实验3 环境和人体微生物的检验及无菌操作技术__
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其 他：酒精灯、无菌棉棒、无菌生理盐水、涂布
棒、记号笔、培养皿、吸管、磁力搅拌器；
实 验 程 序 Ⅰ（无菌操作技术 ）
倒平板
在酒精灯火焰旁操作，将融化并冷却至不烫手的灭菌固体 培养基倒入无菌的培养皿，倒量为容积的1/3或者覆盖皿底5毫 米左右，然后平放到桌面待其凝固即为无菌平板。
稀释涂布平板法（移液枪稀释）
土样的稀释方法示意图
No Image
图1 从土壤中分离微生物操作过程
实验程序Ⅱ
（环境及人体各部位取菌样 ）
共取六个菌样，分别为：口腔、鼻腔、头发、 空气和土壤稀释液中的10-5、10-6两个稀释浓（无
菌吸管分别取0.2ml，无菌操作加到平板上）
➢ 口腔: 将无菌平板打开适度开口，嘴对着开口咳嗽3-5次，使口 腔中的微生物接种到平板中，将皿盖合上，放在桌面即可。
空气--d 4、按个人标记：姓名
培养：将接种的平板分别放入细菌和霉菌培养箱中培养
。25-30℃下霉菌培养3-5天、放线菌培养5-7天，； 35-37℃下细菌培养1-2天。
每小组具体分工
结果与思考题
无菌倒平板时注意的事项有哪些？ 平板接种后为什么要倒置培养？ 通过本次试验你学到了什么？有什么体会？
实验3 环境和人体微生物的检 验及无菌操作技术__
目的要求
掌握从土壤中分离微生物的方法，通过检 测环境和人体中微生物的存在，体会微生 物分布的广泛性。
学习无菌操作的技术，掌握平板划线分离 微生物的方法。
实验原理
自然环境中和人及动物的体表、体内都存在大量的 微生物，它们一遇到适合的条件就会大量繁殖。当把 取自不同来源的含菌样品接种于含有生长发育需要的 各种营养成分的固体培养基时，就会形成肉眼可见的 微生物集体群落。
每种微生物群落都有其独有的特点，如大小、颜色、 表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑、边缘整 齐或不整齐等。因此，可以通过平板培养来检测不同 环境下微生物的数量、种类和特点。
Biblioteka Baidu 实验材料
培养基：牛肉膏蛋白胨培养基(PCA)、马铃薯葡萄
糖培养基（PDA ）、改良高氏1号培养基；
土 样：地面以下5-10cm的土壤；
➢ 10-5 、10-6的土壤稀释液：无菌移液枪或吸管分别取0.2ml，无 菌操作加到两种平板上，每个稀释度做两套平板）。
实 验 程 序 Ⅲ （标记、培养 ）
标记： 培养类别-组别- 样品类别-姓名
1、按培养基类别：细菌培养基--A，霉菌培养基--B，放线菌 培养基--C
2、按3个大组：Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ 3、按样品类别：10-5、10-6、口腔--a、鼻腔--b、 头发--c、
实 验 程 序 Ⅱ （土样的稀释分离 ）
制备土样悬浊液：称取土样1g，迅速倒入盛有99ml无菌水和玻璃 球的三角瓶中，置入磁力棒，搅拌10-15min，使土样充分打散， 即成10-2的土壤悬浊液。
稀释：用无菌移液管吸10-2的土壤悬液1mL，放入9mL无菌水中 即为10-3稀释液，如此重复，可依次制成10-3～10-6的稀释液。 (注意：操作时每一个稀释度换用一支移液管，每次吸入土 液后，要将移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高 于前一次，以减少稀释中的误差。)
➢ 鼻腔：取一支无菌棉棒，放入无菌生理盐水中沾湿后，插入到鼻 孔中转动一周，取出，在无菌平板上划线接种，取出棉棒，合上 皿盖。
➢ 头发：将皿盖打开，轻拍头发，使头发中的微生物降落到平板表 面，合上皿盖。
