染色体 实验报告

染色体标本的制备及组型实验

生命科学学院张瀛

【实验目的】

1．掌握染色体标本的制作方法。

2．认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。

【实验用品】

小白鼠，秋水仙素，生理盐水，0.3%KCl液，固定液，铜网，酒精灯，离心机，注射器，剪刀，镊子，载玻片，滴管，显微镜等。

【实验原理】

染色体标本制作的原理

细胞分裂中期染色体形状较为清楚，故使用中期细胞，并以每条染色体相对独立存在为

染色体标本制作的四大要点

1）PHA：促细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞。

2）秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停止在分裂中期。（相同作用：秋水仙胺、长春碱、鬼臼素）

3）低渗作用：水进入细胞内，使细胞内容空间变大，染色体间的距离拉大，易于染色体分散开。

4）空气干燥：使细胞和染色体展开。

5）固定：用camoy`s solution（甲醇：冰醋酸=3:1）作用使蛋白质变性，对染色体内的组蛋白来说，变形后硬度增加，保持了染色体的“即时形态”，对细胞膜蛋白来说，变形使细

胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。

染色体标本制作的意义

根据染色体的特征（数目、形态、大小等）制作染色体组型图。 染色体标本制作的应用

1） 生物学方面：根据染色体特征鉴别生物及种类。

染色体数目：兔-44条，猫-38条，狗-78条，马-64条，人-46条，小鼠-40条（18对端着丝粒染色体，第17、18对为亚端着丝粒染色体），大鼠-42条，鸡-78条。 2） 临床医学方面：主要用于遗传性疾病的诊断及研究。

因此，染色体组型实验广泛应用于胎儿遗传性疾病早期诊断中（抽取羊水）。 染色体组型

把真核生物的一个体细胞中的各个染色体按其长度、形状和着丝粒的位置排列成一定顺序的过程，即为染色体组型。

染色体核型

染色体组型是染色体核型的模式表达。 染色体组型及分群依据

主要根据染色体的相对长度，着丝粒的位置，其次是臂的长短，以及次级缢痕或随体的有无等方面。

描述染色体的四个参数

相对长度：可用来表示每条染色体的长度。

臂指数：可用来确定臂的长度。

为了更准确的区别压中部和亚端部着丝粒染色体，Levan 提出划分标准：

1．0-1．7之间：中部着丝粒染色体（M ）

1．7-3．0之间：亚中部着丝粒染色体（SM ） 3．0-7．0之间：亚端部着丝粒染色体（ST ） 7．0以上：端部着丝粒染色体（T ）

着丝粒指数：可决定着丝粒的相对位置。

按Levan 划分标准:

4．染色体臂数（NF ）：根据着丝粒的位置来确定。

端着丝粒染色体（T ）：NF=1

中部、亚中部、亚端部着丝粒染色体（M

、SM 、ST ）：NF=2 人类细胞染色体群

染色体组型及分群依据主要根据染色体的相对长度，着丝粒的位置，其次是臂的长短，以及次缢痕或随体的有无等方面。

A 群：1、2、3对，大，M ，2着丝粒略偏中央。（可先找出2，再根据大小最大的选出1）

B 群：4、5对，大，SM ，彼此不易区分。（根据最大的选出4）

C 群：6-12对和X ，中，SM ，6着丝粒近中央，X 大小介于6、7之间，9长臂上有次缢痕，11短臂较长，12短臂较短。（先找出6，再根据最大的找出X ，最小的找出12，其余按其特点依次找出）

D 群：13、14、15对，中，ST ，有随体，彼此不易区分。（可根据大小找出13、15）

E 群：16、17、18对，中，16是M ，长臂上有次缢痕，17、18是SM ，18短臂较短。（可先找出16，再根据最小的找出18）

F 群：19、20对，小，M ，彼此不易区分。（根据大小）

G 群：21、22对和Y ，21、22对小，是ST ，有随体，长臂常呈分叉状，彼此不易区分。Y 染色体较21、22略大，也有近端着丝粒，无随体，长臂常彼此平行（可根据长臂是否分叉选出Y ，再根据最小的选出22） 【实验步骤】

1． 取雄性小白鼠以每克体重4μg 注射秋水仙素。经14-16小时候，断头法杀死小鼠，取出睾

丸用生理盐水（0.9%NaCl ）洗去血污。(若使用骨髓细胞，则需剪断股骨，较粗的一端注射KCl 溶液，使液体从另一端流入离心管，量大约2ml) 2． 放入装有1ml0.3%KCl 液的小烧杯中剪碎。（呈乳白色）

50.0-37.5之间：中部着丝粒染色体（M ） 37.5-25.0之间：亚中部着丝粒染色体（SM ） 25.0-12.5之间：亚端部着丝粒染色体（ST ） 12.5-0.0之间：端部着丝粒染色体（T ）

3．用铜网过滤到刻度离心管中，再加0.3%KCl液至4ml。

4．37℃静置30分钟，进行低渗处理。

5．以800-1000转/分离心8分钟。

6．弃上清液，加入2ml甲醇冰醋酸固定液（3:1），并用吸管吹气，轻轻打散细胞，固定8分钟。

7．再以800-1000转/分离心8分钟。

8．弃上清液，加1ml固定液，制成细胞悬液，固定5分钟。

9．取洁净的低温预冷载玻片，距10-15厘米高度滴下2-3滴细胞悬液，从一边轻轻吹气，并随时轻轻敲打，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。

10．用滤纸擦去载玻片上多余液体，空气干燥或文火干燥，Giemsa染液染色30分钟。11．30分钟后细小水流冲洗玻片背面。置于显微镜下观察。

【实验结果】

显微镜下观察到染成蓝紫色的染色体。

（见下图）

【分析与讨论】

1．秋水仙素注射时间长短要适当。

2．由于低渗时间过长会破坏细胞，时间分配要合理。步骤2-3用时大约小于15分钟。步骤4静置约20min后就要开始离心机配平。步骤6同样。

3．注意细胞要充分混匀后再滴片（一定要混匀但不能破坏细胞）。

4．滴片前都要注意避免细胞被破坏。滴片量要根据细胞数量，若细胞悬液微发白就大约滴3滴，更白则滴4滴左右。滴片结束后可将载玻片在桌子边缘敲打几次，以使更多细胞破裂。