硫酸铵（APs）的配制：（1ml）
1.称取0.1g过硫酸铵；
2.加入1ml的去离子水，将固体粉末彻底溶解；
3.贮存于4℃。

注意：10%过硫酸铵最好现配现用，配好的溶液在4℃保存可使用2周左右，过期会失去催化效果。

5×Tris-Glycine电泳缓冲液的配制：（1L）
1.称取Tris粉末15.1g、Glycine（甘氨酸）94g、SDS5.0g；
2.加入约800ml的去离子水，搅拌溶解；
3.加去离子水定容至1L，室温保存。

注意：加水时应让水延着壁缓缓流下，以避免由于SDS的原因产生很多泡沫。

SDS-PAGE原理、试剂配制和注意事项

SDS是阴离子去污剂，能断裂分子内和分子间的氢键，破坏蛋白分子的二、三级结构。

作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。

而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使绊胱氨酸残基间的二硫键断裂。

在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS 胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。

SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1。

分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。

电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。

2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。

当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。

电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。

蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。

电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。

过硫酸铵（AP）为催化剂，四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。

在聚合过程中，TEMED 催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。

当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。

sds-page配方

SDS-PAGE 电泳8%分离胶5ml 7.5ml 10mlH2O 2300（微升，下面都一样）3450 460030%Acrylamide 1300 2025 27001.5M Tris-HCl (Ph8.8) 1300 1875 250010%SDS 50 75 10010%过硫酸铵50 75 100TEMED 3 4.5 612%分离胶5ml 7.5ml 10mlH2O 1600 2475 330030%Acrylamide 2000 3000 40001.5M Tris-HCl (Ph8.8) 1300 1875 250010%SDS 50 75 10010%过硫酸铵50 75 100TEMED 2 3 4浓缩胶5ml 7.5mlH2O 1700 340030%Acrylamide 415 8301.5M Tris-HCl (Ph8.8) 315 63010%SDS 25 5010%过硫酸铵25 50TEMED 2.5 51.将以上溶液混合均匀，用1ml枪吹打几下2.现配分离胶，将配制好的胶慢慢打入，胶里不能有气泡。

3.分离胶加入到2/3处，再加入去离子水，压胶，保持分离胶水平4.待分离胶凝固后，将水倒出来，用滤纸吸干，差不多就可以~5.配制浓缩胶，插梳子（用蒸馏水洗干净）6加入电泳缓冲液，倒个一半左右？7点样的时候慢慢点，因为点样速度快了，容易冒出来8跑胶的时候，先用80V跑，等样品跑完浓缩胶，就换电压，换到120V得跑个2h左右吧~ （不用那么仔细，你配的胶你估摸着差不多就行）,跑完浓缩胶，蛋白和marker都是呈一条细线这时候你就可以换电压了~9跑完的胶，拿出来用蒸馏水冲几次，放入平皿，加染色液，能覆盖胶就行，摇7,8h，摇完了把染色液倒出来（可以回收，但是效果不怎么好），用蒸馏水冲几次，加入脱色液，再摇摇到你能看见条带，目的蛋白就可以~要是你闲时间太长，加染色液放微波炉，打个两三分钟，脱色的时候加脱色液放微波炉，打2,3分钟，据说这个方法也可以，但是效果不好，而且我没有试过，要不你试试？建议你买个SDS-PAGE的试剂盒吧，要不然配试剂得配个一天。