➢ 空气：选好地点后，打开皿盖，手托住平板，静止3-5分钟，使 空气中的微生物自然降落到平板表面，合上皿盖。
棒、记号笔、培养皿、吸管、磁力搅拌器；
实 验 程 序 Ⅰ（无菌操作技术 ）
倒平板
在酒精灯火焰旁操作，将融化并冷却至不烫手的灭菌固体 培养基倒入无菌的培养皿，倒量为容积的1/3或者覆盖皿底5毫 米左右，然后平放到桌面待其凝固即为无菌平板。
稀释涂布平板法（移液枪稀释）
土样的稀释方法示意图
No Image
图1 从土壤中分离微生物操作过程
实验程序Ⅱ
（环境及人体各部位取菌样 ）
共取六个菌样，分别为：口腔、鼻腔、头发、 空气和土壤稀释液中的10-5、10-6两个稀释浓（无
菌吸管分别取0.2ml，无菌操作加到平板上）
➢ 口腔: 将无菌平板打开适度开口，嘴对着开口咳嗽3-5次，使口 腔中的微生物接种到平板中，将皿盖合上，放在桌面即可。
空气--d 4、按个人标记：姓名
培养：将接种的平板分别放入细菌和霉菌培养箱中培养
。25-30℃下霉菌培养3-5天、放线菌培养5-7天，； 35-37℃下细菌培养1-2天。
每小组具体分工
结果与思考题
无菌倒平板时注意的事项有哪些？ 平板接种后为什么要倒置培养？ 通过本次试验你学到了什么？有什么体会？
实验3 环境和人体微生物的检 验及无菌操作技术__
目的要求
掌握从土壤中分离微生物的方法，通过检 测环境和人体中微生物的存在，体会微生 物分布的广泛性。
学习无菌操作的技术，掌握平板划线分离 微生物的方法。
实验原理
自然环境中和人及动物的体表、体内都存在大量的 微生物，它们一遇到适合的条件就会大量繁殖。当把 取自不同来源的含菌样品接种于含有生长发育需要的 各种营养成分的固体培养基时，就会形成肉眼可见的 微生物集体群落。
每种微生物群落都有其独有的特点，如大小、颜色、 表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑、边缘整 齐或不整齐等。因此，可以通过平板培养来检测不同 环境下微生物的数量、种类和特点。
Biblioteka Baidu 实验材料
培养基：牛肉膏蛋白胨培养基(PCA)、马铃薯葡萄
糖培养基（PDA ）、改良高氏1号培养基；
土 样：地面以下5-10cm的土壤；
➢ 10-5 、10-6的土壤稀释液：无菌移液枪或吸管分别取0.2ml，无 菌操作加到两种平板上，每个稀释度做两套平板）。
实 验 程 序 Ⅲ （标记、培养 ）
标记： 培养类别-组别- 样品类别-姓名
1、按培养基类别：细菌培养基--A，霉菌培养基--B，放线菌 培养基--C
2、按3个大组：Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ 3、按样品类别：10-5、10-6、口腔--a、鼻腔--b、 头发--c、
实 验 程 序 Ⅱ （土样的稀释分离 ）
制备土样悬浊液：称取土样1g，迅速倒入盛有99ml无菌水和玻璃 球的三角瓶中，置入磁力棒，搅拌10-15min，使土样充分打散， 即成10-2的土壤悬浊液。
稀释：用无菌移液管吸10-2的土壤悬液1mL，放入9mL无菌水中 即为10-3稀释液，如此重复，可依次制成10-3～10-6的稀释液。 (注意：操作时每一个稀释度换用一支移液管，每次吸入土 液后，要将移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高 于前一次，以减少稀释中的误差。)
➢ 鼻腔：取一支无菌棉棒，放入无菌生理盐水中沾湿后，插入到鼻 孔中转动一周，取出，在无菌平板上划线接种，取出棉棒，合上 皿盖。
➢ 头发：将皿盖打开，轻拍头发，使头发中的微生物降落到平板表 面，合上皿盖。
➢ 空气：选好地点后，打开皿盖，手托住平板，静止3-5分钟，使 空气中的微生物自然降落到平板表面，合上皿盖。