SDS-PAGE电泳试剂配制

SDS-PAGE电泳试剂1)30%储备胶溶液:丙烯酰胺(Acr）29。

0g，亚甲基双丙烯酰（Bis)1。

0g，混匀后加ddH2O，37O C溶解,定容至100 mL,棕色瓶存于4O C；2）1。

5M Tris—HCl(pH 8.8)：Tris 18.17g加ddH2O溶解,浓盐酸调pH至8。

0，定容至100mL；3) 1M Tris—HCl（pH 6。

8）：Tris 12.11g加ddH2O溶解,浓盐酸调pH至6.8，定容至100 mL；4）4⨯分离胶缓冲液：0。

4gSDS溶于1.5M Tris—HCl（pH 8。

8），定容至100mL;5) 4⨯浓缩胶缓冲液: 0.4gSDS溶于1M Tris-HCl(pH 6。

8），定容至100mL;6）10⨯电泳缓冲液(pH 8.3）：Tris 3.029g，甘氨酸14.415g，SDS 1g加ddH2O溶解，定容至100mL；7) 10％过硫酸铵（Aps,现配）：1g AP加ddH2O至10mL；8) 2⨯SDS电泳上样缓冲液:1M Tris-HCl(pH 6.8）2。

5mL，β-巯基乙醇1.0mL，SDS 0。

6g，甘油2。

0 mL，0。

1％溴酚兰1。

0 mL,ddH2O 3.5mL；9) 考马斯亮兰染色液：考马斯亮兰R2501。

25g，甲醇225 mL，冰醋酸50 mL，ddH2O 225mL;10）脱色液: 甲醇、冰醋酸、ddH2O以2∶1∶7配制而成；11) 分离胶(12。

5%)：ddH2O 4mL，30％储备胶5 mL，4⨯分离胶缓冲液3mL，10% Aps 0。

1mL(现配），TEMED（N，N,N'，N’—四甲基乙二胺）10μL;12）浓缩胶（5％）:ddH2O 2.65mL，30％储备胶0。

85mL，4⨯浓缩胶缓冲液1。

25mL，10%Aps 50μL,TEMED 5μL.Tricine（三羟甲基氨基甘氨酸)- SDS —PAGE蛋白质电泳1 Tricine —SDS —PAGE蛋白质电泳溶液准备1）正极缓冲液(10 ×)：14g Tris 溶于400mL 重蒸水,用1。

SDS-PAGE全部试剂配方

SDS-PAGE试剂配方30%凝胶贮液（150ml， 4℃保存）29.2% Acr：43.8g 0.8% Bis：1.2g将Acr完全溶解于120ml水中，再加入Bis使其完全溶解，加ddH2O定容至150ml，用滤纸过滤溶液，棕色玻璃瓶中4℃保存。

分离胶Buffer （1.5M Tris-HCl 250ml）Tris：45.4725g SDS：1g将Tris溶于200ml水中，在磁力搅拌器上不断搅动溶液使其完全溶解，用HCl调节pH 至8.8，此过程中加入HCl时浓度需逐渐降低，越接近目标pH越要小心防止pH调节过头。

加ddH2O定容至250ml，加入SDS（此时容易产生气泡，可用超声或抽气破碎气泡），抽滤或滤纸过滤，4℃保存。

浓缩胶Buffer （0.5M Tris-HCl 100ml）Tris：6.07g SDS：0.4g将Tris溶于80ml水中，后续步骤同分离胶Buffer，调节pH值至6.8（可配置200ml调pH后100ml用于添加SDS作浓缩胶Buffer，剩余100ml为Tris-HCl贮液）SDS裂解液（10ml）：0.5M Tris-HCl pH：6.8 2ml2%甘油2ml4%SDS 0.4g65mM DTT 100mg（使用时临时加入）ddH2O 6ml样品溶解液：（100ml）终浓度为50 mmol/L Tris﹒HClpH=6.8（总体积的20%=20ml），2% SDS=2g，0.1% 溴酚蓝=0.1g，10% 甘油=10ml，补ddH2O到100ml10％过硫酸铵：5g(0.5g)过硫酸铵，溶于50mL(5mL)去离子水中；现配现用或分装至0.5mL 离心％过硫酸铵：管中冷冻备用TEMED(N-N-N`-N`－四甲基乙二胺)原液，室温保存（有毒，致癌物质）。

SDSPAGE所有详细试剂配方

SDSPAGE所有详细试剂配方SDS-（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用于蛋白质分析的实验技术。

该技术通常涉及到几种试剂，如胶溶液、缓冲液、电泳缓冲液、染色溶液等。

下面是SDS-常见的试剂配方及其详细说明。

一、胶溶液配方：1. 30%（w/v）丙烯酰胺（acrylamide）溶液- 在称量瓶中称取30g丙烯酰胺，并用蒸馏水调至100ml。

搅拌溶解直至均匀。

-这是制备聚丙烯酰胺凝胶的基础溶液。

2. 响应稀释液（Response diluent）-用于稀释聚丙烯酰胺溶液以获得不同浓度的凝胶。

-可通过将聚丙烯酰胺溶液与水按1:3体积比混合来制备响应稀释液。

二、缓冲液配方：1. 离子化追踪剂（Tris-Glycine running buffer）-用于凝胶电泳盒中电解质的运行。

-配方为：3g Tris base （pH 8.8）14.4g glycine将固体溶解于1L蒸馏水中，并调整pH至8.8三、电泳缓冲液配方：1. 离子化追踪剂（Tris-Glycine SDS running buffer）-用于在电泳过程中提供离子追踪剂。

-配方为：30g Tris base144g glycine10gSDS将固体溶解于1L蒸馏水中。

2. 加速剂（stacking gel buffer）- 用于形成凝胶中的聚集堆积层（stacking layer）。

-配方为：30g Tris base （pH 6.8）144g glycine1gSDS将固体溶解于1L蒸馏水中，并调整pH至6.8四、样品处理缓冲液配方：1. 样品加载缓冲液（sample loading buffer）-用于处理蛋白样品，以便在凝胶上获得良好的分离效果。

-配方为：0.5M Tris-HCl（pH 6.8）20%（v/v）甘油10%（w/v）SDS0.05%（w/v）溴酚蓝（bromophenol blue）旋转混合并加入蛋白样品。

五、凝胶染色溶液配方：1. 吸附性染色剂（Coomassie blue staining solution）-用于染色聚丙烯酰胺凝胶上分离的蛋白质。

SDS-PAGE、Native及2D电泳试剂配方

第一章 SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳1. 储存液① 2 M Tris-HCl(pH 8.8), 100ml 24.2g Tris + 50ml 蒸馏水+浓盐酸至 pH 8.8 (4ml)，待室温+蒸馏水至100ml 。

② 1 M Tris-HCl(pH 6.8), 100ml 12.1g Tris + 50ml 蒸馏水+浓盐酸至 pH 6.8 (8ml)，待室温+蒸馏水至100ml 。

③ 10% (w/v)SDS, 100ml, 室温保存 10g SDS+蒸馏水至100ml 。

④ 50% (v/v) 甘油，100ml 50ml 100%甘油+50ml 蒸馏水⑤ 1% (v/v) 溴酚蓝，10ml 100mg 溴酚蓝+蒸馏水至10ml ，搅拌至完全溶解，过滤除去聚合的染料。

2. 工作液① A 液：丙烯酰胺储存液，100ml 30% (w/v)丙烯酰胺（Acrylamide ）,0.8% (w/v)双丙烯酰胺(Bisacrylamide)30g 丙烯酰胺+0.8g 双丙烯酰胺+蒸馏水至100ml 。

有毒，戴手套和口罩在通风橱中操作，石蜡封口，避光4℃保存。

② B 液：4×分离胶缓冲液，100ml 75ml 2M Tris-HCl(pH 8.8)(1.5M)+4ml 10% SDS(0.4%)+21ml 蒸馏水 4℃保存数月。

③ C 液：4×堆积胶缓冲液，100ml 50ml 1M Tris-HCl(pH 8.8)(0.5M)+4ml 10% SDS(0.4%)+46ml 蒸馏水 4℃保存数月。

④ 10% AP(过硫酸铵)， 5ml 0.5g 过硫酸铵+5ml 蒸馏水密封的管内，4℃保存数月。

⑤ 5×样品工作液，10ml 0.6ml 1M Tris-HCl (pH 6.8)(60mM)+5ml 50% 甘油(25%)+2ml 10% SDS (2%)+0.5ml α-巯基乙醇（14.4mM ）+1ml 1%溴酚蓝(0.1%)+0.9ml 蒸馏水 4℃保存数周，-20℃保存数月。

SDS-PAGE电泳试剂配制

SDS-PAGE电泳试剂配制SDSPAGE 电泳试剂配制SDSPAGE 电泳（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离和分析技术。

在进行 SDSPAGE 电泳实验时，准确配制各种试剂是获得可靠实验结果的关键。

下面，让我们详细了解一下SDSPAGE 电泳试剂的配制方法。

首先，我们来看看分离胶缓冲液的配制。

分离胶缓冲液一般是 15M TrisHCl（pH 88）。

要配制 100ml 的这种缓冲液，我们需要称取 1817g Tris 碱，加入约 80ml 去离子水，用浓盐酸调节 pH 值至 88。

这一步需要耐心和细心，因为 pH 值的准确性对电泳结果影响很大。

调节好 pH 后，将溶液定容至 100ml。

接下来是浓缩胶缓冲液，通常是 10M TrisHCl（pH 68）。

同样配制100ml，称取 1211g Tris 碱，加入约 80ml 去离子水，用浓盐酸调 pH 至68，最后定容至 100ml。

然后是 30%丙烯酰胺溶液。

这是 SDSPAGE 电泳中非常重要的试剂。

配制 100ml 该溶液，需要称取 29g 丙烯酰胺和1g N,N’亚甲双丙烯酰胺，用去离子水溶解后定容至 100ml。

丙烯酰胺是有毒物质，在配制和使用过程中要特别小心，避免接触皮肤和吸入粉末。

SDS 溶液的配制也不容忽视。

一般是 10%（w/v）的 SDS 溶液。

称取 10g SDS，加入适量去离子水搅拌溶解，然后定容至 100ml。

还有 10%过硫酸铵溶液。

称取 1g 过硫酸铵，加入 10ml 去离子水，现配现用。

过硫酸铵溶液容易失效，所以每次使用前都要新鲜配制。

TEMED（四甲基乙二胺）在凝胶聚合过程中起到催化作用。

由于它挥发性强，使用时要注意迅速加入。

电泳缓冲液也是必不可少的。

一般使用的是 Tris甘氨酸缓冲液。

配制 1L 缓冲液，需要称取 303g Tris 碱、1877g 甘氨酸和 1g SDS，用去离子水溶解后定容至 1L。

SDS-PAGE电泳试剂配制

SDS-PAGE电泳试剂配制SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离技术，可以将蛋白质按照其分子量大小分离出来。

在这个过程中，需要使用一系列试剂来形成凝胶、还原并变性蛋白质样品、以及进行电泳。

下面我们将介绍SDS-PAGE电泳试剂的配制方法。

聚丙烯酰胺凝胶电泳胶液配制1. 蒸馏水将蒸馏水取2L，通过0.22μm的滤膜过滤3遍来除杂质，备用。

2. 均聚化溶液将40%（w/v）丙烯酰胺10mL，在干燥器中烘干2小时，然后加入蒸馏水固定容积至50mL。

将10%（w/v）N, N’-二甲基亚硫脲5mL加入均聚化溶液中，搅拌30分钟至完全溶解。

3. 凝胶制备将均聚化溶液加入10%（w/v）的三甲基丙烯酰氨基甲基纤维素，搅拌5分钟后加入0.1%TEMED等待至少1小时凝胶化。

4. 等电聚焦凝胶制备将均聚化溶液加入3.33%（w/v）等电聚焦剂，根据需要调节pH值，搅拌5分钟后加入氨基甲酸1mL，搅拌2分钟至完全溶解。

加入TEMED及APS，混合倒入制好的除尘洞中，并插入梳子。

至少1小时后移除梳子，使凝胶完全凝固。

蛋白样品处理试剂配制1. SDS缓冲液将10%SDS 1.25mL加入pH6.8的磷酸盐缓冲液（1M），加入蒸馏水固定容积至100mL，搅拌10分钟至SDS完全溶解，备用。

2. β-巯基乙醇将β-巯基乙醇400μL加入1mL磷酸盐缓冲液（1M），备用。

3. 样品缓冲液将10%SDS 100μL，β-巯基乙醇50μL加入磷酸盐缓冲液1mL中，加入蒸馏水固定容积至10mL，轻轻搅拌即可。

4. 热变性载入缓冲液将4倍浓度的样品缓冲液加入β-巯基乙醇，于100℃水浴中加热5分钟。

冷却至室温，即可使用。

电泳相关试剂配制1. 电泳缓冲液将磷酸盐缓冲液1L加入SDS 10g进行混合后，加入蒸馏水将其固定至2L，备用。

2. Anode buffer将磷酸盐缓冲液1L加入SDS 5g进行混合后，加入蒸馏水将其固定至2L，备用。

SDSPAGE所有详细试剂配方

S D S-P A G E 30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充pH℃，对人体有刺激性，请注意适当防护。

1.5MTris-HCL（pH8.8）(分离胶buffer)称量181.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

（1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL 混合，加水稀释到100ml终体积。

过滤后40C保存。

）【保存条件】室温保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

10%十二烷基硫酸钠SDS溶液-----10%(w/v)SDS5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液----- 5×Tris-Glycine buffer （SDS-PAGE电泳缓冲液）称取15.1gTris，94.0g甘氨酸（glycine），5.0gSDS，用800ml蒸馏水或去离子水溶解，充分搅拌溶解，定容至1000ml，室温保存。

得0.125mol/L Tris-1.25mol/L甘氨酸电极缓冲液。

临用前稀释5倍。

【保存条件】室温保存，两年有效。

【注意事项】配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。

电泳缓冲液可以回收，回收后可再使用1-2次，但为了取得最佳的电泳效果，应使用新电泳液。

5×SDS-PAGE加样缓冲液----- 5×SDS-PAGE Loading Buffer【组分浓度】0.25MTris-HCL(pH6.8)；10%(W/V)SDS；0.5%(W/V) BPB(溴酚蓝)；50%(V/V) 甘油；加考马斯亮蓝染色脱色液。

SDS-PAGE分离胶配方表-及其原理

SDS-PAGE电泳原理：聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。

聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。

SDS是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。

因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。

这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS—PAGE）。

由于SDS-PAGE 可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以略而不计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的蛋白质，那么SDS—PAGE 后，就只出现一条蛋白质区带。

TEMED：通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合。

过硫酸铵（AP）：提供驱动丙烯酰胺与双丙烯酰胺所必须的自由基。

SDS—PAGE 可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。

本实验采用垂直板状不连续系统。

所谓“不连续”是指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、pH 和凝胶孔径等所组成。

1.蛋白样品浓缩效应在不连续电泳系统中，含有上、下槽缓冲液(Tris—Gly，、浓缩胶缓冲液(Tris—HCl，、分离胶缓冲液(Tris—HCl，，两种凝胶的浓度(即孔径)也不相同。

在这种条件下，缓冲系统中的HCl 几乎全部解离成Cl－，两槽中的Gly (pI＝，pK a=只有很少部分解离成Gly 的负离子，而酸性蛋白质也可解离出负离子。

SDS-PAGE所有详细试剂配方

SDS-PAGE30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。

0.45µm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。

严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。

使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。

如有沉淀，可以过滤。

【保存条件】4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。

称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。

可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。

1MTris-HCL（pH6.8）(浓缩胶buffer)称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加>0.7mL的浓HCL调节所需要的pH 值（7.4-大约0.7mL，7.6-大约0.6mL，8.0-大约0.42mL），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

【保存条件】室温保存。

【注意事项】对人体有刺激性，请注意适当防护。

1.5MTris-HCL（pH8.8）(分离胶buffer)称量181.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。

（1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL 混合，加水稀释到100ml终体积。

过滤后40C保存。

）【保存条件】室温保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

sds-page标准方法

SDS-PAGE标准方法如下：1.试剂：准备所需的试剂，包括2M Tris-HCl（pH8.8）、1M Tris-HCl（pH6.8）、10%SDS、50%甘油、1%溴酚蓝、10%过硫酸铵和5×电泳缓冲液等。

2.工作液：制备30%（w/v）丙烯酰胺/0.8%（w/v）双丙烯酰胺的工作液，加蒸馏水至100ml，缓慢搅拌直至丙烯酰胺粉末完全溶解，过0.45μm滤膜。

可在4℃存放数月。

3.凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。

过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。

4.pH8.9分离胶缓冲液：Tris 36.3g ，加1mol/l HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH8.9，定容至100ml，4℃保存。

5.pH6.7浓缩胶缓冲液：Tris 5.98g ，加1mol/l HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH6.7，定容至100ml，4℃保存。

6.TEMED（四乙基乙二胺）原液。

7.10%过硫酸铵（用重蒸水新鲜配制）。

8.考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸，最后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。

9.操作步骤：制备凝胶贮液、分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液等；按照所需比例配制丙烯酰胺和双丙烯酰胺工作液；加蒸馏水至所需体积；将工作液和Tris碱混合并冷却至室温；加入SDS和TEMED；倒入制胶模具中并插入样品梳；放入电泳槽中加入电极缓冲液；连接电源开始电泳；电泳结束后取下凝胶；用考马斯亮蓝染色液染色；脱色并观察结果。

请注意，具体操作方法可能因实验室条件和需求而有所不同。

如有任何疑问或需要进一步了解SDS-PAGE标准方法的具体细节，建议咨询专业技术人员或查阅相关文献资料。

SDS-PAGE相关溶液的配方(10%过硫酸铵、5×电泳缓冲液、5×上样缓冲液)

SDS-PAGE相关溶液的配方（10%过硫酸铵、5×电泳缓冲液、5×上样缓冲液）10%（W/V,g/ml）过硫酸铵（APs）的配制：（1ml）1.称取0.1g过硫酸铵；2.加入1ml的去离子水，将固体粉末彻底溶解；3.贮存于4℃。

注意：10%过硫酸铵最好现配现用，配好的溶液在4℃保存可使用2周左右，过期会失去催化效果。

5×Tris-Glycine电泳缓冲液的配制：（1L）1.称取Tris粉末15.1g、Glycine（甘氨酸）94g、SDS5.0g；2.加入约800ml的去离子水，搅拌溶解；3.加去离子水定容至1L，室温保存。

注意：加水时应让水延着壁缓缓流下，以避免由于SDS的原因产生很多泡沫。

5×SDS-PAGE Loading Buffer的配制（方案一）：（5ml）（本方案摘自Takara网站）组分：Tris-HCl pH6.8（250mM）；SDS（10%）；溴酚兰（0.5%）；甘油（50%）；β-巯基乙醇（5%）配制过程：1.量取1M Tris-HCl（pH6.8）1.25ml；甘油2.5ml；称取SDS固体粉末0.5g；溴酚兰25mg；2.加入去离子水溶解后定容至5ml；3.小份（500μl）分装后，于室温保存。

4.使用前将25μl的β-巯基乙醇加入到每小份中去。

5.加入β-巯基乙醇的上样Buffer可以在室温下保存一个月左右。

5×SDS-PAGE Loading Buffer的配制（方案二）：（10ml）（本方案摘自《蛋白质技术手册》汪家政、范明）组分：Tris-HCl pH6.8（60mM）；SDS（2%）；溴酚兰（0.1%）；甘油（25%）；β-巯基乙醇（14.4mM）配制过程：1.量取1M Tris-HCl（pH6.8）0.6ml；50%的甘油5ml；10%的SDS溶液2ml；1%的溴酚兰1ml；2.加入去离子水定容至10ml；3.分装；4.在4℃可保存数周，-20℃可保存数月之久。